霍乱弧菌检测
霍乱弧菌检测
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉 素平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可 疑菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌 的多价和单价抗血清进行玻片凝集试验， 结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
分别从庆大霉素琼脂或TCBS 琼脂、碱性琼脂
平板上各挑取5 个以上的（少于5 个的全部挑取） 疑似菌落接种于营养琼脂斜面置37℃18-24h 纯培养（即每份样品至少从4 个分离平板上获 得约20 株可疑菌落菌株），取斜面纯培养物 进行O1 群及O139 群霍乱诊断血清玻片凝集 试验，血清凝集阳性的菌株继续相关的系统鉴 定并报告结果。必须注意同一样品中O1、 O139群霍乱弧菌可能同时存在，有必要对所 有选出的菌株都进行凝集试验，以免遗漏。
用于霍乱弧菌的鉴定试验有：①霍乱红试验:霍乱弧菌的 两种生物型均呈阳性反应，但是，本反应并非霍乱弧菌 特有，许多能分解色氨酸和还原硝酸盐的细菌，均能产 生阳性反应；②糖发酵试验:霍乱弧菌分解葡萄糖、蔗糖、 甘露醇产酸不产气，不发酵阿拉伯糖；③粘丝试验:弧菌 属细菌除副溶血弧菌部分菌株外，均有此反应；④ O/129敏感试验：参照药敏试验方法进行。将O/129 10μg和150μg的纸片贴在接种有待测菌的琼脂平板上， 35℃孵育18～24h后，纸片周围出现任何大小的抑菌环 均为敏感；O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感，但已有对 O/129耐药的菌株出现；O139群对O/129耐药，用此 试验作鉴定时需特别谨慎，需结合其他试验结果加以综 合考虑；⑤耐盐试验:霍乱弧菌可在不含氯化钠和含有6 ％氯化钠培养基中生长，氯化钠浓度高于6％则不生长。
+
Ⅴ组噬菌体裂解
-
El-Tor 生物型 D + + + +
O1群霍乱弧菌的血清分型
霍乱弧菌检测
可作为检材。
A
11
（2）送检 剧烈腹泻病人的水样便含有大 量病菌，直接分离培养不难检出阳性。不
能立即检查的，要接种于培养基内，尽快 送往检验室。送检标本可放入（PH8.6-9.0） 碱性蛋白胨水，也可放入文—腊二氏保存 液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基 中。
菌体尾端有鞭毛，运动极为活泼，在暗视野 显微镜下呈流星样运动，培养温度以37℃为 最适宜，在碱性（PH8.8～9.0）肉汤或蛋白 胨培养基上易于生长。
A
3
霍乱弧菌染色图片
革
鞭兰毛染 Nhomakorabea染
色
色
A
4
分群和分型：
根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成139个 血清群。
根据是否与O1抗血清凝集分两大群， O1群霍乱弧菌：凡能与O1群抗血清发生凝集 非O1群霍乱弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。
的编码。 ▪ O139菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
A
10
标本采集和送检
1、粪便采集
（1）采样 应在发病早期，服用抗菌药物之 前完成，并尽快送到检验室。粪便标本采 集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新 鲜大便，也可用直肠棉拭或采便管由肛门 插入直肠内3cm-5cm处采取，水样便采取 1ml-3ml，成型便采取指甲大小的粪便量。
A
16
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
A
17
疑似菌落鉴定基本要求：
霍乱弧菌实验室检测
霍乱弧菌的实验室检测
目的:提高检出率,减少漏检以及误判的发生 手段:
检测人员是否有足够的责任心? 检测试剂准备是否齐全且符合要求? 是否严格按照检测流程进行操作?
霍乱概述
▪ 什么是霍乱?
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae）
引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波 及范围广、危害严重的甲类传染病。
霍乱弧菌
O1群 非O1群
古典生物型 埃尔托生物型
小川型 Ogawa (AB) 稻叶型 Inaba (AC) 彦岛型 Hikojim (ABC)
霍乱病原菌
O139群（Bengal）
O2-O200群
腹泻病原菌
▪ 病原体
O1群，O139群霍乱弧菌
▪ 发病特征：
剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－ 100％）
菌落鉴定
▪ 染色镜检
革兰染色阴性的短杆菌
▪ 血清凝集试验：
➢分别使用O1群，O139群霍乱血清进行凝集试验，同时使用生理盐水进行 对照凝集，以排除与生理盐水发生凝集的自凝菌。 ➢生理盐水不凝集，O1群血清明显凝集的菌落，进一步使用稻叶型和小川型 血清进行凝集试验，判定型别：稻叶型血清凝集而小川型血清不凝集的菌落 为稻叶型，小川型血清凝集而稻叶型血清不凝集的菌落为小川型，如稻叶型 血清和小川型血清均出现凝集的时候，要注意鉴别是否为彦岛型，需进行试 管凝集试验且两者的凝集效价均超过一半以上才能判定为彦岛型，因为某些 小川型菌落自身会带有少量的C抗原而出现与稻叶型血清发生弱凝集，因此 如小川型血清凝集较稻叶型血清凝集有明显优势时应维持小川型的判定。 ➢生理盐水不凝集，O139群血清明显凝集的菌落，一般为O139群，但其与 O22群及O155群甚至一些非霍乱弧菌会出现交叉凝集，由上级实验室进行 进一步确认。
霍乱弧菌检测技术的研究进展
霍乱弧菌检测技术的研究进展霍乱是一种由霍乱弧菌引起的急性肠道感染病，主要通过食物和水进行传播，严重时会导致腹泻、呕吐和脱水等症状，甚至危及生命。
对霍乱弧菌的快速准确检测技术一直是医学和公共卫生领域的研究热点之一。
近年来，随着生物技术和医学诊断技术的不断发展，霍乱弧菌检测技术也取得了一些重要进展，本文将就相关研究进展进行介绍和探讨。
1. PCR 技术在霍乱弧菌检测中的应用PCR（聚合酶链式反应）技术是一种常用的分子生物学检测方法，可以快速准确地检测出霍乱弧菌的存在。
通过PCR技术，可以将霍乱弧菌的 DNA 扩增成百万倍，从而提高其在样本中的检测灵敏度。
PCR技术还可以利用霍乱弧菌的特异基因序列来进行分子鉴定，从而确保检测结果的准确性。
目前，已经有许多研究使用PCR技术成功检测出霍乱弧菌，并且还可以通过实时荧光PCR技术实现对霍乱弧菌的快速定量检测，为临床诊断和流行病学调查提供了重要的技术手段。
2. 基于免疫学的检测方法除了分子生物学方法外，免疫学检测方法在霍乱弧菌检测中也占据重要地位。
ELISA （酶联免疫吸附试验）技术可以利用霍乱弧菌的特异抗原进行检测，通过对霍乱抗原和抗体的特异结合反应来实现对霍乱弧菌的定性和定量检测。
而且ELISA技术还可以通过对样本的多重检测来提高检测的准确性，从而适用于不同类型的样本，包括水样、食物样和临床样本等。
除了ELISA技术外，还有一些新型的免疫学检测方法，如免疫层析技术、免疫印迹技术等，也在霍乱弧菌检测中得到了一定的应用，并且具有一定的潜力和发展前景。
3. 基于生物传感器的检测技术生物传感器是一种将生物识别元件与传感器技术相结合的新型检测技术，可以实现对霍乱弧菌的快速、灵敏和特异检测。
目前，已经有研究利用抗体、酶、核酸等生物识别元件来构建针对霍乱弧菌的生物传感器，通过检测霍乱弧菌的生物分子来实现对其的检测。
生物传感器还具有实时检测、便携式检测、高通量检测等优点，可以满足在不同环境和场合下对霍乱弧菌的快速检测需求。
霍乱弧菌血清学检测标准操作规程
霍乱弧菌血清学检测标准操作规程
1．目的
规范霍乱弧菌的血清学检测标准操作规程。
2．原理
用已知的霍乱弧菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为霍乱弧菌。
3．试剂
霍乱弧菌诊断血清，生理盐水。
4．质控
霍乱弧菌ATCC14035阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。
5.操作步骤
5.1 先用接种环取1环生理盐水于玻片上，以接种针挑取少许菌落与盐水混匀，再取稀释血清1环与之混合，立即出现凝集者为阳性。
5.2 若有自凝现象改用生理盐水稀释的血清再做凝集。
与O1群霍乱弧菌血清凝集者即可定为霍乱弧菌，然后再进一步对霍乱弧菌分型。
6.结果判断
阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。
阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。
自凝：试验一侧及对照一侧
凝集。
7.注意事项
试验时应同时用生理盐水作对照，以防止出现假阳性。
8.临床意义
主要用于霍乱弧菌的鉴定。
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌是一种引起霍乱的弧菌属细菌。
为了有效防控霍乱疫情，国家制定了
相关的标准方法来监测和检测霍乱弧菌的存在和潜在威胁。
以下是关于霍乱弧菌国标标准方法的介绍。
霍乱弧菌国标标准方法主要包括样品采集、实验室分析和结果解读三个方面。
1. 样品采集：根据国家标准方法，样品的采集需要遵循严格的卫生规范。
一般
来说，水样、食物样品和环境表面样品是常见的采集对象。
采集时需要使用无菌容器，避免样品污染。
同时，应根据实际情况选择合适的采集方法和采样点，确保能够准确反映被测对象的情况。
2. 实验室分析：实验室分析是判定霍乱弧菌是否存在的重要环节。
通常采用培
养法进行分析，包括选择适当的培养基、温度和时间等。
在培养过程中，需要注意避免其他细菌的污染，保证结果的准确性。
此外，也可以使用分子生物学技术如PCR检测方法进行快速和准确的分析。
3. 结果解读：根据国家标准方法，对于从采集到的样品中检出霍乱弧菌的，应
根据相应的标准或参考值来进行解读。
结果解读需要根据实验室分析的结果，结合相关的卫生标准来判断是否存在风险，以及是否需要采取相应的控制和预防措施。
综上所述，霍乱弧菌国标标准方法是一种用于监测和检测霍乱疫情的重要手段。
准确采集样品、实验室分析和结果解读是该方法的关键步骤。
通过执行国家标准方法，我们能够及时发现和控制霍乱弧菌的传播，从而保障公众的健康和安全。
霍乱检测操作规程
霍乱检测操作规程霍乱是一种由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，其症状包括剧烈腹泻、呕吐和腹痛。
霍乱具有高度传染性，因此在进行霍乱检测时需要遵循一定的操作规程，以确保实验室工作人员和社会公众的安全。
下面是一份霍乱检测的操作规程，以供参考。
1. 实验室准备：- 确保实验室设备和试剂的完好和有效性。
- 准备好所需的培养基、试剂和仪器。
- 提前准备好相关实验记录和报告模板。
2. 实验室设备清洁和消毒：- 定期对实验室设备进行清洁和消毒，特别是接触到样本的仪器和工具。
- 使用合适的消毒剂对实验台面、试剂架和实验室周边进行消毒。
3. 样本采集和处理：- 使用适当的个人防护装备，包括手套、口罩和护目镜。
- 选择合适的采样方法，如直肠拭子、粪便样本或病人的呕吐物。
- 将采样好的样本放入严密密封的容器中，避免样本泄漏和污染其他样本。
- 将样本尽快送往实验室进行处理，以确保有效的检测结果。
4. 霍乱检测方法：- 使用合适的实验方法和试剂进行霍乱的检测，如PCR、免疫学检测或培养方法。
- 按照试剂和仪器的说明书进行实验操作，确保准确和可靠的结果。
- 对实验过程中的废液和废物进行正确处理，以防止污染和传播。
5. 结果判读和报告：- 对检测结果进行仔细的观察和判断，根据标准判定结果的阴阳性。
- 将结果记录在实验记录中，并及时生成报告。
- 如有需要，将结果报告给相应的卫生部门和相关人员。
6. 实验室安全和废物处理：- 在实验室操作过程中，严格遵守实验室安全规定，确保操作人员的安全。
- 对实验室产生的废液和废物进行正确的处置和处理，以降低污染和传播的风险。
- 使用合适的方法和设备对操作台面和工具进行清洁和消毒。
7. 实验室记录和质量控制：- 对实验室操作进行详细的记录，包括样本信息、实验步骤和结果等。
- 定期进行质量控制实验，以确保实验的准确性和可靠性。
- 定期进行实验室内部和外部的质量评估，及时发现和纠正实验中的问题。
总结：霍乱检测的操作规程至关重要，它能确保实验室工作人员和社会公众的安全。
霍乱弧菌检测技术的研究进展
霍乱弧菌检测技术的研究进展霍乱是一种由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，主要通过口腔摄入受污染的食物或饮水而引起。
霍乱弧菌可在人类和动物的肠道中生长，但在环境中的存活能力较弱。
对于食品和饮用水的监测是防控霍乱的重要手段。
本文将就霍乱弧菌检测技术的研究进展进行探讨。
一、PCR技术在霍乱弧菌检测中的应用PCR（聚合酶链反应）是一种分子生物学技术，能够在较短的时间内迅速扩增特定的DNA 序列。
对于霍乱弧菌的检测，研究人员可以设计特异性的引物，使其与霍乱弧菌的DNA序列结合，通过PCR技术快速扩增霍乱弧菌的DNA，从而进行检测和鉴定。
PCR技术具有高度的特异性和敏感性，能够在较短的时间内得出结果，因此被广泛应用于霍乱弧菌的检测中。
二、免疫学检测技术在霍乱弧菌检测中的应用免疫学检测技术包括ELISA（酶联免疫吸附法）和免疫层析技术，它们利用抗体与抗原特异性结合的原理，能够对霍乱弧菌进行快速、准确的检测。
研究人员可以利用ELISA或免疫层析技术制备具有高度特异性的抗霍乱弧菌抗体，将其固定在检测板或膜上，当待检样品中存在霍乱弧菌时，抗原与抗体结合产生显色反应，从而进行检测和鉴定。
这些技术具有操作简便、快速灵敏的特点，适用于霍乱弧菌的实时监测和快速筛查。
三、基因测序技术在霍乱弧菌检测中的应用基因测序技术是一种通过对DNA序列进行解读，从而得到基因信息的新型检测技术。
对于霍乱弧菌的检测，研究人员可以通过基因测序技术对其基因组进行全面分析，找到特异性的基因序列，从而设计特异性的引物和探针，进行高度特异性的检测和鉴定。
基因测序技术具有高通量、高灵敏度的特点，能够对霍乱弧菌进行全面、准确的检测和鉴定。
随着生物技术的不断发展和进步，霍乱弧菌检测技术也在不断地创新和完善。
各种先进的检测技术，如PCR技术、免疫学检测技术、基因测序技术和纳米技术，都为霍乱弧菌的快速、准确检测提供了重要的技术支持，为预防和控制霍乱提供了有力的手段。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
霍乱弧菌检测
文章目录*一、霍乱弧菌检测的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、霍乱弧菌检测的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、霍乱弧菌检测的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、霍乱弧菌检测的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、霍乱弧菌检测的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应
霍乱弧菌检测的基本信息
1、定义霍乱弧菌检测对霍乱有诊断意义。
阳性见于霍乱。
霍乱弧菌检查常规方法是:直接涂片、染色检查、动力观察制动试验。
阳性结果的临床分析显微镜检查可作为快速诊断的参考。
革兰染色镜检可见典型革兰阴性弧菌。
悬滴暗视野检查可见穿梭样活泼运动。
免疫制动试验阳性,具有重要参考意义。
上述结果只能做出初步诊断,最后的确诊仍需以培养结果为准。
2、专科分类传染病检查
3、检查分类病原微生物检查
4、适用性别男女均适用
5、是否空腹非空腹
霍乱弧菌检测的正常值和临床意义
1、正常值未检出霍乱弧菌。
2、临床意义异常结果: 阳性结果的临床分析:显微镜检查可作为快速诊断的参考。
革兰染色镜检可见典型革兰阴性弧菌。
悬滴暗视野检查可见穿梭样活泼运动。
免疫制动试验阳性,具有重
要参考意义。
上述结果只能做出初步诊断,最后的确诊仍需以培
养结果为准。
阳性:见于霍乱。
需要检测的人群: 频繁急剧腹泻、呕吐等怀疑为霍乱的病人。
霍乱弧菌检测的检查过程及注意事项
1、检查过程增菌
称取检样25g,加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。
固体样品应以均质器9000r/min-10000r/min打碎,或以剪刀充分剪碎。
(36±1)℃培养6h-8h和16h-24h。
如为牡蛎样品,应同样制备另一份检样,置于APW中,42℃培养6h-8h和16h-24h。
分离
以3mm-5mm接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个,于(36±1)℃
培养18-24h。
在TCBS琼脂上,典型的霍乱弧菌菌落为大的,光滑,黄色,稍平,具有不透明中心和半透明的边缘。
初步鉴定
用接种环挑取TCBS琼脂平板上2-5个可疑菌落,划线于T1N1琼脂平板上,(36±1)℃培养12h-18h。
以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。
以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中,进行粘丝试验。
以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物,接种TSI、KIA 和AGS,穿刺底层并划线斜面。
以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。
将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h-24h。