蛋白质组学部分题目
中南大学2020—2021学年第1学期生物技术《现代分子生物学》考试试卷(附答案)
中南大学2020—2021学年第1学期
《现代分子生物学》考试试卷（A卷）
院/系年级专业姓名学号
考生答题须知
1．所有题目答题答案必须做在考点发给的答题纸上，做在本试题册上无效。
请考生务必在答题纸上写清题号。
2．评卷时不评阅本试题册，答题如有做在本试题册上而影响成绩的，后果由考生自己负责。
3．答题时一律使用蓝、黑色墨水笔或圆珠笔作答（画图可用铅笔），用其它笔答题不给分。
4．答题时不准使用涂改液等具有明显标记的涂改用品。
中南大学2020—2021学年第1学期《现代分子生物学》考试试卷（A卷）
标准答案。
蛋白质工程生物技术探索考核试卷
B.真核表达系统
C.无细胞表达系统
D.电子表达系统
20.以下哪个技术主要用于蛋白质工程中的结构预测？()
A.同源建模
B.蛋白质设计
C.分子对接
D.量子化学计算
（请在此处继续答题）
二、多选题（本题共20小题，每小题1.5分，共30分，在每小题给出的四个选项中，至少有一项是符合题目要求的）
1.蛋白质工程基本步骤包括序列分析、结构预测、设计突变、表达纯化、功能测试。例如，通过在酶的活性部位引入疏水性氨基酸，可以提高其热稳定性。
2.蛋白质工程在生物制药中用于优化蛋白质药物的稳定性和减少免疫原性。例如，通过替换可能引起免疫反应的氨基酸，开发更安全的药物。
3.蛋白质折叠是功能实现的前提，影响折叠的因素包括氨基酸序列、环境条件、pH值等。
1.以下哪些是蛋白质工程中常用的设计方法？()
A.理性设计
B.随机突变
C.计算机模拟D.Fra bibliotek上都是2.蛋白质工程可以应用于以下哪些领域？()
A.医药
B.农业
C.食品工业
D.能源
3.以下哪些因素可能影响蛋白质的活性？()
A.温度
B. pH值
C.氧气浓度
D.蛋白质浓度
4.下列哪些技术可以用于蛋白质表达？()
A.氨基酸序列
B.蛋白质浓度
C.环境温度
D.上述所有因素
8.以下哪个酶在蛋白质工程中常用于DNA的切割？()
A.逆转录酶
B.限制性内切酶
C.连接酶
D.聚合酶
9.下列哪种方法通常用于蛋白质工程中的定向进化？()
A.随机突变
B.理性设计
C.模拟退火
D.计算机辅助设计
高考生物一轮复习 课堂互动探究案3 生命活动的主要承担者——蛋白质(含解析)-人教版高三全册生物试题
课堂互动探究案3生命活动的主要承担者——蛋白质考点突破素养达成考点一蛋白质的结构和功能及其多样性(国考5年3考)(全国卷：2016全国卷Ⅲ；2015全国卷Ⅰ；2014全国卷Ⅱ；地方卷：2018某某、某某卷；2017某某、某某卷；2016某某卷；2015某某、某某、、某某、某某卷；2014某某、某某卷)【师说考问】考问1 判断下列化合物是否是组成蛋白质的氨基酸属于组成蛋白质的氨基酸的是①③⑥⑦(填序号)。
考问2 分析氨基酸结构并回答问题(1)比较上述三种氨基酸，写出氨基酸共有的结构。
(2)氨基酸理化性质的不同取决于R基的不同，图中三种氨基酸的R基依次是—CH(CH3)2、—CH2—CH2—COOH、—(CH2)4—NH2。
(3)从氨基和羧基的数量和位置上分析、归纳、总结组成蛋白质氨基酸的特点。
①数量上：至少有一个—NH2和一个—COOH。
②位置上：必须有一个—NH2和一个—COOH连在同一个碳原子上。
考问3 据图示判断位置在分泌蛋白的合成、加工、运输和分泌过程中，用含35S标记的氨基酸作为原料，则35S存在于图示①～④中的①部位。
科学思维1．[归纳与概括] 头发和肌肉的主要成分均为蛋白质，但功能相差极大，从氨基酸角度分析，原因是什么？答案：组成蛋白质的氨基酸的种类、数量和排列顺序不同。
2．[模型与建模] 请用集合图的形式表示蛋白质、酶、激素、抗体、载体之间的关系。
答案：科学探究在“探究添加皮革蛋白粉的饲料对动物生长发育的影响”的实验中，应当选择身体健康、发育正常、体重相同的大鼠若干，随机均分为A、B两组，分笼饲养；其中A组大鼠每天都饲喂适量普通饲料，B组大鼠每天饲喂等量的添加皮革蛋白粉的饲料。
【题组跟进】高考题组——研考向考向一组成蛋白质的氨基酸相关知识考查1．真题重组，判断正误。
(1)氨基酸之间脱水缩合生成的H2O中，氢来自于氨基和羧基。
[2016·某某卷，T4B](√)(2)人体内含有多种多样的蛋白质，每种蛋白质都含有20种氨基酸。
重症肌无力胸腺组织比较蛋白质组学研究的开题报告
重症肌无力胸腺组织比较蛋白质组学研究的开题报
告
题目：重症肌无力胸腺组织比较蛋白质组学研究
背景：重症肌无力（Myasthenia Gravis，MG）是一种典型的自身免疫病，主要特点是肌肉疲劳和无力。
虽然现有的治疗手段可以缓解症状，但并没有根治方法，且一些患者治疗效果有限。
因此，探索MG的病理机制和治疗靶点，对于开发更有效的治疗手段具有重要的价值。
研究问题：MG胸腺组织与正常人胸腺组织的蛋白质表达差异是什么，这种差异是否与MG的发生相关？
研究方法：采用蛋白质组学技术对多个MG患者及正常对照组的胸
腺组织进行蛋白质表达差异分析。
首先，用免疫磁珠技术富集组织中的
总蛋白和低丰度蛋白，并经过 SDS-PAGE 分离；然后，将蛋白质经过酸
性蛋白水解（HCD）或限制酶降解，获得肽段；最后，通过液相色谱-串
联质谱技术（LC-MS/MS）鉴定蛋白质，并进一步进行差异蛋白筛选和生物信息学分析。
预期结果：通过比较MG胸腺组织与正常对照组的差异蛋白质，预
计可以发现一些与MG发病机制相关的新靶点或标志物，进而对MG的治疗和预后提供科学依据。
研究意义：本研究将探究MG胸腺组织的蛋白质组学特征和差异表达，为深入了解MG的发病机制以及寻找新的治疗策略提供一定的实验依据和理论支持，同时，也可以为临床MG治疗的效果评估提供更丰富的科学依据。
生物技术在蛋白质工程中的应用考核试卷
答案：标签
3.生物技术中，CRISPR/Cas9系统来源于______。
答案：细菌
4.蛋白质的折叠是由其______决定的。
答案：氨基酸序列
5.蛋白质工程中，常用的蛋白质表达系统有原核表达系统和______。
答案：真核表达系统
B.双向电泳
C.蛋白质芯片
D.串联质谱
8.以下哪些生物技术可以用于基因编辑？（）
A. CRISPR/Cas9
B.锌指核酸酶
C. TALEN
D. PCR
9.以下哪些方法可以用来提高蛋白质的表达量？（）
A.优化启动子
B.使用强化的终止子
C.添加融合标签
D.调整培养条件
10.蛋白质工程中，以下哪些方法可以用于设计蛋白质突变体？（）
3.基因编辑技术在蛋白质工程中用于精确改造基因序列，CRISPR/Cas9简单、高效、成本低，但可能存在脱靶效应；ZFNs和TALENs精确性高，但设计和构建复杂、成本高。
4.以血红蛋白为例，通过同源建模预测其空间结构，再结合分子对接方法分析其与氧分子的结合模式，从而推测其运输氧气的功能。
A.氨基酸序列
B.环境条件
C.翻译后修饰
D.蛋白质浓度
5.以下哪些是蛋白质工程在医药领域的应用？（）
A.生产治疗性抗体
B.开发疫苗
C.设计药物载体
D.诊断疾病
6.常见的蛋白质纯化方法包括哪些？（）
A.离子交换层析
B.凝胶过滤
C.亲和层析
D.电泳
7.以下哪些技术可以用于蛋白质组学研究？（）
A.质谱分析
B.改变蛋白质的空间结构
生物化学蛋白质的化学知识点
生物化学蛋白质的化学知识点一、知识概述《生物化学蛋白质的化学知识点》①基本定义：蛋白质啊，简单说就是由许多氨基酸按一定顺序连起来的大分子。
就好比许多小珠子（氨基酸）串成一条长长的链子（多肽链），然后这些链子还能盘曲折叠，最后就形成了蛋白质。
②重要程度：在生物化学里那可是超级重要的。
像是细胞结构的组成部分啊，很多酶也是蛋白质，有了它们生物体内各种各样的化学反应才能顺利进行呢。
我觉得它就像建筑里的砖块一样，是构建生物体的基础。
③前置知识：咱们得先大概知道氨基酸是啥吧，毕竟蛋白质是由氨基酸组成的。
还有化学键的基本概念，像肽键就是连接氨基酸的重要化学键。
④应用价值：在制药方面，如果了解蛋白质的结构和功能，就能开发出针对特定蛋白质的药物。
在食品行业，像检测食物中的蛋白质含量也是基于这个知识点。
二、知识体系①知识图谱：蛋白质的化学知识点在生物化学学科里算是核心板块了。
它和核酸化学、酶化学等知识点都有联系。
打个比方，蛋白质和核酸就像伙伴，核酸给出指令，蛋白质负责做事。
②关联知识：和生物大分子中的核酸关联密切，核酸指导蛋白质的合成。
而且与新陈代谢的知识点也有联系，因为很多代谢反应是蛋白质（酶）参与催化的。
- 掌握难度：难。
- 关键点：理解蛋白质的一、二、三、四级结构比较难，像是四级结构，好多条肽链怎么组合起来的，得好好琢磨。
④考点分析：- 在考试中的重要性：非常重要。
- 考查方式：会直接考蛋白质的结构层次、氨基酸的组成计算，也会间接考蛋白质在某些生理过程中的作用。
三、详细讲解【理论概念类】①概念辨析：- 蛋白质就是由氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物。
氨基酸好比是字母，按照特定顺序排列就能写出不同的单词（小的肽段），这些肽段再组装就成了蛋白质这个大文章。
②特征分析：- 具有两性电离特性。
这就是说它既能像酸一样给出质子，又能像碱一样接受质子。
比如说，在人体不同的生理pH环境下，蛋白质的带电情况就不一样。
- 有特定的空间结构。
中小学蛋白质计算公开课教案教学设计课件案例测试练习卷题
中小学蛋白质计算公开课教案教学设计课件案例测试练习卷题一、教学目标1. 让学生了解蛋白质的基本概念及其在生命科学中的重要性。
2. 培养学生运用数学知识解决实际问题的能力，提高学生的科学素养。
3. 引导学生掌握蛋白质计算的基本方法，培养学生的创新思维和团队合作精神。
二、教学内容1. 蛋白质的基本概念：蛋白质的组成、结构和功能。
2. 蛋白质计算方法：原子质量、氨基酸序列、蛋白质分子量等。
3. 蛋白质计算案例：常见蛋白质的计算实例。
4. 练习题：巩固蛋白质计算方法。
三、教学方法1. 采用问题驱动的教学模式，引导学生主动探究蛋白质计算方法。
2. 利用多媒体课件，生动展示蛋白质的结构和功能，提高学生的学习兴趣。
3. 案例教学：分析实际问题，培养学生解决实际问题的能力。
4. 小组讨论：培养学生的团队合作精神和沟通能力。
5. 练习巩固：通过练习题，检验学生对蛋白质计算方法的掌握程度。
四、教学步骤1. 导入：介绍蛋白质的基本概念，引导学生关注蛋白质在生命科学中的重要性。
2. 蛋白质结构与功能：利用课件展示蛋白质的结构和功能，让学生了解蛋白质的作用。
3. 蛋白质计算方法：讲解原子质量、氨基酸序列、蛋白质分子量等计算方法。
4. 案例分析：分析常见蛋白质的计算实例，让学生学会运用计算方法。
5. 小组讨论：让学生结合案例，探讨蛋白质计算的技巧和方法。
6. 练习巩固：发放练习题，让学生独立完成，检验学习效果。
五、教学评价1. 课堂参与度：观察学生在课堂上的发言和讨论情况，评价学生的参与程度。
2. 练习题完成情况：检查学生练习题的完成质量，评价学生对蛋白质计算方法的掌握程度。
3. 小组讨论报告：评价学生在团队合作中的表现，包括沟通、协作和创新能力。
4. 课后反馈：收集学生对课堂内容的反馈意见，为后续教学提供改进方向。
六、教学延伸1. 蛋白质计算在生物技术中的应用：介绍蛋白质计算在药物设计、蛋白质工程等方面的应用，让学生了解蛋白质计算在实际科学研究中的重要性。
Ephrin-B2对人脐静脉内皮细胞功能的影响及其蛋白质组学研究的开题报告
Ephrin-B2对人脐静脉内皮细胞功能的影响及其蛋
白质组学研究的开题报告
题目：Ephrin-B2对人脐静脉内皮细胞功能的影响及其蛋白质组学研究
背景：
内皮细胞是构成血管壁的组成细胞，其具有维持血管功能，调控血
管张力和血流等生理功能。
Ephrin-B2是一种跨膜蛋白质，与不同细胞表面的Eph受体结合，参与多种细胞活动，如神经元轴突导向和血管形成。
研究发现，Ephrin-B2在内皮细胞中的表达与内皮细胞的功能密切相关，但其影响机制尚不清楚。
研究目的：
本研究旨在探讨Ephrin-B2对人脐静脉内皮细胞功能的影响，以及其对内皮细胞蛋白质组的调控作用，并深入研究Ephrin-B2在内皮细胞中的分子机制和信号通路。
研究方法：
通过实验室培养的人脐静脉内皮细胞模型，在体外经过不同剂量的Ephrin-B2处理，并评估其对内皮细胞细胞增殖、迁移和损伤修复等相关功能的影响。
同时，采用蛋白质组学技术，对内皮细胞中Ephrin-B2的表达和调控作用进行研究，并进一步分析其信号通路。
预期结果：
预计本研究发现Ephrin-B2可以显著调节内皮细胞的运动、增殖和损伤修复等相关功能，而这种调节与其在内皮细胞中的表达水平和其它相
关因素密切相关。
蛋白质组学研究将进一步揭示Ephrin-B2对内皮细胞功能调控及其信号通路。
该研究结果有望为今后改善内皮细胞相关疾病的
治疗提供新的思路和方法。
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蛋白质组学课程试题简答题（每题10分）1、自由流电泳分离蛋白质的机理及其优缺点。
自由流电泳（CFFE）是在无固相支持介质的薄的矩形分离中，以缓冲液为分离介质进行生物大分子或不溶性颗粒及细胞等物质的分离纯化技术。
在CFFE中，分离介质在两块平行的矩形板组成的分离腔内形成层流（两板之间的距离通常介于0.5-3.0mm）分离腔的两侧为正负电极室。
被分离物质由一口径很小的输入口进入分离介质中，形成一细带，在垂直于液流的方向上加上均匀的电场后，样品中各种组分由于各自电泳迁移率的差异而各自向与所带电荷符号相反的电极以不同的速度迁移，相同电泳迁移率的物质则迁移为一窄带，在到达分离腔出口处由分级手机器收集。
优点：CFFE是一个连续的而不是分批进行的分离过程。
同时由于它不使用有机溶剂、高盐溶液，及硅胶或凝胶等支持介质，分离调节相当温和，对有活性的生物材料的分离纯化提供了十分合适的分离环境。
缺点：因自由流电泳是完全无载体的液相电泳，因此除了电泳本身所固有的影响因素外（如：焦耳热，电动力学变形），还有层流（流体力学变形）以及一些综合因素的影响（电流体力学变形等），且这些过程常常互相关联，使整个过程变得极其复杂。
重力对自由流电泳会产生影响。
颗粒沉降、小滴沉降和热对流是影响自由流电泳的三种重力现象，在微重力条件下这些现象几乎消失，这使CFFE的放大在空间有可能得到实现。
2、质谱仪的组成及其主要技术指标。
质谱仪一般由进样装置、离子化原、质量分析器、离子检测器、数据分析系统组成。
其中，离子化原用来待分析的分子转化成气态离子。
在质量分析器中，不同荷质比m/z离子在一个随时间变化的电场作用下分离。
离子检测器用来接受在质量分析器中分离的带有不同荷质比的离子检测m/z值以及不同m/z的离子密度。
主要技术指标包括：灵敏度，分辨率，准确度，稳定性，质量范围，动态范围3、蛋白质组学定量分析方法的主要原理。
蛋白质组学定量分析主要包括两种方法：1、建立在2－DE基础上的电泳方法：其原理是通过比较通过比较蛋白质在不同胶上的染色强度来进行相对定量。
提供蛋白质表达水平的信息。
2、利用质谱检测技术：对来自不同样品的肽段标上一个内部标准，使得可以识别不同样品来源的肽段，以质谱峰的信号强度就可以作为定量的依据。
4、请列举预测蛋白质相互作用的方法。
1、酵母双杂交法：主要原理是将可能存在相互作用的蛋白之一与Gal4的DB结构域融合。
另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合。
如果在两个待测蛋白之间存在相互作用, 那么分别位于这两个融合蛋白上的DB 和AD就能重新形成有活性的转录激活因子, 从而激活相应基因的转录与表达。
通过对报道基因表达产物的检测, 反过来可判别作为“诱饵”和“猎物”的两个蛋白质之间是否存在相互作用。
2、免疫共沉淀法：免疫共沉淀是一种比较经典的蛋白质相互作用方法，其实验比较简单。
裂解细胞后，加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性亲和再分析结合复合体。
目前常使用Pull－down实验结合免疫共沉淀可以对可能的蛋白质相互作用进行验证。
3、高通量质谱蛋白质鉴定：使用一分子标签如FLAG标记把蛋白，使融合蛋白在细胞内过表达。
通过免疫亲和（FLAG抗体）捕获到抽提物中把蛋白形成的蛋白质复合物。
SDS-PAGE分离复合体各组分，胰酶酶切后，进行质谱分析。
此法适合于分析天然状态下细胞内浓度较低的蛋白质，但是如果蛋白质浓度过高则背景较强，产生假阳性。
4、串联亲和纯化（tandem affinity purification, TAP）：该技术核心是设计一个双重分子标签，包括A蛋白（IgG binding protein）、TEV蛋白酶切位点、钙调素结合蛋白。
将TAP标签构建到靶蛋白上，然后在宿主细胞内表达融合蛋白，表达水平接近把蛋白的天然状态。
可以与把蛋白相互作用的其他蛋白质结合到融合蛋白上，形成复合体。
细胞裂解物和IgG基质温浴在一起，通过A蛋白复合物结合在IgG上。
冲洗后，加入TEV蛋白酶，洗脱复合物。
在Ca2+存在的情况下，洗脱液与包被钙调素的温育在一起，复合物就结合在珠子上。
进一步洗去杂质后，加入EGTA鳌合，复合物脱落。
SDS-PAGE分离复合体各组分，胰酶切割后进行质谱分析。
该方法检测到的蛋白质相互作用更加接近自然条件下蛋白质的性质，包括浓度，定位和翻译后修饰。
适合于检测大量蛋白质之间的相互作用而形成的复合物，而不局限在两个蛋白质之间相互作用。
但是不能检测蛋白质复合物形成的顺序。
需要与酵母双杂交等方法互补。
5、系统生物学研究的主要流程是什么？1. 对前人的实验进行总结，获得大量关于系统的信息，在已有的大量数据（如：基因组，蛋白质组，转录组，代谢组等数据）的基础上，对选定的某一生物系统的所有组分进行了解和确定，描绘出该系统的结构，包括基因相互作用网络和代谢途径，以及细胞内和细胞间的作用机理。
以此构造出一个初步的系统模型。
这是一个由数据得到模型的过程。
2. 对模型进行精炼，并在这个初步模型的基础上对可能的现象，或某些实验的结果进行预测。
3. 根据模型作出的预测设计实验证明或证伪初步模型，如：系统地改变被研究对象的内部组成成分（如基因突变）或外部生长条件，然后观测在这些情况下系统组分或结构所发生的相应变化，包括基因表达、蛋白质表达和相互作用、代谢途径等的变化，并把得到的有关信息进行整合。
这样又从实验中达到了大量的数据和信息。
这个过程需要实验室中真实的实验。
4. 把通过实验得到的数据，信息与根据模型预测的情况进行比较，根据实验结果与模型预测结果的差异程度对初始模型进行修正，或抛弃。
5. 如果模型不被彻底抛弃，则根据新实验数据修正后的模型则取代了原有模型，利用这个模型仍可进行预测，并据此设计和实施新的改变系统状态的实验，重复上述各步骤，不断地通过实验数据对模型进行修订和精练。
6、试述如何应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学的研究，并分析其优缺点。
2D-PAGE原理是根据蛋白质的等电点和分子量的差异而使之分别在等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中分离出来。
应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学研究主要步骤有：1、在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织，如肿瘤组织与癌旁正常组织，然后裂解组织和细胞，抑制蛋白酶活性，出去非蛋白质的DNA，RNA，脂类等物质，溶解蛋白质，溶解并抽提总蛋白质。
2、将准备好的蛋白质进行2D-PAGE实验，先选择合适的PH范围进行等电聚焦，平衡胶条，再进行第二维的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3、对2D凝胶进行染色处理（可选择各种染色方法），利用软件分析比较成对组织的2D结果，找到上调或下调的蛋白质点。
4、将有差异的蛋白质点切割下来进行质谱分析，质谱谱图通过查询数据库找得蛋白质点对应的蛋白质。
5、对于得到的有差异的蛋白质要进一步进行验证，常用的手段包括：Western Blot, RT-PCR, 免疫组织化学等。
利用2D－PAGE进行差异蛋白质组学分析的优点主要在于：1、效率高：目前，一块胶板(16cm×20cm)可检测到3000～4000个甚至10000个蛋白斑点。
2、可重复性好：80年代开始采用固定化pH梯度胶的IEF，克服了载体两性电解质阴极漂移等许多缺点而得以建立非常稳定的可以随意精确设定的pH梯度，可建立很窄的pH范围(0.05U/cm)，对特别感兴趣的区域做第二轮分析，大大提高了分辨率。
固定化pH梯度胶已有商品生产，基本解决了重复性的问题；3、灵敏度高：SDS-PAGE有垂直板和水平超薄胶电泳两种方法，可分离10～100kD分子量的蛋白质；银染色法可检测到4ng蛋白，同位素标记法最灵敏，可测定20ppm的标记蛋白。
利用2D－PAGE进行差异蛋白质组学分析的缺点主要在于：1、对盐，DNA等杂质高度敏感。
2、对于溶解度低的输水性蛋白质，酸性，碱性蛋白质效果不好。
3、对PH和MW的范围有所限制。
4、耗时，无法自动化。
7、翻译后修饰（包括糖基化、磷酸化、泛素化等）的蛋白质组学研究中共性核心技术是什么？简述如何将这些技术应用到你的课题研究中。
研究翻译后修饰的蛋白质组学方法的共性是都要首先从细胞或组织的总蛋白中分离出带有特定修饰集团的蛋白质，然后经过电泳，酶解，富集有修饰的肽段，最后通过质谱分析和数据库检索确定被修饰的蛋白质种类以及被修饰的位点。
例如：设计如下的蛋白质组学课题“高通量寻找食管鳞癌组织中磷酸化修饰异常的蛋白质”，则可以按照上述核心技术流程设计以下实验：1、设计并制备磷酸化蛋白特异性抗体（单抗或多抗）。
2、分别从食管癌组织和癌旁正常组织中提取总蛋白。
3、分离磷酸化蛋白：使用磷酸化特异性抗体进行免疫共沉淀。
或者将磷酸化抗体连在亲和层析柱上，将总蛋白过柱分离磷酸化蛋白质。
4、分离得到的食管癌组织的总蛋白和癌旁正常上皮的总蛋白分别进行2D－PAGE实验。
5、用软件分析比较2D-PAGE胶，找到有差异的蛋白质点，则可能是磷酸化修饰异常的蛋白质。
6、选取差异的蛋白质点，用酶切成肽段。
7、采用亲和层析法富集磷酸化肽段（因为磷酸化肽段在总肽段中所占比例少，需要富集）。
8、进行质谱分析，数据库检索确定磷酸化肽段序列。
再进一步确定磷酸化的蛋白质。
9、为了提高结果的可信度还要在体外验证结果的真实性。
如果有条件还要在较大样本中确定这种磷酸化修饰的异常在人群中的比例，以及与食管癌发生发展的关系。
实验设计题（共30分）根据蛋白质组学研究方法，结合本实验室的研究方向，设计一个相关蛋白质组学实验。
（包括研究意义、国内外研究现状及参考文献、研究方法及流程、预期结果）食管鳞癌异常表达的蛋白质研究一、背景，研究意义食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其死亡率分别位居我国和世界恶性肿瘤的第四位和第七位。
原发的食管癌主要包括腺癌和鳞状细胞癌两种类型，西方的白人以腺癌为主，东方的黄种人以鳞癌居多。
遗传易感性也是食管癌发生的重要因素。
我国河南、山西、山东等省食管癌高发区的调查显示食管癌患者有家族史者为24%—61%。
在一个家族中，食管癌可在同一代或连续两到三代内发生。
食管癌这种明显的家族聚集现象显示出一些遗传易感基因可能在其中扮演重要角色。
大量研究资料表明，基因异常改变的积累以及蛋白质表达谱的异常干扰了细胞的正常生物学行为，导致细胞恶性增殖。
最常见的基因改变是原癌基因的激活和抑癌基因的失活，二者通过参与细胞周期的调控、信号传导、细胞分化及凋亡等事件，引起肿瘤的发生和发展。
尽管食管癌发生的分子遗传学研究已经有了很大的进展，但我们对于它认识仍然相当不足。
目前，还没有找到一个临床上可用的诊断特别是早期诊断的分子标志物或一个很好的基因治疗的靶点。