MS培养基及配制注意事项
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
MS培养基及配制注意事项
、MS培养基母液的配制母液编种号类1大元KNO3NH4NO3MgS04・7H201900165037017044022.38.66.20.831010101010100100100100100100100100100100100100100成分浓缩母液配制1升规定量倍数称取量体积培养基吸(mg)( ml)取量定容1900016500370017004400223086083252.52.5373027801002525 500050010500101000101000 1000100101000100 素KH2PO43微元CaCl2 2H2OMnSO4 4H2OZnSO47H2OKINa2MoO4・7H2O0.25 0.0250.02537.327.82.00.50.10.5100CuSO4.5H2O4CoCL2.6H2O4铁Na2-EDTA盐FeSO4.4H2O5有机甘氨酸盐酸吡哆醇盐酸硫铵素6 肌酸注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl22H20 单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2 2H20 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20 分别溶于450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织培养实验-MS培养基及配制注意事项一、 MS 培养基母液的配制注意：1．除 CaCl22H2O 单独配制外，大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在 500ml 烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl22H2O 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO47H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液成分 1 倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制 1 升培养基吸取量（ml）编号种类 1 大量元素KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4 7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2 2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000830 1000 1 Na2MoO4 7H2O 0.25 1000250 CuSO4.5H2O 0.025 100025 CoCL2.6H2O 0.025 100025 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 251 / 8盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
MS培养基及配制注意事项
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。
MS培养基的配制
MS 培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L（（500ml 500ml）的母液。
各自倒入）的母液。
各自倒入1L 1L（（500ml 500ml）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液，倒入1L 试剂瓶中，存放于冰箱中。
试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：注：CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g，，CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液，然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
（3）配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
MS培养基的配制
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg 的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
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一、MS培养基母液的配制
注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，
定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。
二、培养基配制和灭菌
一．养培养基配制程序
(一).母液吸取量的计算
配制培养基的升数
公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————
母液浓缩倍数
培养基要求的含量
公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二）各种母液按顺序编号排列
A.大量元素；
B.CaCl2.2H2O；
C.微量元素；
D.铁盐；
E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
(三)配制培养基（1000ml）
1.琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.
2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。
3.各种母液的吸取（培养基1L）
（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml
（2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml
（3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml
（4）移取激素
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。
二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。
三.包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法
具体操作步骤：
1. 高压锅放水至平把架；
2. 把包扎好的培养基装入高压锅;
3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.
4. 然后接通电源.
5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。
6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。
7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
8.经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
四、无菌操作技术
（一）植物材料表面——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。
因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。
1.接种步骤：
第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗
→→自来水冲洗
第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌水
第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂）
第四步：无菌水进行冲洗
注意事项：
１.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存．
２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底．
４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。
５.灭菌液要充分浸没材料
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。
然后搽拭工作台面；
（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
（如叶片切成0.5cm2材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。
的小块；茎切成含有一个节的小段。
微茎尖要剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
常用植物激素
四、常用药品的配置方法
1.1mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度37%盐酸溶液的密度为1.19克/毫升，假设要配制1000ml 1mol/L HCl，则需要盐酸的物质的量为1mol，所以需要量取37%的盐酸为1*36.5/37%/1.19=82ml
2.1mol/L的NaOH的配制：称40gNaOH，然后融于1000ml的蒸馏水中。
（定容到100ml）
3.95%的酒精配制成75%的酒精：用量筒量取750ml的95%酒精加入200ml的蒸馏水即可得到75%的酒精。
如果用无水酒精配制75%的酒精，则量取750ml的无水酒精，再加水250ml。
4.0.1%的升汞配制：先称取1克升汞粉末，然后用蒸馏水溶解最后定容到1000ml。
5. 1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2.4-D，用少量1mol/LnaOH或酒精助溶，然后定容到100ml。
6.1 mg/ml的6-BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/L HCl或1mol/LNaOH助溶，然后定容到100ml。
7.0.5mg/ml的NAA的配制：称取0.05gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml。