细菌一般染色方法
细菌一般染色方法
细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术，通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法：简单染色是最基础的细菌染色方法，主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下：1.取一片细菌涂片，将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂，覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟，用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状，并能够区分一些基本形态和结构，但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法：阴性染色可使细菌显现为透明，而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上，使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上，使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液，并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色，使细菌透明，从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法：阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状，常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上，使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟，然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌，使其呈现有色的形态，便于观察和鉴定。
此外，还有一些特殊染色方法，如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法，通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液，以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法，将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后，用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色，最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
常用微生物染色方法
WOIRD格式革兰染色抗酸染色：分支杆菌属，诺卡放线菌属。
石炭酸复红染色，金永染色。
芽孢染色：用于区分细菌的芽孢和营养细胞。
结果芽孢染成绿色，营养细胞为红色。
晶体染色：观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。
结果晶体染成紫色，芽孢为透明椭圆形，仅见具有轮廓的折光体。
鞭毛染色：有赖夫生染色法、银盐染色法，西萨-基尔染色法等。
一般以西萨-基尔（Cesares-Gill）染法效果最佳。
异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色，直接涂片或改良阿伯特法染色。
墨汁荚膜染色：观察菌体有无荚膜，如新型隐球菌。
碳素墨汁。
镀银染色：螺旋体吉姆萨染色：螺旋体荧光染色魏申染色（wayson）染色：鼠疫耶尔森杆菌。
铬酸P、A、S真菌类染色。
结果：曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。
曲霉菌丝周边紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。
Mann氏甲基蓝伊红染色法：病毒包涵体染色。
Negri氏小体红色。
Nacchiavello氏染色：病毒包涵体染色。
结果：包涵体、立克次氏体均染红色，其余组织呈蓝色。
Crocott-Gomori氏六胺银法：新型隐球菌碘染色法吉姆萨染色：衣原体乳酸酚棉蓝染色，糖原染色：真菌，前者适用于所有真菌，呈蓝色。
吉姆萨染色，瑞氏染色：鞭毛虫，滴虫，锥虫，疟原虫，弓形虫，隐孢子虫等原虫。
三色染色，碘染色：阿米巴等原虫。
荧光素吖啶橙染色：疟原虫。
金胺-酚染色：隐孢子虫。
甲苯胺蓝，四胺银染色：耶氏肺孢子虫。
专业资料整理。
常见细菌染色及临床意义
类别：
革兰染色法 抗酸染色法
芽胞染色法 鞭毛染色法 特殊染色法 荚膜染色法 异染颗粒染色法等
革兰氏染色法（Gram Stain）
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
步骤：
结果:
涂片固定
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
结晶紫初染
碘液媒染
95%乙醇脱色
番红复染
结晶紫初染１min
菌的大小、形态和排列。
染料：(1) 吕氏美蓝液；
(2) 稀释石碳酸复红液 。
方法： 结果：吕氏美蓝染色后菌体呈蓝色；
稀释石碳酸染色后菌体呈红色。
单染色方法
涂片
干燥
固定
镜检
水洗、吸干 染色 1 min
复染色法
特点：既可以观察细菌的形态结构，还可根据 染色反应及着色深浅鉴别细菌的种类，
故又称鉴别染色法。
细菌染色方法及临床意义
细菌染色法:
细菌染色意义
由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适 当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造 及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。
革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法， 籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。
单染色法
特点：细菌为统一的单一颜色,可以观察细
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
革兰染色法的原理
目前尚未明了 三大学说
通透性学说 化学学说 等电点学说
通透性学说
G+细菌细胞壁致密,脂类含量低,蛋白含量高, 遇乙醇变性,通透性不强,已进入细胞内的结晶 紫不能透出,保留了紫色;
G-细菌细胞壁较疏松,脂类含量高,蛋白含量低, 遇乙醇脂类溶解,通透性加强,已进入细胞内的 结晶紫容易透出,被复红复染成红色.
细菌常用染色方法
细菌常用染色方法
细菌常用的染色方法包括：
1. 革兰氏染色法：根据细菌细胞壁的不同组成，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
该方法使用革兰氏紫染料染色，然后使用碘酒处理和洗涤，最后用洋红染色，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
2. 厌氧杆菌染色法：用甲基蓝和碘溶液混合物染色，可以区分厌氧杆菌和其他菌种。
3. 浓缩染色法：用詹氏菲洛染料染色，然后用酒精淋洗和乙醚蒸发，最后用洋红染色。
这种方法可以观察到细菌的形态、结构等细节。
4. 封闭染色法：将细菌培养在带有染色剂的琼脂上，细菌会吸收染料并形成深色颗粒。
5. 微胞溶解染色法：将细菌培养在含有亚甲蓝的琼脂平板上，细菌会吸收染料并产生颜色。
6. 阴离子染色法：使用负电染料如酸性染料贾氏深蓝染色或卡尔巴查染色，细菌细胞呈现颜色。
这些染色方法可以帮助鉴定细菌的形态、结构和组成，辅助进行细菌分类和鉴定。
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
常用细菌染色方法
常用细菌染色方法
常用的细菌染色方法包括：
1. 革兰染色法（Gram staining）：将细菌样品先用碘溶液固定，然后依次涂抹上紫色染料（紫薄荷）和红色染料（碱基红），最后用酒精洗去多余染料。
革兰阳性菌会呈紫色，而革兰阴性菌会呈红色。
2. 酸忍染色法（Acid-fast staining）：用高温和浓酸染料如石蜡-费劳丁（carbol-fuchsin）对细菌样品进行染色，然后用酸洗去多余染料。
酸忍阳性菌会呈红色，而其他菌则无法保留染色。
3. 吉姆萨染色法（Giemsa staining）：将细菌样品用吉姆萨染料染色，然后用溶液洗去多余染料。
这种染色方法可以用于细菌形态和结构的观察。
4. 霍乱弧菌染色法（Cholera vibrio staining）：将细菌样品用霍乱弧菌碱性溶液、大草胺D染料和酒精进行染色和洗去多余染料，从而观察霍乱弧菌的形态特征。
5. 肉眼法：将细菌样品放在平板培养基上培养一段时间，然后通过眼睛观察细菌是否在培养基上生长形成菌落。
这种方法适用于一些较大的菌落，如某些肠道细菌。
以上是常见的几种细菌染色方法，不同染色方法适用于观察不同的细菌特征和结构。
常用细菌染色技术
三、结果:
阳性菌——紫色
阴性菌——红色
固定 初染
媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN” （Gram’s Negative）表示。
四、影响因素
1.操作：
涂片的厚薄，不宜过厚 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风 杆菌）和非抗酸菌。
荧光染色法
一、原理
抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用
含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。
标本涂布不能过厚，影响染色效果。 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
普通染色法
革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细菌学 家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今已逾百 年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法。
一、原理
体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。 大小、厚度同痰涂片。
脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
标本处理注意事项
标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不均影响结果判读， 或使染色不均造成阴阳不定。
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽 聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料 复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多， 肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细 胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无 色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
细菌染色和涂片观察的方法
细菌染色和涂片观察的方法细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。
下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。
一、细菌染色方法：1.革兰氏染色法：革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。
(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。
(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。
(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。
(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。
(7)洗净玻片，以去除碘酒液。
(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。
(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。
(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。
(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。
(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。
(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。
2.肥湖水染色法：肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。
步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。
(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。
(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。
(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。
(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。
二、涂片观察方法：1.涂片制备：涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。
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操作过程
取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 →
石炭酸复红加温染色8~10分钟后→ 用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗后，用碱性美蓝复染1分钟→水洗， 印干 → 镜检
细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间， 故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体 蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷 的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合， 使细菌被染成紫色或红色。
一、细菌染色标本片的制备
细菌染色检查，首先要进行细菌标本制 备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、 固定三步。
固定的目的和方法
结晶紫初染
１分钟水洗
卢戈碘液媒染
１分钟水洗
（４）
９５％乙醇脱色
３０秒水洗
复红复染
３０秒水洗吸干
结晶紫初染１分钟
水
洗
碘液媒染 １分钟
水 洗
酒精脱色 ３０秒
水 洗
复红复染
３０秒
水 洗
滤纸吸干 油镜镜检
抗酸染色法(acid-fast stain)
分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染 色法不易着色，须用抗酸染色法。 注意事项
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得 更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火染 （碘液） 脱色（酒精） 复染（复红）
Crystal violet
滤纸吸干 油镜镜检
safranin
染色步骤
（１） （２） （３）
常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同 可分为以下类型：
碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子 部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子 部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。
革兰染色原理
结核分枝杆菌(M.tuberculosis)
形态：
细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。
染色性：
不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质 蓝色。
细菌基本形态结构观察
基本形态
球菌 杆菌 弧菌
葡萄球菌 链球菌 肺炎球菌 脑膜炎球菌 革兰阴性 革兰阳性
特殊结构
芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌 荚膜 肺炎球菌 鞭毛 变形杆菌
肺炎（双）球菌
荚膜
常用的细菌染色方法
革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察
细菌染色意义
由于细菌个体微小，基本上无色透明， 故将其用适当染料染色观察，方能显示 它的形态、大小、构造及染色特性等， 在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种 染色方法，籍此染色法，可将所有细菌 区分为两大类。
细菌染色方法及原理