酵母RNA的提取实验报告
实验三_酵母RNA的提取及含量测定
酵母RNA的提取及含量测定一、实验目的与要求1、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法；2、了解测量核酸浓度不同方法的原理；3、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法；4、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验原理1、RNA提取原理：由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。
一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。
其中苯酚法又是实验是最常用的。
组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。
向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。
上述方法提取的RNA具有生物活性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。
稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA 达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
2、测定RNA含量的方法：（1）紫外吸收法原理：核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260纳米处有最大吸收，且在一定浓度范围内光吸收值与浓度成正比（0—50微克/毫升），符合朗伯-比尔定律。
优点样品用量少，不用显色，测完后样品可以继续使用。
（2）地衣酚显色法：核酸与浓盐酸共热，放生降解，生成糠醛，后者与地衣酚反应，在三价铁离子或二价铜离子作用下，生成鲜绿色的复合物，670纳米处有最大吸收，且光吸收值与浓度成正比，符合朗伯-比尔定律。
缺点反应特异性差，易受干扰。
（3）定磷法：在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中无机磷酸生成磷钼酸，当有还原剂存在时，磷钼酸立即被还原生成蓝色的还原产物--钼蓝，其最大吸收在660纳米处，当无机磷含量在每毫升1-25微克范围内，光吸收与含磷量成正比。
实验8 酵母RNA的提取----苯酚法-20090301
三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉 2、实验试剂 ⑴ 90%苯酚水溶液 (含0.1% 8-羟喹啉)
⑵ 95%乙醇 四、实验器材与仪器 1、 离心机、离心管（7ml） 2、 制冰机 3、 分析天平 4、 托盘天平（平衡离心管） 5、 摇床 6、 具塞锥形瓶 (150ml) 7、 量筒(10ml)、烧杯、滴管和小玻棒
五、实验操作方法和步骤 1、酵母细胞破碎、提取RNA ： 酵母细胞破碎、提取RNA 称取干酵母粉1.0g , 入150 ml具塞锥形瓶中，加蒸馏水5ml , 再小心加 入90%苯酚5ml（苯酚有毒！并具腐蚀性），盖好锥形瓶的塞子，在摇床上振 摇反应 40 mi00rpm离心10min。用吸管小心吸取上清液（含RNA)转移到另一 支干净离心管中。见图1。 图
六、注意事项 1、离心前样品离心管一定要先平衡，并对称放入离心机中。 2、吸取上清液时，不能搅动界面，更不能吸入界面物质。 3、苯酚不要弄到手上、皮肤上或桌上，以免损伤皮肤和衣物。
20090228
实验八 酵母RNA的提取——苯酚法 酵母RNA的提取——苯酚法 RNA的提取——
一、实验目的和要求 1、 了解核酸的组成及RNA提取技术。 2、 掌握用苯酚法制备RNA的原理和方法 二、实验基本原理 苯酚法适用于tRNA的提取。从细菌或酵母细胞中提取tRNA，可在不经细胞 破碎，直接用被水饱和的中性苯酚抽提，苯酚可以改变细胞壁的通透性，使 tRNA (分子量在25000左右)从细胞中释入出来，而大分子核酸仍留在细胞内。 通过离心，将含有酚水和细胞碎片的乳浊液分成两相， 上层水相为水溶性RNA、 多糖及小分子极性物质，下层酚相为被水饱和的酚、变性蛋白质和DNA（大多与 变性蛋白质缠连）菌体残渣等。在酚相和水相界面有一层凝集的变性蛋白质。 用乙醇沉淀水相中的大分子物质，tRNA即呈白色絮状沉淀析出，同时除去可溶 性的酯类等杂质。再离心，弃上清液，得到tRNA沉淀样品。苯酚法是提取具有 生物活性的，不降解RNA的简便而有效的方法。 酵母RNA的提取→乙醇沉淀 →得到粗品RNA
生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定
实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。
临用时配制。
五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。
然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。
（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。
2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。
（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。
（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。
酵母RNA的提取
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论 • 参考文献
01 实验准备
实验材料
01
02
03
04
新鲜酵母样品
确保酵母样品新鲜且无污染， 以保证RNA提取的质量。
无菌水
用于清洗实验器具和稀释提取 液。
离心管和离心机
用于离心分离酵母细胞和上清 液。
滤纸和过滤器
用于过滤上清液和去除杂质。
价值的信息。
05 参考文献
参考文献
01
[请在此处插入参考文献1]
02
[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献3]
03
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破碎条件优化
为了获得最佳的破碎效果，可能 需要优化破碎条件，如破碎时间 、破碎次数、破碎温度等。
沉淀与洗涤
沉淀
在破碎后的酵母细胞液中加入适量的沉淀剂，如异丙醇或乙醇，使RNA沉淀下 来。
洗涤
将沉淀物洗涤干净，去除杂质和残留的沉淀剂。洗涤过程中需注意洗涤液的更 换和洗涤次数。
RNA的提取与纯化
提取RNA
将沉淀物溶解在适量的缓冲液中，通过离心或过滤的方法将 RNA从细胞残渣中分离出来。
纯化RNA
去除提取液中的蛋白质、DNA等杂质，获得纯度较高的RNA 。纯化方法包括凝胶电泳、离心机分离、酶解等方法。
03 结果分析
RNA浓度测定
总结词：准确测量
详细描述：使用紫外分光光度计测定提取的RNA溶液的吸光度，根据标准曲线计 算RNA浓度。
实验结果可重复
通过实验操作，成功从酵母细胞中提 取出RNA，且质量较高，无明显杂质。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取实验报告实验报告：酵母RNA的提取一、实验目的1.学习和掌握酵母RNA的提取基本原理和方法。
2.了解RNA在生物体内的生物功能及其重要性。
3.培养实验技巧和操作能力，提高实验素养。
二、实验原理RNA（核糖核酸）是生物体内的重要生物分子之一，它参与蛋白质合成、基因表达等重要生命活动。
酵母是一种常用的真核生物模型，其RNA提取方法与人体、植物等真核生物类似。
本实验采用氯仿-异戊醇法提取酵母RNA。
主要步骤包括细胞破碎、离心分离、有机溶剂抽提、乙醇沉淀等。
三、实验步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：氯仿、异戊醇、无水乙醇、DEPC水、RNA酶。
（2）器材：研钵、离心管、移液器、玻璃棒、氮气吹干器、分光光度计等。
2.酵母细胞破碎（1）在冰上用研钵将酵母细胞研磨成粉末。
（2）加入适量DEPC水，搅拌均匀。
（3）用玻璃棒将细胞碎片挑出，弃去上清液。
（4）加入适量DEPC水，搅拌均匀，重复上述步骤，直到细胞完全破碎。
3.离心分离（1）将破碎的酵母细胞溶液转移到离心管中。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
4.有机溶剂抽提（1）用移液器将上清液小心地转移到另一个离心管中。
（2）加入等体积的氯仿-异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1），用玻璃棒搅拌均匀。
（3）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
5.乙醇沉淀（1）将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
6.洗涤和干燥（1）用移液器小心地将上清液吸出，留下沉淀物。
（2）加入适量75%乙醇，用玻璃棒搅拌均匀，去除残留的乙醇和水分。
（3）在氮气吹干器下将沉淀物吹干约5分钟。
7.RNA溶解与定量（1）加入适量DEPC水，将沉淀物溶解。
（2）用分光光度计测定RNA溶液的吸光度值（A260nm），计算RNA浓度。
四、实验结果与分析表1：酵母RNA提取结果本实验通过氯仿-异戊醇法成功地提取出了高浓度的酵母RNA。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告引言：RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内承担着转录和翻译的重要功能。
在分子生物学研究中，提取RNA是一项常见的实验操作。
本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，探究RNA的提取方法和应用。
材料与方法：1. 实验材料：酵母细胞、细胞裂解缓冲液、RNA提取试剂盒、异丙醇、氯仿、异丁醇、乙醇、载玻片、显微镜等。
2. 实验步骤：a. 酵母细胞的培养与收获：将酵母细胞培养于培养基中，通过离心将细胞收获。
b. 细胞裂解：将收获的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，以释放RNA。
c. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行RNA提取。
d. 纯化RNA：通过异丙醇沉淀和氯仿萃取，去除DNA和蛋白质等杂质。
e. 洗涤与干燥：使用异丁醇和乙醇进行洗涤，最后将RNA干燥。
f. 检测RNA：将提取得到的RNA溶解于适当的缓冲液中，使用紫外可见光谱仪或显微镜观察RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地提取到了酵母细胞中的RNA。
在实验过程中，我们注意到以下几点：1. 细胞裂解的缓冲液选择：细胞裂解缓冲液的选择对RNA提取至关重要。
合适的缓冲液可以有效地破坏细胞膜，释放细胞内的RNA。
在本实验中，我们选择了一种经充分验证的缓冲液，以确保细胞能够完全裂解。
2. RNA提取试剂盒的使用：RNA提取试剂盒是一种常用的RNA提取方法。
它通过特定的试剂和离心步骤，将RNA从细胞裂解物中分离出来。
在本实验中，我们按照试剂盒的说明书进行操作，成功地提取到了RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化是为了去除细胞裂解物中的杂质，如DNA和蛋白质。
在本实验中，我们使用了异丙醇沉淀和氯仿萃取的方法，成功地纯化了RNA。
这些方法可以有效地去除DNA和蛋白质，提高RNA的纯度。
4. RNA的检测：在实验中，我们使用紫外可见光谱仪或显微镜对提取得到的RNA进行检测。
通过观察RNA的浓度和纯度，我们可以评估提取的RNA是否适用于后续的实验操作。
实验三酵母RNA的提取、测定
实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。
因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。
由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。
工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。
稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。
稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。
浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。
离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。
加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。
2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。
待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。
随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。
调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
实验四酵母RNA提取
(二)A旳鉴定
取沉淀约1g，加10 ml 10％H2SO4→沸水浴中加热30 min。
• （5）．嘌呤碱 取水解液2mL加入2mL浓氨水， 然后加入约1mL 5%硝酸银溶液，观察有无嘌 呤碱旳银化合物沉淀。（慢慢加入嘌呤碱时， 沉淀上浮，摇匀，沉淀下沉）
• （6）．核糖 取1支试管加入水解液0.5mL、 1mL苔黑酚三氯化铁浓盐酸溶液。放沸水浴中2 分钟。注意溶液是否变成绿色，阐明核糖旳存 在。时间久了会有黑色沉淀，是浓度高，产物 结晶出来了。
• 苯酚法：组织匀浆用苯酚处理并离心后， RNA即溶于上层被酚饱和旳水相中，DNA 和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇 后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能 很好地除去DNA和蛋白质。
• 浓盐法：在加热旳条件下，利用高浓度旳 盐变化细胞膜旳透性，使RNA 释放出来， 再利用等电点（pH为2.0～2.5）沉淀。此 法易掌握，产品颜色很好。盐浓度需要控 制，太低，RNA不易从细胞中释放出来， 太高，细胞急剧收缩不利于抽提。一般 80～120g/L为宜。
酵母RNA旳提取
1、试验目旳
• 1、掌握稀碱法提取RNA旳原理和措 施
• 2、学习和了解其他提取RNA旳措施 和原理
2、试验要点和难点
• 离心机旳使用 • 提取RNA旳试验原理
3、试验原理
• 一般旳生物细胞中同步具有DNA和RNA，在 酵母中RNA比DNA旳含量高得多， RNA （2.67～10.0%），DNA则少于2％(O.03 ％～O.516％)，在试验室常用酵母作为RNA 提取旳材料。若要制备具有生物活性旳RNA， 可采用苯酚法、去污剂法和盐酸胍法等，最 常用旳是苯酚法提取RNA；若对生物活性没 有要求，则可使用浓盐法，稀碱法等。工业 中用稀碱法或浓盐法，主要用于制备核苷酸 旳原料.
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一、实验目的
1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
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2、掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
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3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。
?
二、实验原理
核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。
研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。
本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA）。
RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA 酶的作用。
本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。
核酸（RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。
?
提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，避免在20~70℃的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。
这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的一般方法。
但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。
RNA在260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA含量。
?
由于蛋白质在280nm波长处也有光吸收，对RNA测定有一定的干扰作用，但蛋白质的最大吸收峰在280nm处，如同时测定280nm的光吸收，通过计算可消除其对RNA测定的影响。
因此如其中含有蛋白质时必须同时测定280nm和260nm的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量。
三、实验器材
电子天平、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、紫外分光光度计、容量瓶（100mL）、移液管（5ml）、试管和试管架、PH 1-14 试纸
四、实验试剂
%NaOH、酸性乙醇（5mlHCl加入剂、500ml 95% 乙醇）、95%乙醇、无水乙醇、酵母粉、第一次实验所提取的酵母RNA、标准RNA液（100ug/ml）、%NaoH溶液、蒸馏水?
五、实验步骤
1、称取4g干酵母粉，放入200ml锥形瓶中，加入%NaOH，沸水浴30分钟，后流水冷却。
将冷却后的液体倒入离心管中，离心15分钟，4000转/min。
留上清液，加入95%酸性乙醇溶液40ml，边加边搅拌，再4000转/min离心5min。
保留沉淀，用10ml95%乙醇洗沉淀两次，每次洗后离心3000转/min，5分钟。
洗完后，再用10ml无水乙醇分别洗涤两次，每次洗后离心5min，3000转/min。
最后，收集沉淀于滤纸上，保存备用。
2、称取于100ml烧杯中，加%NaOH和1mlH2O溶解，调成糊状，加入50ml 左右水，边溶解边用%NaOH调PH至，后定容至100ml混匀。
3、取2ml定容后溶液再定容至100ml，按表1.所示分别向试管中加入定量试剂，混匀，用紫外分光光度计260nm紫外线测吸光度其并记录表格
4、重复步骤3.
5、再一次重复步骤3.
表1.
六、实验结果
表2.
根据表1.表2.绘制出标准曲线
紫外线测RNA浓度标准曲线
样品平均吸光度为
通过标准曲线可得到稀释后样品浓度为μg/ml
所得样品RNA百分含量ω= =%
七、分析与讨论
1、在使用离心机时，离心管要对称放置，而且对称的离心管重量也要相同，否则会对离心机造成毁坏。
2、提取RNA最后在用酒精洗涤沉淀时，要充分混匀，提高提取的RNA的浓度。
3、根据理论在5-45μg/ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，这样所得到的标准曲线的范围变小，而且可能会有一定偏差，进而可能导致实验结果出现误差。
4、用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，具有简单、快速、灵敏度高的优点，但是待测核酸样品中含有的微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质时，会产生较小测定误差。
由于蛋白质在280nm波长处有光吸收，如果同时测定280nm 的光吸收，通过计算可消除蛋白质对RNA测定的影响，减少实验误差。
5、我们组得到的RNA的浓度相对来说是较高的，这得益于我们操作过程的更加准确与细心，在测定吸光度时，对没有用手碰触比色皿的光滑一面，保持实验的准确性。