微生物实验考复习题仅供参考

微生物实验复习题一、名词解释：菌苔：如果把大量分散的纯种细胞密集地接种在固体培养基的较大表面上，结果长出的大量“菌落”已相互连成一片，这就是“菌苔”。

菌落：将单个细菌（或其他微生物）细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基表面（有时为内层），当它占有一定的发展空间处于适宜的培养条件下，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。

芽孢：是一些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，壁厚、透性低、不易着色。

荚膜：是一些细菌细胞外的一层胶状粘液物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽，与染料亲和力低。

细菌：细菌是单细胞原核微生物，基本形态为球状、杆状、螺旋状。

天然培养基：是指一类利用动、植物或微生物体包括用其提取物制成的培养基，这是一类营养成分既复杂又丰富、难以说出其确切化学组成的培养基。

例如：牛肉膏蛋白胨、麦芽汁培养基。

合成培养基：组合培养基又称合成培养基或综合培养基，是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。

例如：高氏一号培养基。

半组合培养基：又称半合成培养基，指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。

例如：马铃薯蔗糖培养基。

液体培养基：一类呈液体状态的培养基，在实验室和生产实践中用途广泛，尤其适用于大规模地培养微生物。

固体培养基：一类外观呈固体状态的培养基。

根据固态的性质又可分为：固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基和滤膜。

半固体培养基：是指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态培养基。

例如：“稀琼脂”。

二、理论书内容：1、细菌、放线菌、酵母菌、霉菌各菌落的比较。

菌落特征微生物类别单细胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌主要特征菌落含水状态很湿或较湿较湿干燥或较干燥干燥外观形态小而凸起或大而平坦大而凸起小而紧密大而疏松或大而致密细胞相互关系单个分散或有一定排列方式单个分散或假丝状丝状交织丝状交织形态特征小而均匀，个别有芽孢大而分化细而分化粗而分化参考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合程度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落颜色多样单调，一般呈乳脂或矿烛色，少数红色或黑色十分多样十分多样菌落正反面颜色的差异相同相同一般不同一般不同菌落边缘一般看不到细胞可见球状，卵圆状或假丝状细胞有时可见丝状细胞可见粗丝状细胞细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香味常有泥腥味往往有霉味2、根霉、青霉、曲霉形态结构图。

根霉3、培养基种类。

（微生物营养）一、按对培养基成分的了解作分类：1、天然培养基：指一类利用动，植物或微生物包括用其提取物制成的培养基。

如牛肉膏蛋白胨培养基。

2、组合培养基：也叫组合培养基或综合培养基，是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。

例如：高氏一号培养基3、半组合培养基：又称半合成培养基，指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些一类呈天然成分的培养基。

例如：马铃薯蔗糖培养基二、按培养基外观的物理状态作分类1、液体培养基：一类呈液体状态的培养基，在实验室和生产实践中用途广泛，尤其适用于大规模的培养微生物。

2、固体培养基：一类外观呈固体状态的培养基。

可分为固化培养基，非可逆性固化培养基，天然固态培养基和滤膜。

①固化培养基：加有琼脂或明胶或海藻酸钠②非可逆性固化培养基：血清培养基或无机硅胶培养基③天然固态培养基：由天然固态基质直接配制成的培养基④滤膜3、半固体培养基：指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态培养基，一般可在液体培养基中加入0.5%左右的琼脂制成。

例如：“稀琼脂”,“直立柱”4、脱水培养基：指除水以外的一切营养成分的商品培养基，使用时只要加入适量水分并加以灭菌，分装即可，是一类既有成分精确又有使用方便的现代化培养基。

三、按培养基对微生物的功能作分类1、选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学，物理因素抗性的原理设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛应用于菌种筛选等领域。

（选择性培养基包括：①酵母菌富集培养基②Ashby无氮培养基③Martin培养基④含糖酵母菌培养基）2、鉴别性培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。

EBM培养基。

例如：EMB培养基中的伊红和美蓝两种苯胺染料可抑制G+细菌和一些难培养的G-细菌。

4、油镜的使用方法及与普通物镜的区别材料：显微镜，拭镜纸，液体石蜡油，二甲苯步骤：显微镜油镜的使用和维护1.将显微镜平稳地安放在实验台适宜处。

识别油镜头：标有100×、OIL、HI等字样。

2. 打开电源，用低倍镜对光，打开光圈，调节聚光镜的位置，使视野光线充足。

3. 标本上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油中接近玻片为止。

4. 从目镜观察，同时徐徐转动粗螺旋提升，见模糊物象后再用细螺旋调节，直到见到清晰物象为止。

5. 观察完毕，粗螺旋提高镜头，取下标本片，油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。

如油已干，可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭，并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯，因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

6.将镜头转呈“八”字，调低聚光器，对号送入柜子内存放原理：油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射入镜筒的光线极少，视野暗，物象不清晰。

如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物象。

•注意事项：•1、油不要滴太多•2、在调节焦距的时候要特别注意与载玻片之间的距离不要弄坏工具•3、调节时应该从下往上调节•4、在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。

•5、用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。

•如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。

在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

•6、油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。

油镜的使用和维护.使用油镜的正确操作步骤是:（1）低倍镜观察。

（2）高倍镜观察。

（3）转出高倍镜头，滴加香柏油后用油镜观察。

在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。

5.如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?首先要根据分离对象选择适宜的培养基。

若要分离真菌应选用马丁- 孟加拉红选择培养基；若要分离细菌应选用牛肉膏蛋白胨培养基；若要分离放线菌应选用高氏培养基。

土样采回来后，用常规的十倍稀释分离法进行稀释分离，若分离细菌，一般稀至 10-8, 若分离放线菌,一般稀至 10-6；若分离真菌，一般稀至10-4。

取最后三个稀释度倒平板获得单个菌落。

将平板上出现的单菌落转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度，若不纯，应将培养的单菌落斜面再次进行稀释分离。

倒平板获得单菌落，转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度。

反复几次直到得到菌体单一的单菌落方可认为是某一微生物的纯培养体。

6、灭菌、消毒、防腐概念及高温灭菌种类，实际应用。

一、灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。

还可分为：杀菌和溶菌。

二、消毒：消毒就是消除毒害，这里的“毒害”专指传染源或致病菌。

消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动、植物有害的病原菌，而对被消毒的对象基本无害的措施。

例如：一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法，对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行的巴氏消毒法。

三、防腐：防腐就是利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，即通过制菌作用防止食品、生物制品等对象发生霉腐的措施。

①低温：4℃以下②缺氧：抽真空、充氮或二氧化碳、加除氧剂③干燥：晒干、烘干或红外线干燥④高渗：盐腌（15%以上）和糖渍（70%以上）⑤高酸度：泡菜⑥高醇度：用白酒或黄酒。

例如：醉蟹、醉笋⑦加防腐剂：防腐剂、防霉剂高温灭菌的种类：1、干热灭菌法①火焰灼烧法：接种环、接种针的灭菌或带病原体的材料、动物尸体的烧毁。

②烘箱内热空气灭菌法2、湿热灭菌法①常压法a.巴氏消毒法：对牛奶、啤酒、果酒或酱油的低温消毒方法1)低温维持法：用于牛奶消毒只要在63摄氏度下维持30min即可2)高温瞬时法：用于牛奶消毒时只要在72~85摄氏度下保持15s或120~140摄氏度下保持2—4s即可。

b.煮沸消毒法：采用在100摄氏度下煮沸数分钟的方法。

例：日常的饮用水消毒。

c.间歇灭菌法：适用于不耐热培养基的灭菌。

例：培养硫细菌的含硫培养基就可采用此方法。

②加压法a.常规加压蒸汽灭菌法：适用于一切微生物学实验室、医疗保健机构或发酵工厂中对培养基及多种器材或物料的灭菌。

b.连续加压蒸汽灭菌法：仅适用于大型发酵厂的大批培养基灭菌。

7、化学杀菌剂、消毒剂的使用浓度、机制及应用类型名称及使用浓度作用机制应用AgNO3：0.1%~1% 沉淀蛋白质，使其变性皮肤，滴新生儿眼睛重金属盐类CuSO4：0.1%~0.5% 与蛋白质的基结合使失活杀植病真菌与藻类石碳酸：3%~5% 蛋白质变性，损伤细胞膜地面，家具，器皿酚类煤酚皂(来苏尔)：2% 蛋白质变性，损伤细胞膜皮肤蛋白质变性，损伤细胞膜，脱皮肤，器械醇类乙醇：70%~75%水，溶解类脂物品消毒，接种箱，接种室的熏醛类甲醛：0.5%~10% 破坏蛋白质氨基或氢键蒸精密仪器等的消毒高锰酸钾：0.1% 氧化蛋白质的活性基团皮肤，尿道，水果，蔬菜氧化剂过氧乙酸：0.2%~0.5% 氧化蛋白质的活性基团皮肤，塑料，玻璃，人造纤维表面活性剂新洁尔灭：0.05%~0.1% 蛋白质变性，破坏膜皮肤，黏膜，手术器械染料龙胆紫：2%~4% 与蛋白质的羧基结合皮肤，伤口最低抑制浓度：评定某化学药物药效强弱的标志，指在一定条件下，某药物毒性完全抑制特定微生物生长的最低浓度。

半致死剂量：是评定某药物毒性强弱的标志，指在一定条件下，某化学药剂能杀死50%试验动物时的剂量。

最低致死剂量：是评定某药物毒性的另一指标，指在一定条件下，某化学药物能引起试验动物群体100%死亡率的最低剂量。

8、用固体培养基分离微生物纯培养的三种方法。

（一）稀释倒平板法（pour plate method）先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。