流式细胞所用试剂配置及荧光特性
流式细胞术中应用的荧光染料介绍
流式细胞术中应用的荧光染料介绍流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术。
在流式细胞术中，荧光染料起着至关重要的作用，可以标记细胞的不同成分，使其能够通过流式细胞仪进行检测和分析。
荧光染料通过特定的荧光光谱来发出荧光信号，这些信号被流式细胞仪采集和分析，从而提供有关细胞类型、数量和功能的信息。
以下是几种常见的流式细胞术中应用的荧光染料的介绍。
1. FITC（Fluorescein Isothiocyanate）：FITC是最常用的荧光染料之一，通过与免疫球蛋白G（IgG）结合，可用于免疫细胞表面分子的检测。
FITC在波长为488 nm的激光下激发，发射的荧光信号在525 nm 左右。
它可以与其他荧光染料（如PE或APC）结合使用，以实现多参数流式细胞分析。
2. PE（Phycoerythrin）：PE是一种从红藻中提取的荧光染料，其发射的荧光信号在575 nm左右。
PE通常用于检测细胞表面的抗原或细胞内的蛋白质，如细胞因子。
PE也可以与其他染料结合使用，以实现多参数分析。
3. APC（Allophycocyanin）：APC是一种类似于PE的荧光染料，通过独特的发射波长（约于660 nm附近）和长的荧光寿命来区分。
APC适用于检测多种细胞表面分子和蛋白质，在深色的区域提供了可靠的信号。
5. PE-Cy7：PE-Cy7是PE染料与Cyanine 7（Cy7）结合形成的荧光染料。
它适用于多参数流式细胞术，利用其较长的荧光寿命和波长（激发于488 nm，发射于780 nm左右），可以与其他染料一起使用，以实现更多的细胞表面和内部分子的检测。
除了上述染料外，还有很多其他的荧光染料可以用于流式细胞术。
例如，Alexa Fluor系列、eFluor系列、Brilliant Violet系列等。
这些染料具有不同的光谱特性和荧光强度，可以根据实验需要选择合适的染料。
需要注意的是，在选择荧光染料时，需考虑染料的互相干扰问题和流式仪的激发和检测系统。
流式常用荧光染料概要
如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。
流式细胞术样品制备技术(完整)
流式细胞术样品制备技术流式细胞术对细胞的分析检测必须基于单细胞的基础上，这是流式细胞术的基本要求。
因此就必须把实体组织制备成单细胞悬液。
在应用FCM技术中，制备出合格的单分散细胞是流式细胞术样本制备技术中重要的一环。
它要求这种分散细胞方法既要使细胞成为单个细胞，又能保持细胞的固有生物化学成分及生物学特性。
流式细胞术样品制备大致可分为下面五个步骤：①取材：取手术或活检组织必须具有代表性，如取手术肿瘤组织，必须取瘤细胞生长旺盛部位；组织等标本必须在取材后保持样本的新鲜；一般在室温1个小时之内处理好样本或及时用固定剂或低温对组织进行保存；②对细胞的待测生物化学成分进行荧光染色；③按照厂家提供的软件程序对样本进行获取、检测和存储；④再依照软件提供的程序对检测结果进行定量分析；⑤检测分析结果在生物、医学上的意义进行分析和评价。
第1节样本单细胞悬液的制备方法一新鲜实体组织样本的制备FCM对单细胞快速进行各种参数分析必须基于单细胞基础上，根据各种组织成分的特点，可选择不同的分散细胞方法，以期达到单细胞产额高、损伤少的目的。
尽管标本制备已形成了标准化的程序，但实际操作中总会出现这样或那样的问题。
在实体组织分散为单个细胞过程中，解离的方法可能瞬间地或持久地影响细胞的性质、形态、结构、功能等。
所以，在对各种不同组织进行分散选择方法时，应尽量减少对细胞的这种影响。
目前常用的分散组织细胞的方法有如下3种。
（一）酶消化法1 作用原理：对实体组织分散的作用原理主要有3方面：①可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；②可以水解组织间的粘多糖等物质；③可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。
酶消化法是实体瘤、培养细胞分散为单细胞的主要方法之一。
常用的酶类试剂有：蛋白酶类——胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和中性蛋白酶等，都能解离组织中的细胞。
胰蛋白酶能水解脂键和肽键；胶原酶能降解几种分子类型的胶原；溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷键；弹性蛋白酶能消化连接组织的糖蛋白和弹性蛋白的纤维。
流式细胞术活细胞实验步骤
流式细胞术活细胞实验步骤A. 溶液与试剂注：利用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水制备溶液。
011X 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：配制 1 L 的 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS至 900 ml 水，然后将其混合。
02抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液，或在100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA)来制备 0.5% BSA PBS 缓冲液。
4°C 保存。
03推荐的二抗：要检测未偶联的抗体，请选择与一抗（例如兔）的宿主物种匹配的二抗。
注：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活性染料、DNA 染料等）时，请参考所添加的染料产品页，了解建议的实验步骤。
B. 免疫染色注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注：如果使用全血，则需在免疫染色之前裂解红细胞并通过离心分离来洗涤。
注：为防止人 Fc 受体与兔 IgG 或小鼠 Fc 受体与兔或小鼠 IgG 结合，在免疫染色前用 Fc 块预孵育活细胞。
注：理想的离心条件根据细胞类型和试剂容量有所不同。
一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
01将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。
（通常，每次检测用5x10^5至 1x10^6 个细胞）。
02通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。
03在100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
04在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。
避光。
05在抗体稀释缓冲液或 1X PBS 中通过离心洗涤。
弃去上清液。
重复。
如果使用直接偶联抗体，则跳到步骤 9。
06在100 µl 稀释的荧光物质偶联的二抗（按建议稀释度用抗体稀释缓冲液制备）中重悬细胞。
07在冰上孵育 30 分钟。
避光。
08用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。
弃去上清液。
重复。
09在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。
流式常用荧光染料概要
如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种，我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？首先要考虑，他们分子结构不同，激发光谱和发射光谱也不同，选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长，如：氩离子气体激光管，它的发射光波488nm氦氖离子气体激光管发射光波长633nm488nm激光光源常用的荧光染料有FITC （异硫氰酸荧光素）；PE （藻红蛋白）PI （碘化丙啶）CY5 （化青素）preCP（叶绿素蛋白）ECD（藻红蛋白-得克萨斯红）等。
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器Hoechst 33342 Hoechst 33258 DAPI ndo-1 F |T C PE_CY5 480 PE_CY5.5 480 PerCP 490 Alexa Fluor 488 494PE_Texas Red 480Rhodamine 123 500 Fluo-3 506DiOC6(3) 480PE 80 YOYO-1 90:x 波长（nm ） m 波长(nm)355DNA 染色365核酸标记372 细胞内钙离子标记350 405 490 标记抗体517 13520 578・540 ■激光器351nm紫外激光器488nm线粒体标记 APC CY5细胞内钙离子标记 内质网标记■ 510 [■DNA 染色 ropidium Iodide 核酸标记Acridine Orange 90 650 633nmAlexa Fluor 647 650 氦氖激光器650.60标记抗体流式掘田胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht mlIndo-1 361/330490/4051010AM ester. Low/High Ca++,Fluo-3 506526855AM ester. pH > 6DCFH 5055355292'7'Dichorodihydrofluorescein, oxidized formDHR 50553434 6Dihydrorhodamine 123, oxidized form,light catalyzes oxidationSNARF 548/579 587/635pH 6/9荧光蛋白 360Y66H 360 508Y66F EBFP 38044018EBFP2 383 448Azurite 383 447GFPuv 385 508T-Sapphire 399511475Cerulean 475mCFP 477ECFP 477CyPet 485Y66WQYPSBR 0.monomer27monomermonomer0.weak dimer600.620.monomer400.150.weak dimer 51weak dimer。
流式细胞仪原理及操作步骤
流式细胞仪原理及操作步骤流式细胞仪（FCM）是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。
其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。
活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。
（一）原理一活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。
（二）操作步骤制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法）用10% FCS RPMI1640调整细胞浓度为5X 106〜IX 107/ ml取40卩1细胞悬液加入预先有特异性McAb（5〜50卩I）的小玻璃管或塑料离心管，再加50卩I 1 : 20（用DPBS（或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇J 4 C 30mi n用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右1000rpmx 5mi nJ]加适量固定液（如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，视细胞浓度加入100〜500 ^1固定液）FCM检测或制片后荧光显微镜下观察（标本在试管中可保存5〜7天）（三）试剂和器材1. 各种特异性单克隆抗体。
2. 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。
3. 10% FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液（见附录）。
4. 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
I （四）注意事项1. 整个操作在4C下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaN3,上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。
流式细胞术实验报告
一、实验目的本实验旨在通过流式细胞术技术，对细胞群体进行快速、精确的分析和定量测定，研究细胞的物理与化学性质，并对细胞进行分类和分选。
通过本次实验，掌握流式细胞仪的工作原理，了解其在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
其基本原理是将经过荧光标记的细胞或微粒，在流动系统中以高速通过，同时利用激光束照射细胞，通过光散射和荧光信号来获取细胞的大小、形态、表面标记物等信息。
最后，通过数据分析和可视化展示，对细胞进行计数、分类和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞样本：小鼠脾细胞、Jurkat细胞- 荧光标记抗体：CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC- 溶液：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、荧光染料（如PI）2. 实验仪器：- 流式细胞仪（如BD FACS Calibur）- 离心机- 恒温培养箱- 移液器四、实验步骤1. 细胞制备：- 收集小鼠脾细胞或Jurkat细胞，用PBS洗涤后，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
- 加入荧光标记抗体，室温下孵育30分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，去除未结合的抗体。
2. 流式细胞术分析：- 将处理好的细胞加入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
- 收集数据，进行细胞分类和分析。
3. 数据分析：- 利用流式细胞术分析软件（如CellQuest、FlowJo）对数据进行分析，包括细胞计数、分类、DNA含量分析等。
五、实验结果与分析1. 细胞分类：- 通过流式细胞术，成功将小鼠脾细胞和Jurkat细胞分为不同的亚群，如T细胞、B细胞等。
2. DNA含量分析：- 通过PI染色，检测细胞的DNA含量，发现小鼠脾细胞和Jurkat细胞均处于G0/G1期。
3. 表面标记物分析：- 通过CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC抗体检测，发现Jurkat细胞为T细胞，小鼠脾细胞中含有B细胞和T细胞。
流式常用试剂配制精选文档
流式常用试剂配制精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-一、流式细胞术常用试剂1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。
2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入 10％的NaN3。
3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。
4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至，使用前新鲜配制。
5、消化液：％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或％胰蛋白酶与％ EDTA的混合液。
6、红细胞裂解液：NH4Cl ，KHCO3 ，EDTA?2Na ，溶于100ml水中，调PH 至，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂：L PBS液（PH ）＋1％BSA＋％Na2N3。
8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH ）＋1％FBS（或BSA）＋％NaN3＋％saponin（Sigma的效果不错）。
9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、％NaN3的PBS（PH ）。
10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。
应用时，10倍稀释，每管加～ PI染液。
11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）原液ANaCl 160gMgSO4?7H2O 2gKCl 8gMgCl?6H2O 2gCaCl2溶于1000ml双蒸水原液B1）Na2HPO4?12H2OKH2PO4葡萄糖溶于800ml双蒸水2）％酚红溶液：取酚红置玻璃研钵中，逐滴加入 NaOH并研磨，直至完全溶解，约加入 NaOH 10ml。
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、流式细胞术常用试剂1、10％NaN 3：将 10gNaN3 溶解于 100ml 蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化 酶反应中可不使用 NaN 3。
2、 3％ BSA/PBS ： 100ml PBS 中加入 3g BSA ，使之溶解，再加入 0.2ml 10％的 NaN 3。
3、500mmol/L EDTA ：将 186g EDTA?Na 2?2H 2O 溶解于 400ml 蒸馏水中，用 NaOH 将 PH 调 至 8.0 ，补充蒸馏水至 500ml ，分装，高压灭菌，室温保存。
4g 多聚甲醛溶于100ml PBS ，加入数滴 NaOH ，在通 PH 至 7.4，使用前新鲜配制。
5、消化液： 0.25％胰蛋白酶（用培养液或 PBS 配制）或 0.25％胰蛋白酶与 0.02％ EDTA 的 混合液。
6、红细胞裂解液： NH 4CI 4.16g , KHCO 3 0.5g , EDTA?2Na 0.02g ，溶于 100ml 水中，调 PH 至 7.2，补充蒸馏水至 500ml ， 4 度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂： 0.1mmol/L PBS 液（PH 7.4）+ 1 % BSA + 0.1% Na 2N 3。
8、常用细胞破膜剂： PBS 液（PH 7.4） + 1% FBS （或 BSA ） + 0.1% NaN 3+ 0.1% saponin （Sigma的效果不错） 。
9、流式细胞染色洗涤液：含 2%的 BSA 、 0.1%NaN3 的 PBS （PH 7.4）。
10、PI 染液（保存液，10务用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI 溶于10ml PBS ,加入2mg 无DNA 酶的RNA 酶，4度保存备用。
应用时，10倍稀释，每管加 0.3ml 〜0.5ml PI 染液。
11、Hanks 液的配制（BSS ，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、 组织培养液）原液 ANaCl 160gMgSO 4?7H 2O 2gKCl 8gMgCl?6H 2O 2gCaCl 2 2.8g溶于 1000ml 双蒸水原液 B1） N a 2HPO 4?12H 2O 3.04gKH 2PO 4 1.2g葡萄糖 20.0g溶于 800ml 双蒸水2） 0.4%酚红溶液：取酚红 0.4g 置玻璃研钵中，逐滴加入 0.1N NaOH 并研磨，直至完全溶 解，约加入 0.1N NaOH 10ml 。
将溶解的酚红吸入 100ml 量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留 的酚红4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将 风柜中于 60 度加热，使其溶解，调整液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml 。
将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml 即为原液 B 。
应用液：原液 A 1 份原液 B 1 份双蒸水18 份混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。
临用前用无菌的5.6 % NaHCO3调PH至7.2〜7.6。
12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）A 液（0.2mol/L NaH 2PO4 水溶液）：NaH2PO4?H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。
B 液（0.2mol/L Na2HPO4水溶液）：Na2HPO4?7H2O 53.6g 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
不同PH 值PB 的配制：A液xml （参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。
若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/L PB。
PH x/ml y/ml5.7 93.56.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 77.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.0 90.07.8 8.50 91.07.9 7.00 93.08.0 5.30 94.713、PBS 的配制配制PBS,只要在相应的PB基液中加入8.5g/L NaCI即可。
二、常用激活剂1激活剂PMA :用DMSO配制成0.1mg/ml，分装20ul/管，—20度保存。
勿反复融冻。
实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1：100 稀释储存液,终浓度为20ng/mI。
2、激活剂离子霉素:用乙醇配制成浓度为0.5mg/ml 的储存液,—20 度保存。
实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10 稀释储存液,终浓度为1ug/ml。
3、Staphylococcal enterotoxin B（SEB）:用无菌无叠氮钠PBS 调节浓度0.5mg/mL , 4 C储存，SEB 终浓度10ug/mL 。
4、C D3 :包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞。
5、CD28 :加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。
6、阻断剂Bregeldin A :用DMSO配制成浓度为5mg/ml的储存液，分装20ul/管，—20度保存。
勿反复融冻。
实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1 : 10稀释储存液，在激活过程最后4〜5小时使用BFA，终浓度为10ug/ml。
7、阻断剂莫能菌素：用DMSO配制成浓度为1mg/ml的储存液，4C储存至少4个月，实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10稀释储存液,终浓度为2umol/L。
三、常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC :激发波长488nm，最大发射波长525nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1 通道检测；3）可用于荧光显微镜技术4）荧光强度易受PH 值影响, PH 值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor 488 :激发波长488nm，最大发射波长519nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1 通道检测；3）具有超乎寻常的光稳定性,非常适用于荧光显微镜技术；4）在较宽的PH 值范围内保持稳定（PH4〜10）。
3、Cy3 :激发波长488nm，最大发射波长570nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm 氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2 通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。
4、Cy5 :激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL4通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE:激发波长488nm,最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR :激发波长488nm，最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610 :激发波长488nm，最大发射波长628nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；2）荧光强度高；3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor 647 :激发波长488nm，最大发射波长668nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；2）不易湮灭；3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
9、PE-Cy5 :激发波长488nm，最大发射波长670nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；4）可与FITC、PE搭配，荧光干扰小、补偿小，但不宜与APC搭配。
5）与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、PE-Cy5.5 :激发波长488nm，最大发射波长694nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；4）可与FITC、PE、APC搭配，荧光干扰小、补偿小，是APC比较理想的搭配。
11、PE-Alexa Fluor 700 :激发波长488nm，最大发射波长723nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；2）光淬灭性很强，要绝对避光。
12、PE-Cy7 :激发波长488nm,最大发射波长767nm。
1 ）在Beckman Coulter 流式细胞仪的FL4 通道检测，BD 细胞仪FL3 通道检测；2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；3）光淬灭性很强,要绝对避光；4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小，补偿小，是比较理想的搭配。
13、T R :激发波长595nm，最大发射波长615nm。
1）其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪；2）荧光不易淬灭,可用于荧光显微镜。
14、APC :激发波长633/635nm，最大发射波长660nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；2）在BD 细胞仪的FL4 通道检测,在Beckman Coulter 细胞仪只有配备双激光器的FC500 才能检测到。
15、A PC-Cy5.5 :激发波长633/635nm，最大发射波长668nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；2）主要用于四色以上的流式细胞术。
16：PerCP:激发波长488nm，最大发射波长677nm。
1 ）在Beckman Coulter 流式细胞仪的FL4 通道检测, BD 细胞仪FL3 通道检测；2）可于FITC、PE 搭配,荧光光谱重叠少,对随细胞的特异性结合少,但量子产量较低, 适用于较高表达物的检测。