细菌简单染色

❖光学显微镜
➢普通光学显微镜 ➢相差显微镜 ➢暗视野显微镜
染色的必要性
❖因为细菌微小而且透明 ❖如果不染色反差就很低 ❖染色后可以增加反差
微生物染色的染料
❖是一类苯环上带有发色基团和助色基团 的有机化合物。
❖染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染 料两大类。
❖在微生物染色中，碱性染料较常用，如 常用的美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱 性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都 属于碱性染料。
简单染色方法
涂片
干燥
固定
镜检
干燥
水洗
染色
1、涂片
1、取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载 玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）；
2、无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许 菌苔；
3、将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀 并涂成薄膜。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
微生物分类鉴定依据
❖形态学和生理生化特征 ❖血清学试验和噬菌体分型 ❖氨基酸序列和蛋白质分析 ❖核酸的碱基组成、序列和核酸分析
细菌的基本形态
Spherical coccus Rod-shaped bacillus
Spired-shaped spirallum
细菌形态观察方法
❖电子显微镜
➢透射式电子显微镜 ➢扫描电子显微镜
注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应 使水从载玻片的一端流下。水流不宜过 急，过大，以免涂片薄膜脱落。
6、干燥
❖自然干燥：将染好色的细菌涂片平放在 载玻片架上，室温下自然干燥；
❖吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻 片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；
❖吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张 吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细 菌涂片两面水分吸干。
微生物染色原理
❖在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞 通常带负电荷；
❖而碱性染料在电离时，其分子的染色部分 带正电荷；
❖带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带 负电荷细菌细胞结合使细菌染色。
材料
1、菌种 2、染色剂 3、仪器或其他用具：
➢ 显微镜 ➢ 酒精灯 ➢ 载玻片 ➢ 接种环
➢ 香柏油 ➢ 二甲苯 ➢ 擦镜纸 ➢ 生理盐水等。
实验六、细菌的简单染色法
目的要求
1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌 握细菌的简单染色法。
2、初步认识细菌的形态特征。 3、学习显微镜（油镜）的使用方法和无菌
操作技术。
简单染色的意义
1、简单染色目的是观察细菌的形态。 2、细菌的形态是其基本特征。 3、细菌的形态特征是其分类鉴定的重要依
据之一。
7、镜检
❖涂片干后镜检。 ❖注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜
观察。 ❖防止水的折射，以便于观察。
无菌操作技术
球菌
肺炎链球菌
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
大肠杆菌
变形杆菌
绿脓杆菌
螺菌
幽门螺杆菌 钩端螺旋体
霍乱弧菌
4、染色
❖将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架 上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜）。
❖染色时间：
➢吕氏碱性美蓝染色1~2min； ➢石炭酸复红染色约1min ➢草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗
❖将细菌涂片上染液倒入废液缸中；
❖手持细菌染色涂片，置于废液缸上方， 用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的 水无色为止。
2、干燥
❖ 将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上， 室温下自然干燥。
3百度文库固定
❖手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片， 涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次， 热固定细菌细胞。
原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使 细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形 态，并使之牢固附着在载玻片上。
注意：热固定温度不宜过高，否则会改变 甚至破坏细胞形态。