兔子免疫程序

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家兔防疫程序

家兔防疫程序

42传染病会对家兔的健康造成重大影响,带来巨大的经济损失。

预防和控制家兔传染病最主要的措施是免疫接种和药物预防。

家兔不同年龄阶段,注射疫苗及使用药物的种类、剂量、方法都有所不同。

为保障兔群安全生产,促进养兔业健康发展和经济效益的提高,笔者根据经验及相关材料,介绍一下在预防家兔传染病中疫苗和药物的使用程序,供广大养兔从业者交流学习。

一、免疫接种免疫接种一般采取皮下注射等方法,皮下注射时选择皮肤游离性比较好的部位,如颈后部、颈背部等活动比较频繁的部位进行多点注射,利于疫苗的吸收利用,产生较高的免疫力。

为保障免疫效果切实可靠,得到较好的经济效益,养兔场应该根据兔病的流行特点及当地实际情况,有选择性、针对性地制定免疫程序。

根据笔者多年的研究实践结果,常见免疫程序如下:1.仔、幼兔免疫程序。

25~28日龄,大肠杆菌多价灭活疫苗2毫升,皮下注射;30~35日龄,巴、波二联灭活苗2毫升,皮下注射;40~45日龄,兔瘟灭活苗1毫升,皮下注射;50~55日龄,魏氏梭菌病灭活苗2毫升,皮下注射;60~65日龄,兔瘟单联或含兔瘟联苗1毫升,皮下注射。

2.青、成年兔免疫程序。

防疫方法:一年2次或3次定期防疫,所有存栏青年、成年兔全部进行免疫注射;各疫苗注射间隔3~5天。

主要疾病:兔瘟、巴氏杆菌、魏氏梭菌病、波氏杆菌病、大肠杆菌病、葡萄球菌病、沙门氏杆菌病等。

疫苗品种:单联、二联、三联等均可。

3.繁殖母兔。

兔瘟防疫,用兔瘟灭活苗加倍用量,有利于幼兔43获得较高水平的母源抗体。

4.种公兔等。

按疫苗常量使用。

疫苗注射时应注意的事项包括:(1)选择国家正规厂家生产的标准疫苗。

(2)疫苗使用前应细看说明书及瓶签,检查疫苗有无破损、变质,严格按要求使用,疫苗用前应充分震荡使沉淀混合均匀。

(3)接种疫苗前必须检查家兔的健康状况,凡体温高、病兔、怀孕后期的母兔均暂不注射,病兔、孕兔在痊愈或生产后要及时补防。

(4)注射时要避开大的血管和神经,注射动作要迅速,消毒要严格,剂量要准确。

家兔免疫程序

家兔免疫程序

每年两次(春、秋)
兔巴氏杆菌病 兔巴氏杆菌灭活苗或巴 6 个月 1ml 30 日龄一次,间隔 14
氏杆菌与兔瘟二联苗
天再注射 1ml
兔魏氏梭菌病 兔魏氏梭菌灭活苗或魏氏 6 个月 1ml 30 日龄一次,间隔 14
梭菌和巴氏杆菌二联苗
天再注射 1ml
兔沙门氏菌病 兔沙门氏菌灭活苗
6 个月 1ml 2 次/年.只
头孢西林、氟苯尼考、强力霉素、利剑、
防(每隔 20 天拌料 7 天)
坏死杆菌病、结核病 大肠杆菌病、 布氏杆菌病
科瑞痢停、磺胺 痢菌净、磺胺、头孢西林、利剑
螺旋体病
强力霉素、混感特号、混感 120
真菌病
制霉菌素软膏涂抹
弓形体病
强力霉素、红弓 120。治疗:弓链附灭
长期使用 健胃、促生长、提高免 健之源、维生素、败毒食圣、益生素、
7~9 月份
兔球虫病
球力消、球克宁、科瑞痢停
春秋季
巴氏杆菌病
土霉素、强力霉素、磺胺、头孢西林
春夏之交
野兔热
土霉素、缉毒 110、瘟毒 120、植物血凝
素、科瑞瘟毒康
夏秋之交
付红细胞体病
强力霉素、红弓 120、针剂弓链附灭
魏氏梭菌、波氏杆菌、 头孢西林、磺胺间甲氧嘧、土霉素、强
冬春寒冷
李氏杆菌病
力霉素、利剑
家兔免疫序
家兔的用药程序(仅供参考,灵活掌握)
疫病
疫(菌)苗
免疫 剂量
接种时间

兔瘟
兔病毒性出血症灭活疫苗 6 个月 1ml 出生 20~30 日龄
兔瘟油佐剂灭活疫苗
1年
母兔产后 45 日龄
兔波氏杆菌病 支 气 管 败 血 兔 波 氏 6 个月 1ml 产前 2~3 周,断奶前

家兔主要传染病免疫程序

家兔主要传染病免疫程序

家兔主要传染病免疫程序(新推荐)(供参考)江苏省农科院兽医研究所南京天邦生物科技有限公司薛家宾兔病应以防为主,特别是规模兔场。

对于重大传染病必须进行免疫预防和药物预防。

科学的防病程序的建立在兔病防治中占有重要的地位,是保证养兔成功的主要关健之一。

提出如下防病程序供参考。

1 毛兔、獭兔免疫程序仔、幼兔免疫力的建立35~40日龄兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 2 ml皮下注射60~65日龄兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml 皮下注射非繁殖青年兔、成年产毛兔免疫程序(每年2次定期免疫)第1次兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射间隔6个月第2次兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射繁殖母兔、种公兔(每年2次定期免疫)第1次兔病毒性出血症灭活疫苗 1 ml皮下注射兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射或兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 2 ml皮下注射产气荚膜梭菌病(魏氏梭菌病)灭活疫苗 2 ml 皮下注射间隔6个月第2次兔病毒性出血症灭活疫苗 1 ml皮下注射兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射或兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 2 ml皮下注射产气荚膜梭菌病(魏氏梭菌病)灭活疫苗 2 ml 皮下注射2 肉兔免疫程序商品肉兔(70日龄出栏)35~40日龄兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗2ml 皮下注射或兔病毒性出血症(兔瘟)灭活疫苗 2 ml 皮下注射商品肉兔(70日龄以上出栏)35~40日龄兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗2ml 皮下注射60~65日龄兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗1ml 皮下注射或兔病毒性出血症(兔瘟)灭活疫苗1ml 皮下注射繁殖母兔、种公兔(每年2次定期免疫)第1次兔病毒性出血症灭活疫苗 1 ml皮下注射兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射或兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 2 ml皮下注射产气荚膜梭菌病(魏氏梭菌病)灭活疫苗 2 ml 皮下注射间隔6个月第2次兔病毒性出血症灭活疫苗 1 ml皮下注射兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗 2 ml皮下注射或兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗 2 ml皮下注射产气荚膜梭菌病(魏氏梭菌病)灭活疫苗 2 ml 皮下注射。

皮肉兔免疫程序与防病制度

皮肉兔免疫程序与防病制度

皮肉兔免疫程序与防病制度1、免疫程序2、防病制度一、3日龄前滴服复方黄连素2~3滴/兔,预防仔兔黄尿病。

二、15~16日龄滴服痢菌净(莫氏滴滴康)3~5滴/兔,每天1次,连续两天,预防仔兔胃肠炎。

三、25~83日龄选用抗球虫药,配伍抗菌药。

连续用药3~4个疗程,每个疗程7天,停药15天,再开始下一个疗程。

防兔球虫病及细菌性疾病。

配伍与饮用方法:兔病球康+兔兔康拌料50KG,连用3天,沙拉沙星10G,兑水50KG,饮用3天,保胎壮仔灵每50G拌料100KG连用1个月,烟酸诺氟沙星10G,兑水50KG,饮用2天,地克珠利(通扬球精、齐鲁球敌)10ML,恩诺沙星10G,兑水50KG,饮用2天。

或第一个疗程用一种药,第二、三个疗程换另一种药也可。

四、仔兔断奶注射头孢畜健一次,100KG体重1支,仔兔补料阶段,加喂兔乐1袋拌料100斤,注意预防肚胀、拉稀、消化不良、胃肠炎等疾病。

五、60~70日龄内服丙硫苯咪唑25毫克/兔,连续用药3次每次间隔三天。

或皮下注射乾坤长效虫净0.2ML/兔,1次即可,预防寄生虫病。

六、25~90日龄选用人工盐、复合B等能促进胃肠蠕动的药,隔3~5天内服一次,能有效的预防大肠便秘。

七、每年的6、7、8月份,每兔每次内服磺胺嘧啶1/4片,病毒灵1/2片,广东星鲨复合B粉1克,成年兔加倍,每天一次,连续3~5天,每个月用药一疗程。

预防传染性口炎。

气温在30℃以上时,饲料中添加清瘟败毒散或饮用抗应激药物如速补之星。

八、基础兔每三个月驱虫一次,每年的7~8月份皮下注射乾坤长效虫净0.2ML/兔,隔10天注射一次,预防兔患豆状囊尾蚴病,兔群一旦发生此病,淘汰老弱病兔,选用青壮年兔进行治疗,其方法是:除去护场犬,禁用被犬污染的饲料原料和饮水,兔场内彻底消毒多次,最好用火焰消毒,内服丙硫苯咪唑50毫克/兔,隔三天一次,连续40~50天,治愈率达90%。

九、母兔产仔前,内服复方新诺明1片/兔,每天1次,连续3~5天,或饮用葡萄糖2500G,含碘食盐450G,速补康30G,氧氟沙星10~15G,兑水50KG的混合液300ML/兔,每天1次,连续3~5天。

肉兔免疫程序及驱虫程序

肉兔免疫程序及驱虫程序

免 疫 程 序 是 指 兔 出生 后 各
种疫苗 、菌苗 的接 种时 间 、 次
数 、 序 等 , 虫 程 序 是 指 各 种 顺 驱
驱 虫药 的饲 喂 时 间 、 次数 、 序 顺


兔瘟 灭活疫苗
防兔瘟
皮下注射
日龄加强注 射 1 , m , 次 1 L 以后每
4个 月注 射 一 次
素。 223 仔 兔 1 .. 2日龄 喂 球 特 灵 ; 开 饲后 , 混料 使 用地 克珠 利 或 氯
1 . 免 疫 抗 体 合 格 率 达 不 到 .4 4
要 求 时 , 快 实施加 强 免疫 。 尽 1 . 发 生重 大疫 情 时 , 进行 .5 4 应
紧急免 疫 。
上 腺 素 、 的 松 、 塞 米 松 等 可 地
葛盛 军 金 海平 , , 吴翠 平 z张 ,
剑 :李 先 荣 ,杨 志德 , , ,
(. 1四川省 攀枝 花市 仁和 区农牧 局 , 四川 攀 枝花 6 6 7 ; 10 1
2四川省 攀枝 花市仁 和 区畜牧 兽医 站 , . 四川 攀枝 花 6 6 7 ; ’ 10 1
3四川省 攀枝 花市仁 和 区振牧 兔业 专业合 作社 , 川 攀枝 花 6 6 7 ) . 四 1 0 1
神经 症状 。 因 可能 是 7 5日龄 时滴 鼻 免 疫 的
“ I V系+ 2 ” 1 0。接种质量差、 抗体均
四川畜牧兽医 ・0 2期・ 21・ 1 总第 24期 4
及稀释倍 数 , 接种方法 、 操作人 47 造成鸡新城疫免疫失败的原 .
疫 、 虫效 果监 测 , 根 据 免 疫 驱 并
兔 菌 氏 菌 二 灭 兔 氏 氏菌 ! 杆 波 杆 病 联 防 巴、 杆 病 波

兔子的免疫程序

兔子的免疫程序

兔子的免疫程序一.母兔妊娠中后期1. 妊娠15天以上至产前的母兔每3-5天口服抗菌素1次,药物可选复方新诺明、复方敌菌净、磺胺脒,严格按说明用量。

有效预防妊娠期一般病菌感染,如胃肠病和部分炎症等。

2. 妊娠20天的母兔增补维生素和葡萄糖或胡萝卜喂量。

可调整新陈代谢,有效预防母兔毒血症。

3. 妊娠25天的母兔饲料中按量加入沈氏回春散,连喂3天。

调节母兔内分泌,对保胎产生作用。

二. 哺乳期的仔兔和母兔1. 初生仔兔3天内人用氯霉素眼药水滴口腔,每兔每次2滴,连漳1-2次。

能较好地预防仔兔急性肠炎2. 产后当天的母兔肌肉或皮下注射产后康,按说明使用,仅1次。

可起到消炎抗菌和防病作用。

3. 产后3天的母兔加喂维生素C、B,每天2次,每次每兔各1片,连用3天。

重点预防毒血症。

4. 产后母兔选3-4种抗菌素,每3-5天用一种,每种用一次。

预防各种细菌感染。

5. 在哺乳期的仔兔产箱每天检查1-2次,对潮湿和污染的垫物勤更换。

明显地防止仔兔患身螨病。

6. 仔兔开食到断奶前用3-4种抗球虫药物,如球立克、痢特灵、氯苯胍、敌菌净等,7-10天连结交替用一种。

以药预防为主,很好地预防球虫病。

三. 幼兔期断奶兔(幼兔)1.36天和80天颈部皮下注射兔球净,每兔0.2毫升,共两次。

加喂抗球虫药。

同时继续预防球虫病,直至100日龄。

2. 40日龄兔(幼兔)颈部皮下注射巴、波二联疫苗,每兔2毫升。

有效预防巴、波杆菌病感染。

3.45日龄初兔和75日龄加强免疫45日龄皮下注射兔瘟疫苗,每兔2毫升,75日龄加强兔瘟免疫。

有效预防兔瘟病。

四.中成兔期1. 季节性兔瘟免疫每6个月注射一次兔瘟疫苗,每兔皮下注射2毫升。

有效预防兔瘟病。

2.季节性巴、波免疫从36日龄起,每4个月注射1次巴、波二联疫苗,每次每兔2毫升。

有鼻炎病,注射兔鼻康。

预防巴、波杆菌病。

3.全部中成兔每6个月注射一次伊维菌素,每次每公斤体重0.02毫升。

预防各种寄生虫病,最好定期使用抗球虫药。

獭兔养殖免疫程序

獭兔养殖免疫程序

獭兔养殖免疫程序材料及保管员职责1、材料经验收后入库,分别摆放整齐。

2、做好入库、出库清单,标明物品数量及价格。

3、领取物品时,必须由主管领导批准及财务手续手后方可领取。

4、凡外单位及本公司人员借用工具,由当事人写出借条,经领导批准后办理有关借用手续,用后及时收回,若造成丢失损坏,由当事人赔偿。

5、领用药品及低值易耗品,由领料人签字并注明领用原因。

6、采购原料经主管领导批准后办理,并提前向公司有关领导及财务汇报,做出报表,以便及时添置购买入库。

7、注重物品防温、防鼠等工作,若造成损失者,由责任人赔偿。

富源县后所镇纯丰獭兔养殖场技术员职责1、认真组织饲养员学习养殖技术。

2、与饲养员一道对兔子进行生产观察,发现问题,做出处理解决。

3、提出生产方案,制定生产目标。

4、向主管领导定期汇报种兔生产情况。

5、作好种兔场的档案建立,以及卫生防疫。

6、负责对外培训,养殖技术及来人技术业务解答和指导饲养员职责1、认真搞好本职工作,努力钻研养兔技术,熟练掌握操作规程。

2、按照喂养时间,做到定时定量的饲养方法,灵活掌握喂养量,保证投料及饮水清洁充足。

3、严格卫生防疫制度,防大于治,定期作好兔场内外卫生的消毒工作以及兔子的疾病预防。

4、注意观察兔子情况,添加饲料,观察兔子的精神、食欲打扫卫生看兔的粪便及其它情况,发现问题要及时处理并报告技术员。

5、严格个人卫生及消度制度,进入场内要穿工作服及工作鞋,严禁将兔场内的工作服及工作鞋穿出室外。

6、做好自己所管理的兔子的情况,因管理不当造成兔子丢失,无故死亡等,由当事人负责。

场长职责1、熟爱国家法律,法规和政策。

2、认真执行公司的章程和规章制度。

3、积极配合总经理的工作。

4、熟悉养兔技术与管理。

5、组织职工技术培训和思想教育。

6、负责兔场人员和外来人员学习技术培训。

7、负责兔场环境卫生和安全工作监督。

8、执行种兔场场长负责制,严格审查。

9、掌握职工的思想动态和工作监督。

安全生产制度为了发展养殖业,搞好市场经济,促进各项工作的顺利进行,提高效益,确保公司安全,特定措施如下:1、种兔场职工必须认真执行领导的分工安排,各负其责,各司基职,搞好自己的本职工作。

兔子免疫程序

兔子免疫程序

小鼠免疫程序admin一、抗原的准备1、收到抗原时,首先要了解抗原的种类、性质和浓度,以便采取不同的处理方法。

2、多肽抗原,一般分多肽—偶联KLH和多肽—偶联BSA(或GGG)或裸多肽三种。

多肽—偶联KLH一般用于免疫,而多肽—偶联BSA或裸肽一般用于检测,在免疫时注意区分使用。

3、分装(1)收到抗原后,应及时按免疫需要分装,避免反复冻融。

(2)如抗原是大肠杆菌重组蛋白,可能存在不溶性沉淀,分装前,应用超声粉碎仪粉碎,要注意,在冰浴中进行,超声强度应以溶液不产生泡沫的水平为准,超声强度过大,易产生泡沫导致蛋白变性,超声强度太低效果不佳,每次2-3秒,重复3-4次,超声完毕立即分装。

(3)分装管应用不粘附蛋白的样品管,要用二种不同颜色的标签明确区分免疫用抗原和检测用抗原,并写明分装日期,抗原名,浓度和剂量。

A 免疫用抗原:一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管,备做首次免疫用。

另分装2个100ug/1管,备做融合前加强免疫用,再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管,共分装4-5管,备加强免疫用。

B 检测用抗原:100ug/每管,分装共3管。

C 分装好的抗原除马上免疫用管外,其余均装入小塑料袋中,写好抗原名标签,马上存入-700C。

剩余抗原交保管员存-700C,并填好交接班表格。

二、免疫程序1、多肽类抗原(包括MAP型多肽),第一次用福氏完全佐剂,每只50-100ug ,腹腔注射,总剂量0.5ml/只,第二次起用福氏不完全佐剂,剂量为25-50ug/0.5ml/只,间隔3周,第三次注射后10天测血(ELISA法),如滴度未达到1:104, OD1.0以上,则继续免疫,如ELISA已达滴度,则可取血清送WB或ICC检测。

2、蛋白类抗原:所用抗原的剂量等与多肽类相同,但进程有差异,首次免疫21天后,第二次免疫后,每次间隔为10天。

三、抗原的乳化抗原乳化前,应检查抗原管有否颗粒状沉淀,如有沉淀,应超声粉碎后,立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中(PBS应为无菌液),每只小鼠腹腔注射总量0.5ml,用2-5ml注射器,取1.25ml含抗原的PBS,另一支注射器取(等体积)福氏完全佐剂或不完全佐剂,用不锈钢连接接头连接,反复推拉混合约10-30分钟,平放静置30分钟,如水乳相不再分离,即可注射小鼠。

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小鼠免疫程序admin一、抗原的准备1、收到抗原时,首先要了解抗原的种类、性质和浓度,以便采取不同的处理方法。

2、多肽抗原,一般分多肽—偶联KLH和多肽—偶联BSA(或GGG)或裸多肽三种。

多肽—偶联KLH一般用于免疫,而多肽—偶联BSA或裸肽一般用于检测,在免疫时注意区分使用。

3、分装(1)收到抗原后,应及时按免疫需要分装,避免反复冻融。

(2)如抗原是大肠杆菌重组蛋白,可能存在不溶性沉淀,分装前,应用超声粉碎仪粉碎,要注意,在冰浴中进行,超声强度应以溶液不产生泡沫的水平为准,超声强度过大,易产生泡沫导致蛋白变性,超声强度太低效果不佳,每次2-3秒,重复3-4次,超声完毕立即分装。

(3)分装管应用不粘附蛋白的样品管,要用二种不同颜色的标签明确区分免疫用抗原和检测用抗原,并写明分装日期,抗原名,浓度和剂量。

A 免疫用抗原:一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管,备做首次免疫用。

另分装2个100ug/1管,备做融合前加强免疫用,再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管,共分装4-5管,备加强免疫用。

B 检测用抗原:100ug/每管,分装共3管。

C 分装好的抗原除马上免疫用管外,其余均装入小塑料袋中,写好抗原名标签,马上存入-700C。

剩余抗原交保管员存-700C,并填好交接班表格。

二、免疫程序1、多肽类抗原(包括MAP型多肽),第一次用福氏完全佐剂,每只50-100ug ,腹腔注射,总剂量0.5ml/只,第二次起用福氏不完全佐剂,剂量为25-50ug/0.5ml/只,间隔3周,第三次注射后10天测血(ELISA法),如滴度未达到1:104, OD1.0以上,则继续免疫,如ELISA 已达滴度,则可取血清送WB或ICC检测。

2、蛋白类抗原:所用抗原的剂量等与多肽类相同,但进程有差异,首次免疫21天后,第二次免疫后,每次间隔为10天。

三、抗原的乳化抗原乳化前,应检查抗原管有否颗粒状沉淀,如有沉淀,应超声粉碎后,立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中(PBS应为无菌液),每只小鼠腹腔注射总量0.5ml,用2-5ml注射器,取1.25ml 含抗原的PBS,另一支注射器取(等体积)福氏完全佐剂或不完全佐剂,用不锈钢连接接头连接,反复推拉混合约10-30分钟,平放静置30分钟,如水乳相不再分离,即可注射小鼠。

1. 将抗原蛋白溶于生理盐水中(可以溶解为0.2mg/mL的抗原溶液);2. 与等体积的弗氏完全佐剂双推法混匀(此时抗原浓度约0.1mg/mL);3. 经腹部皮下多点注射免疫BALB/C小鼠(注射约0.25mL);4. 2周后用等量抗原与不完全弗氏佐剂同上法混匀后免疫;5. 再过1周后连续每周用以上4.的方法加强免疫1次(抗原可减半),共3次;6. 最后一次免疫3d后,可通过断尾取血测血清效价,若达到预期目的,即可放血收集抗血清。

这是一般常用程序,最佳程序与你所用的抗原类型、免疫方法、佐剂类型等有关,需要通过实验确定多抗制备动物免疫点击次数:449 发布时间:2012-3-19制备好抗原后,就要进行动物免疫了,免疫这一步除了动物自身的因素外,实验者也要有良好的计划才能得到更好的免疫效果。

这里就几个常见的问题作一下简单的讨论。

动物的选择。

常见的可以用来制备抗体的动物有:小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea pig)、仓鼠(Hamster)、兔(Rabbit)、绵羊(Sheep)、山羊(Goat)、马(Horse)、驴(Donkey)、奶牛(Cow),还有的还用鸡或者鸭的。

选择动物无非就是考虑两个问题,第一个问题是能否具有较好的免疫效果。

特别是对于抗原是蛋白质的情况,为了保证免疫成功,就要求宿主动物与抗原来源物种之间需要有较远的亲缘关系,如果不太确定亲缘关系的远近,可以把抗原的序列与被免疫的动物相应的蛋白的序列进行一个对比,优先选择同源性较低的物种进行免疫。

选择动物的第二个问题是抗血清产量的问题,其实很多情况下需要的血清量就很大程度上限制了选择余地。

根据实验目的不同,抗血清的用量也有所不同。

比如说只想做几次Western Blot只需要一点点血清就够了,此时就可以选用小鼠这样的小动物,而如果想生产二抗作为商业使用,则可选用羊、驴、马这样的大型动物,大型动物还可以进如果是制备单克隆抗体,那选择的余地就更小了,目前主流做单抗的动物主要有小鼠、兔、大鼠。

而且除了Epitomics公司外,其它单位是不可以制备兔单抗的(已申请专利)。

另外需要指出的是,实验动物都有相应的法律法规,在进行实验之前需要参考相应的规定,只有获得了相关的资质才可以进行实验。

实验动物也由相应的机构繁殖和保种,选择动物应该使用特定的动物品系,以保证实验的稳定性。

免疫佐剂(Adjuvant)。

免疫佐剂主要有两个作用:一是刺激机体引起免疫反应,另一个作用是将抗原包起来延缓释放,起到相当于多次刺激的效果。

可以用来制备抗体的免疫佐剂主要有这么几类:铝盐、油乳、脂质体、CpG、细胞因子、经过处理的微生物或其代谢物。

关于它们各自的特性我这里就不作详细的介绍了,有兴趣的可以看看这篇文献:《我国免疫佐剂的研究进展》(刘悦竹,2008)。

目前应用得比较广泛的商品化佐剂主要有三种:弗氏佐剂(Freund's Adjuvant)、Ribi Adjuvant、Titermax。

弗氏佐剂是应用最多的佐剂,分为弗氏完全佐剂(Freund's Complet Adjuvant,FCA)和弗氏不完佐剂(Freund's Incomplete Adjuvant,FIA),弗氏完全佐剂由石蜡油和羊毛脂以及结核分枝杆菌的细胞壁成分组成,它是细胞免疫的刺激剂。

弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌,其它同弗氏完全佐剂。

弗氏不完全佐剂仅能刺激体液免疫。

通常在免疫动物时,先使用弗氏完全佐剂进行首次免疫,后用弗氏不完全佐剂作为加强免疫,二者使用前都需要与抗原进行完全乳化。

弗氏佐剂会引起动物局部肉芽肿或者无菌性脓肿,人体接触可能导致风湿病,误入眼睛可能造成失明,因此在操作时需要注意防护。

Ribi佐剂则采用可被代谢的角鲨烯代替矿物油,同时它也含有分枝杆菌的成份,与弗氏佐剂相比,它毒性小,可以减小动物的局部接种反应,但是同样可以产生高亲和力的抗体(抗原为蛋白质)。

Titermax不像弗氏佐剂和Ribi那样是油包水的结构,而是由角鲨烯和非离子型嵌段聚合物组成,此聚合物是由疏水性的聚氧丙烯和亲水性的聚氧乙烯形成的异分子多聚体组成的。

由于同时存在亲水部分和疏水部分,故可以和抗原形成稳定的乳浊液。

Titermax毒性低,但是价格贵,而且对于弱免疫原性的抗原能否引起机体的免疫反应尚存在争议。

另外向大家推荐一款国产的佐剂,由北京康碧泉公司研制,商品名叫Quickantibody,此佐剂不含蛋白质成分,而且免疫方式简单,无需乳化抗原(只需要简单混合即可免疫),同时免疫周期短,抗原用量少,推荐大家使用。

佐剂和抗原的乳化大部分佐剂在使用前都需要乳化,很多网友问起过乳化方法的问题,在这里我简单地向大家介绍几种我个人觉得比较好的方法吧。

先来了解一下怎么样才算乳化好了。

对于弗氏佐剂这类油包水结构的佐剂来说,乳化完成后,可以取一滴乳化过的液滴滴在一杯清水里,看看此液滴是否分散,如果不分散则表明乳化完全,否则还要接着乳化。

关于乳化的方法,比较好用的有三种:第一种比较费时间,就是将抗原和佐剂放在EP管里,然后用枪反复吹打,然后放在涡旋仪上反复涡旋。

第二种方法就是将抗原和佐剂用枪混合后放在超声破碎仪下超声,这个方法比较快速,但是需要一个配有小探头的超声破碎仪。

第三种方法也就最简单最常用的方法了:准备好两个玻璃注射器和一个鲁尔接头,将抗原和佐剂用枪在EP 管内混合好,然后吸入一个注射器内,再用鲁尔接头将另一个注射器与它接上,把抗原和佐剂来回在两个注射器内推动,两分钟左右就可以完成乳化工作。

如果没有鲁尔接头,也可以用一小截一次性输液管将两个注射器连接,不过有网友反映这个不是很好用。

免疫方案(1)免疫部位:常见的免疫部位有皮下、肌肉、腹腔、脚垫、静脉、脾脏。

大型动物多为皮下或肌肉免疫,小型动物可采用后面的免疫部位。

制备多抗时,整个流程可采用同一种免疫部位,也可以多种部位联合使用,但是初次免疫都建议在皮下进行。

在制备单抗时,甚至还可以将脾脏取出进行体外免疫,脾脏免疫最大的优势就是可以大大减小免疫剂量并缩短周期,而且还可以解决高同源性蛋白无法免疫成功的问题。

但体外免疫不能形成完整的免疫应答反应,抗体无法成熟,所产生的抗体全部为IgM,不能产生其它类型的抗体。

对体外免疫感兴趣的朋友可以看看这篇文献:《体外免疫法制备单克隆抗体的研究》(陆芹章,1994)。

(2)免疫形式。

抗原通常需要与佐剂混合充分后才进行免疫,也有改进不用佐剂的方法,比如可以将抗原跑SDS-PAGE胶,然后将胶进行磨碎充分即可进行免疫,这样可以将抗原(蛋白质类抗原)纯化,而且还可以延缓抗原的释放。

也有人将抗原从SDS-PAGE胶上转移到NC膜上或者PVDF膜上然后将其磨碎进行免疫,还有人将抗原连接到琼脂颗粒等固相载体上,这样可以增加抗原的颗粒化程度,也可以增大抗原与机体免疫应答系统的接触。

(3)免疫剂量。

免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很远。

如果用兔制备多抗,首次免疫(皮下)一般在200-1000ug之间,对于大鼠,首次免疫(皮下)为100-500ug,对于小鼠,首次免疫(皮下)一般在10-100ug之间,加强免疫一般为首次免疫剂量的20%-50%。

尾静脉或脾内方式加强则可减至几微克至十微克。

对于体型比较大的动物可酌量增加(不能按照体重比增加),具体的用量请大家参考文献。

(4)免疫周期。

首次免疫后,一般在10-15d左右抗体的产量会达到一个峰值,但是此时抗体亲和力不够,大部分都是IGM,因此需要进行加强免疫,加强免疫一般在首次免疫后三至四周进行。

第二次、第三次加强免疫间隔可以缩短至2-3周。

这个时间不太能长也不能太短,太短起不到加强的效果,而且还容易引起免疫耐受,如果相隔太久,则前面的免疫将失去初步刺激的效果。

如果是采用脾内免疫,则可以在一定程序上缩短免疫周期。

实验一免疫血清的制备一、实验目的熟悉免疫血清的制备过程;了解动物实验的基本知识。

二、实验原理将抗原物质经适当途径,按照预先制定的免疫方案免疫动物,经过一定时间,可刺激机体产生特异抗体并释放入血液,当血中抗体达到一定效价时采血,分离血清,即为特异性免疫血清(又称为抗血清)。

因抗原具有多种表位,可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体,因此,这种免疫血清又称为多克隆抗体。

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