浙江大学生物化学丙实验报告1
导论 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
Symbiotic system can now carry out aerobic catabolism. Some bacterial genes move to the nucleus, and the bacterial endosymbionts become mitochondria.
efficient because fuel is oxidized to CO2.
HH
H H C=C
/\
"J R—C ZCH
基团
Carbonyl (aldehyde)
Carbonyl (ketone)
R —C—R 2 0
Ether
R1—O—R2
Guanidinium
Ester Acetyl R
O H
OH
Imidazole Sulfhydryl
Anhydride (two
carboxylic acids)
A2
Amino (protonated)
H l + R—N—H
1H
Thioester
H
H
R—N—C—N/
JI ，
+N H / \ H H
R——C=CH
HN、 、夕
H
R— O
Carboxyl
R —C—O-o
R—C—N O
Hydroxyl R —O—H <(alcohol)
Enol
?—H,H
R—C=C
Imine N-Substituted
线粒体的进化
Anaerobic metabolism is inefficient because fuel is not completely oxidized.
生物氧化 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
Interlocking gears (coupHng device)
Battery (two leal species of
different reduction
potential)
Motor (energy transducer)
(a)
Weight being lifted (mechanical work)
膜结构。外膜outer membrane可允许小分子 (Mr<5000)和离子自 由通过。内膜inner membrane只允许
在内膜上有特异通道的物质通过，对大部分的小分子及离 子不通透。
外膜
Outer membrane ---- Inner membrane
内膜
-Cristae -Matrix
基质
CH2
产—8。一
CO2
CH2
c—COOJ
o
II
a-Ketoglutarate
C—S-CoA
II
o
Succinyl-CoA
CoA-SH
CO2
④
Oxidative
decarboxylation
二、电子传递链：又称为呼吸链。是由存在于线粒体内膜上 的一系列能接受氢或电子的中间传递体组成。
•电子传递链的组成成分
Dehydrogenation
CH2—coo一
CH2
coo-
Succinate CoA-SH
succinyl-CoA synthetase
GTP (ATP)
⑥
Substrate-level phosphorylation
GDP (ADP)
+R
\a-ketoglutarate dehydrogenase \ complex CH2—COO~
浙江大学氨基移换反应及其产物的鉴定实验报告
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩： 实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型： 定量实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得一、 实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术；二、 实验内容和原理1、氨基移换反应：氨基移换反应是在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。
任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化，转氨酶的最适pH 接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT ）和谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT ）的活性最强。
转氨作用主要发生在肝脏中。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。
在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（GPT ）、谷草转氨酶（GOT ）活性较高。
2、GPT 催化下的转氨作用装订线L －谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L －谷氨酸氧化脱－NH 2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L －谷氨酸。
3、纸层析原理本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。
滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。
层析溶剂是由有机溶剂和水组成。
由于滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
在进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。
生物化学实验报告格式范文
生物化学实验报告格式范文
生物化学实验报告格式范文主要包括以下几个部分：实验名称、实验目的、实验原理、实验材料与试剂、实验过程、实验结果与分析、结论。
下面是一个具体的实验报告范例：
实验名称：蛋白质的提取与分离
实验目的：掌握蛋白质的提取与分离方法，了解蛋白质纯化的过程。
实验原理：蛋白质是生物体内重要的功能分子，其提取与分离在生物研究和应用中具有重要意义。
本实验通过盐析、透析等方法对蛋白质进行提取，然后利用凝胶色谱技术对蛋白质进行分离纯化。
实验材料与试剂：蛋白质溶液、盐析剂、透析袋、凝胶色谱柱、缓冲液、标签试剂等。
实验过程：
1.蛋白质的提取：将蛋白质溶液与盐析剂混合，静置后收集上清液，进行透析，得到纯化的蛋白质溶液。
2.蛋白质的分离：将纯化的蛋白质溶液上样到凝胶色谱柱，用缓冲液洗脱，收集目标蛋白质峰。
3.蛋白质的鉴定：对分离得到的蛋白质进行SDS-PAGE电泳，然后转移到膜上进行Western Blot分析，验证蛋白质的分离效果。
实验结果与分析：
1.SDS-PAGE电泳结果显示，提取的蛋白质分子量与理论值相符。
2.Western Blot分析结果显示，分离纯化的蛋白质能够与对应的抗体特异性结合，说明分离效果良好。
结论：通过本实验，我们成功提取并分离了蛋白质，掌握了蛋白质纯化的基本方法。
实验结果表明，盐析、透析和凝胶色谱技术等方法可以有效地用于蛋白质的提取与分离。
浙江大学生物化学丙实验报告3、4
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。
2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。
二、实验内容和原理1、Folin-酚测定法Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。
优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。
缺点： 该反应受多种因素的干扰。
2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。
它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。
因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。
还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。
生化丙实验报告
实验名称：蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价一、实验目的和要求1. 学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；2. 掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量；3. 掌握分光光度计的使用方法；4. 掌握酶活力测定的基本原理和方法；5. 学习酶的比活力计算；6. 了解蔗糖酶分离纯化的原理和操作方法。
二、实验内容和原理1. Folin-酚测定法Folin-酚试剂由甲、乙两种试剂组成。
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝）。
2. 蔗糖酶活力测定3.5二硝基水杨酸法（DNS法）是测定酶活力的一种常用方法。
DNS试剂在碱性条件下与还原糖反应生成橙黄色物质，其颜色深浅与还原糖的浓度成正比。
通过测定DNS反应液的颜色深浅，可以计算出酶活力。
3. 蔗糖酶分离纯化蔗糖酶分离纯化常用的方法有：凝胶过滤、离子交换、亲和层析等。
本实验采用凝胶过滤法进行蔗糖酶的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：蔗糖酶、牛血清白蛋白、标准蛋白质溶液、蔗糖溶液、葡萄糖溶液、DNS试剂、Folin-酚试剂等。
2. 试剂：碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜、酒石酸钾钠、磷钼酸、磷钨酸、硫酸、溴、苯酚、浓盐酸、无水乙醇等。
四、实验器材与仪器1. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、离心机、电子天平、移液器、试管、试管架、烧杯、滴定管、比色皿等。
2. 器材：凝胶过滤柱、离子交换柱、亲和层析柱等。
五、操作方法和实验步骤1. 蔗糖酶蛋白含量的测定（1）制备标准曲线：将标准蛋白质溶液分别稀释成不同浓度，取一定量加入Folin-酚试剂，按照实验原理进行显色反应，在540 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
浙江大学生物化学实验甲SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 这样的蛋白质- SDS复合物在凝胶中的迁移率，不 再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒 的长度，也就是蛋白质分子量的函数。
• 当蛋白质的分子量在15000~200000D之间时，蛋白 质分子的电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系， 符合下列方程式：
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
1.1、原理
• 电泳法分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各 蛋白质组分的分子大小和形状以及所带静电荷的多 少等因素所造成的电泳迁移率的差别。蛋白质分子 在外加电场下的泳动行为可用下列函数式表示：
EQ V=
6π rη
v：分子泳动速度
E：电场强度
η ：介质粘度
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 自由基引发的方式有化学法和光化学法两种，前者 的引发剂是过硫酸胺（AP），后者的引发剂是核 黄素（VitB2）。两种方法的催化剂都是四甲基乙 二胺（TEMED）。
• 在一定浓度范围内，改变聚合体系中Acr和Bis的比 例，可得到不同网眼大小的凝胶，由于凝胶的三维 网状结构，对在凝胶中泳动的不同分子量的质点有 着选择和阻碍，因此使凝胶本身又具有分子筛效应。
称取去脉叶片0.5g，加入0.05mol/L pH7.8的磷酸缓 冲液2ml，加石英砂少许研磨成匀浆，10000r/min 离心10min，上清备用。 ⑵、样品的处理 • 取30ul待测样品的上清于离心管中，加入30ul浓样 品溶解液，混匀，置于100℃水浴中保温3~5min， 取出冷却备用。
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 如将已知分子量的几种标准蛋白质的相对迁移率对 分子量作图，可获得一条标准曲线。未知蛋白质在 相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在 标准曲线上求得该蛋白质的分子量。
浙江大学生物化学丙实验报告
. .. . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。
离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
这些过程都是可逆的。
在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。
离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离阴离子交专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310 装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。
2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
本实验采用3.5－二硝基水酸法，其原理是3.5－二硝基水酸与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定围还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。
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专业：农业资源与环境
姓名：李佳怡 ____________
学号：_J6 _______________
日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙）
实验名称：蔗糖酶的提取
一、实验目的和要求（必填）
三、实验材料与试剂（必填）
五、操作方法和实验步骤（必填）
七、实验结果与分析（必填）
.指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得
一、实验目的和要求
1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法;
2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。
二、实验内容和原理
订 1、实验内容:
线 蔗糖酶的提取、分离纯化
2、实验原理:
① 酵母细胞破碎
液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法
固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶
本实验采用研磨的方法。
通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀
来。
② 蔗糖酶的初步分离纯化
蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。
本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。
由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。
实验报告
细
胞
破碎
的
常
用
方
法
三、实验材料与试剂
1、实验材料
市售干酵母粉10g/组（3〜4人）
2、实验试剂
石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。
四、实验器材与仪器
电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。
五、操作方法和实验步骤
1、酵母细胞破粹（干磨法）
①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵
②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min）
③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin,
使呈糊状液体；
④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin
（条件:4°C、12000r/min）
⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存
用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析
2、热处理
①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min,
并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。
②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min
③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a
（条件：4°C, 12000r/min）
④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。
3、有机溶剂（乙醇）沉淀
①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
放置约20min：
②离心：转移至两支50 ml离心管中，平衡后，离心lOmin：
（条件:4°C, 12000r/min）
③收集保存：弃去上淸液，用7 mL的20mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解沉淀
留岀lmL溶液，并将余下溶液转移入7 mL塑料离心管，一20°C冰箱保存。
（用于实验2离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶）
六、实验数据记录和处理
1、实验数据记录
石英砂：：
干酵母粉:；
Tris-HCl提取离心后上淸液体积（样品I ）VI：：
样品I热处理离心后上层淸液体积（样品II）V2：。
2、实验现象：
研磨过程：干酵母颜色变浅，散发岀一股难闻的气味：
第一次离心后：上清液澄淸颜色上黄色；下部沉淀分层，上层酵母细胞碎片等呈棕褐色，
下层石英砂呈白色：
第二次离心后：上清液更加澄淸橙黄色；沉淀为米白色，较第一次变浅：
第三次离心前：上晴液柠檬黄，沉淀为米白色。
七、实验结果分析讨论
1、实验结果：
①经过研磨破碎的酵母提取液样品I （lmL）：
②将样品I经过热处理的样品II （lmL）：
③经过选择性变形和有机溶剂沉淀处理过的样品II,用Tris-HCl缓冲液溶解保存在一只7mL和一只lmL的离心管中（样品III、IV）。
注意：所有收集样品均需在管壁外用油性记号笔做好标记，先放在一次性PE手套中，并放入-20 *C冰箱中保存，用于后续实验。
2、结果分析：
①最后得到的两管沉淀，英中一管为米白色沉淀，另一管夹杂部分黄色沉淀，疑为杂质蛋白，或是由于在加入乙醇时体积比例没有调整好而造成，具体结果有待进一步检测。
②误差分析:
a：称呈:天平精确度不高，可能会对石英砂和干酵母的称量结果造成误差；
b：在研磨过程中，有少部分粉末洒岀，存在操作误差；
c：在平衡过程中，为了保持平衡用胶头滴管在两支离心管之间进行调肖，有部分溶液残留在胶头滴管里。
可以将所有的材料放进一支离心管，另外一支离心管加入水，通过改变水的含捲达到平衡的效果，以此来减少误差。
八、讨论、心得
1、实验原理探析
①石英砂的作用：加入石英砂是为了在研磨过程中增大摩擦力，将酵母细胞充分研磨破裂，提取蔗糖酶:
②高温水浴：利用了蔗糖酶的耐热性（最受温度为45-50°C）,可以在50°C的水浴热处理下将不耐热的杂蛋白去除：
③有机沉淀：乙醇提供疏水的环境，破除蛋白质外层的水膜，从而使提取的蔗糖酶聚集在一起沉淀分离;
④冰浴作用：使分子运动速度下降，再加以搅拌使之快速沉降。
⑤低温操作：防I匕操作过程温度升髙引起有效成分变性。
2、思考题：本实验在从丁•酵母中提取和分离纯化蔗糖酶的过程中具体运用了哪些方法你认为还有哪些方法可以运用说说你的设想。
答：①在本次试验中采用机械法中固体剪切法的研磨法：分离纯化过程用了选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀的方法，后通过离心达到真正分离纯化的目的。
②英他常用细胞破碎方法：液体剪切法中的超声波法、机械搅拌法、高压匀浆法以及固体剪切法中的压力法和非机械法中的溶胀和自溶、化学渗透和生物酶降解等。
由于蔗糖酶存在于细胞内部，所以需要将细胞破碎以获取蔗糖酶。
另外，浓缩方法有沉淀法、吸附法、超过滤法、透析法、减压蒸懈法、冰冻干燥法等。
不同的方法都各有优势和缺点，我们要根据不同的实验条件和要求、目的来选择较为适宜的方法。
（《生物化学技术原理及应用》赵永芳第四版）
3、实验感想
第一次做生化实验，感觉还是很新鲜。
在实验开始研磨的过程中，就有点被一股难闻的味道恶心到了。
之后在实验具体操作过程中，发现实验本身比较简单，所以即使第一次实验没有预习，还是能够很快的理解实验的内容。
但是之后的实验应该还是比较复杂的，所以需要我们好好预习，并进行一定的思考，以便在下次实验课上能充分的将理论课上所学知识应用到实验中去。