微生物大小测定

微生物的大小测定

胡雪芳 201300261033

【实验目的】

1.了解显微镜测定微生物大小的原理。

2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微

尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。

【实验原理】

微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

1.目镜测微尺

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。

图1 目镜测微尺

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校

正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

2.镜台测微尺

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。

图2 镜台测微尺

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

【实验材料】

1.菌株

酵母菌液，

枯草芽孢杆菌斜面培养物

2.仪器和用具

普通光学显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、酒精灯、吸水纸、擦镜纸、结晶紫染液等。

【实验步骤】

1.目镜测微尺的校正

（1）把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。

（2）先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。

（3）因为镜台测微尺的刻度每格长l0μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。

目镜测微尺每格长度（μm）=两重合线间镜台测微尺的格数×10两重合线间目镜测微尺的格数

（4）用此法分别校正在物镜倍数为10×，40×，100×下目镜测微尺每小格所代表的长度。

2.酵母菌大小的测定

（1）取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。

（2）移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽

各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。

3.枯草芽孢杆菌大小的测定

（1）将载玻片洗净晾干后，在其中央滴一滴蒸馏水，然后通过无菌操作用接种针取少量枯草芽孢杆菌的斜面培养物于蒸馏水中，然后干燥。

（2）单染色：用结晶紫染液或美兰染液对其进行单染色，染色一定时间后冲洗载玻片的背面，将染液冲洗掉。如要观察芽孢，需进行孔雀绿染色。

（3）将制好的片子置于显微镜下镜检，用目镜测微尺测量枯草芽孢杆菌的长和宽。

【实验结果】

1.目镜测微尺的标定结果

表1.目镜测微尺的标定结果记录表格

2.酵母菌的大小测定结果

表2.酵母菌的大小测定结果记录表格

酵母菌大小为直径4.8-7.0μm，平均大小为直径5.56μm。

3.枯草芽孢杆菌的大小测定结果

表3.枯草芽孢杆菌的大小测定结果记录表格

枯草芽孢杆菌大小为0.7-0.8μm×2.0-4.0μm，枯草芽孢杆菌平均大小为0.76μm×2.72μm。

【分析与讨论】

注意事项：

1.由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必

须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。

2.测量菌体大小时要在同一个标本片上测定至少3个大小相近的菌

体，求出平均值，才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。

分析讨论：

1.在目镜测微尺矫正的时候，不同的倍数需要分别矫正。但是也正是

由于放大的倍数不一样，是使在矫正的时候镜台测微尺的刻度线不断放大，也为最终的读数带来了一定的误差。因为放大的倍数越高，测量的越精确。所以用100倍物镜测得的应该是最准确的。其中酵母菌大小的参考值为：1-5微米×5-30微米；枯草芽孢杆菌的大小的参考值为：细胞0.7-0.8微米×2-3微米，芽孢0.6-0.9

微米×1.0-1.5微米。测得值均在参考值的范围内。

2.由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必

须针对特定的显微镜和附件（特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情况下重复使用。高倍镜的单格长度比低倍的精确，因此需要尽量使用100倍油镜下测量菌体（孢子）的大小。