细菌简单染色
细菌一般染色方法
细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术，通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法：简单染色是最基础的细菌染色方法，主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下：1.取一片细菌涂片，将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂，覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟，用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状，并能够区分一些基本形态和结构，但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法：阴性染色可使细菌显现为透明，而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上，使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上，使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液，并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色，使细菌透明，从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法：阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状，常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上，使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟，然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌，使其呈现有色的形态，便于观察和鉴定。
此外，还有一些特殊染色方法，如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法，通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液，以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法，将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后，用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色，最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
02-实验三、细菌简单染色
三、操作步骤
（一）细菌的简单于玻片中央，用接种环 以无菌操作从金黄色葡萄球菌平板上挑取少许菌苔于水滴中， 混匀成薄膜。
载玻片无油迹；滴蒸馏水不要太多；涂片要涂抹均匀
2.干燥 室温自然干燥
3.固定 涂面朝上，通过火焰2-3次，热固定温度不宜过高，以免 改变或破坏细胞形态。 4.染色 滴加石炭酸复红染液或吕氏碱性美蓝染液于涂片上，染色 约1-2分钟
实验三、细菌的简单染色
一、实验目的与要求
1 .学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简 单染色的方法 2 .掌握油镜的使用方法和无菌操作技术
二、器材
1.菌种 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 2.染色剂：石炭酸复红染液或吕氏碱性美蓝染液 3.仪器及其他用具 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 香柏油 二甲苯 擦镜纸 蒸馏水
5.水洗 用自来水冲洗，直至涂片上流下的水为无色为止。
Note:不要直接冲洗涂面，使水从载玻片的一端流下。
水流不宜过大，以免涂片薄膜脱落
6.干燥 自然干燥或用吸水纸吸干
7.镜检 涂片必须完全干燥后才能依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察
结果要画出形态图
细菌单染色及革兰氏染色过程观察
BEIJING SOLARBIO SCIENCE &TECHNOLOGY CO.,LTD细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察1.基本原理（1）简单染色法用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
（2）革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。
碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染BEIJING SOLARBIO SCIENCE &TECHNOLOGY CO.,LTD 液一般是结晶紫。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。
细菌简单染色法.
简单染色微生物染色原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
步骤1、涂片1.取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；2.用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；3.将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。
也可用电吹风低温吹干。
3、固定手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。
原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。
4、染色将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。
染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min；草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。
注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。
水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。
6、干燥自然干燥：平放于室温，自然干燥；吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。
配方1、吕氏碱性美蓝染液溶液A 美蓝0.6克；95%乙醇30毫升溶液B 氢氧化钾0.01克；蒸馏水100毫升分别配制溶液A和B 配好后混合即可。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
实验三简单染色法和革兰氏染色法
实验三简单染色法和革兰氏染色法实验三简单染色法和革兰氏染色法（一）细菌的简单染色法1实验目的1.1熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能1.2学习微生物涂片、染色的基本技术1.3掌握细菌的简单染色法1.4初步认识细菌的形态特征，学习油镜的使用方法和无菌操作技术2 实验原理细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。
利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
此法操作简单，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
一般使用碱性染料进行简单染色。
碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。
因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用作简单染色的燃料有美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等。
酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。
染色前必须固定细菌，其目的有二：一是杀死细菌并使菌体黏附于玻片上；二是增加对染料的亲和力。
常用的有加热和化学固定两种方法。
固定时尽量维持细胞原有的形态。
3实验材料3.1菌种金黄色葡萄球菌约18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物。
3.2染色剂草酸铵结晶紫染液，番红染液。
3.3仪器或其他用具显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签等。
4 流程涂片干燥固定染色水洗干燥镜检5 步骤5.1涂片在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴生理盐水或无菌蒸馏水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1～1.5cm2。
实验三 细菌的简单染色与形态观察
实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色和形态学观察一、目的要求：1.了解并掌握简单细菌染色的机理和技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
2、实验材料：1株：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌aureus等培养好的细菌斜面；2.染料：结晶紫3.其他：显微镜、玻片、接种环、酒精灯、无菌水、雪松油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、基本原则：染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。
因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
用于微生物染色的染料是苯环上带有显色基团和辅助基团的有机化合物。
显色基团决定了化合物的颜色特征，助色基团决定了化合物的成盐性。
染料通常是盐，分为酸性染料和碱性染料。
在微生物染色中，碱性染料更常用，如亚甲基蓝、结晶紫、碱性红、砂黄、孔雀绿等。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性和弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后带有正电荷，很容易与菌体结合使细菌着色。
通过本实验，我们可以学习和掌握细菌染色技术，了解细菌细胞的形态，巩固课堂知识，增加感性知识。
四、方法与步骤：（一）制片1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌从斜面上取少量真菌苔藓，放入水滴中，搅拌均匀，涂膜，涂膜面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温下自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目其主要目的是使细胞质凝固，以固定细胞形状，并使其牢固地附着在载玻片上。
4.染色：将涂片放在水平位置，滴下结晶紫染色液（最好只覆盖涂片），染色1分钟左右。
实验细菌的简单染色与革兰氏染色
掌握简单染色和革兰氏染色的操作方法
简单染色
将细菌涂片或培养物直接与染料混合 ，然后进行观察。操作简单，适用于 初步观察细菌形态。
革兰氏染色
一种特殊的染色方法，通过结晶紫初 染、碘液媒染、酒精脱色和沙黄复染 等步骤，将细菌分为革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两类。
出版年份：XXXX年
THANK YOU
简单染色方法简便，操作相对容易，但只能显示细菌的形态 和结构，不能提供细菌的种类信息。
革兰氏染色原理
01
02
03
04
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革兰氏染色是一种常用 的细菌鉴别染色法，通 过使用结晶紫、碘液和 酒精等染料对细菌进行 染色，能够将细菌分为 革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌两大类。
革兰氏染色的原理主要 是基于细菌细胞壁的成 分和结构不同，导致对 染料的吸附和着色能力 。
复染
将涂片浸入稀释后的伊 红或沙黄染色液中，染
色一定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除 染色液。
观察
在显微镜下观察染色结 果，判断细菌是革兰氏
阳性还是阴性。
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实验结果与分析
简单染色结果与分析
染色结果
通过简单染色法，细菌被 染上了不同的颜色，如红 色或紫色。
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涂片制备
将细菌均匀涂在载玻片上，晾 干。
染色
将涂片浸入染色液中，染色一 定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除染色液 。
观察
在显微镜下观察染色结果，判 断细菌类型。
革兰氏染色步骤
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涂片制备
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2、干燥
❖ 将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上， 室温下自然干燥。
3、固定
❖手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片， 涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次， 热固定细菌细胞。
原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使 细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形 态，并使之牢固附着在载玻片上。
注意：热固定温度不宜过高，否则会改变 甚至破坏细胞形态。
简单染色方法
涂片
干燥
固定
镜检
干燥
水洗
染色
1、涂片
1、取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载 玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）；
2、无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许 菌苔；
3、将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀 并涂成薄膜。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
微生物染色原理
❖在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞 通常带负电荷；
❖而碱性染料在电离时，其分子的染色部分 带正电荷；
❖带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带 负电荷细菌细胞结合使细菌染色。
材料
1、菌种 2、染色剂 3、仪器或其他用具：
➢ 显微镜 ➢ 酒精灯 ➢ 载玻片 ➢ 接种环
➢ 香柏油 ➢ 二甲苯 ➢ 擦镜纸 ➢ 生理盐水等。
注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应 使水从载玻片的一端流下。水流不宜过 急，过大，以免涂片薄膜脱落。
6、干燥
❖自然干燥：将染好色的细菌涂片平放在 载玻片架上，室温下自然干燥；
❖吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻 片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；
❖吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张 吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细 菌涂片两面水分吸干。
7、镜检
❖涂片干后镜检。 ❖注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜
观察。 ❖防止水的折射，以便于观察。
无菌操作技术
球菌
肺炎链球菌
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
大肠杆菌Biblioteka 变形杆菌绿脓杆菌螺菌
幽门螺杆菌 钩端螺旋体
霍乱弧菌
实验六、细菌的简单染色法
目的要求
1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌 握细菌的简单染色法。
2、初步认识细菌的形态特征。 3、学习显微镜（油镜）的使用方法和无菌
操作技术。
简单染色的意义
1、简单染色目的是观察细菌的形态。 2、细菌的形态是其基本特征。 3、细菌的形态特征是其分类鉴定的重要依
据之一。
❖光学显微镜
➢普通光学显微镜 ➢相差显微镜 ➢暗视野显微镜
染色的必要性
❖因为细菌微小而且透明 ❖如果不染色反差就很低 ❖染色后可以增加反差
微生物染色的染料
❖是一类苯环上带有发色基团和助色基团 的有机化合物。
❖染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染 料两大类。
❖在微生物染色中，碱性染料较常用，如 常用的美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱 性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都 属于碱性染料。
微生物分类鉴定依据
❖形态学和生理生化特征 ❖血清学试验和噬菌体分型 ❖氨基酸序列和蛋白质分析 ❖核酸的碱基组成、序列和核酸分析
细菌的基本形态
Spherical coccus Rod-shaped bacillus
Spired-shaped spirallum
细菌形态观察方法
❖电子显微镜
➢透射式电子显微镜 ➢扫描电子显微镜
4、染色
❖将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架 上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜）。
❖染色时间：
➢吕氏碱性美蓝染色1~2min； ➢石炭酸复红染色约1min ➢草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗
❖将细菌涂片上染液倒入废液缸中；
❖手持细菌染色涂片，置于废液缸上方， 用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的 水无色为止。