细菌染色技术
细菌一般染色方法
细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术，通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法：简单染色是最基础的细菌染色方法，主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下：1.取一片细菌涂片，将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂，覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟，用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状，并能够区分一些基本形态和结构，但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法：阴性染色可使细菌显现为透明，而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上，使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上，使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液，并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色，使细菌透明，从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法：阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状，常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上，使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟，然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌，使其呈现有色的形态，便于观察和鉴定。
此外，还有一些特殊染色方法，如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法，通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液，以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法，将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后，用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色，最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
细菌染色技术总结
细菌染色技术（2010-11—22 22：29:46)目的要求初步掌握细菌涂片制作，单染色法及革兰染色法等染色技术。
实验内容1．细菌染色一般程序涂片干燥固定初染（媒染) 脱色复染（1）涂片临床标本或液体培养物可直接涂抹于洁净的载玻片上，固体培养的细菌先在玻璃片上滴一滴生理盐水，然后取菌少许在盐水中磨匀，呈轻度混浊.涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。
（2)干燥涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面向上,置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。
（3)固定细菌的固定常用火焰加热法,即将上述已干的涂片在火焰中迅速通过3～5次，温度以手能摸时热而不烫为度。
目的在于杀死细菌，凝固细胞质，改变细菌对染料的通透性。
(4）初染不同的染色方法，所用染液也不同.染液以覆盖菌膜为度。
（5) 媒染通过媒染可增加染料和被染物质的亲和力。
媒染剂还可用于固定之后，亦可含在固定液或染液中。
（6）脱色此步骤主要目的是观察细菌与染料间结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。
（7) 复染细菌初染色被脱色后常以复染液复染，便于观察。
复染液的颜色与初染液有明显不同。
2．常用染料原液配制一般制备100ml纯酒精饱和溶液所需染料量：美兰2g～5g；结晶紫7g~14g；碱性复红3g～7g。
3．常用的染色方法(1) 单染色法即用一种染料染色的方法。
常用吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液。
1）染液①吕氏美兰液美兰酒精饱和液30ml+0.01％KOH溶液70ml即成.②稀释石炭酸复红液碱性复红酒精饱和液10ml+5%石炭酸溶液90ml,然后用蒸馏水作10倍稀释即成。
2) 菌种大肠埃希菌普通斜面培养物。
3）染色方法于已做好的涂片上滴加吕氏美兰或稀释石炭酸复红染液，染色1min，以水冲洗至无颜色流下为止，自然干燥或以远火烘干后镜检。
4) 结果以美兰染色者菌体呈现兰色;以稀释石炭酸复红染色的菌体呈现红色.（2）革兰染色法1) 原理细菌被结晶紫着色后，再经媒染剂处理，染成深紫色或紫黑色。
细菌常用染色方法
细菌常用染色方法
细菌常用的染色方法包括：
1. 革兰氏染色法：根据细菌细胞壁的不同组成，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
该方法使用革兰氏紫染料染色，然后使用碘酒处理和洗涤，最后用洋红染色，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
2. 厌氧杆菌染色法：用甲基蓝和碘溶液混合物染色，可以区分厌氧杆菌和其他菌种。
3. 浓缩染色法：用詹氏菲洛染料染色，然后用酒精淋洗和乙醚蒸发，最后用洋红染色。
这种方法可以观察到细菌的形态、结构等细节。
4. 封闭染色法：将细菌培养在带有染色剂的琼脂上，细菌会吸收染料并形成深色颗粒。
5. 微胞溶解染色法：将细菌培养在含有亚甲蓝的琼脂平板上，细菌会吸收染料并产生颜色。
6. 阴离子染色法：使用负电染料如酸性染料贾氏深蓝染色或卡尔巴查染色，细菌细胞呈现颜色。
这些染色方法可以帮助鉴定细菌的形态、结构和组成，辅助进行细菌分类和鉴定。
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
常用细菌染色方法
常用细菌染色方法
常用的细菌染色方法包括：
1. 革兰染色法（Gram staining）：将细菌样品先用碘溶液固定，然后依次涂抹上紫色染料（紫薄荷）和红色染料（碱基红），最后用酒精洗去多余染料。
革兰阳性菌会呈紫色，而革兰阴性菌会呈红色。
2. 酸忍染色法（Acid-fast staining）：用高温和浓酸染料如石蜡-费劳丁（carbol-fuchsin）对细菌样品进行染色，然后用酸洗去多余染料。
酸忍阳性菌会呈红色，而其他菌则无法保留染色。
3. 吉姆萨染色法（Giemsa staining）：将细菌样品用吉姆萨染料染色，然后用溶液洗去多余染料。
这种染色方法可以用于细菌形态和结构的观察。
4. 霍乱弧菌染色法（Cholera vibrio staining）：将细菌样品用霍乱弧菌碱性溶液、大草胺D染料和酒精进行染色和洗去多余染料，从而观察霍乱弧菌的形态特征。
5. 肉眼法：将细菌样品放在平板培养基上培养一段时间，然后通过眼睛观察细菌是否在培养基上生长形成菌落。
这种方法适用于一些较大的菌落，如某些肠道细菌。
以上是常见的几种细菌染色方法，不同染色方法适用于观察不同的细菌特征和结构。
细菌特殊的染色方法
细菌特殊的染色方法摘要：一、细菌染色的基本原理二、常见细菌染色方法1.单染色法2.双染色法3.荧光染色法4.免疫染色法三、特殊染色方法的应用1.染色对细菌的识别和分类2.染色在疾病诊断中的应用3.染色在科学研究中的作用四、染色方法的优缺点对比五、未来细菌染色技术的发展趋势正文：细菌在生物学、医学和微生物学等领域具有重要的研究价值。
为了更好地观察和研究细菌，染色技术在细菌检测、识别和分类中起到了关键作用。
本文将介绍细菌的特殊染色方法，包括基本原理、常见染色方法、应用领域、优缺点对比以及未来发展趋势。
一、细菌染色的基本原理细菌染色是通过染色剂与细菌细胞成分发生特定的化学反应，使细菌呈现出不同颜色，从而便于观察和识别。
染色的基本原理包括吸附、渗透、吸附与渗透相结合等。
染色过程中，染料与细菌细胞成分结合，使细菌具有特定的颜色。
二、常见细菌染色方法1.单染色法：使用一种染料对细菌进行染色，如革兰氏染色、鞭毛染色等。
这种方法简单、快速，但对细菌的形态和结构观察不够详细。
2.双染色法：使用两种染料对细菌进行染色，如荧光染色法、相差染色法等。
这种方法可以同时显示细菌的两种不同属性，如形态和生理功能。
3.荧光染色法：利用荧光染料对细菌进行染色，通过荧光显微镜观察细菌的形态和分布。
这种方法具有高灵敏度和特异性，适用于活细胞染色。
4.免疫染色法：利用特异性抗体与细菌表面抗原结合，再通过染色剂显色。
这种方法可对细菌进行准确识别和分类，适用于病原菌检测和研究。
三、特殊染色方法的应用1.染色对细菌的识别和分类：染色方法有助于鉴别不同种类的细菌，如革兰氏阳性菌和阴性菌，以及观察细菌的形态和结构。
2.染色在疾病诊断中的应用：免疫染色法可用于检测病原菌，有助于临床诊断和治疗感染性疾病。
3.染色在科学研究中的作用：特殊染色方法可应用于细菌的生理、生化和分子生物学研究，揭示细菌的生长、繁殖和代谢等机制。
四、染色方法的优缺点对比1.优点：染色方法操作简便，结果直观，适用于各类细菌的观察和研究。
常用细菌染色技术
三、结果:
阳性菌——紫色
阴性菌——红色
固定 初染
媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN” （Gram’s Negative）表示。
四、影响因素
1.操作：
涂片的厚薄，不宜过厚 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风 杆菌）和非抗酸菌。
荧光染色法
一、原理
抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用
含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。
标本涂布不能过厚，影响染色效果。 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
普通染色法
革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细菌学 家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今已逾百 年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法。
一、原理
体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。 大小、厚度同痰涂片。
脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
标本处理注意事项
标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不均影响结果判读， 或使染色不均造成阴阳不定。
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽 聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料 复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多， 肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细 胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无 色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
细菌的的染色原理
细菌的的染色原理
细菌的染色原理是通过在细菌细胞外层的细胞壁和细胞膜上加上一层附着物质，使其能与染色剂发生特异性反应，从而在显微镜下观察和区分不同种类的细菌。
常见的细菌染色方法包括格拉姆染色、抗酸染色和吉姆萨染色等。
1. 格拉姆染色（Gram staining）：格拉姆染色法是最常用的细菌染色方法之一。
其原理是根据细菌细胞壁的结构和组成的差异，将细菌分为两类：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
染色过程包括以下几个步骤：将细菌样品固定在载片上，加上紫色的革兰氏染色剂，然后用酒精洗去多余的染色剂，再加上红色的唐纳染色剂，最后用水冲洗，使细菌样品显色。
2. 抗酸染色（acid-fast staining）：抗酸染色是用于检测结核菌等抗酸杆菌的染色方法。
其原理是由于这些细菌细胞壁的特殊成分，不易被常规的染色剂染色，因此需要使用酸性染色剂，如红染色剂或甲基蓝染色剂，加热或加上异丙醇等处理，使细菌样品在显微镜下呈红色或蓝色。
3. 吉姆萨染色（Giemsa staining）：吉姆萨染色法是广泛用于细菌和寄生虫的染色方法之一。
其原理是根据染色剂吉姆萨染料中的碱性成分能与细胞中的酸性成分结合，使细菌呈现特定的颜色。
吉姆萨染色常用于观察细菌的形态、大小及细胞内结构，可以帮助区分不同种类的细菌。
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三、结果:
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”
（Gram’s Negative）表示。
四、影响因素
1.操作：
涂片的厚薄，不宜过厚
染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度
复染时间不可过长
镜检
荧光显微镜观察有无黄绿色荧光
三、结果:
阳性—明亮橘黄色荧光； 阴性—无荧光
三、临床应用：
荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床
细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分枝杆菌、麻风
分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
四、注意事项：
荧光染色法可以作为分枝杆菌的初筛实验，初筛阳性的须做 抗酸染色确认。
特殊结构染色法
细菌的某些基本结构如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特 殊结构如荚膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易着色， 须用一些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法主要有荚 膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等 。这些染色法不仅能使特殊结构着色，还可使特殊结构染 成与菌体不同的颜色，有利于观察和区别。
染色不均，阴阳不定的现象。
五、临床意义
鉴别细菌：
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，
以利进一步鉴定。
选择药物：
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
与致病性相关：
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致 病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。
荧光染色法
一、原理
抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用
含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。
这种方法可用较低倍镜头镜检，因此能快速找出抗酸杆菌。
二、步骤：
标本处理 涂片固定 金胺O染色 盐酸酒精脱色 复染
涂布均匀，不可过厚
时间可稍微延长，但不可少于规定时间
脱色时间依片子厚薄适当调整
墨汁染色法
标本：脑脊液 处理方法：离心或用细胞离心机离心浓缩 染色方法：墨汁染色（负染色）
结果：
在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用 外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较 高、染色过程要求非常严格，而普通染色法虽不 能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和 芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊 染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特 殊结构染色法。
鞭毛：变形杆菌
标本处理
痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm 长),每张玻片只涂一份标本。
脓液： 同痰涂片法。
病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再行涂片。
大小、厚度同痰涂片。
体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。
有一层类脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的
作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染 色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此 时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色），也就易于鉴 别。
二、步骤
标本处理
涂片固定
酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染
镜检
染色过程中的细菌颜色变化：
固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
响染色效果。
2.染液
染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果
3.细菌因素
被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会
影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性，
所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现
革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
革兰氏阳性链球菌例子
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
革兰氏阴性弧菌例子
革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
革兰氏阴性弯曲菌例子
革兰氏阳性棒状杆菌例子
抗酸染色法
一、原理
结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面
常见细菌图例
肺炎链球菌
无乳链球菌
化脓链球菌
缺陷乏养菌
脑膜炎奈瑟氏菌
淋病奈瑟菌
产单核李斯特菌
红斑丹毒丝菌
奴卡氏菌
豚鼠/嗜水气单胞
类鼻疽单胞菌
巴斯德菌属
阴道加特纳菌
军团菌
产气荚膜梭菌
巴斯德菌
霍乱弧菌
新型隐球菌
布鲁氏菌
染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含 量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解， 使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色 为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
二、步骤
标本处理
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染 乙醇脱色 复红复染
用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力， 即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。 不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不 能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。 复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的 目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
酸性染料:显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。 复合染料（中性染料）：是碱性染料和酸性染料的复
合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料(伊红天青)等；
荧光染料：如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。
用于某些特殊的染色技术。
脂溶性染料
如Sudan black。
染色方法的分类
1.单染法:采用一种染料染色 如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种细菌均染成同 一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小，对 细菌的鉴别价值不大。
大小、厚度同痰涂片。
脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
标本处理注意事项
标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不 均影响结果判读，或使染色不均造成阴阳不定。
标本涂布不能过厚，影响染色效果。
体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
负染色法
所谓负染色法是指使背景着色而细菌本身不着色的一 种染色方法。常用的有墨汁染色法。也可用酸性染料如刚 果红或水溶性苯胺黑等进行染色。因酸性染料带负电荷， 而细菌本身在近乎中性的环境中也带负电荷，同种电荷相 排斥，故染色时菌体不着色，而只能使背景着色。实践中 常用墨汁负染色法配合单染色法（如美兰染色法）检查细 菌的荚膜，使背景成黑色；菌体呈蓝色；而荚膜不着色， 从而使荚膜包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。
细菌染色技术
细菌染色方法
细菌染色
活菌染色
死菌染色
燃料与细胞 结合而染色
细胞不染色 而背景染色
负染色
正染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法
细胞壁染色法
抗酸染色
革兰氏染色
常用的染色方法 革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步
识别特殊形态
抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、
特殊染色
鞭毛染色
质量控制
每批或每天染色时应同步进行质控，质控方法如下： 染色方法
革兰染色 抗酸染色 荧光染色
质控菌株
Sau ATCC25923 Eco ATCC25922
阳性
紫色 红色 橘黄色荧光
阴性
红色 蓝色 无荧光
H37RV Eco ATCC25922
H37RV Eco ATCC25922
麻风病等
荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核
分枝杆菌等
其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色
常用燃料
碱性染料
带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染 料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、 刚果红等。
普通染色法
革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细 菌学家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今 已逾百年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方 法。
一、原理
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，
且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，
2.复染法（鉴别染色）: 采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使 不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的 颜色，以便鉴别细菌。
染色过程
涂片 干燥 固定
水洗、吸干 镜检 染色
细菌基本形态结构
基本形态
球菌 杆菌 弧菌
特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌
荚膜：肺炎链球菌
抗酸杆菌
非抗酸杆菌
三、结果:
抗酸菌———红色；
非抗酸菌——蓝ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
抗酸染色注意事项
每张玻片只能涂一个标本，以免染色过程中因冲洗使菌体脱 落，造成阴阳性结果混淆； 注意生物安全，自我防护； 脱色时间依据涂片厚薄适当调整，以无红色为止。
抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风 杆菌）和非抗酸菌。