MS培养基的作用
ms培养基配方表

ms培养基配方表ms培养基是一种常用的细胞培养基,用于无菌条件下培养哺乳动物细胞,特别是鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryo Fibroblast,MEF)。
它是由多种有机和无机化合物组成的复杂混合物,可以提供细胞生长所需的必需氨基酸、糖类、维生素和微量元素等营养物质。
同时,它还包含有机缓冲剂和盐类,可以调节培养品的 pH 值和离子浓度,保持培养条件的稳定性。
下面介绍 ms培养基的配方表:MS培养基水相1. 将1L 去离子水(DI水)加入1mol/L NaCl 至5mL2. 加入HEPES缓冲液(1mol/L)27.7g,调节至pH7.2-7.43. 加入葡萄糖25.0g,混合直至葡萄糖完全溶解4. 加入 L-谷氨酸1.42g,细胞培养I 类和 II 类所需濃度5. 加入 L-苏氨酸0.07g,细胞培养所需濃度6. 加入 L-半胱氨酸0.16g7. 加入 L-赖氨酸0.07g8. 加入 L-缬氨酸0.07g9. 加入L-异亮氨酸0.07g10. 加入L-亮氨酸0.14g11. 加入L-丙氨酸0.14g12. 加入L-天冬氨酸0.15g13. 加入L-芸香氨基酸0.42g14. 加入 L-色氨酸0.03g15. 加入 L-酪氨酸0.03g16. 加入 L-精氨酸0.17g17. 加入 L-组氨酸0.03g18. 加入 L-甘氨酸0.10gMS培养基固相1. 加入 NaHCO3(7.5%)4mL,细胞培养所需濃度2. 加入 4-(2-羟乙基)吡啶盐酸盐(HEP)2g,细胞培养所需濃度;过度使用可导致凝块形成3. 加入 MgSO4(7H2O)0.94g,细胞培养所需濃度4. 加入 KH2PO4 0.17g,细胞培养所需濃度5. 加入 NaH2PO4(H2O,2. H2O)0.19g,细胞培养所需濃度6. 加入 Na2HPO4(7H2O)3.05g,细胞培养所需濃度7. 加入次黄嘌呤(NEAA)1mL,必需的非必需氨基酸,促进细胞生长8. 加入乳酸钠2.72g,利用减少氧淤积,促进细胞生长9.加入硫酸铜子(10-5M))1mL,为MEF的细胞类型提供最佳的增生所需注:以上配方根据MS原始文献略作调整,如果在实验中出现差异,请根据实际情况微调。
MS培养基:

MS培养基:MS是人名Murashige and Skoog的缩写。
MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
基于此,这种培养基就用他们的名字来命名了。
MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存和消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养,其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此,一般情况下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的显著特点。
MS培养基配方单:工作液浓度单位mg/L 大量元素:NH4NO3 1 650 KNO3 1 900 CaCl2·2H2O440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170 微量元素:KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MnO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 铁盐:FeSO4·7H2O(27.8)Na2-EDTA·2H2O(37.3)有机物质:肌醇100 烟酸0.5 盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5 盐酸硫胺素(维生素B1)0.1甘氨酸 2.0 注意:肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液,因为它比较难溶,一般配成100倍,而除去肌醇后的有机,还是可以配成1000倍的。
ms 培养基促进生根的方法

ms 培养基促进生根的方法以MS培养基促进生根的方法引言:生根是植物生长过程中重要的阶段,对于繁殖植物来说尤为关键。
MS培养基是一种被广泛应用于植物组织培养的基础培养基,其成分和浓度的合理调配对于生根的促进起到重要作用。
本文将介绍利用MS培养基促进生根的方法。
一、调整植物激素浓度MS培养基中含有多种植物激素,其中包括生长素和细胞分裂素。
这些激素对于植物的生根起到重要的调控作用。
为了促进生根,可以根据不同植物的需要调整激素浓度。
一般情况下,增加生长素的浓度可以促进生根的形成,而增加细胞分裂素的浓度则可以促进生根的生长。
因此,我们可以在MS培养基中适量调整这些激素的浓度,以达到促进生根的效果。
二、添加生长因子除了植物激素外,MS培养基中还可以添加一些生长因子,如维生素、矿物质等。
这些物质对于植物的生长和发育起到重要的调控作用。
在促进生根方面,适量添加维生素B1、B6和菸酸等可以增强植物的生根能力。
此外,添加一些矿质元素,如钙、镁、铁等,也可以促进生根的形成和生长。
三、调整培养基pH值pH值是影响培养基中养分吸收和植物生理代谢的重要因素。
对于促进生根来说,适宜的pH值范围是5.5-6.5。
如果pH值偏高或偏低,都会对植物的生根产生不利影响。
因此,在制备MS培养基时,应注意调整pH值,以保持适宜的生根环境。
四、光照和温度控制光照和温度是植物生长过程中必不可少的环境因素。
对于促进生根来说,适宜的光照和温度条件可以提高生根的成功率。
一般来说,光照强度为3000-5000勒克斯,温度为20-25摄氏度是较为适宜的生根条件。
此外,光周期也会对生根产生影响。
对于大部分植物来说,16小时的光照和8小时的黑暗是较为适宜的光周期。
五、培养基的配制和处理制备MS培养基时,应注意材料的选择和配比。
一般来说,MS培养基中的盐类成分是固定的,但可以根据植物的需要适当调整某些成分的浓度。
此外,培养基的pH值应调整到适宜的范围。
制备好的培养基应经过高压灭菌处理,以确保无菌状态。
ms培养基的烟酸作用

ms培养基的烟酸作用
烟酸在MS培养基中起着重要的作用。
MS培养基是一种常用的植物组织培养基,广泛用于植物离体培养和组织培养。
烟酸是维生素B3的一种形式,也称为烟酸酰胺或烟酸胺。
在MS培养基中,烟酸具有以下几个重要作用:
1. 生长促进作用,烟酸可以促进植物体外组织的生长。
它在细胞分裂和伸长过程中发挥重要作用,有助于培养基中植物组织的生长和增殖。
2. 代谢调节作用,烟酸参与植物体内的代谢过程,特别是在能量代谢和氧化还原反应中发挥作用。
它可以影响植物细胞的新陈代谢,有助于维持培养组织的正常代谢活动。
3. 抗氧化作用,烟酸具有一定的抗氧化作用,可以帮助减少培养组织中的氧化应激,保护细胞免受氧化损伤。
4. 激素合成前体,烟酸在植物体内还可以作为激素生物合成的前体物质,参与植物生长发育调控。
总的来说,烟酸在MS培养基中对植物组织的生长、代谢和抗逆性都起着重要作用。
因此,合适的烟酸浓度和添加量对于培养基的配制和植物离体培养具有重要意义。
希望这些信息能够对你有所帮助。
常用的植物组织培养基——MS培养基解析

常用的植物组织培养基——MS培养基解析植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基是目前使用非常多的培养基,它有很好的特点,比如较高的无机盐和离子浓度,是比较稳定的平衡溶液。
很多植物的细胞、组织和器官在MS 培养基上表现良好的生长和发育。
MS(Murashige & Skoog)培养基已经开发出许多改良形式。
比如增加到50-60 mM的氮会明显刺激烟草细胞的生长,但是80 mM 和更高的浓度显然对细胞不利。
所有其它元素(尤其是大量元素)的增加也刺激了愈伤组织的生长。
由于矿物质的浓度很高,MS培养基是非常丰富和含盐量高的培养基,对于某些植物物种可能太“咸”。
为避免此问题,MS培养基通常与全浓度的微量元素一起使用,而大量元素的浓度分别为浓度的一半或四分之三。
有时,原来的MS培养基中维生素被Linsmaier和Gamborg B5培养基中的维生素所取代,因为植物对硫胺素的需求量较大。
目前来说,用于植物组织培养的MS 培养基还是挺多的,包括不同规格和组分,比如:1.MS培养基,规格:50l;组分:大量元素和微量元素2.MS培养基含维生素,规格:50l;组分:大量元素,微量元素和维生素3.MS培养基含B5维生素,规格:50l;组分:大量元素,微量元素和Gamborg B5维生素4.MS培养基mod.No. 1A(改良MS培养基),规格:50l;组分:1/2大量元素,微量元素5.MS培养基van der Salm(改良MS培养基),规格:50l;组分:大量元素,微量元素,FeEDDHA替代FeNaEDTA,含维生素... ...MS培养基中的大量元素:MS培养基中的微量元素:MS培养基中的维生素:相关热门文章:如何定量检测目的基因甲基化水平/featured/m6a-5mc-5hmc.shtml。
ms培养基主要成分及作用

ms培养基主要成分及作用
MS培养基是常用的植物组织培养基之一,其主要成分包括微量元素、无机盐和有机物等。
下面我们来具体介绍一下MS培养基的成分和
作用。
微量元素是MS培养基中的重要成分之一,微量元素指的是植物在
生长过程中只需以微量的形式摄取的元素,包括铁、锰、锌、铜、钼、氯等。
这些元素虽然只需要很少的量,但对植物生长和发育起到了至
关重要的作用。
无机盐是MS培养基中另一重要成分,无机盐的主要作用是提供植
物所需的重要离子,如钾离子、钠离子、钙离子等,同时也起到了调
节植物生理代谢的作用。
无机盐中的每一个元素都有其特定的作用,
合理配比能够提高植物的生长效果。
有机物是MS培养基中的第三个重要成分,有机物的主要作用是为
植物提供能量和营养,促进其正常生长和发育。
有机物中的糖类、蛋
白质和维生素等物质可被植物吸收并转化成能量。
有机物的含量对MS
培养基的品质和成果也有很大的影响。
除了以上三个主要成分外,MS培养基中还含有一些添加剂,如椰
子汁、植物生长素、生长素拮抗剂等。
这些添加剂能够增强植物的生
长性能、促进其分化和再生。
总之,MS培养基中的微量元素、无机盐和有机物等成分各具特定的作用,它们的合理配比能够提高植物的生长效果,促进组织培养工作的顺利进行。
因此,在进行植物组织培养和研究时,选择合适的培养基和合理的组分配比是非常关键的。
ms培养基的有机

ms培养基的有机MS培养基是一种常用的细胞培养基,在细胞生物学和生物医学研究中扮演着重要的角色。
本文将对MS培养基的有机成分进行详细介绍。
一、背景介绍MS培养基是由Murashige和Skoog于1962年首次提出的一种细胞培养基。
它是一种无机盐和有机成分组成的复杂培养基,广泛应用于植物和动物细胞的培养和研究中。
MS培养基中的有机成分对细胞的生长和增殖起着重要的调控作用。
二、MS培养基的有机成分1. 氨基酸:氨基酸是构成蛋白质的基本单元,也是细胞生长和分裂所必需的有机物质。
MS培养基中通常添加了多种氨基酸,如谷氨酸、天门冬氨酸等,以提供细胞合成蛋白质所需的氨基酸。
2. 糖类:糖类是细胞能量的重要来源,也是细胞生长和分裂所必需的有机物质。
MS培养基中通常添加了蔗糖、葡萄糖等糖类物质,以提供细胞所需的能量。
3. 维生素:维生素是细胞正常生长和代谢所必需的有机物质。
MS 培养基中通常添加了多种维生素,如维生素B1、维生素B5等,以满足细胞对维生素的需求。
4. 植物激素:植物激素是细胞生长和分化的重要调节因子。
MS培养基中通常添加了植物激素,如生长素、赤霉素等,以促进细胞的生长和分化。
5. 有机酸:有机酸是细胞代谢的产物,也是细胞生长和分裂所必需的有机物质。
MS培养基中通常添加了柠檬酸、琥珀酸等有机酸,以调节培养基的pH值和提供细胞所需的有机物质。
6. 其他有机成分:除了上述几种主要有机成分外,MS培养基中还可能添加了其他有机物质,如胆酸、脯氨酸等,以满足细胞对特定有机物质的需求。
三、MS培养基的作用机制MS培养基中的有机成分通过多种途径对细胞的生长和增殖起着调控作用。
首先,有机成分作为细胞的营养物质,提供细胞合成蛋白质、核酸和其他生物大分子所需的有机原料。
其次,有机成分作为能量来源,提供细胞所需的能量,维持细胞的正常代谢活动。
此外,有机成分还可以通过调节细胞的内环境,影响细胞的生长和分化过程。
四、MS培养基的应用MS培养基广泛应用于植物和动物细胞的培养和研究中。
MSB5N6培养基配方

MSB5N6培养基配方培养基是一种用于细胞培养和生物学研究的基础培养液,可以为细胞提供必需的养分和环境条件,促进细胞的生长和增殖。
在细胞培养过程中,常用的培养基有多种配方,每种培养基都有特定的应用范围和成分要求。
下面将介绍MS、B5和N6培养基的配方和主要组分。
1. MS培养基(Murashige and Skoog培养基)是一种广泛应用于植物组织培养的基础培养基。
MS培养基的配方如下:成分(每升)- 盐类:硝酸铵(1.65g)、硝酸钙(1.85g)、硫酸镁(0.37g)、硫酸钾(1.90g)、硝酸镁(18.0mg)、硼酸(6.2mg)、镁硫酸(16.9mg)、硫酸锌(8.6mg)、硫酸钴(0.025mg)、硝酸铜(0.025mg)、硝酸亚铁(27.8mg)、硫酸亚铁(27.8mg)- 维生素:尼古丁酸(0.5mg)、吡哆醇(0.5mg)、吲哚-3-乙酸(0.1mg)、吲哚-3-丁酸(0.1mg)、维生素B1(0.5mg)-培养糖:葡萄糖(30g)- 植物激素:植物生长素(0.1-1.0mg/L)2.B5培养基是一种用于植物根系培养和营养生理研究的培养基。
B5培养基的配方如下:成分(每升)- 盐类:硝酸铵(1.65g)、硝酸钙(1.83g)、硫酸镁(0.25g)、硝酸钾(1.25g)、硼酸(6.2mg)、硫酸锌(8.6mg)、硫酸亚铁(27.8mg)- 维生素:葡萄糖(30g)、吡哆醇(0.01mg)、锦灯胺酸(0.1mg)、维生素B1(0.1mg)、维生素B2(0.1mg)、维生素B3(0.5mg)、维生素C(100mg)- 植物激素:植物生长素(0.5-3.0mg/L)3.N6培养基是一种用于细胞培养和植物芽培养的培养基。
成分(每升)- 盐类:硝酸铵(1.65g)、硝酸钙(1.83g)、硫酸镁(0.37g)、硫酸钾(1.25g)、硼酸(6.2mg)、硝酸亚铁(27.8mg)- 维生素:吡哆醇(0.5mg)、吲哚-3-乙酸(0.5mg)、吲哚-3-丁酸(0.05mg)、维生素B1(0.1mg)- 植物激素:植物生长素(1.0-5.0mg/L)、植物激动素(0.1mg/L)以上是MS、B5和N6培养基的配方和主要成分。
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MS培养基的作用植物组织培养中常用的一种培养基是ms培养基。
ms培养基的配制步骤这样每次使用时,取其总量的1/20(50ml)或1/200(5ml),加水稀释,制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ)mg/lnh4no333000kno338000cacl2·2h2o8800mgso4·7h2o7400kh2po43400微量元素(母液Ⅱ)ki166h3bo31240mnso4·4h2o4460znso4·7h2o1720na2moo4·2h2 o50cuso4·5h2o5cocl2·6h2o5铁盐(母液Ⅲ)feso4·7h2o5560na2-edta·2h2o7460有机成分(母液Ⅳ)Ⅳa肌醇20000Ⅳb烟酸100盐酸吡哆醇(维生素b6)100盐酸硫胺素(维生素b1)20甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1l的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1l。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的feso4·7h2o和na2-edta·2h2o 分别放到450ml蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将ph调至5?5,最后定容到1l,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
ms培养基中还需要加入:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-d)、萘乙酸(naa)、6-苄基嘌呤(6-ba)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1mg/ml)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10mg,将2,4-d和naa用少量(1ml)无水乙醇预溶,将6-ba用少量(1ml)的物质的量浓度为0.1mol/l的naoh溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100ml,即得质量浓度为0.1mg/ml的母液。
配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50ml,母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa和Ⅳb各5ml。
再取2,4-d5ml、naa1ml,与各种母液一起放入烧杯中。
ms培养基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蔗糖30g,放入1000ml的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750ml,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。
然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1000ml,搅拌均匀。
需要注意的是,在加热琼脂,制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。
此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。
但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤。
调ph用滴管吸取物质的量浓度为1mol/l的naoh溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的ph试纸(5.4~7.0)测培养基的ph,一直到培养基的ph为5.8为止(培养基的ph必须严格控制在5.8)。
培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。
分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50ml或100ml)中。
注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。
锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4。
每1000ml培养基,可分装25~30瓶。
培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。
用2块硫酸纸(每块大小约为9cm×9cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。
最后在锥形瓶外壁贴上标签。
高压灭菌培养基的高压灭菌步骤高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。
第一,码放锥形瓶。
将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内。
如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
第二,放置其他需要灭菌的物品。
将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
第三,灭菌。
待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖。
在98kpa、121.3℃下,灭菌20min。
灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固。
最好放置1d后再使用。
开放分类:植物组织培养中常用的一种培养基是ms培养基。
ms培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存ms培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时,取其总量的1/20(50ml)或1/200(5ml),加水稀释,制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
大量元素大量元素大量元素大量元素(母液母液母液母液ⅠⅠⅠⅠ)mg/lnh4no333000kno338000cacl2·2h2o8800mgso4·7h2o7400kh2po43400微量元素微量元素微量元素微量元素(母液母液母液母液ⅡⅡⅡⅡ)ki166h3bo31240mnso4·4h2o4460znso4·7h2o1720na2moo4·2h2o50cuso4·5h2o5cocl2·6h2o5铁盐铁盐铁盐铁盐(母液母液母液母液ⅢⅢⅢⅢ)feso4·7h2o5560na2-edta·2h2o7460有机成分有机成分有机成分有机成分(母液母液母液母液ⅣⅣⅣⅣ)Ⅳa肌醇20000Ⅳb烟酸100盐酸吡哆醇(维生素b6)100盐酸硫胺素(维生素b1)100甘氨酸400以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1l的贮备液。
其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1l。
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的feso4·7h2o和na2-edta·2h2o分别放到450ml蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将ph调至5.5,最后定容到1l,保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
ms培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-d)、萘乙酸(naa)、6苄基嘌呤(6ba)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0.1mg/ml)。
其配制方法是:分别称取这3种物质各10mg,将2,4-d和naa用少量(1ml)无水乙醇预溶,将6ba用少量(1ml)的物质的量浓度为0.1mol/l的naoh溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100ml,即得质量浓度为0.1mg/ml的母液。
配制培养液配制培养液配制培养液配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50ml,母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa和Ⅳb各5ml。
再取2,4-d5ml、naa1ml,与各种母液一起放入烧杯中。
配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。
溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蒸糖30g,放入1000ml的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750ml,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。
然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1000ml,搅拌均匀。
需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。
此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。
但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤。
调ph用滴管吸取物质的量浓度为1mol/l的naoh溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的ph试纸(54~70)测培养基的ph,一直到培养基的ph为58为止(培养基的ph必须严格控制在58)。
培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。
分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50ml或100ml)中。
注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。
锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4。
每1000ml 培养基,可分装25~30瓶。
培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。
用2块硫酸纸(每块大小约为9cm×9cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。
最后在锥形瓶外壁贴上标签。
高压灭菌高压灭菌高压灭菌高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。
第一,码放锥形瓶。
将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内。
如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
第二,放置其他需要灭菌的物品。
将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
第三,灭菌。
待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖。
在98kpa、121.3℃下,灭菌20min。
灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固。
最好放置1d后再使用一母液配制与保存配制培养基时如果每次配制都要按着杨成分表依次称量既费时又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率一般将常用的基本培养基配制成10200倍甚至1000倍的浓缩贮备液即母液。
母液贮存于冰箱中使用时将它们按一定的比例进行稀释混合可多次使用并在配制较多数量的培养基时降低工作强度也提高试验的精度。