乳酸杆菌培养基配方
益生菌培养基配方
益生菌培养基配方益生菌培养基是特别设计用于培养益生菌的一种培养基。
益生菌是指一类有益于宿主健康的微生物，主要包括一些菌株的乳酸菌和双歧杆菌等。
益生菌培养基的配方要求能够提供生长所需的营养物质，并且能够维持菌株的稳定性和活性。
以下是一种常见的益生菌培养基配方。
1.碳源益生菌需要碳源来产生能量和维持生长。
常用的碳源包括葡萄糖、麦芽糊精、果糖等。
在益生菌培养基的配方中，葡萄糖通常是最常用的碳源。
2.氮源氮源是益生菌合成蛋白质和其他重要分子的关键成分。
常见的氮源包括酵母提取物、蛋白胨和氨基酸等。
酵母提取物在益生菌培养基中通常是最常用的氮源。
3.矿物质4.维生素维生素是益生菌生长所必需的营养物质之一、益生菌培养基中通常添加一定量的维生素，如维生素B群和维生素K等。
这些维生素能够提供菌株的生长所需的营养物质，同时有助于维持菌株的活性。
5.pH调节剂pH调节剂的添加可调节益生菌培养基的酸碱度。
大多数益生菌适宜在酸性环境中生长，因此通常使用柠檬酸和琼脂来调节培养基的pH值。
6.防腐剂为了防止培养基被细菌和真菌污染，常常在培养基中添加适量的防腐剂，如苯甲酸和对羟基苯甲酸等。
7.硫酸镁和硫酸锰硫酸镁和硫酸锰是益生菌培养基中的重要组成部分，它们能够提供营养物质给益生菌，同时对其生长和代谢过程有积极的影响。
8.氨基酸氨基酸是益生菌合成蛋白质和其他生物活性分子的重要组成部分。
在益生菌培养基中通常添加少量的氨基酸，以提供益生菌生长所需的营养物质。
9.激素激素可以促进益生菌的生长和活性。
一些常见的激素包括生长因子（如细胞因子）和植物激素（如生长素）等。
这些激素可以通过调节菌株的生长和代谢过程来提高菌株的存活率和活性。
以上是一种常见的益生菌培养基配方。
不同的菌株可能有不同的营养要求，因此具体的培养基配方应根据菌株的需要进行调整。
同时，在培养益生菌时还需注意合适的温度、pH、培养时间等条件。
植物乳杆菌的培养基配方
计算培养基的pH值：根据培养基配方，计算培养基的pH值，并调整至适宜 范围。
计算培养基的成本：根据培养基配方和各成分的价格，计算培养基的总成本。
称量
准备所需的仪器和材料，如天 平、烧杯、量筒等。
准确称量各种成分，按照配方 比例进行混合。
安全性：选择无毒、无害的 原材料，避免对环境造成污
染
常用培养基配方
MRS培养基
成分：蛋白胨、 酵母提取物、 葡萄糖、甘油、 磷酸氢二钾、 硫酸镁、硫酸 亚铁、维生素 K1、维生素
B12
作用：适用于 植物乳杆菌的
生长和繁殖
特点：营养丰 富，易于配制，
成本低
使用方法：将 成分按比例混 合，加热溶解， 冷却至45℃， 加入植物乳杆
植物乳杆菌的培 养基配方
培养基的成分
培养基的配制 方法
培养基的选择 依据
常用培养基配 方
注意事项
培养基的成分
碳源
葡萄糖：主要碳源，易被 植物乳杆菌利用
蔗糖：次要碳源，可被植 物乳杆菌利用
乳糖：可被植要分解成葡萄糖
才能被利用
氮源
蛋白胨：提供细菌生长所需的氮源 酵母提取物：提供细菌生长所需的氮源和维生素 牛肉膏：提供细菌生长所需的氮源和维生素 尿素：提供细菌生长所需的氮源
菌菌种，在 30℃下培养24
小时。
YPD培养基
成分：酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖 作用：用于培养植物乳杆菌 特点：营养丰富，易于生长 使用方法：按照一定比例混合后，在无菌条件下进行培养
其他常用配方
LB培养基：含 有酵母提取物、 蛋白胨和NaCl
TY培养基：含 有酵母提取物、 蛋白胨、NaCl
酵母菌、乳酸杆菌的分离筛选
姓名:温迪雅学号：10991367 专业：环境科学乳酸杆菌的分离筛选及鉴定一、材料与方法：1、菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2、试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml 浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸4、方法：（1）无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养（2）菌落观察与镜检（3）筛选生产用菌株二、实验步骤1、分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制：A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。
以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
（2）样品的处理按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌水的三角瓶内，振摇混匀。
（3）分离方法①倒培养基在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
常用乳杆菌培养基整理
用途
原理
改Hale Waihona Puke 番茄汁培养基用于食品中乳酸菌总数测定
番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
MRS肉汤
用于乳酸菌增菌培养
蛋白胨、肉膏、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌。
MRS琼脂
用于食品中乳酸菌总数测定
蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
APT琼脂
用于乳酸菌分离培养
酪蛋白胨、酵母浸粉、提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸钠、硫酸镁、盐酸硫胺素、氯化锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
MC培养基
用于食品中乳酸菌检测的
APT肉汤
用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。
酵母浸粉、蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖是可发酵糖，氯化钠维持均衡的渗透压，磷酸盐是缓冲剂。
Rogosa琼脂（RogosaAgar）
大豆蛋白胨、牛肉浸粉和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。乳酸球菌和乳酸杆菌在本培养基上典型特征为红色,有明显溶钙环
乳酸菌培养及诱导培养基
嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[J]. 中国酿造，20091、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。
2、MRS固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。
3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。
1 出发菌株的活化及纯化保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。
划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖*。
长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。
嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。
10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。
革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。
肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。
1）500mL MRS液体培养基2）5个250mL的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个接种环，酒精灯，打火机，酒精2 种子的制备活化的菌种接种于基础培养基，于36℃恒温培养24 h，保藏备用。
增菌培养基最佳接种量为3%（活菌数为108个/mL）★3 产酶诱导培养用脱脂乳配成12%的产酶液体培养基，每250mL三角瓶中装入100mL(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，加入1mL吐温80，115℃灭菌30 min后，接入2 mL 种子液(每mL含菌体5×108个)，36℃培养36h。
乳酸菌培养及诱导培养基
乳酸菌培养及诱导培养基嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[j].中国酿造，20211、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0g脱脂奶粉，蒸馏水100ml，ph自然，115℃杀菌20min。
2、mrs固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，浓硫酸乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，mgso47h2o0.58g，mnso4h2o0.33g，琼脂15g，ph6.8左右，加蒸馏水至1000ml，121℃灭菌20min。
3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。
1启程菌株的活化及提纯保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体mrs培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。
划线接种到mrs固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖。
长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。
嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在mrs琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。
10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。
革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。
肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。
1）500mlmrs液体培养基2）5个250ml的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个注射环路，酒精灯，打火机，酒精2种子的制备活化的菌种注射于基础培养基，于36℃恒温培育24h，中草药水泵。
增菌培养基最佳注射量为3%（活菌数为108个/ml）★3产酶诱导培养用脱脂乳硝酸锶12%的产酶液体培养基，每250ml三角瓶中放入100ml(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，重新加入1ml吐温80，115℃杀菌30min后，互连2ml种子液(每ml含菌体5×108个)，36℃培育36h。
乳酸杆菌实验报告
一、实验目的1. 掌握乳酸杆菌的分离与纯化方法。
2. 了解乳酸杆菌的形态特征和生理特性。
3. 鉴定乳酸杆菌的种类。
二、实验原理乳酸杆菌是一种革兰氏阳性菌，属于乳酸菌，广泛存在于自然界中，如土壤、水体、植物和动物体内。
在人体肠道中，乳酸杆菌具有重要的生理功能，如调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力、降低胆固醇、促进消化等。
本实验通过分离纯化乳酸杆菌，观察其形态特征和生理特性，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- MRS培养基- 琼脂糖- 酵母提取物- 葡萄糖- 乳糖- 麦芽糖- 蛋白胨- 氯化钠- 酚红指示剂- pH试纸- 显微镜- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌平板计数器2. 实验仪器：- 灭菌锅- 灭菌培养箱- 灭菌移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌剪刀- 灭菌烧杯四、实验方法1. 土壤样品的处理- 取一定量的土壤样品，加入适量的无菌水，充分振荡后静置。
- 取上层悬液作为实验样品。
2. 乳酸杆菌的分离与纯化- 将MRS培养基在高压蒸汽灭菌器中灭菌后，倒入培养皿中制成平板。
- 将处理好的土壤样品悬液用无菌移液器取适量，涂布在MRS平板上。
- 将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度下培养。
3. 乳酸杆菌的形态特征观察- 取分离得到的单菌落，在显微镜下观察其形态。
4. 乳酸杆菌的生理特性检测- 将分离得到的单菌落接种到含有不同糖类的培养基中，观察其在不同糖类上的生长情况。
- 用pH试纸检测培养基的酸碱度变化。
5. 乳酸杆菌的鉴定- 根据乳酸杆菌的形态特征、生理特性和生化反应，将其与已知菌种进行比对，确定其种类。
五、实验结果与分析1. 乳酸杆菌的分离与纯化- 成功分离得到多个单菌落，表明土壤样品中存在乳酸杆菌。
2. 乳酸杆菌的形态特征观察- 分离得到的乳酸杆菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm×1.0～2.0μm。
3. 乳酸杆菌的生理特性检测- 分离得到的乳酸杆菌在葡萄糖、乳糖、麦芽糖培养基上均能生长，表明其可以利用这些糖类作为碳源。
乳酸杆菌培养
培养基配方如下"改良MRS培养基蛋白陈10g牛肉膏10g酵母提取物5g葡萄糖20个吐温80 1 g琼脂粉15g乙酸钠5g柠檬酸二铰2gK2HPO4 2g MgSO4.7H2O0 0.58g MnSO4.4HZO 0.25g碳酸钙20g蒸馏水1000 mL pH6.2 121 C x l0 min灭菌MRS培养基蛋白陈109牛肉膏109酵母提取物5g葡萄糖209吐温8019琼脂粉159乙酸钠5g柠檬酸二按2gKZHPO429MgSO4#7HzO0.589MnSO4#4HZO0.259蒸馏水1000mLpH6.212loCxlsmin灭菌明胶基础培养基蛋白陈lg酵母提取物lg葡萄糖0.19明胶129盐溶液4mL蒸馏水100mLpH值7.0115oCxlsmin灭菌蛋白陈水培养基蛋白陈109NaC巧g蒸馏水IO00mLpH值7.012loCX15mill灭菌冻干保护剂脱脂乳粉1209蒸馏水gsomL115oCxlsmin灭菌2.3.1.1酸菜中乳杆菌的分离与纯化取酸菜汁lmL,用无菌PBs缓冲液梯度稀释到10-,,分别从10一!10石!10一,三个稀释度的试管中各取0.2mL涂布于改良MRS琼脂培养基上,于37e!80%氮气!10%氢气和10%二氧化碳的厌氧环境下培养2小48小时后,挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落,进行革兰氏染色!镜检"凡是革兰氏阳性的菌株,继续在MRS培养基上纯化培养,直至镜检为纯菌"2.3.1.3过氧化氢酶试验挑取固体培养基上培养24小时后的单个菌落,置于洁净玻片上,滴加3%过氧化氢溶液数滴(新鲜配制),在305内有大量气泡产生者为阳性(+),不产生气泡者为阴性(一)"其中过氧化氢酶试验阴性的杆菌初步确定为乳杆菌(敖敦格日勒等,2002)"将这些菌株编号后接种到MRS斜面培养基上,培养24小时后置4e冰箱中保存备用"2.3.1.4菌种保存将己经分纯的乳杆菌接入10mL液体MRS培养基中37e培养20小时后,离心(6000甲m离心10min)收集菌体,然后加入3mL冻干保护剂,对菌体进行悬浮,混匀后取分装至安瓶瓶中(600林F瓶),然后放入一20e的冰箱中预冻12小时"预冻结束后,立即放入冻干机中进行冷冻干燥,搁板温度均为一40干燥压力均为10Pa,干燥温度均为202.3.2.5部分分离株的糖发酵试验将分离自酸菜样品的分离株Ll一L10和分离自猪肠道样品的分离株L10一L20在MRS固体培养基上划线,37e恒温培养24h后,挑取单个菌落接入发酵管内,放入灭菌试管中,37e培养一周后观察试验结果,并记录,阳性用(十)表示,阴性用(一)表示"通过菌种对单糖!二糖!多糖以及糖普和糖醇类等碳水化合物的利用情况加以鉴定它们的种"其反应结果仅局限于保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌生产的普通酸奶, ,嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌发酵乳糖产生乳酸、醋酸、细菌素等健康促进成分,但是它们对酸及胆汁盐非常敏感，难以通过胃肠环境而在肠道中定植。
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葡萄糖
磷酸氢二钾
柠檬酸氢二铵
乙酸钠
硫酸镁
硫酸锰
琼脂
吐温80
pH值6.5±0.2
10.0
8.0
4.0
20.0
2.0
2.0
5.0
0.2
0.04
14.0
1.0
25℃
3.
用途：用于乳酸杆菌增菌培养
胨化乳
酵母浸粉
磷酸二氢钾
葡萄糖
蕃茄浸出粉
吐温80
pH值6.8±0.2
15.0
5.0
2.0
10.0
2.5
1.0
25℃
4.APT
用途：用于乳酸菌分离培养
酵母浸粉
酪蛋白胨
葡萄糖ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
柠檬酸钠
盐酸硫胺素
氯化钠
磷酸氢二钾
氯化锰
硫酸镁
亚硫酸铁
吐温80
琼脂
pH值6.7±0.2
7.5
12.5
10.0
5.0
0.001
5.0
5.0
0.14
0.8
0.04
0.2
15.0
25℃
乳酸杆菌相关培养基配方
1.
用途：用于乳酸杆菌检测和分离培养
胰酪蛋白胨
酵母浸粉
磷酸二氢钾
柠檬酸铵
乙酸钠
硫酸镁
硫酸锰
亚硫酸铁
吐温80
葡萄糖
琼脂
pH值5.5±0.2
10.0
5.0
6.0
2.0
25.0
0.575
0.12
0.034
1.0
20.0
15.0
25℃
2.MRS
用途：用于食品中乳酸菌总数测定
蛋白胨
牛肉浸粉