微生物实验五微生物数量的测定
微生物大小测定和显微镜直接计数
实验五微生物大小测定和显微镜直接计数一、实验目的：1、了解显微测微尺的结构；2、掌握显微测微尺用于测量菌体的方法；3、学习使用血细胞计数板计算酵母细胞数的原理和方法；4、了解微生物活体染色的原理的技术的方法。
二、实验原理：1、显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物细胞的长度.目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间镜台测微尺的格数×10/两条重合线间目镜测微尺的格数2、利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目。
优点：直观、快速、操作简便，其缺点为：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×25×104×稀释倍数本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右，即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中三、实验步骤：（一）微生物大小的测定：1、放置目镜测微尺：取出目镜，旋开目透镜，目镜测微尺放在光阑上，旋上目镜，将目镜插入镜筒2、将镜台测微尺放在井台上，调焦看清镜台测微尺的刻度3、低倍镜下使镜台测微尺与目镜测微尺刻度平行，一段起止线重合，分别数出格数并求出目镜测微尺每小格的实际长度，同样的方法在高倍镜下重复进行4、按公式计算目镜测微尺每格的长度5、测量菌体的大小：取下镜台测微尺，制作酵母菌涂片，分别在低倍镜、高倍镜下测量10个菌体的长宽，求其平均值，用长（μm)*宽（μm）表示（二）显微镜直接计数1、制备酵母菌的稀释液，将菌液稀释10倍2、将计数板的盖玻片放在计数室上面的两边平台架上，混匀后酵母菌悬液吸取滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，待菌液渗入计数室，菌体自然沉降与稳定后计数3、在计数室移至视野中央，选取25中格（4觉与中央）计含菌数，重复计数2-4个计数室内的含菌量，求其平均值。
微生物大小的测定及数量的测定
微生物的大小测定与数量的测定一、实验目的1．学习了解测微尺的结构，掌握测定微生物大小的方法。
2．观察酵母菌的形态，掌握鉴别死活酵母菌的方法。
3．学习了解血球计数板的结构，掌握微生物数量测定的方法。
二、实验内容1．在低倍镜和高倍镜下求出目镜测微尺的校正值。
（1）目镜测微尺和镜台测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在 5 毫米内作50 等分刻制的，每一等份为0.1 毫米。
另一规格是 5 毫米作100 等分，每等分为0.05毫米。
镜台测微尺是刻在载玻片中央的小尺，它是在1 毫米内作100 等分刻成的，每等分10 微米。
（2）目镜测微尺校正的方法将镜台测微尺上面的透镜片取下，把目镜测微尺放在光阑上，刻度朝下。
把镜台测微尺置于载物台上，用低倍物镜检视，使测微尺位于视野中央。
注意区分视野内两把尺哪个是目镜测微尺，哪个是镜台测微尺。
利用推进器或转动目镜使两尺的第一条线（0 线）互相重合，然后找出另一条重合线。
如重合线较多选取距0 线最远的重合线。
记下两条重合线之间两尺的刻度，依公式算出目镜测微尺的校正值。
目镜测微尺校正值（每刻度微米数）= 两重叠刻度间镜台测微尺格数×10两重叠刻度间目镜测微尺格数2．用美兰水浸片法观察酿酒酵母（saccharomyces cerevisiac）的形态，注意出芽繁殖和死活酵母菌的染色形态，并测量大小。
3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。
（1）血球计数板3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。
（1）血球计数板利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。
因为计数板载片和盖片间的容积一定，所以可以根据显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内微生物总数。
血球计数板是一只特制载玻片。
载片上有两个方格网，每一方格网共分九个大方格，其中间的一个大方格用来做微生物计数，所以又称为计数室。
计数室的刻度一般有两种，一种是每个大方格分成16 个中方格，每中方格又分成25个小方格。
微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定
2022/9/12
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三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微
微生物实验五微生物数量的测定
1、明确血球计数板计数的原理 2、掌握测定酵母细胞总数、出芽率和死亡率的技术
二、实验原理
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮 液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌 或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得 罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板 的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用 油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细 菌不易看清。
二、实验原理
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽 而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分 隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共 分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物 的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中 方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大 方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。 但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点， 即每个大方格都由400个小方格组成。
3、加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴
管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透 作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。样品要均 匀充满计数室，不可有气泡。
4、显微镜计数 加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台
上，先用低倍物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜 （40倍）进行计数。显微镜视野中的光线要暗一些，否则， 不容易看清计数室的方格线。计数时，对位于线上的酵母 菌，可采取只计数两条边的办法，即遵循查上不查下，查 左不查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2时， 即可计作两个细胞。
死细胞数
死亡率=
×100%
测定微生物总数的方法
测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。
本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。
一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。
它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。
3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。
4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。
二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。
2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。
3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。
3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。
实验五微生物大小的测定
实验五微生物大小的测定实验五微生物大小的测定一、实验目的1. 学会测微尺的使用和计算方法。
2. 学习用测微尺对细菌和酵母菌的测量方法。
二、实验内容：1．认识测微尺，学习目镜测微尺的标定。
2．测定细菌和酵母菌菌体的大小。
三、实验材料和用具金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和酵母菌的菌种斜面。
香柏油、擦镜液。
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、操作步骤l．测微尺的构造显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成，目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份。
目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。
镜台测微尺为一专用中央有精确等分线的载玻片，一般将长为1mm的直线等分成100个小格每格长0.0lmm即10μm，是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
2．目镜测微尺的标定把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。
将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。
先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。
3．计算方法标定公式：目镜测微尺每格长度（μm）=两条重合线间镜台测微尺的格数×10／两条重合线间目镜测微尺的格数例如，目镜测微尺20个小格等于镜台测微尺3小格，已知镜台测微尺每格为10μm，则3小格的长度为3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为3×10÷20=1.5μm。
用以上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜及油镜下目镜测微尺每格实际长度。
4．菌体大小的测定将镜台测微尺取下，分别换上大肠杆菌及金黄色葡萄球菌玻片标本，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。
先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。
了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。
它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。
首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。
这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。
但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。
首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。
培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于大部分微生物，但是它需要一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。
首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。
培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。
它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
这些方法可以快速、准确地测定微生物的数量，并且可以检测到少量微生物。
但是，分子生物学方法需要一定的实验设备和技术，并且对样品预处理要求较高。
总结起来，微生物数量的测定方法有直接计数法、培养法、膜过滤法和分子生物学方法等。
微生物大小与数量的测定实验报告
微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。
通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。
使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。
显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。
（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。
它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。
因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。
三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。
（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。
2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。
（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。
（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。
分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。
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林标声
实验五 微生物数量的测定
一、实验目的
1、明确血球计数板计数的原理 2、掌握测定酵母细胞总数、出芽率和死亡率的技术
二、实验原理
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮 如有杂菌或杂质常不易分辨。 液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌 或霉菌泡子可采用血球计数板 一般细菌则采用彼得 血球计数板； 或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得 罗夫·霍泽 霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板 细菌计数板。 罗夫 霍泽 细菌计数板 的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄， 的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用 油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜， 油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细 菌不易看清。 菌不易看清。
25个中方格的计数板
1mL菌液中的总菌数 =A/5*25*104*B
三、实验器材
啤酒酵母菌悬液，显微镜，血球计数板， 载玻片，电吹风，盖玻片，接种环，0.1%、 载玻片，电吹风，盖玻片，接种环，0.1%、 0.05%吕氏美蓝染色液。 0.05%吕氏美蓝染色液。
四、实验方法和步骤
1、菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度 以每小格内含5 10个酵母宜，可采用10倍系列 以每小格内含5-10个酵母宜，可采用10倍系列 稀释法。 2、镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。如 有污物，则需清洗，用点吹风吹干后才能进行 计数。
二、实验原理
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽 血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有 条槽 而构成3个平台 中间的平台较宽， 个平台。 而构成 个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分 隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。 隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。每个方格网共 大格， 又称为计数室)常被用作微生物 分9大格，其中间的一大格 又称为计数室 常被用作微生物 大格 其中间的一大格(又称为计数室 的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中 的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为 个中 方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大 方格，而每个中方格又分成 个小方格； 个小方格 方格分成25个中方格 而每个中方格又分成16个小方格 个中方格， 个小方格。 方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。 但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点， 但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点， 即每个大方格都由400个小方格组成 个小方格组成。 即每个大方格都由 个小方格组成。
二、实验原理
每一个大方格边长为1mm， ， 每一个大方格边长为 每一个大方格的面积为1 每一个大方格的面积为 mm2，
盖上盖玻片后， 盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之 间的高度为0.1mm，所以计数室的 间的高度为 ， 容积为0.1mm3（10-4） 容积为
16个中方格的计数板
1mL菌液中的总菌数 =A/4*16*104*B
七、下一个实验
实验六 实验七 糖发酵实验 药物敏感试验
3、加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片， 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴 管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透 作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。 作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。样品要均 匀充满计数室，不可有气泡。 匀充满计数室，不可有气泡。 4、显微镜计数 加样后静止5min 然后将血球计数板置于显微镜载物台上， 5min， 加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上， 先用低倍物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜（ 先用低倍物镜寻找计数室的位置，然后换成高倍物镜（40 进行计数。显微镜视野中的光线要暗一些，否则， 倍）进行计数。显微镜视野中的光线要暗一些，否则，不 容易看清计数室的方格线。计数时，对位于线上的酵母菌， 容易看清计数室的方格线。计数时，对位于线上的酵母菌， 可采取只计数两条边的办法，即遵循查上不查下 查上不查下， 可采取只计数两条边的办法，即遵循查上不查下，查左不 查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2 1/2时 查右的原则。当酵母菌芽体达到母细胞大小1/2时，即可 计作两个细胞。 计作两个细胞。
5、出芽率的测定 按前法，测定出酵母菌芽体数（小于母细 胞1/2的），计算出单位体积内测得酵母菌 1/2的），计算出单位体积内测得酵母菌细胞的芽体占总数的百分率，即为酵母菌 的出芽率。
6、酵母死亡率的测定 滴一滴0.1%、0.05%吕氏美蓝液于载玻片中央 吕氏美蓝液于载玻片中央， 滴一滴0.1%、0.05%吕氏美蓝液于载玻片中央，再 用接种环取酵母菌液少许，与染液混匀，染色2 用接种环取酵母菌液少许，与染液混匀，染色2– 3min，加盖玻片，立即镜检，计数在一个视野中， 3min，加盖玻片，立即镜检，计数在一个视野中， 以变蓝（ 和未变蓝（ 的细胞数。 以变蓝（死）和未变蓝（活）的细胞数。依法再 计数2 个视野中的细胞数。 计数2-3个视野中的细胞数。 死细胞数 死亡率= 死亡率= ×100% 细胞总数 死亡率是单位体积内死亡的细胞数占总细胞数的 百分率。 百分率。
7、计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或 电吹风吹干。
五、实验结果
次数 中方格序号 细胞数 芽体数 细胞数/ml 细胞数 芽体数/ml 芽体数 出芽率 1 2 平均值
六、思考题
根据你的实验体会，说明用血球计数板进 根据你的实验体会， 行微生物计数时，其误差来自哪些方面？ 行微生物计数时，其误差来自哪些方面？ 如何避免？ 如何避免？