乳酸菌培养基
双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基
BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨15.0g酵母粉2.0g葡萄糖20.0g可溶性淀粉0.5g氯化钠5.0g5%半胱氨酸10.0mL西红柿浸出液400.0mL吐温80 1.0mL肝提取液80.0mL琼脂20.0g蒸馏水520.0mLpH7.0MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨10.0 g牛肉膏10.0 g酵母膏 5.0 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g吐温80 1.0 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58 g硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g琼脂18.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 6.2~6.6当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH 值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。
2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。
这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。
亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。
而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。
双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基
BBL培养基双歧杆菌选择性培养基成份蛋白胨酵母粉葡萄糖可溶性淀粉氯化钠5%半胱氨酸西红柿浸出液吐温80肝提取液琼脂蒸馏水MRS培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨 g牛肉膏 g酵母膏 g柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] g葡萄糖(C6H12O6·H2O) g吐温80 mL乙酸钠（CH3COONa·3H2O） g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） g硫酸镁（MgSO4·7H2O） g硫酸锰（MnSO4·H2O） g琼脂 g蒸馏水 1 000 mLpH ~当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。
2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。
这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。
亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。
而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。
1材料样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。
培养基改良MRS培养基，PTYG 培养基。
仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。
2 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数3方法铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。
常用乳杆菌培养基整理
用途
原理
改Hale Waihona Puke 番茄汁培养基用于食品中乳酸菌总数测定
番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
MRS肉汤
用于乳酸菌增菌培养
蛋白胨、肉膏、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌。
MRS琼脂
用于食品中乳酸菌总数测定
蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸氢二铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
APT琼脂
用于乳酸菌分离培养
酪蛋白胨、酵母浸粉、提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸钠、硫酸镁、盐酸硫胺素、氯化锰、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
MC培养基
用于食品中乳酸菌检测的
APT肉汤
用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。
酵母浸粉、蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖是可发酵糖，氯化钠维持均衡的渗透压，磷酸盐是缓冲剂。
Rogosa琼脂（RogosaAgar）
大豆蛋白胨、牛肉浸粉和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。乳酸球菌和乳酸杆菌在本培养基上典型特征为红色,有明显溶钙环
乳酸菌基础培养基比较研究
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摘
要 ： 究 了脱脂乳 中性蛋 白酶的最适酶解条件 ， 以保加利 亚乳杆 菌和嗜热链球菌为混合发 酵菌种 ， ＭＲ 、 研 并 对 Ｓ 脱
乳酸菌培养及诱导培养基
嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[J]. 中国酿造，20091、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。
2、MRS固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。
3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。
1 出发菌株的活化及纯化保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。
划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖*。
长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。
嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。
10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。
革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。
肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。
1）500mL MRS液体培养基2）5个250mL的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个接种环，酒精灯，打火机，酒精2 种子的制备活化的菌种接种于基础培养基，于36℃恒温培养24 h，保藏备用。
增菌培养基最佳接种量为3%（活菌数为108个/mL）★3 产酶诱导培养用脱脂乳配成12%的产酶液体培养基，每250mL三角瓶中装入100mL(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，加入1mL吐温80，115℃灭菌30 min后，接入2 mL 种子液(每mL含菌体5×108个)，36℃培养36h。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。
乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。
乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。
乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。
本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。
二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。
可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。
在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。
2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。
根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。
3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。
4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。
5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。
三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。
2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。
3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。
四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。
2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。
乳酸菌培养及诱导培养基
乳酸菌培养及诱导培养基嗜酸乳杆菌试验方法一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化[j].中国酿造，20211、基础培养基(脱脂乳培养基)12.0g脱脂奶粉，蒸馏水100ml，ph自然，115℃杀菌20min。
2、mrs固体培养基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，浓硫酸乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，mgso47h2o0.58g，mnso4h2o0.33g，琼脂15g，ph6.8左右，加蒸馏水至1000ml，121℃灭菌20min。
3、产酶培养基：脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。
1启程菌株的活化及提纯保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体mrs培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。
划线接种到mrs固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖。
长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。
嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征在mrs琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。
10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝状或卷发样。
革兰氏染色后可见菌体呈短杆状，单个或短链状排列，革兰氏染色阳性。
肉眼观察，嗜酸乳杆菌菌落较小,平台状，不规则、圆形凸起、边缘整齐、质地柔软、灰白色、有光泽。
1）500mlmrs液体培养基2）5个250ml的三角瓶，橡胶塞，牛皮纸，绳子3）5个培养皿4）1个注射环路，酒精灯，打火机，酒精2种子的制备活化的菌种注射于基础培养基，于36℃恒温培育24h，中草药水泵。
增菌培养基最佳注射量为3%（活菌数为108个/ml）★3产酶诱导培养用脱脂乳硝酸锶12%的产酶液体培养基，每250ml三角瓶中放入100ml(含12g脱脂乳、1.50‰亚油酸)，重新加入1ml吐温80，115℃杀菌30min后，互连2ml种子液(每ml含菌体5×108个)，36℃培育36h。
乳酸杆菌培养
培养基配方如下"改良MRS培养基蛋白陈10g牛肉膏10g酵母提取物5g葡萄糖20个吐温80 1 g琼脂粉15g乙酸钠5g柠檬酸二铰2gK2HPO4 2g MgSO4.7H2O0 0.58g MnSO4.4HZO 0.25g碳酸钙20g蒸馏水1000 mL pH6.2 121 C x l0 min灭菌MRS培养基蛋白陈109牛肉膏109酵母提取物5g葡萄糖209吐温8019琼脂粉159乙酸钠5g柠檬酸二按2gKZHPO429MgSO4#7HzO0.589MnSO4#4HZO0.259蒸馏水1000mLpH6.212loCxlsmin灭菌明胶基础培养基蛋白陈lg酵母提取物lg葡萄糖0.19明胶129盐溶液4mL蒸馏水100mLpH值7.0115oCxlsmin灭菌蛋白陈水培养基蛋白陈109NaC巧g蒸馏水IO00mLpH值7.012loCX15mill灭菌冻干保护剂脱脂乳粉1209蒸馏水gsomL115oCxlsmin灭菌2.3.1.1酸菜中乳杆菌的分离与纯化取酸菜汁lmL,用无菌PBs缓冲液梯度稀释到10-,,分别从10一!10石!10一,三个稀释度的试管中各取0.2mL涂布于改良MRS琼脂培养基上,于37e!80%氮气!10%氢气和10%二氧化碳的厌氧环境下培养2小48小时后,挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落,进行革兰氏染色!镜检"凡是革兰氏阳性的菌株,继续在MRS培养基上纯化培养,直至镜检为纯菌"2.3.1.3过氧化氢酶试验挑取固体培养基上培养24小时后的单个菌落,置于洁净玻片上,滴加3%过氧化氢溶液数滴(新鲜配制),在305内有大量气泡产生者为阳性(+),不产生气泡者为阴性(一)"其中过氧化氢酶试验阴性的杆菌初步确定为乳杆菌(敖敦格日勒等,2002)"将这些菌株编号后接种到MRS斜面培养基上,培养24小时后置4e冰箱中保存备用"2.3.1.4菌种保存将己经分纯的乳杆菌接入10mL液体MRS培养基中37e培养20小时后,离心(6000甲m离心10min)收集菌体,然后加入3mL冻干保护剂,对菌体进行悬浮,混匀后取分装至安瓶瓶中(600林F瓶),然后放入一20e的冰箱中预冻12小时"预冻结束后,立即放入冻干机中进行冷冻干燥,搁板温度均为一40干燥压力均为10Pa,干燥温度均为202.3.2.5部分分离株的糖发酵试验将分离自酸菜样品的分离株Ll一L10和分离自猪肠道样品的分离株L10一L20在MRS固体培养基上划线,37e恒温培养24h后,挑取单个菌落接入发酵管内,放入灭菌试管中,37e培养一周后观察试验结果,并记录,阳性用(十)表示,阴性用(一)表示"通过菌种对单糖!二糖!多糖以及糖普和糖醇类等碳水化合物的利用情况加以鉴定它们的种"其反应结果仅局限于保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌生产的普通酸奶, ,嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌发酵乳糖产生乳酸、醋酸、细菌素等健康促进成分,但是它们对酸及胆汁盐非常敏感，难以通过胃肠环境而在肠道中定植。