叶绿素测定办法
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。
叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。
利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。
二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。
然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。
注意，酒精的使用要避免火源。
2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。
3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。
记录吸光度值。
4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。
5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。
利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。
2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。
2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。
3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。
叶绿素的测量方法
叶绿素的测量方法叶绿素是植物和浮游生物体内的一种绿色色素，具有光合作用和光合细菌中也存在这种色素。
叶绿素对于生物体内的光合作用非常重要，因此对于叶绿素的测量方法，一直是科学研究和工程应用中的重要问题。
本文将介绍叶绿素的几种常用测量方法，旨在通过详细的介绍和分析，使读者对叶绿素的测量方法有更为全面深入的了解。
一、光学吸收法1.常用紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)光学吸收法是一种广泛使用的叶绿素测量方法之一。
通过利用叶绿素对特定波长光的吸收特性，可以测量叶绿素的浓度。
常用的是紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)。
通过用叶绿素标准溶液构建标准曲线来测定待测叶绿素溶液的浓度，精确、快速、准确。
2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法(HPLC)是一种专业的叶绿素测量方法，对于复杂样品的分离和测量更加准确。
利用HPLC技术，可以进一步分析不同种类的叶绿素和其同系物的含量。
二、荧光法1.光诱导荧光法(PAM)光诱导荧光法(PAM)是一种基于叶绿素光合效率的测量方法。
通过测量叶绿素在光合作用过程中释放的荧光信号，可以快速、准确地评估叶绿素的光合活性和健康状态。
2.激光诱导荧光法(LIF)激光诱导荧光法(LIF)是利用激光激发样品后产生的荧光信号来测量叶绿素含量和活性的一种方法，具有高灵敏度和高空间分辨率。
三、生物化学法1.粉末化学法粉末化学法是通过将叶绿素样品制成粉末，再用特定的溶剂提取叶绿素进行测定的方法。
这种方法操作简单，适用于对叶绿素的快速测量。
2.超声波破碎法超声波破碎法利用超声波的作用，能够快速破碎植物细胞壁，并释放出细胞内的叶绿素。
该方法操作简单、高效。
以上所述的叶绿素测量方法只是其中的几种常用方法，随着科技的不断发展，还有许多新的测量方法不断涌现。
在实际的应用中，根据需求和样品的特性选择合适的测量方法至关重要。
希望本文所介绍的叶绿素测量方法能够为相关研究和实际应用提供参考。
实验10叶绿素含量的测定
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长旳光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液旳吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下旳吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量旳根据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光经过溶液时，溶液旳吸光度与溶 液旳浓度和液层厚度旳乘积成正比。其数学体现式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液旳厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b旳丙酮溶液在可见光范围内旳最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处旳吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时旳 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处旳吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处旳吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），旳关系可分别用下列方程式表达：
叶绿素含量旳测定
一.试验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱旳吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素旳含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液旳吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α百分比常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质 旳吸光系数。多种有色物质溶液在不同波长下 旳吸光系数可经过测定已知浓度旳纯物质在不 同波长下旳吸光度而求得。
漏斗、大试管
三. 试验环节
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用丙酮研磨 ↓
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
以下是 8 条关于叶绿素含量测定方法：
1. 嘿，你知道吗，分光光度法就可以测定叶绿素含量哦！就像用魔法镜一样，能把叶绿素的秘密都照出来。
比如说，在实验室里，小明拿着样本放在分光光度计前，专注地操作着，那认真的样子，简直酷毙啦！
2. 还有一种方法叫荧光分析法呢！哇哦，这就像是给叶绿素装上了信号灯，一测就知道它的情况啦！想象一下，小红在那里调试着仪器，期待着结果，那心情肯定很激动呀！
3. 说起来，高效液相色谱法也是很厉害的哟！这不就是给叶绿素来个精准的“体检”嘛！记得有一次，小王看着色谱图出来，脸上露出了惊喜的表情，嘿，肯定是发现了什么有趣的结果！
4. 重量法也能行呀！这就像称一称叶绿素有多重一样。
就像那次和小李一起做实验，看着天平上的数字，我们都在猜叶绿素到底有多少呢！
5. 浸提法也不错呢！感觉就像是给叶绿素泡个舒服的“澡”，然后就能知道它在里面的情况。
那次和朋友们一起用这个方法，大家边做边讨论，可有意思了！
6. 哇塞，难道你不知道还有纸层析法呀！这简直就是给叶绿素来一次奇妙的“旅行”嘛！上次看到老师熟练地操作着，那技术，真牛！
7. 原子吸收光谱法也能测定哦！这是不是跟找宝藏一样神奇呀！就像我们有一次好奇地看着仪器，在想它怎么就能找到叶绿素的秘密呢。
8. 近红外光谱法也很管用呢！想想看，就像是给叶绿素照了个特别的“照片”。
我记得有一次和同学一起用这个方法，大家都觉得好新奇呀！
总之呀，这些方法都各有各的奇妙之处，都能帮助我们了解叶绿素含量呢！。
叶绿素测定实验方法
叶绿素测定实验方法引言：叶绿素是一种存在于植物和藻类细胞中的绿色色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究光合作用的过程和效率具有重要意义。
本文将介绍一种常用的叶绿素测定实验方法，通过该方法可以准确快速地测定叶绿素的含量。
实验材料：1. 叶绿素提取液：含有乙醇和醋酸的混合液；2. 磷酸盐缓冲液：用于稀释样品和调整pH值；3. 丙酮：用于去除样品中的类胡萝卜素；4. 乙醇：用于去除样品中的脂类物质；5. 乙酸镁溶液：用于稀释样品和调整pH值；6. 纯水：用于稀释样品和制备试剂。
实验步骤：1. 取一片新鲜的叶片，用研钵将其研磨成细碎的叶浆。
添加适量的磷酸盐缓冲液，使叶浆与缓冲液的体积比为1:10，并搅拌均匀。
2. 将混合物过滤，收集滤液，滤液即为叶绿素提取液。
3. 将叶绿素提取液分装到两个试管中，分别标记为A和B。
4. 在试管A中加入适量的丙酮，用于去除样品中的类胡萝卜素。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
5. 在试管B中加入适量的乙醇，用于去除样品中的脂类物质。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
6. 分别离心试管A和B，将上清液转移到两个新的试管中。
7. 在试管A中加入适量的乙酸镁溶液，用于稀释样品和调整pH值。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
8. 在试管B中加入适量的纯水，用于稀释样品和制备试剂。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
9. 分别使用分光光度计测量试管A和B中溶液的吸光度。
选择适当的波长（通常为665nm和649nm），分别记录吸光度值为A665和A649。
10. 根据公式A = (A665 - A649) × V / M，计算叶绿素的含量。
其中，V为取样体积，M为叶绿素的摩尔吸光系数。
结果分析：通过测量试管A和B中溶液的吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
试管A中的溶液经过丙酮处理，去除了类胡萝卜素的干扰；试管B 中的溶液经过乙醇处理，去除了脂类物质的干扰。
因此，通过计算两个试管中溶液的吸光度差，可以准确测定叶绿素的含量。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
叶绿素含量的测定
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称0.5g叶用乙醇或丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用乙醇或丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用乙醇或丙酮定容至25mL ↓ 置分光光度计测定 (注意:不同提取溶剂波长不同)
四. 结果计算
注意分光光度计的规范使用
六. 思考题
为什么植物在不同生长环境下其 Chl含量 有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？
实验二. 叶绿素含量的测定
高等植物光合作用过程中利用的光能是 通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿 体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 和叶黄素组成。 在植物光合生理、发育生理和抗性生理 研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿 素含量也是指导作物栽培生产和选育作 物品种的重要指标。
一.实验原理
组织变白，在暗处静止3-5min后，用滤纸过滤
到25ml容量瓶中。
注意：用滴管吸取96%乙醇或80%丙酮将研钵洗净，
清洗液也要过滤到容量瓶中，并用96%乙醇或 80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残 渣全部变白后，用96%乙醇或80%丙酮定容至刻 度。
3．读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注 意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素 提取液清洗2~3次，注意清洗时要使清洗液接触 比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒
4.1 结果计算
C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数
Chl = (mg/g叶)
材料鲜重（g）
4.2 比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同 种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异。
五. 注意事项
注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法1、实验原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶液的质量浓度C和液层厚度L成正比，即 A=αCL式中，α为比例常数。
当溶液浓度以质量浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光值。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知质量浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合物在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
要测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在3个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、叶绿素b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
由于叶绿体色素在不同溶液中的吸收光谱有差异，因此，在使用其他溶剂提取色素时，计算公式也有所不同。
叶绿素a、叶绿素b在体积分数为95%的乙醇中最大吸收峰的波长为665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm，据此列出关系式为C a=13.95A665-6.88A649C b=24.96A649-7.32A665C c=(1000A470-2.05C a-114.8C b)/245C a为叶绿素a的质量浓度，C b为叶绿素b的质量浓度，C c为类胡萝卜素的质量浓度，单位都是mg/L2、器材准备：分光光度计，百分之一天平，研钵，棕色容量瓶（25mL），小漏斗，滤纸，吸水纸，擦镜纸，滴管。
3、溶剂的制备：1）95%乙醇 2）石英砂 3）碳酸钙粉4、实验步骤：（1）取新鲜植物叶片，擦干净表面，剪去叶中脉，只取叶片（2）取新鲜植物叶片样品2g，放入研钵中，加少量石英砂及2-3mL95%乙醇，研成匀浆，再加10mL95%乙醇，研磨至组织变白。
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分光光度法测定叶绿素含量
一、实验目的
1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。
2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
二、实验原理
叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。
当植物细胞死
1.
2.—比尔
叶绿素a
定
提取液在a、叶绿素b
仪器
原料
新鲜(或烘干)的植物叶片
试剂
1.96％乙醇(或80％丙酮)
2.石英砂
3.碳酸钙粉
四、操作步骤
取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。
称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白。
静置3～5min。
取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至100mL，摇匀。
取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm和652nm下测定吸光度，以95％乙醇为空白对照。
五、计算。