蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书 微量法
蔗糖酶的制备和活力测定
冰浴和离心的同时， 可以开始做级分I和级分II的
蛋白质含量测定，
酶活测定
葡萄糖标准曲线的制备
管号
试剂 ml
标准糖溶液 5mM 0.1M醋酸缓冲液
0 0 2.0
1 0.6 1.4
2 0.8 1.2
3 1.0 1.0
4 1.2 0.8
5 1.4 0.6
0.1M NaOH溶液
二硝基水杨酸溶液
2.5
0.5
2 0.4 0.2
3 0.6 0.2
4 0.8 0.2
5 1.0 0.2
H2O
0.1M NaOH溶液 二硝基水杨酸溶液
1.8
2.5 0.5
1.6
2.5 0.5
1.4
2.5 0.5
1.2
2.5 0.5
1.0
2.5 0.5
0.8
2.5 0.5
混匀，沸水浴 5min，流水冷却3min 以零号管调零，测520nm光密度。以葡萄糖含量为横坐标， 以光密度为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线
3. 级分I （1:50）
4. 级分I （1:100）
6. 级分II （1:50）
7. 级分II （1:100）
参照蛋白质浓度标准曲线(预制)，计算出各级分蛋白质含量。 y=0.0035x
X代表溶液的浓度（mg/ml），Y代表595nm下的吸收值
实 验 结 果
1、葡萄糖浓度的标准曲线
2、级分I和级分II中的蔗糖酶的活力 （每 1ml蔗糖酶溶液产生的还原糖量） 3、级分I和级分II中蛋白质的含量（每1ml 所含的mg） 4、计算级分I和级分II蔗糖酶的比活力： 比活力=
OD(595nm)
20 40 60 Protein Con.(mg/ml)
蔗糖酶活力测定
一、目的了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。
二、原理本实验以Nelson 方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu 2+ 还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm 波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25~200μg。
三、主要仪器及试剂四、操作步骤1．标准曲线制作（1）取9 个具塞试管，按表1 加样：（2）向每管中加1mL Nelson 试剂，盖上塞子，置沸水浴中20 min。
冷至室温，向每管中加1 mL 砷钼酸试剂。
（3）5 min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，混匀。
（4）在510 nm 下测定光密度，以还原糖葡萄糖为横坐标，以OD510nm 值为纵坐标，制作标准曲线。
2．酶活力测定取2g 小麦苗，加入2mL 乙酸缓冲液，在冰浴中用研钵研磨成糊状，12 000r/min 离心10min，留取上清液用于酶活测定。
取2 支具塞刻度试管，向每个试管中加入乙酸缓冲液0.8ml，0.5 mmol/L 蔗糖溶液0.2mL，适当稀释的酶液1mL，以同样处理但不加酶液者为空白对照，室温下放置10min。
然后向每管中加1mL Nelson 试剂，置沸水浴中20min。
冷却至室温，向每管中加1mL 砷钼酸试剂，5min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，510 nm 下比色，测定光密度OD510nm。
五、实验结果活力计算：在室温、pH4.5 条件下，每分钟水解产生1μmol 葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1 个活力单位（U）酶活力的影响教师：XXX实验类型：基础学时：10(参考)内容：一、实验目的初步掌握用正交表设计实验方案并用数理统计方法处理实验数据的步骤和注意事项。
二、实验原理酶的催化作用受多种因素的影响。
欲求某因素对酶活力的影响，通常是固定其它因素，测定该因素不同水平下的酶活力。
蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒说明书 微量法
蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0585规格:100T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：粉剂10mg×1支，4℃保存，临用前加1mL水，配制成10mg/mL蔗糖溶液，再将其用蒸馏水稀释为500μg/mL备用；试剂三：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体6mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。
SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰操作步骤：一、测定样品提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定操作表：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：试剂名称（μL）测定管对照管标准管空白管样本1010蒸馏水454555试剂一45试剂二10混匀，25℃准确水浴10min试剂三15151515沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却试剂四210210210210试剂五60606060混匀，80℃水浴保温20min，冷却后，在480nm下测定各管吸光值。
标准管和空白管只做一管。
每个测定管需要设定一个对照管。
蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4310规格:50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。
4℃保存一周。
产品简介：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。
3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本2020--标准溶液--20-蒸馏水---20试剂一808080试剂二-80--混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。
蔗糖合成酶的测定方法[方案]
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蔗糖合成酶的测定方法[方案]蔗糖合成酶的测定方法一、仪器设备冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计二、试剂HEPES-NaOH(50mmol/L，pH7.5)缓冲液，包括50mmol/L MgCI;2mmol/LEDTA;20.2%(W/V)BSA;2%PVP;0.1%间苯二酚:称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。
30%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L果糖三、操作方法1、粗酶液制备称取0.5g样品(植物叶片去掉主叶脉)，洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。
2、酶活性测定依次加入50μL粗酶液，50μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5，20μL 50 mmol/LMgCI， 220μL 100mmol/L UDPG，20μL 100mmol/L6-磷酸果糖(20μL 100mmol/L果糖)， 30?中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80?水浴保温10min，冷却后置于480nm 处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。
同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaOH，以下同上操作，测定蔗糖含量。
3、蔗糖标线制作:取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。
4、计算,1,1样品中酶活性(μg?g?h)=式中 C—反应液催化产生的蔗糖总量(μg);V—提取酶液时加入的缓冲液体积(ml); 1V—酶反应时加入的粗酶液体积(ml) 2淀粉酶活性的测定1方法1.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液:0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液:用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制;标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol?L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。
土壤蔗糖酶( S-SC)活性检测试剂盒说明书 微量法
土壤蔗糖酶(S-SC）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0245规格：100T/48S产品说明：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。
自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
产品内容：试剂一：甲苯1mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体7.5mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入22mL双蒸水充分溶解备用；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1mL蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL。
操作步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2.测定步骤和加样表：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.030.03--试剂一（μL）55--振荡混匀，使土样全部湿润，37℃水浴15min试剂二（μL）7575--试剂三（μL）220--双蒸水（μL）220--混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000g，4℃，离心5min，取上清液，将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）若后续测定吸光值仍大于1.5继续稀释。
上清液（μL）8585标准品（μL）85蒸馏水（μL）85试剂四（μL）215215215215充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。
蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4147
蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4147规格:100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体8mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体8mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融；2、标准品：20mg果糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用，4℃保存一周。
产品说明：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5–二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为8、6、5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。
转化酶和蔗糖合成酶活性的测定方法
转化酶和蔗糖合成酶活性的测定方法2 Oct, 2013一、酶的提取：1、组织样品（3 ovary of 0 dap或0.1g叶片）在液氮中磨碎，加入0.6 mL（或1.5 mL）酶提取液，匀浆转入2mL离心管中，用100 uL提取液洗研钵。
每管加入6或15 μL PMSF（100mM）和3或7.5 μL DTT（1M）。
2、14000 g（约12000rpm）离心10 min，取上清液。
3、沉淀用0.5mL提取缓冲液重新悬浮，14000 g离心3 min，弃上清液。
4、沉淀用0.6或1.5 mL提取缓冲液悬浮。
二、酶活性的测定：（一）不溶性酸性转化酶活性的测定：细胞壁转化酶1、取40 μL酶提取液（上清或沉淀悬浮液）加入360 μL酸性转化酶分析液中，30℃水浴保温1 h。
2、加入60 μL 1 M Tris-HCl （pH8.0）进行碱化处理。
3、85℃保温3 min，然后加入等体积（460 μL）氯仿，混匀，14000 g离心5 min，4、取上清140 μL加入380 μL葡萄糖测定液，30℃水浴保温30 min。
5、测定OD340nm，然后根据葡萄糖标准曲线计算出转化酶的活性，表示为mg Gluh-1 g-1 FW。
注：每个测定样品均做一个对照，对照除省略第1步中30℃水浴保温1 h外，其他相同。
（二）可溶性酸性转化酶活性的测定：液泡转化酶1、取40 μL酶提取液（上清或沉淀悬浮液）加入360 μL酸性转化酶分析液中，30℃水浴保温1 h。
2、加入60 μL 1 M Tris-HCl （pH8.0）进行碱化处理。
3、85℃保温3 min，然后加入等体积（460 μL）氯仿，混匀，14000 g离心5 min，4、取上清140 μL加入380 μL葡萄糖测定液（由葡萄糖分析液配制），30℃水浴保温30 min。
5、测定OD340nm，然后根据葡萄糖标准曲线计算出转化酶的活性，表示为mg Gluh-1 g-1 FW。
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蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4315
规格:100T/48S
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。
4℃保存一周。
产品简介：
蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5–二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为8、6、5、4、
3、2、1mg/mL的标准溶液备用。
3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)
试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本1010--标准溶液--10-
蒸馏水---10
试剂一404040
试剂二-40--
混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。
试剂三50505050
混匀，95℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温。
蒸馏水400400400400混匀，取200µL置于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定540nm处吸光值A，分别记为A对照管，A 测定管，A标准管，A空白管。
计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。
每个测定管需设一个对照管，标准曲线只需检测一次。
三、SS-I活性计算
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程
y=kx+b，将ΔA带入方程得到x（mg/mL）
2、SS-I活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每mg蛋白每分钟分解蔗糖产生1µg果糖为1个酶活力单位。
SS-I酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）×103÷T=33.33x÷Cpr。
（2）按样本质量计算
酶活定义：每g样品每分钟分解蔗糖产生1µg果糖为1个酶活力单位。
SS-I酶活（U/g鲜重）=x×V提取×103÷W÷T=33.33x÷W。
V提取：提取液体积，1mL；103：单位换算系数，1mg=103µg；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间：30min。
注意事项
1.当A或ΔA超过1.5时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。
2.95℃水浴时EP管盖紧，防止水分散失，待冷却至室温后，再进行下一步操作，避免液体飞溅烫伤以及
影响试验数据。