实验细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
实验二：细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理1、染色原理：细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
2、革兰染色法原理：革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。
如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器，材料和用具1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液四、实验步骤（1）简单染色1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。
2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
3、干燥：涂片后待其自然干燥。
4、固定：将以干燥好的涂片标本朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，要求载玻片温度不能超过60度，以手背触载片不烫为宜。
5、染色：滴加一滴结晶紫染液，染色1min。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告实验三细菌的简单染色和革兰氏染色实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一、目的与要求1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3、识别细菌革兰氏染色结果二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G?)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。
三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillus subtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；细菌的简单染色步骤：细菌的革兰氏染色步骤：涂片,干燥,固定,结晶紫染色,水洗,碘液媒染,水洗,乙醇脱色,水洗,番红复染,水洗,干燥,镜检.五、实验关键步骤和注意点：1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
实验二+细菌的简单染色与革兰氏染色
滴加碘液 媒染1min; 碘液, (6)媒染 滴加碘液,媒染 ) ; 用水洗去碘液; (7)水洗 用水洗去碘液; ) 将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色 乙醇脱色 (8)脱色 将玻片倾斜,连续滴加 ) 乙醇脱色2 0-25s至流出液无色,立即水洗; 至流出液无色,立即水洗; 至流出液无色 滴加沙黄复染5min; 沙黄复染 (9)复染 滴加沙黄复染 ) ; (10)水洗 用水洗去涂片上的沙黄染色液; 用水洗去涂片上的沙黄染色液; ) (11)晾干 将染好的涂片放空气中晾干或者用吸 ) 水纸吸干; 水纸吸干; 镜检时先用低倍,再用高倍, (12)镜检 镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油 ) 镜观察, 镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应 性.
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以 简单染色法 是只用一种染料使细菌着色以 显示其形态, 显示其形态,简单染色不能辨别细菌细胞 的构造. 的构造. 革兰氏染色法是 年由丹麦病理学家C.G 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 年由丹麦病理学家 ram所创立的.革兰氏染色法可将所有的 所创立的. 所创立的 细菌区分为革兰氏阳性菌( G+ ) 和革兰 细菌区分为革兰氏阳性菌 ( 氏阴性菌( 两大类, 氏阴性菌(G-)两大类,是细菌学上最常 用的鉴别染色法. 用的鉴别染色法.该染色法所以能将细菌 分为G 菌和G 是由这两类菌的细胞 分为 + 菌和 - 菌 , 是由这两类菌的 细胞 壁结构和成分的不同所决定的 所决定的. 壁结构和成分的不同所决定的.
六 思考题及作业题
1,当对未知菌进行革兰氏染色时 , 如何保 , 当对未知菌进行革兰氏染色时, 证操作正确及结果可靠? 证操作正确及结果可靠? 2,简述革兰氏染色的原理和步骤. ,简述革兰氏染色的原理和步骤.
球菌
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
答：
染色时，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
7、叙述无菌操作时应注意的问题？
答：
1、使用前超净工作台开15分钟紫外线
2、注意开通风
3、使用的器皿注意消毒
4、操作时戴无菌手套或并用75%酒精消毒
5、操作时尽量靠近酒精灯火焰
1．涂片：
取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。
微生实验报告
姓名：
xx
专业年级：2011级生物技术
学号：1032
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色
一、实验目的
学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。
二、实验原理
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
(2)革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌无色。
4、你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
微生物学实验-简单染色与革兰氏染色
（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3 次固定（以不烫手为宜）。
1 简单染色：
实验方法
2 革兰氏染色： （7）水洗：用水洗去碘液。 （8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色30 s
左右至流出液无色，立即水洗。
（9）复染：滴加蕃红复染2 min。 （10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 （11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水
纸吸干。
（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油 镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
实验器材
菌种： 苏云金芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌 液体培养12-16h的枯草芽胞杆菌和培养24h的大肠 杆菌
染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、蕃红、 美蓝、醇醚、香柏油
器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、 擦镜纸（脱脂棉）、显微镜
实验方法
1 简单染色： （1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片上滴2滴蒸馏
实验完毕后的处理
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： （1）先用脱脂棉将油镜头上的油擦去。 （2）用脱脂棉沾少许醇醚将镜头擦2—3次。 （3）再用干净的脱脂棉将镜头擦2—3次。 （4）注意擦镜头时向一个方向擦拭。
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度， 革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色 时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性 菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。
2 革兰氏染色： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）晾干：与简单染色法相同。 （3）固定，与简单染色法相同 （4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，
实验细菌的简单染色与革兰氏染色
掌握简单染色和革兰氏染色的操作方法
简单染色
将细菌涂片或培养物直接与染料混合 ，然后进行观察。操作简单，适用于 初步观察细菌形态。
革兰氏染色
一种特殊的染色方法，通过结晶紫初 染、碘液媒染、酒精脱色和沙黄复染 等步骤，将细菌分为革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两类。
出版年份：XXXX年
THANK YOU
简单染色方法简便，操作相对容易，但只能显示细菌的形态 和结构，不能提供细菌的种类信息。
革兰氏染色原理
01
02
03
04
05
革兰氏染色是一种常用 的细菌鉴别染色法，通 过使用结晶紫、碘液和 酒精等染料对细菌进行 染色，能够将细菌分为 革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌两大类。
革兰氏染色的原理主要 是基于细菌细胞壁的成 分和结构不同，导致对 染料的吸附和着色能力 。
复染
将涂片浸入稀释后的伊 红或沙黄染色液中，染
色一定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除 染色液。
观察
在显微镜下观察染色结 果，判断细菌是革兰氏
阳性还是阴性。
05
实验结果与分析
简单染色结果与分析
染色结果
通过简单染色法，细菌被 染上了不同的颜色，如红 色或紫色。
03
04
涂片制备
将细菌均匀涂在载玻片上，晾 干。
染色
将涂片浸入染色液中，染色一 定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除染色液 。
观察
在显微镜下观察染色结果，判 断细菌类型。
革兰氏染色步骤
01
02
03
涂片制备
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
占细胞壁的90%
占细胞壁的10%
2020/9/20
2020/9/20
革兰氏阳性细菌的细胞壁
1、细胞壁
2020/9/20
成 分
肽 聚 糖 磷 壁 酸 类 脂 质 蛋 白 质
革兰氏阳革性兰\氏阴染性色细与菌细的胞细壁胞：壁对比
占 细 胞 壁 干 重 的 %
革 兰 氏 阳 性 细 菌
2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色\革兰氏染色的方法，并能正确染色 4 巩固显微镜油镜的使用方法。
2020/9/20
2020/9/20
（一）细菌的简单染色原理
细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察， 所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式. 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可 以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均 应维持细胞原有形态。
七 思考题
1 细菌简单染色操作过程中应注意哪些事项？ 2 如果对一未知菌进行革兰氏染色，如何能确证染色 结果正确可靠？ 3 为什么说95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？
下次实验内容：
实验四 微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数
2020/9/20
2020/9/20
2020/9/20
1
阳性菌
2
3
阴性菌
4
六 实验报 告
1 写出实验目的 2 写出简单染色、革兰氏染色的基本原理 3 根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。
2020/9/20
菌名： 放大倍数： 细菌简单染色结果图
2020/9/20
放大倍数： 细菌革兰氏染色结果图 要求： 标出菌名、颜色、阳性或阴性菌
1 涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。
2 初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。 3 媒染：滴加碘液染色1---2min，后用水冲洗，甩尽残余水 4 脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度），
然后立即用水冲洗。 5 复染：用蕃红或石炭酸复红覆盖涂片进行复染，蕃红染
2---3min，如果石炭酸复红染1min。水洗，晾干。 6 镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察
2020/9/20
（二）革兰氏染色基 本原理
革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是 根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而 使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细 菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂 复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的 是革兰氏阳性细菌。
2020/9/20
1
2
？
3
4
2020/9/20
三 实验材 料
大肠杆菌（24 h 培养）斜面菌种 枯草杆菌（16 h 培养）斜面菌种
2020/9/20
四 无菌操作过 程ຫໍສະໝຸດ 无菌操作：不让除我们接种的微生物以外
其它微生物侵入的技术。
2020/9/20
2020/9/20
五 操作步 （一） 简骤单染色操
细胞的结构
一 般 结 构 ： 一 般 细 菌 都 有 的 构 造2020/9/20
一特 般殊 细结 菌构 在： 特部 殊分 环细 境菌 下具 才有 有的 的或
革兰氏染色 C.Gram（革兰）于1884 年发明的一种鉴别不同类 型细菌的染色方法。
2020/9/20
◆用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2020/9/20
2020/9/20
实验三 细菌的简单染色和 革兰氏染色
2020/9/20
细菌的简单染色和革兰氏染色
• 一 目的要求 • 二 基本原理 • 三 实验材料 • 四 无菌操作过程 • 五 操作步骤 • 六 实验报告 • 七 思考题
2020/9/20
一 目的要 求
1 学习制染色片技术，学习简单染色\革兰氏染色原理， 理解着色机理。
作步骤
1 涂片：载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层 2 干燥： 3 固定：加热固定 4 染色：结晶紫染1min或蕃红染2-3min或石炭酸复红染1min。 5 水洗： 6 干燥： 7 镜检：低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。
2020/9/20
2020/9/20
（二）革兰氏染色操作 步骤
革 兰 氏 阴 性 细 菌
含 量 很 高 （ 50~90）
含 量 很 低 （ ~10）
含 量 较 高 （ ＜ 50）
无
一 般 无 （ ＜ 2）
含 量 较 高 （ ~20）
无
含 量 较 高
2020/9/20
❖革兰氏染色原理：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻 留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时， 肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内， 细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因 其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细 胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。
◆用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
◆用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。
◆用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色