细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导编者梁亦龙张继承生物信息学院2004年9月前言细胞是一切生物(包括人类)最基本的结构和功能单位。
生命科学中的各个学科领域，甚至非生命科学的许多学科领域中的学者们，越来越多地投入到对细胞生命现象的研究。
细胞是生命的载体，不理解细胞就不理解生命。
在现代生命科学教学中，不设置细胞生物学课，所培养出来的学生就称不上是完全的生命科学家。
在细胞生物学放学中，实验课不可或缺。
实验课的基本任务是，让学生学习细胞生物学基本技术，使他们具有一定的实验操作技能，并培养他们树立独立设计实验的思考观念和进行科研的基本素质。
我们借鉴兄弟院校的经验编写了这本《细胞生物学实验指导》•，供我院开设的各专业选用。
由于我们主客观条件所限，而且编写时间仓促，肯定会有不少缺点和错误，请提出批评意见，帮助我们不断改进教学。
编者梁亦龙2004年9月目录实验是规则与操作要求 (1)实验一细胞形态及大小的观测 (2)实验二相差和暗视野显微镜的原理、使用及标本观察 (5)实验三荧光显微镜原理及应用 (9)实验四电镜参观 (12)实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察 (14)实验六人淋巴细胞染色体标本制作 (15)实验七人淋巴细胞姐妹染色体区分染色 (17)实验八碱性磷酸酶的显示 (19)实验九叶绿体的制备及其对染料的还原 (22)实验十人体细胞核型图的制作 (24)实验十一线粒体的分离及活性测定 (27)实验十二联会复合体的染色与观察 (32)实验十三细胞融合 (33)实验十四死、活细胞鉴别 (39)实验十五细胞固定染色法 (41)实验十六早熟染色体凝集（PCC） (43)实验十七细胞同步化 (46)实验十八动物染色体分带技术 (48)实验十九线粒体的显示 (50)实验二十植物愈伤组织培养以及再分化 (52)实验二十一肿瘤细胞培养实验步骤 (57)实验二十二细胞器的分离 (62)实验二十三石蜡切片的制作 (66)实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
细胞生物学实验指导(12生工)
细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
细胞生物学实验指导
实验一动物细胞的传代培养一、实验目的1．熟悉细胞培养过程中的无菌操作技术。
2．了解细胞传代培养的基本方法和主要操作步骤二、实验原理细胞培养(cell culture)是指从机体内取出某种组织或细胞，模拟机体内的生理条件使其在体外生存、生长和繁殖的过程。
细胞的体外培养在细胞生物学和医学研究领域有着极为广泛的用途，这一技术已成为研究细胞生理、细胞增殖、细胞遗传、细胞癌变和细胞工程等课题的一项不可缺少的手段。
细胞培养技术的突出优点在于能为研究者提供大量的生物性状相同的细胞作为研究对象，便于人们在体外利用各种不同的方法从不同的角度研究细胞生命活动的规律。
另外，利用细胞培养技术还可使人们较为方便地研究各种物理、化学和生物因素对细胞结构和功能的影响。
细胞培养可分为原代培养和传代培养2种情况。
所谓原代培养(primary culture)是指直接从机体取出组织或细胞后所进行的首次培养。
而传代培养(subculture)是指当原代培养的细胞增殖到一定密度后，将其从原培养容器中取出，以1：2或其他比例转移到另一个或几个容器中所进行的再培养。
传代培养可简称传代。
在体外培养过程中，要使细胞能正常地生长、繁殖，需经常对其进行传代。
传代的累积次数就是细胞的代数。
在从事细胞培养工作时常常会接触到细胞系(cell line)和细胞株(cell strain)这两个容易混淆的概念。
一般认为，细胞系指通过原代培养并经传代后所形成的细胞群体，由于细胞系来源于原代培养，而原代培养物中所含的细胞种类较多，故一个细胞系往往由多个生物学性状不同的细胞群体所组成，而细胞株是利用单细胞分离培养法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中选择出的细胞群体，一个细胞株往往具有特殊的生物学性状或标记并可持续存在。
细胞培养是一种程序复杂、条件较多且要求严格的实验性工作。
由于细胞在体外的生长、繁殖会受到温度、营养物质、酸碱度、渗透压及微生物等多种因素的显着影响，故细胞培养工作的各个环节如培养器皿清洗消毒、营养液配制和除菌、pH值调整、温度调节等操作都有严格的要求和规定，特别要注意无菌操作，这是细胞体外培养成败的关键。
细胞生物学实验指导
新鲜菠菜。
三、 试剂：
0.35 mol/L氯化钠，0.01％吖啶橙（acridine orange）。
实验方法：
1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，称30 g于 150 ml 0.35 mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3-5 min。
3. 分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验（步骤同上）。
实验结果：
将观察到现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。
不同低渗溶液下的溶血现象
试管编号 是否溶血 时间 结果分析
1. 10 ml 氯化钠 + 1 ml 稀释羊血
2. 10 ml 氯化铵 + 1 ml 稀释羊血
3. 10 ml 醋酸铵 + 1 ml 稀释羊血
实验结果：
描述并记录实验结果。
实验二 叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
实验目的：
（一）原理
气孔复合体由一对保卫细胞（有的有副卫细胞）组成，组成气孔的保卫细胞对光、温度、湿度、CO2等环境因子以及一些植物激素非常敏感。保卫细胞接收信号后，经过胞内信号转导，保卫细胞渗透势变化引起保卫细胞吸水或失水，使气孔开放或关闭，而K+是调节保卫细胞渗透势的重要物质，因此气孔的运动伴随着K+的迁移，如在光下，K+大量进入保卫细胞，渗透势下降，细胞吸水，气孔张开，反之，气孔关闭。
细胞生物学试验指导
细胞生物学实验指导细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步，所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。
实验一普通显微镜及其使用（装片观察）一、目的要求：1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。
2、参观了解其他各类显微镜。
二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
三、方法和步骤：1、介绍普通光学显微镜的构造机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。
光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。
2、油镜的原理及使用方法原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。
在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。
3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。
4、注意事项：（1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。
再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。
注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。
（2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍己干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。
5、观察几种细菌标本片。
6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。
四、作业及思考题：1、油镜的原理是什么？2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？实验二、细胞膜的渗透性实验目的了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。
实验原理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。
实验用品一、器材50ml烧杯，试管(1〜10cm) ,10ml移液管,试管架。
细胞生物学实验指导
《细胞生物学实验》指导一、实验课名称：细胞生物学实验Experiment of Cell Biology二、实验课性质：独立设课三、适用专业：生物技术和水产养殖四、采用教材及参考书：教材：安利国主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2004参考书：1. 杨汉民主编．细胞生物学实验（第二版）．北京：高等教育出版社，1997.72. 徐承水，党本元主编．现代细胞生物学技术．青岛：青岛海洋大学出版社，19953. 王金发主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2003五、学时学分：课程总学时：36；课程总学分：1七、实验课考核方式：1.实验课考核成绩确定：本课程考核成绩由平时成绩（占30%）、实验报告成绩（占30%）和终期考核成绩（占40%）三部分构成。
2.平时成绩确定：由任课教师根据实验操作、问题回答和出勤情况确定，按A（优）、B （良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
3.实验报告成绩：本课程要求学生实验报告应包括以下内容：①实验目的及原理：简明；②方法与步骤：具体操作步骤、注意事项等；③结果：详细每一步的结果以及计算方法和计算结果；④分析与讨论：根据所学知识对结果进行分析讨论，阐明所得结果说明了什么问题；如果结果与理论不符，应说明可能的原因。
实验报告成绩由任课教师根据学生实验报告写作是否符合规范要求、试验结果及分析的具体情况给出。
每次报告均按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分，实验报告成绩为各次报告成绩的平均值。
4.终期考核成绩：实验课结束后进行笔试、口试或现场操作考核，按A（优）、B（良）、C（及格）、D（不及格）四个等级评分。
实验项目实验一、显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验一、要求：了解普通光镜及各种特殊光镜的构造、成像原理及应用；掌握正确的使用方法；理解显微镜的技术参数和特殊光镜的结构特点；掌握实验报告的写法。
二、实验内容：普通光学显微镜的结构及技术参数：由光学和机械两大系统构成。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验目录:实验一：特殊显微镜的原理及其使用实验二：电子显微镜的原理及使用实验三：细胞膜的渗透性实验四：细胞的凝集反应实验五：诱导细胞融合—聚乙二醇法实验六：线粒体和液泡系的超活染色与观察实验七：叶绿体的荧光原位观察实验八：细胞骨架的观察实验九：细胞中DNA、RNA的显示实验一特殊显微镜的原理及其使用I.暗视野显微镜的原理和使用一、实验目的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利用此原理设计的。
它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。
但被检物体为非均质时，并大于1/2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。
一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004μm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2μm)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
三、仪器、材料与试剂（一）仪器具有暗视野聚光器的显微镜（二）材料牙垢微生物，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头镊子，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。
（三）试剂生理盐水四、实验步骤1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。
先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。
如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。
在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。
注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。
四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。
2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。
3．观察细胞中DNA的分布。
（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。
DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。
并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3．淀粉：取一块马铃薯，用徒手切片法，切成薄片，将薄片放于载玻片上的 水滴中，加盖玻片后即可观察，先观察一下淀粉粒的形状及在细胞内的分布，然 后在加碘液染色 5 分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖片观察。 四、习题
1、DNA 的显示法-Feulgen 反应 2、压片法 3、细胞有丝分裂相的观察 四、实验仪器、材料和试剂 1、仪器：显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、 解剖针、酒精灯、试管、烧 杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。 2、材料：洋葱鳞茎、根尖 。
7
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
（2）硝酸银溶液：
硝酸银
1.5g
蒸馏水
100m
（3）还原剂：
对苯二酚
1—2g
中性福尔马林
15ml
亚硫酸钠
0.1—0.5g
蒸馏水
100ml
2．镀银步骤
（1） 固定：在硝酸钴溶液中固定 10—24 小时，但不宜超过 24 小时；
（2） 蒸馏水快洗；
（3） 室温下在硝酸银溶液中放置 36—48 小时；
（4） 蒸馏水冲洗；
2
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
高尔基体
高尔基体显示的方法，目前使用较多的是： 1．固定染色法。1889 年 Golgi 用镀银的方法显示出这种细胞器，目前仍应 用 AgNO3 或饿酸处理材料，将高尔基体显示为棕黑色。这是由于 AgNO3、饿酸在 高尔基体的部位被还原之故，所以显出高尔基体的形态及其在细胞内的分布。常 用的方法有 DaFano 硝酸钴-硝酸银镀银法，Aoyama 镀银法及 Romony Cajal 镀银 法等，而欲显示其细胞结构，就得使用电镜技术。 2．活体染色法。将中性红配制成一定的浓度，对细胞进行活体染色，以显 示高尔基体。但此种显示高尔基体的方法，仍不如詹纳斯绿显示线粒体的方法更 为广泛。因为中性红只能染高尔基体的液泡部分，因此有一定的局限性。 一、目的与要求
先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注 意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中
4
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。 3．电镜照片的观察
观察了光学显微镜的线粒体以后，在观察线粒体的电镜照片。在电镜照片上， 可以看到，线粒体不是一个简单的杆状或颗粒状，从切面看它是一个具有双层膜 的小囊：外膜完整、内膜连续不断地向线粒体的基质褶入，形成一些列双膜的嵴 （cristae）. 嵴的形状和数目随细胞不同而异。可以说线粒体是一个复杂的膜 系统。 （二）高尔基体
（5） 还原剂中还原，8—24 小时；
（6） 蒸馏水洗，快步脱水，透明，包埋；
6
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
（7） 切片—帖片—脱蜡到水—封片； （8） 镜检，高尔基体呈黑色，细胞质呈黄色。
实验二 DNA 显示和细胞有丝分裂相的观察
配制时间：宜在使用时配制新鲜液，不可久存。 （2）鼠肝细胞线粒体的活体染色：剪断颈动脉，放血处死小鼠，剖腹，取出肝 脏，放在滴定板上。沿肝脏边缘，用刀片切取 2—3mm 厚的切片，置滴定板的凹 孔内。加 2—3 滴 1/10000 浓度的詹纳斯绿染液，染色 20—30 分钟。取出肚脏， 用生理盐水洗去染料，再用刀片切取很薄的小片，置载片上。滴一滴生理盐水于 肝切片上，加上盖玻片，再放上一张小滤纸，用拇指猛压载片，使细胞分离或压 碎。
观察时，先在低倍镜下找到完整的肝细胞，再在高倍镜下观察细胞质内的线 粒体。 （3）洋葱鳞片表皮细胞线粒体的活体染色：取一载玻片，在其中央加一滴 0.5% 詹纳斯绿染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下一小块表皮，放在载玻片上的染 料中，并使其展开，染 5—10 分钟，用吸管吸取蒸馏水，滴于染色的载玻片上， 使染液冲淡，最后使标本周围液体近于无色。此时，用镊子取一盖玻片，先将它 的一边轻轻接触到载玻片染液的边缘。此时再慢慢地放下盖玻片，这样可以避免 出现气泡。如载玻片上水过多，可用一吸水纸从盖玻片的一侧吸去过多的染液。 此时，可放在显微镜下进行观察。
在电镜下，叶绿体和线粒体一样，也显示为一个复杂的膜系统，对照电镜照 片你能说出叶绿体的超微结构吗？ （四）细胞内含物
1．多糖：观察小鼠肝细胞的永久制片，肝细胞内储存有大量的肝糖，可以用 PAS 反应显示肝糖在细胞内存在的部位。
2．脂滴：取花生的子叶，用徒手切片法，切成薄片，放于载玻片上，加一滴 苏丹 3 染液染色 5 分钟，用蒸馏水洗去染液，加盖玻片，即可进行观察，观察时 注意脂滴的颜色及其在细胞内的分布。
按上述方法继续观察其他标本。 （2）小鼠肾细胞：肾小管细胞为方形，在细胞核周围被染成蓝黑色的是线粒体， 仔细观察它们是什么形状？ （3）小鼠肠细胞：细胞呈长柱状，注意线粒体形状及在细胞内的分布？
2．活体染色标本的制作与观察 （1）活体染色所用染色剂的一般要求
染料浓度：一般是非常稀的，詹纳斯绿作为活体染液，它的使用浓度范围在 1/3000—1/10000，也有人用 1/30000 浓度。使用浓度要依不同材料而异，如对 植物细胞线粒体的活体染色，可用 1%，配制时可用等渗盐水，如生理盐水或 Ringer 液。
2．高尔基体电镜照片的观察 在观察了光学显微镜下的高尔基体后，在观察示范电镜照片，注意高尔基体
是由几部分组成的。 （三）叶绿体
叶绿体—示范：叶片横切面上，在叶肉细胞质部位有许多圆形颗粒，此即叶 绿体。
此种材料，亦可取新鲜叶片，用刀片做徒手切片或用镊子撕下菠菜叶肉细胞 将切片放于载玻片上，滴一滴蒸馏水，加上盖玻片，即可在显微镜下直接观察绿 色的叶绿体。
观察制版标本时，要注意线粒体在不同细胞内的心态及在细胞质内的分布部 位。
3
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
（1）兔肝细胞：先在低倍镜下找到标本，再换高倍镜观察，肝细胞为多角形的 较大细胞，细胞中央有一圆形细胞核，此时换上油镜头，再继续观察，注意在肝 细胞只能感线粒体是什么形状？它们在细胞质内是怎样分布的？
化学与生物工程系：
细胞生物学 实验指导
专 业 ：生 物 技 术 指导老师：陈 春 岚
1
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
实验一 细胞和细胞内含物的观察
细胞质内含有多种细胞器。有些细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶 体等普遍存在于各种细胞中，而另有些细胞器如叶绿体，只存在于植物细胞中。 细胞质内的这些结构，除叶绿体外，一般在光学显微镜下不易看见，必须经过一 定的固定染色方法处理后，才能看到大多数细胞器，或直接用相差显微镜观察。
一、目的与要求
了解 Feulgen 反应的基本原理，学习其操作方法和压片法，初步掌握细胞分 裂各期的主要特点。 二、原理
Feulgen 反应的原理是根据 DNA 经弱酸（1mol/L）水解后，打开料嘌呤和脱 氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位与 Schiff 试剂结合，形成含醌基的化合物。Schiff 试剂是由碱性品红和偏重亚硫 酸钠作用形成的无色品红液，当无色品红液与醛基结合则形成紫红色的化合物。 醛基是一个发色团所以具有颜色，因此凡有 DNA 的部位，就呈现紫红色。材料不 经过水解或预先用热的三氯乙酸或 DNA 处理，得到的反应是阴性的，从而证明 Feulgen 反应的专一性。 三、实验内容
本实验所用标本是按 Aoyama 镀银法制作的，简单地讲。在制作中，首先将 材料放于含有氯化（）和福尔马林的固定剂中，进行固定，然后镀银，若干小时 后，取出放入还原液。最后，经脱水、包埋、切片，制成薄切标本。用这种方法 制成的标本，在细胞内的高尔基体被显示为棕黑色（详细方法见本实验末附录）。
1．高尔基体永久制片的观察。在兔神经节细胞核的周围原生质中，可看到棕 黑色的网状物，此即为高尔基体。
3、试剂：
（1）1mol/L 盐酸的配制：取 82.5ml 密度 1.19/ml 的浓盐酸加蒸馏水至 1000ml。
（2）Schiff 试剂的配制与保存：称取 0.5g 碱性品红加入到 100ml 株沸的蒸
馏水中，时时震荡，煮 5 分钟（不能沸腾），使之充分溶解。冷却至 50℃时用滤
线粒体 线粒体是一种动态的易变结构。经过处理在光学显微镜下呈现为颗粒状、棒 状或弯曲细线。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发 生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状，成熟的卵细胞内线粒体呈颗 粒状，肾细胞内的线粒体呈棒状。显示线粒体的方法可以概括为以下几种： 1、生活细胞的观察。如将组织培养细胞或其他生活细胞，放在相差显微镜 下，就可以看到细胞质内有线状小体活动，这就是线粒体。 2、活细胞染色法。就是利用某些无毒或毒性较小的染料，显示出细胞内某 些特殊结构存在的真实性，而并不对细胞的活动有影响，如 Janus green B（詹 纳斯绿 B），就是一种毒性较小的碱性染料。将其配制成一定浓度，对活细胞进 行染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体，这就是线粒体。 还可看到其在细胞质内的活动状况。线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体 中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的 细胞质中的染料被还原呈无色。 3、固定染色法（即永久制片法）。用特殊的固定液染色处理动物的组织或细 胞后，可显示出线粒体的形态。但所用材料必须新鲜，否则线粒体常因已经破坏 而显示不出，线粒体的组成成分主要是脂蛋白，脂类又以磷脂为主，用于线粒体 的固定液含有饿酸，重铬酸钾等。因为两者均能使脂类物质保存下来，故可显示 出线粒体的形态。用于显示线粒体形态的固定、染色方法较多，常用的有 Altmann 染色法、Regand 染色法及 Chmpy-Kull 染色法等，但欲显示线粒体的细微结构， 则要用电镜技术。 4、生化分离提取方法。在一定的低温条件下，将组织细胞破碎制备成匀浆， 用于线粒体组分及其在不同生理状态的分离分析研究。