实验四甘油三酯测定范玉平
甘油三酯测定
四、实验内容和操作过程
1、取3支干净试管，分别标明测定（T）、标准（S） 和空白管（O），然后按表加入试剂：
加入物
测定管T 标准管S 空白管O
血清（ml）
标准液（ml）
15
工作液（ml） 1.5
1.5
1.5
4. 用72-1型分光光度计测出红色化合物吸光度，再利用公式 求出甘油三酯含量。
三、实验器材与试剂 （一）实验器材
（1）试管
3支
（2）水浴箱
1台
（3）试管架
1个
（4）洗耳球
1个
（5）微量五档可调移液器 2支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）72-1型分光光度计 1台
微量五档可 调移液器 使用方法：
3、先天性脂蛋白脂酶缺陷，脂肪肝及其他肝病。
4、妊娠后期，糖原累积病。
TG降低：
甲亢、肾上腺皮质功能降低、肝功能严重低下等。 甲 亢
嘴应沿容器壁上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成。
6.最后，打掉用过的吸液嘴，调回最大量程，仪器放置好保存。
72-1型分光光度计
工作原理
物质对光的吸收具有选择性，不同的物质都有各 自的吸收波长。在一定波长下，某物质的溶液对光的 吸收强弱（吸光度A）与溶液的浓度C和液层的厚度L 的乘积成正比，即遵循朗伯-比尔定律：
×标准液浓度（2.26 mmol/L）
【结果分析】
经过计算得到的血清中甘油三酯浓度为多 少，是否在人体的正常范围内（空腹甘油三酯 浓度为0.45～1.36mmol/L ）。
六、临床意义
TG升高：
1、随年龄增长有上升趋势，体重超标者。
实验四甘油三酯测定范玉平
化学法
1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸变色酸法） 比较准确
2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低
基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
实验四甘油三酯测定范玉平
色谱法
核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS） 主要用作参考系统中决定性方法的建立及 参考物质的制备与定值，此法费用昂贵， 样品处理复杂，难以推广应用。
实验四甘油三酯测定范玉平
实验方法选择原则
①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、 安全可行。
②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性 均达到要求。
实验四甘油三酯测定范玉平
实验四 血清三酰甘油测定
实验四甘油三酯测定范玉平
实验目的:
1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理 和意义．
2.了解三酰甘油的正常值范围.
实验四甘油三酯测定范玉平
生化分析相关概念
实验方法分类
①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
实验四甘油三酯测定范玉平
①决定性方法（definitive method）是指准确度最 高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发 现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方 法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接 近。由于技术要求太高，费用昂贵，
实验四甘油三酯测定范玉平
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一 酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油 （FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、 极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG 含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL）， 也称残粒样脂蛋白（RLP）
生物化学实验实验4-血清甘油三酯含量测定123课件
血清甘油三酯含量测定
生物化学与分子生物学系
血脂的概念
定义：血浆所含脂类统称血脂
种类：甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。
来源 外源性——从食物中摄取 内源性——肝、脂肪细胞及其他组织合成后释放入血
特点：受膳食、年龄、性别、职业及代谢等因素影响， 波动范围大。
血脂与血浆中的蛋白质结合，以脂蛋白(lipoprotein)形式而 运输。
分光光度计的使用
样品池
波长
毛面
读数
光面
拉杆，0-4档
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
比色杯的使用
临床应用
血脂：血甘油三酯、血胆固醇
餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高，
抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、
急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬化等
Let’s begin ！
血浆脂蛋白的功能
1. CM ：十二指肠，空肠细胞 运输外源性甘油三酯及胆固醇的主要形式。
2. VLDL：肝细胞 运输内源性甘油三酯的主要形式。
3. LDL：肝细胞、血浆 转运肝合成的内源性胆固醇的主要形式。
4. HDL：肝细胞，小肠细胞、血浆 将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢。
实验目的
掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法
×m
标准品
甘油三酯测定的操作规程
甘油三酯测定的操作规程一、实验前的准备工作：1.准备所需的实验仪器和试剂，包括分光光度计、离心机、试剂瓶、称量瓶、吸管等。
2.清洁实验用具，保证实验环境的卫生和安全。
3.检查仪器的使用情况，确保其正常工作。
二、实验步骤：1.取一定量的血液样本，将其放入离心管中。
2.将离心管放入离心机中，离心5-10分钟，使红细胞和血浆分离。
3.用吸管将上清液吸入试剂瓶中，确保不吸入红细胞沉淀。
4.在一个干净的试剂瓶中，加入一定量的甘油三酯试剂。
5.将试剂瓶摇匀，使甘油三酯试剂均匀分散。
6.取适量的上清液，加入已摇匀的试剂瓶中。
7.用吸管慢慢吸取液体，尽量避免产生气泡。
8. 将试剂瓶放入分光光度计中，设置波长为546nm。
9.读取并记录光密度值，作为读取的基准值。
10.按照甘油三酯试剂的说明书，进行标准曲线的制作。
11.将实验样本分别加入已制作好的标准曲线体系中。
12.读取标准曲线上与实验样本对应的光密度值。
13.根据标准曲线计算出实验样本中甘油三酯的浓度。
14.计算每个样本的甘油三酯浓度的平均值，并记录下来。
15.清洗实验仪器和试剂瓶，保持实验室环境的整洁和安全。
三、数据处理：1.对于每个样本，根据标准曲线计算出甘油三酯的浓度。
2.将测得的各样本的浓度值进行平均计算，得到样本组的平均浓度值。
3.根据实验设计和需要，对样本组的平均浓度值进行统计学分析。
四、实验注意事项：1.操作过程中要保持实验环境的卫生和安全。
2.严格按照试剂的使用说明操作，避免误操作。
3.操作过程中要注意换液的避免，避免产生气泡。
4.保持实验仪器的清洁和正常工作，可定期进行维护和保养。
5.实验结束后，及时清洁仪器和实验台面，保持实验室的整洁。
甘油三酯的测定的实验报告
甘油三酯的测定的实验报告实验报告：甘油三酯的测定一、实验目的1.掌握甘油三酯测定的原理和方法。
2.熟悉甘油三酯在临床诊断中的应用。
3.学习使用实验室仪器进行样品检测。
二、实验原理甘油三酯是血液中的一种脂质成分，其测定主要用于评估心血管疾病的风险。
甘油三酯的测定通常采用酶法，利用甘油三酯酶将甘油三酯水解成甘油二酯和脂肪酸，再通过甘油激酶将甘油二酯转化为甘油一酯和磷酸，最后通过磷酸脱氢酶将甘油一酯转化为甘油和磷酸盐。
通过测定反应过程中产生的磷酸盐的量，可以推算出甘油三酯的浓度。
三、实验步骤4.样品准备：采集受试者的血液样本，分离出血清，备用。
5.试剂准备：准备好甘油三酯测定试剂盒，按照说明书上的操作配制好试剂。
6.仪器准备：准备好全自动生化分析仪，调试好仪器参数。
7.样品检测：将血清样品加入试剂中，充分混匀，放入全自动生化分析仪中进行检测。
8.数据记录：记录每个样品的检测结果，包括样品编号、甘油三酯浓度等。
四、数据分析9.数据整理：将检测结果进行整理，计算出每个样品的甘油三酯浓度。
10.数据统计：计算所有样品的甘油三酯浓度的均值、标准差、最大值和最小值等统计指标。
11.数据分析：根据统计结果，对数据进行进一步分析。
例如，可以绘制柱状图或折线图来直观地展示不同性别或年龄组的甘油三酯浓度分布情况。
五、实验结论根据实验数据和分析结果，我们可以得出以下结论：12.本实验采用的酶法测定甘油三酯的方法可靠，可以用于临床诊断。
13.通过对受试者血液样本的测定，我们得到了不同性别和年龄组的甘油三酯浓度分布情况。
这些数据可以为临床医生提供参考，以评估心血管疾病的风险。
14.从数据中可以看出，不同性别和年龄组的甘油三酯浓度存在差异。
因此，在临床实践中，应该根据不同人群的特点制定相应的甘油三酯控制标准。
15.需要注意的是，甘油三酯测定结果受多种因素的影响，如饮食、运动、药物等。
因此，在解释实验结果时应该综合考虑这些因素。
实验十四 血清甘油三酯(TG)的测定
实验十二血清甘油三酯（TG）的测定血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。
近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法：一、酶法测定甘油三脂【原理】甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶（GK）的作用下生成3－磷酸甘油和ADP，3－磷酸甘油经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。
过氧化氢、4－氨基替吡啉和苯酚在过氧化物酶（POD）的微化生成红色的醌类化合物，颜色的深浅与含量成正比。
反应过程如下：1、TG 甘油＋脂肪酸2、甘油＋ATP 3－磷酸甘油＋ADP3、3－磷酸甘油＋O2磷酸二羟丙酮＋H2O24、H2O2＋4－氨基安替吡啉＋苯酚红色醌类化合物【试剂】TC酶试剂盒（商品）【操作】取三支试管，按下表操作：标准管测定管空白管血清（μl）—20—TG标准液（μl）（2mg/ml）20——TG酶工作液（ml） 1.0 1.0 1.0H2O（μl）——20混匀，37℃水浴15分钟，保温结束后，以空白管调零，520nm处比色测定光密度。
【计算】TG（mg%）×2×0.02×正常值：50－150mg％【注意事项】1、清晨空腹血清为好。
2、干粉配成酶工作液后，在2—8℃条件下可保存7天。
【临床意义】血清TG随进食脂肪后即见上升并出现混浊。
空腹脂肪餐后2—4小时内，血清混浊度及甘油三酯含量达高峰，8小时后，基本恢复空腹水平。
血清TG有随年龄而上升的趋势，体重超过标准者也往往偏高。
家庭性脂质代谢紊乱、糖尿病、肾病综合症、粮原累积病、动脉粥样硬化、酒精中毒、垂体、甲状腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。
原发性β－脂蛋白缺乏、甲状腺机能亢进、肾上腺皮质机能不全等疾病TG均可降低。
二、乙酰丙酮法【原理】血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。
甘油三酯的测定方法
甘油三酯的测定方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊甘油三酯的测定方法。
这可真是个重要的事儿呢，就好像咱每天要吃饭睡觉一样重要！你想想看，甘油三酯就像是身体里的一个小“指标精灵”，它的高低能反映出咱身体的一些状况呢。
那怎么才能知道这个“小精灵”的情况呢？这就得靠测定方法啦。
一般来说呢，常见的测定方法有化学法和酶法。
化学法就像是个经验丰富的老工匠，虽然传统，但也挺靠谱的。
它通过一些化学反应来检测甘油三酯的含量。
而酶法则像是个机灵的小鬼头，更快捷、更准确呢。
咱先说说化学法吧。
这就好比是一场古老的战斗，各种试剂和样本在那里“战斗”，最后得出结果。
这个过程可不简单呢，需要操作人员特别细心，就像绣花一样，不能有一点儿马虎。
要是稍微不小心，那结果可能就不准确啦，那可不行呀！再来讲讲酶法。
这可就高级多啦，就好像是有了魔法一样。
酶就像是一把神奇的钥匙，能快速打开检测甘油三酯的大门。
这种方法不仅快，而且还很准呢，就像射击比赛里的神枪手，一枪一个准儿！那在做这个测定的时候，咱可得注意好多细节呢。
比如说样本的采集，这可不能随随便便的，得按照要求来，不然结果能准吗？还有操作过程中，那些仪器就像是咱的宝贝，得好好爱护，不然它们闹脾气了，结果不就乱套啦？还有啊，不同的测定方法也有各自的优缺点呢。
化学法虽然可靠，但操作相对复杂；酶法快速准确，但也不是完美无缺的呀。
这就像人一样，没有谁是十全十美的嘛。
那咱为啥要这么关心甘油三酯的测定呢？这还用问吗？这可是关乎咱身体健康的大事呀！要是甘油三酯太高了，那可得小心了，可能会有心血管疾病来找麻烦呢。
所以呀，定期检测一下，心里有个数，不就放心多啦？总之呢，甘油三酯的测定方法虽然听起来有点复杂，但其实只要咱了解了，也就不那么难啦。
就像学骑自行车一样，一开始觉得难，等学会了就觉得很简单啦。
咱可得重视这个事儿，毕竟身体是自己的，咱得好好照顾它，对吧？大家说是不是这个理儿呀！。
甘油三酯(TG)测定操作规程(SOP)
甘油三酯(TG)测定操作规程（SOP）一、用途体外定量测定血清、血浆样品中甘油三酯（TG）的含量。
二、临床意义（一）概述甘油三酯（TG）分子量约为885道尔顿，是血液中主要的脂质成分，主要参与体内能量代谢。
（二）临床意义甘油三酯是最常用的高脂血症筛查指标。
甘油三酯升高常见于糖尿病、肾病综合征、脂肪肝及其他肝病、SLE、胰腺炎、糖原累积病等。
妊娠中后期TG升高。
先天性脂蛋白脂肪酶缺陷时TG异常升高。
甘油三酯降低见于甲状腺功能低下，肾上腺皮质功能降低和肝功能严重低下。
甘油三酯与HDL－C间呈负相关，而HDL－C和冠心病的流行呈负相关。
测定血清TG评估HDL－C降低是否由于血中TG过多引起，以制定治疗方案有意义。
血清TG＞2．8mmol／L时，HDL－C下降的机会增大。
（三）医学决定水平0.45mmol/L：此值在正常下限附近，低于此值多与营养不良有关，应进行正确的诊断和治疗。
1.69mmol/L：年轻男性此值接近参考范围上限，为动脉粥样硬化性心血管的一个危险因子，应给予病人提供合适的预防建议。
4.52mmol/L：高于此水平常预示会发生动脉粥样硬化性心血管疾病，应给予适当治疗，如控制饮食和用降脂药物等。
三、检验原理甘油三酯＋H2O−−→−LPL甘油＋脂肪酸甘油＋ATP−→−GK 3-磷酸-甘油＋ADP3-磷酸-甘油＋O2−−→−GPO磷酸二羟丙酮＋H2O2H202＋4-AAP＋4-氯酚−−POD醌亚胺＋H2O−→醌亚胺的生成使505nm波长处吸光度上升，吸光度的变化与TG的含量成正比。
通过与同样处理的甘油三酯校准品比较，即可计算出样品中TG的含量。
四、样品血液样品原则上采集空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
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TG的代谢
外源性途径 内源性途径
外源性途径：
指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘 油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞， 再合成TG并与其他脂质形成CM，通过 淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂 肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离 脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。
内源性途径：
CM水解产物—CM残粒以受体介导的 形式被肝脏吸收，其衍生物和一些 新组分合成VLDL。
用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂 盒等。 ( 有条件实验室可用于常规工作 )
③常规方法（routine method）有足够的精密 度、准确性、特异性和适当分析范围。
用途：经方法评估和学术组织认可后推荐 为常规方法。
例如： TG 定量 决定性方法——同位素稀释/质谱 （ID/GC/MS） 参考方法——酶法 常规方法——酶法
TG的生物化学
二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和 1分子甘油酯化而成，是体内能量的主 要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血 中以脂蛋白形式运输。
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一 酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油 （FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、 极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG 含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL）， 也称残粒样脂蛋白（RLP）
试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯
磺酸盐 Mg2+
计算TG的含量
甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L)
单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定
3.甘油氧化酶法
磷酸甘油氧化酶法实验原理:
LPL
TG + H2O
甘油+FFA
GK
甘油+ATP
甘油-3-磷酸+ADP
GPO
甘油-3-磷酸+O2
磷酸二羟丙酮+H2O2
POD
H2O2+4-AAP+DHBS
醌亚胺+ H2O
实验操作(手工分析）:
加入物
生化分析相关概念
准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的
一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如
谈准确度高、低，是否合格。
测量误差:是测量结果减真值之差。
误差和准确度属于不同概念，两者之 间不能划等号。
不准确度的数字表达是不确定度 (标准 差和置信区间的半宽度表示)。
可以理解为测量结果与约定真值之差 的范围。
空白管 标准管 样本管
蒸馏水（ul） 20
—— ——
标准液 （ul） ——
20 ——
样本 （ul） —— —— 20
酶工作液（ml) 1.5
1.5 1.5
混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波 长处测定各管吸光度值(A)。
酶工作液
试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂
注意要点：
1．酶试剂发红时，不可再用。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水
稀释。
血清TG参考范围：
成人 0.45—1.69mmol/L(40—150mg/dL)
临床意义
富含TG的脂蛋白是CHD的独立危险因 子，TG增加表明患者存在代谢综合症， 需进行治疗。
2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低
基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
色谱法
核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS） 主要用作参考系统中决定性方法的建立及 参考物质的制备与定值，此法费用昂贵， 样品处理复杂，难以推广应用。
酶法
1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽
实验方法选择原则
①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、 安全可行。
②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性 均达到要求。
实验四 血清三酰甘油测定
实验目的:
1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理 和意义．
2.了解三酰甘油的正常值范围.
TG的生物化学
一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是 一项重要的临床血脂常规测定指标，特别 是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研 究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危 险因素日益受到重视 。
TG测定的方法学
化学法 色谱法 酶法
化学法
化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽 提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG， 以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应 测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不 能自动化，而不适于常规工作应用。
化学法
1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸变色酸法） 比较准确
生化分析相关概念
正确度 大量测量的均值与真值的接
近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
生化分析相关概念
精密度：表示测量结果中的随机误差大小
的程度，即指在一定条件下进行多次测 定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。
生化分析相关概念
实验方法分类
①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
①决定性方法（definitive method）是指准确度最 高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发 现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方 法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接 近。由于技术要求太高，费用昂贵，
用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用 于常规工作 )
②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经 充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与 重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏 度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条 件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常 规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可 以被接受。
试剂1 （ul） 240
240
240
240
蒸馏水（ul） 3 标准液 （ul） —— 质控液 （ul） ——
—— 3 ——
—— ——
3
—— —— ——
样本（ul） ——
—— ——
3
混匀，37℃孵育5min
试剂2（ul） 60
in，以空白管调零，520nm波长处测定各管 吸光度值(A)。
TG降低比较少见，甲状腺功能亢进、 肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损 伤时可见。