高效液相色谱法
高效液相色谱法
2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
（l）气相色谱法：分析对象仅占有机物总数的20％。 高效液相色谱法：分离和分析占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质。
（2）气相色谱：流动相与组分不产生相互作用力，仅起运 载作用。 高效液相色谱法：流动相对组分可产生一定亲和力，并参与 固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用， 相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数；
高压输液泵应符合下列要求：密封性好，输出 流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速 更换溶剂及耐腐蚀。
高压输液泵
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱 柱引起阻力变化无关； 恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力 而变化，故保留时间的重视性差。 目前主要使用恒流泵，又称机械泵，它又分机械注射泵和机械 往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。
（四）检测系统
两种基本类型的检测器： 溶质型检测器：它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、安培检测器等。 总体检测器：它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应， 属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电化学检测器
高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography，HPLC
§1
概 述
Introduction
一、高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优 点，并用现代化手段加以改进。
引入了气相色谱的理论;
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器; 具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点;
高效液相色谱法 HPLC
1）硅胶： <>无定型硅胶 最早使用，传质慢、柱效低 <>薄壳型硅胶 直径为30~40μm的玻璃珠表面涂布一层1~2μm 厚的硅胶微粒，孔径均一、渗透性好、传质 快，但柱容量有限。 <>全多孔球型硅胶 粒度一般为5~10μm，颗粒和孔径的均一性都比 前两种好，柱容量大，为当今液固色谱固定相 的主体，也是键合固定相的主要基质。
2．进样系统 a 隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室） >GC系统压力较小，可以 >HPLC系统压力太大，须停泵进样（早期） b 阀进样：不必停泵，六通阀
3．分离系统-色谱柱 >直径4~6mm,柱长10~30cm,多为不锈钢材料 >柱效评价：色谱系统适应性试验 R，n，fs（拖尾因子） >色谱柱维护 >预柱和预饱和柱
（二）反相键合相固定相
1．分离机制：疏溶剂理论 正相——流动相与溶质排斥力强， 作用时间↑， k↑，组分tR↑ 反相——流动相与溶质排斥力弱， 作用时间↓， k↓，组分tR↓
二、HPLC与GC差别
1．分析对象的区别 GC：
适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品； 但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型 及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可 检测。(占有机物的20%)
HPLC： 适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶 液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分 子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分 子和离子型样品均可检测用途广泛。（占有机物 的80%）
高效液相色谱法简介
高效液相色谱的特点
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱
柱每米降压为75 kg/cm2以上。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中
同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
第二节
塑料块 Teflon
1 cm
工作电极 (Pt, Au, 碳糊)
e.电导检测器
电导检测器主要用于离子色谱的检测。 原理： 根据待测物在一些介质中电离后所产 生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质 的含量。 电导检测器的主要部件是电导池。其响应 受温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温 箱中。另外，当 pH>7时，该检测器不够灵敏。 电导检测器不能用于梯度洗脱。
◆恒流泵
注射型泵------输出精确，无脉动，需更换溶剂而中断工作。
往复型泵------造价低廉，溶剂更换方便，但存在脉动。 （使用较多） 对流量变化敏感的检测器会有噪声 干扰，此时可连接一脉动阻尼器。
◆恒压泵--------压力恒定，但流量不恒定（现在已经较少使用）。
输液泵操作注意事项：
防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气
F=2.3QKI0εCl
Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系 数，l为光径长度。
F=KC
特点：选择性好，
专属型检测器，灵敏 度比紫外检测器高 （检测限10-10 g/ml） 对多环芳烃，维 生素 B 、黄曲霉素、 卟啉类化合物、农药 、药物、氨基酸、甾 类化合物等有响应；
c. 示差折光检测器
hplc高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法简介高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体作为流动相，通过高压输液系统，将样品中的各组分在固定相和流动相之间进行分配或吸附等作用而实现分离和检测的色谱技术。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、样品适用范围广等优点，已成为化学、生物、医药、环境等领域中最重要的分析方法之一。
本文将简要介绍HPLC的基本原理、仪器组成、常用的色谱模式和应用领域，以期对HPLC感兴趣的读者有所帮助。
一、HPLC的基本原理HPLC的基本原理是利用样品中的各组分在固定相和流动相之间的不同亲和力，使其在色谱柱内以不同的速度移动，从而达到分离的目的。
固定相是填充在色谱柱内的颗粒状物质，可以是固体或涂于固体载体上的液体。
流动相是通过高压泵送入色谱柱的溶剂或溶剂混合物，可以是极性或非极性的。
样品是通过进样器注入流动相中，并随流动相进入色谱柱。
当样品中的各组分经过固定相时，会发生吸附、分配、离子交换、排阻等作用，导致它们在固定相中停留不同的时间。
这个时间称为保留时间（retention time），通常用tR表示。
保留时间是反映样品组分在色谱柱内分离程度的重要参数，不同的组分有不同的保留时间。
当样品组分从色谱柱出口流出时，会被检测器检测到，并产生一个信号。
这个信号随时间变化而变化，形成一个色谱峰（chromatographic peak）。
色谱峰的位置反映了样品组分的保留时间，色谱峰的面积或高度反映了样品组分的含量或浓度。
将检测器信号随时间变化而绘制出来，就得到了一条色谱图（chromatogram）。
色谱图上可以看到不同的色谱峰，每个峰对应一个样品组分。
通过比较保留时间和色谱峰面积或高度，就可以对样品进行定性和定量分析。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由以下几个部分组成：溶剂供给系统（solvent delivery system）：负责提供恒定压力和流速的流动相，并将溶剂混合成所需比例。
高效液相色谱法
第八章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograph)第一节概述（Generalization）以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。
具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）是最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
一、高效液相色谱法的特点目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。
经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。
它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。
HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。
高效液相色谱法
高效液相色谱法高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D)系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带人柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局"液相色谱仪检定规程"定期检定并符合有关规定。
1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等〉也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm= lOA)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10µm之间。
粒径更小(约2µm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60°C。
流动相的pH值应控制在2～8之间。
当pH值大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH值小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
高效液相色谱法
（2）化学键合固定相 ） B. 极性键合相 极性键合相指键合有机分子 中含某些极性基团，与空白硅胶相比， 中含某些极性基团，与空白硅胶相比，其极性 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 常用的极性键合相有氨基、氰基等。 常用的极性键合相有氨基、氰基等。氨基键合 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈-水 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈 水
二、液相色谱的流动相
1. 流动相特性
（mobile phases of LC） ）
（2）化学键合固定相 ）
化学键合固定相是应用最广的色谱法。 化学键合固定相是应用最广的色谱法。将固定液的官能团键
合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 一般认为有分配与吸附两种功能。 一般认为有分配与吸附两种功能。 a. 硅氧碳键型： 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 硅氧硅碳键型： 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂， c. 硅碳键型： 硅碳键型： d. 硅氮键型： 硅氮键型： ≡Si—C ≡Si—N
4.6
高效液相色谱法
高效液相色谱法(high pressure Liquid 高效液相色谱法 chromatography，HPLC)是利用物质在两 ， 是利用物质在两 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 当两相作相对移动时， 当两相作相对移动时，被测物质在两相之间做 反复多次的分配， 反复多次的分配，这样使原来微小的差异产生 了很大的分离效果，达到分离、 了很大的分离效果，达到分离、分析和测定一 些理化常数的目的。 些理化常数的目的。
第五章高效液相色谱法
数据处理系统
打开工作站，选择工作通道 编辑方法文件，设置方法名称、运行时间及定量方法 输入路径名、样品名、操作者等 样品分离完成后，记录谱图文件名和色谱峰峰高、峰面积和保留值等
2019/7/25
四. 液相色谱固定相
1.液-固色谱固定相
种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等； 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm；
（3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响
小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。
2019/7/25
气相色谱中的固定相原则上都可以用于液相色谱，其选 用原则与气相色谱一样。
选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但 在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的 工作，一般很少自行制备。
2019/7/25
光电二极管阵列检测器
光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
2019/7/25
二极管阵列检测器
样品池 D2 / W 灯
光栅
每一组分可在每一波 长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰
2019/7/25
2. 液-液色谱固定相
（1）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，
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减少方法 ： a 降低 p：目前商品柱多采用 降低d 目前商品柱多采用3-5µm粒径 粒径 b 降低λ：采用球形、均匀分布固定相。 降低 ：采用球形、均匀分布固定相。
2. 纵 向 扩 散 项 B/u 样品分子沿流动相方向产生扩散， 样品分子沿流动相方向产生扩散，所引起 峰展宽 B=2γDm Dm ∝T/η
第12章 高效液相色谱法 章
high performance liquid chromatography HPLC
HPLC与经典 区别 与经典LC区别 与经典
经典液相色谱 固定相颗粒较大， 固定相颗粒较大，不均 匀 常压下输送流动相 柱效低 分析周期长
现代液相色谱 固定相颗粒小，均匀 固定相颗粒小， 高压下输送流动相 柱效高 分析周期短
正相键合相色谱法（NP-HPLC） 正相键合相色谱法（NP-HPLC） 4）流动相极性与k的关系： ）流动相极性与 的关系 的关系： 流动相极性↑，洗脱能力 ，组分t ， 流动相极性 ，洗脱能力↑，组分 R↓，k↓ 5）出柱顺序：极性小的组分先出柱 ）出柱顺序： 极性大的组分后出柱
6）适用： ）适用： 氰基键合相： 氰基键合相：与硅胶的柱选择性相似 氨基键合相：糖类等 氨基键合相：
流动相及其流速的选择： 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇， 甲醇， 选粘度小、低流速的流动相 甲醇 1ml/min 柱温的选择： 3. 柱温的选择： 选室温25-300C左右。太低，流动相黏度增加， 左右。 选室温 左右 太低，流动相黏度增加， 太高容易产生气泡
二、柱 外 展 宽
3．离子对色谱法（IPC或PIC） 离子对色谱法（IPC或PIC）
反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂， 反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分 离子对试剂 与其中的反离子形成中性离子对 增加k和 中性离子对， 与其中的反离子形成中性离子对，增加 和tR，以改善分离
离子对试剂：烷基磺酸钠→ 1）离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱 四丁基季胺盐→ 四丁基季胺盐→分析酸 影响k 2）影响k的因素 的极性有关（同反相色谱） a．与m的极性有关（同反相色谱） 的链长有关：R↑长 极性↓ b．与R的链长有关：R↑长，极性↓小，tR↑，k↑ 适用：较强的有机酸、 3）适用：较强的有机酸、碱
3．洗脱方式 ． 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） ）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 类似GC的等温度洗脱 类似 的等温度洗脱 2）梯度洗脱： ）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性（两个泵） 即不断改变其极性（两个泵） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） 的程序升温（ 类似 的程序升温 沸程较长样品）
1、反相键合相色谱法（RP-HPLC） 反相键合相色谱法（RP-HPLC） 1）分离原理 ） 流动相与溶质有排斥力， 流动相与溶质有排斥力 ， 促使溶质分子与键 合相的烃基发生疏水缔合，且缔合反应是可 合相的烃基发生疏水缔合， 逆的。 逆的。 k↓，组分 R↓ ，组分t
反相键合相色谱法（ 反相键合相色谱法（RP-HPLC） ） 2）固定相：极性小的烷基键合相 ）固定相： C8柱，C18柱（ODS柱） 柱 十八烷基键合相：常用的非极性键合相 十八烷基键合相：
2)流动相的物理性质 流动相的物理性质 流动相的 沸点bp、分子量 、密度、介电常数e 沸点 、分子量M、密度、介电常数 粘度η、折射率RI、 粘度 、折射率 、紫外吸收截止波长 溶剂强度参数ε(Al2O3)、溶解度参数 溶剂强度参数 、 δ(色散 d、取向极性 0、受质子 a 色散δ 取向极性δ 受质子δ 色散 给质子δ 、溶剂极性参数P 质子接 给质子 h)、溶剂极性参数 / (质子接 给质子x 偶极x 、 受xe、给质子 d、偶极 n)、选择性分 表面张力、 组、表面张力、离子对色谱溶剂强度 (P/+0.25e)
影响因素： 影响因素：固定相内部阻力影响
C m ∝ d / Ds
2 f
减免方法： 减免方法：减少固定相液膜厚度 ——化学键合相 ——化学键合相
6、HPLC法中分离条件的选择 HPLC法中分离条件的选择 H = A + （Cm+Csm）u 1. 固定相与装柱方法的选择： 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相（ 选粒径小的、分布均匀的球形固定相（ dp≤10µm） 首选化学键合相，匀浆法装 ） 首选化学键合相， 柱
反相键合相色谱法（ 反相键合相色谱法（RP-HPLC） ） 3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈 水 ）流动相：极性大的甲醇 水或乙腈 水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性 底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 有机调节剂（极性调节剂） 甲醇，乙腈， 例：水 + 甲醇，乙腈，四氢呋喃
反相键合相色谱法（ 反相键合相色谱法（RP-HPLC） ） 4）流动相极性与k的关系： ）流动相极性与 的关系 的关系： 流动相极性↑ 洗脱能力↓ k↑，组分t 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5）出柱顺序：极性大的组分先出柱 ）出柱顺序： 极性小的组分后出柱 6）适用：非极性-中等极性组分 ）适用：非极性-
2 p
Dm ∝T/η
减免方法： ） 减免方法：1）减少固定相颗粒直径 2）减少流动相液体黏度（甲醇） ）减少流动相液体黏度（甲醇）
静态流动相传质阻力项C 4. 静态流动相传质阻力项Csmu
原因： 原因：处于固定相颗粒 内部孔洞内静态流动相 引起
影响C 的因素与C 影响Csmu的因素与Cm相同
固定相的传质阻力项C 5. 固定相的传质阻力项Csu
Kromasil
Zobax Eclipse
Zobax Extend
min
Zobax SB
流动相的性质和选择
1、流动相的物理性质 、 1)流动相要求： 流动相要求： 流动相要求 易得易纯化，无毒不易燃。 ①易得易纯化，无毒不易燃。 检测器的适应性:如紫外检测器对 ②检测器的适应性 如紫外检测器对 溶剂的透明波长要求；示差折光不能 溶剂的透明波长要求；示差折光不能 用梯度洗脱 ③对样品有一定溶解度而不反应 纯净,低廉 低粘度(5× 低廉,低粘度 ④纯净 低廉 低粘度 ×10-4Pa.S), 低沸点(>柱温 柱温(20~50)) 低沸点 柱温
DAD1 E, Sig=275,16 Ref=off (F:\DONNA\AJX\JX0-66\JIANG035.D) mAU
Luna
20 0 0 10 20 30 DAD1 E, Sig=275,16 Ref=off (F:\DONNA\AJX\JX0-66\JIANG050.D) mAU 20 10 0 0 10 20 30 VWD1 A, Wavelength=275 nm (F:\DONNA\AJX\JX0-66\JIANG051.D) mAU 100 50 0 0 10 20 30 DAD1 E, Sig=275,16 Ref=off (F:\DONNA\AJX\JX0-66\JIANG054.D) mAU 75 50 25 0 0 10 20 30 DAD1 E, Sig=275,16 Ref=off (F:\DONNA\AJX\JX0-66\JIANG057.D) mAU 100 50 0 0 10 20 30 40 50 60 70 min 40 50 60 70 40 50 60 70 min 40 50 60 70 min 40 50 60 70 min
R1 Si OH + Cl R1 C18H37 Si O
Si
R2
Si
R2
C18H37 + HCl
键合相分类
高碳型： 高碳型：R1、R2是两个甲基 特点：载样量大， 特点：载样量大，保留能力强 中碳型： 其中一个是氢， 中碳型：R1、R2其中一个是氢，一个为氯 低碳型： 低碳型： R1、R2都是氯
表面覆盖度：参加反应的硅醇基数目， 表面覆盖度：参加反应的硅醇基数目， 占硅胶表面硅醇基总数的比例。 占硅胶表面硅醇基总数的比例。 作用：决定了键合相是分配还是吸附占 作用： 主导 封尾：为了减少残余的硅醇基， 封尾：为了减少残余的硅醇基，一般在 键合反应后， 键合反应后，用三甲基氯硅烷等小分子 进行钝化处理。 进行钝化处理。
基本理论第2节 基本理论-速率理论
一、柱内展宽
H = A + B / u + (C m + C sm + C s )u
Csm为静态流动相传质阻力系数
1. 涡 流 扩散 项 A 组分在色谱柱中运行时间不同， 组分在色谱柱中运行时间不同，导致色谱 峰展宽。 峰展宽。 影响因素： 影响因素：固定相的粒度和填充均匀程度
从进样器到检测器之间的体积称柱外死 体积，均可导致色谱展宽，柱效下降。 体积，均可导致色谱展宽，柱效下降。 减免方法： 减免方法：应尽可能减少柱外死体积
第3节
各类高效液相色谱法
吸附色谱法 化学键合相 离子对色谱法
一、吸 附 色 谱 法 1．分离原理 2．固定相：极性和非极性固定相 ．固定相： 3．流动相：底剂（烷烃）+ 有机极性调节剂 ．流动相：底剂（烷烃）
液相色谱中Dm比GC中小 5 比 中小10 液相色谱中 中小 u是最佳流速的 倍 是最佳流速的3-5倍 是最佳流速的
B/u忽略 忽略
3.流动的流动相传质阻力项C 3.流动的流动相传质阻力项Cmu 流动的流动相传质阻力项
流动相本身， 流动相本身，处于不 同层流的分子具有不 同流速。 同流速。
C m ∝ d / Dm
Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5µm （ × ， µ ）色谱柱 (Aschaffenburg, Germany)。流动相： 。流动相： (A)乙腈 乙腈-(B)0.3%醋酸水溶液进行梯度洗脱： 醋酸水溶液进行梯度洗脱： 乙腈 醋酸水溶液进行梯度洗脱 0-30min：A 28%，B 72%； ： ， ； 30-53min： A 28％升至 ％， 72％降至 ％； ： ％，B ％降至66％； ％升至34％， 53-70min： A 34％升至 ％， 66％降至 ％。 ： ％，B ％降至20％。 ％升至80％， 流速： 流速：1.0 ml·min-1； 检测波长： 检测波长：275 nm； 进样量： 进样量：20µl； ； 柱温： ℃ 柱温：30℃；