生物碱类成分的薄层色谱分析
第五章生物碱介绍
第七页，编辑于星期日：七点 十四分。
极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用
中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%-1%的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取，
但提出的杂质较多，需净化。
第五章 中药制剂中各类化学成分分析
第一节 含生物碱（alkaloid）类成分的分析
第一页，编辑于星期日：七点 十四分。
生物碱的分布
含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、小 檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科及茜 草科等，中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄柏、乌 头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、贝母、百 部等。
品精密称定，加无水乙醇溶液并放置24小时，过滤，减压
回收乙醇，至残留液至小量时加2%盐酸溶液（注2），
移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次（注3），在样品液中
滴 加 氨 试 液 调 PH9 10 （ 注 4 ） ， 再 用 乙 醚 - 氯 仿 （3:1）混合液提取３次（注5），合并萃取液，蒸干， 加无水乙醇溶解．精密加入硫酸液（0.01mol/l）与
通常用磷酸盐缓冲液，但操作时由于存在 盐，做过后应充分洗柱，以免腐蚀柱子。
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（2）、固定相方面的改进 A：选择C链较短的键合相硅胶为固定相，如C8
比C18好，原因是由于硅烷的C链较短则覆盖硅 胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。 B：封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三甲 基氯硅烷（TMCS）处理，可减少残余羟基，增 加单体覆盖度。
人有了知识，就会具备各种分析能力，
明辨是非的能力。
所以我们要勤恳读书，广泛阅读，
8398生物碱类的检识天然药物化学
（三）生物碱的纸色谱（分配原理）：
色谱条件与生物碱的存在状态有关。 1.生物碱盐的状态（离子型、 极性大） 固定相：水。 展开剂：偏酸性（使生物碱以盐的状态存在）、极性较
大的有机溶剂（正丁醇—冰醋酸—水4：1：5上层 ，即 BAW系统 ）。
（三）生物碱的纸色谱（分配原理）：
2. 游离态生物碱（脂溶性、 极性小） 固定相：甲酰胺。 ห้องสมุดไป่ตู้展开剂：偏碱性（使生物碱以游离状态存在） 、极性
生物碱类的检识
生物碱的检识：
➢理化检识： 物理性质，沉淀反应，显色反应
➢色谱检识： TLC, PC, HPLC
（一） 生物碱的吸附薄层层析
硅胶、氧化铝 硅胶薄层（弱酸性） 适用于大多数生物碱，但强碱性生物碱可能出现 Rf太小和 复斑或拖尾,影响检识效果。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
解决办法：
（1）碱液（0.1~0.5mol/L NaOH）制板。 （2）碱性展开剂（中性展开剂 + 少许二乙 胺或氨水）。 （3）在层析槽中放一盛有氨水的小器皿。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
展开剂： 亲脂性展开剂，以氯仿为基本溶剂。根据色谱 结果调整展开剂极性。
显色： 观察斑点；荧光；改良碘化铋钾；特殊显色剂。
（一） 生物碱的吸附薄层层析
一般来说，硅胶和氧化铝薄层色谱适用于分离 和检识脂溶性性生物碱。尤其氧化铝吸附力较硅胶 强，更适于分离亲脂性较强的生物碱。
较小的有机溶剂（甲酰胺饱和的苯、氯仿）。
练习
请比较下列化合物在硅胶吸附层析和反相薄层层析中的Rf.
N H3C
H
OMeMeO
OR O O
OMe
N CH3
H
粉防己甲素 R=CH3 粉防己乙素 R=H
中医药材中的活性成分与鉴定方法
中医药材中的活性成分与鉴定方法活性成分是指中医药材中具有药理活性和治疗作用的化学成分。
中医学认为，药材中的活性成分是药物的主要组成部分，直接影响药物的疗效。
因此，对中医药材中的活性成分及其鉴定方法进行深入研究具有重要意义。
一、中医药材中的活性成分中药材中的活性成分种类繁多，根据其化学性质和药理作用，可分为以下几类：1. 生物碱类生物碱是指由含有一环或多环芳香核的含氮碱性天然产物，具有广泛的生物活性。
常见的中药材中含有的生物碱包括马钱子中的鸦片碱、黄连中的黄连素等。
2. 单体类单体是指一种特定的天然有机化合物，它通常是由一个基本单位构成的。
常见的中药材中含有的单体类活性成分包括黄酮类、黄酮糖苷类、生物类碱和苯乙基醇等。
3. 多糖类多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的复杂碳水化合物。
多糖在中药中广泛存在，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
人参、枸杞等药材中的多糖成分是其药效的主要来源。
4. 有效成分组合许多中草药中的活性成分存在于复杂的生物组合中，相互之间具有协同作用或加强作用。
例如，天麻中的多种酯类成分共同发挥镇静和镇痛作用。
二、活性成分的鉴定方法为了准确鉴定中医药材中的活性成分，科学家们常常采用多种分析方法和技术。
以下是几种常用的鉴定方法：1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种将化学样品通过分子在固定相上的吸附、分配和迁移来实现分离和鉴定的方法。
通过和标准物质对比，可以确定中药材中的活性成分。
2. 气相色谱法气相色谱法是一种通过样品在气相固定相之间的分配和迁移来分离和鉴定化学物质的方法。
该方法具有分离效果好、分离速度快、分析结果准确等优点。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种将溶剂通过柱上固定的固定相，使溶质在固定相和溶剂之间分配和迁移来完成分离和鉴定的方法。
该方法适用于多种中药材中活性成分的分离和测定。
4. 质谱法质谱法是一种通过样品中化学物质的质量谱图来鉴定样品中的成分的方法。
质谱法具有高分辨率、高灵敏度和高特异性等特点，可以准确鉴定中药材中的活性成分。
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术
生物碱是一类具有生物活性的有机化合物，广泛存在于植物、动物等生物体内，具有
多种生理活性和药理作用。
提取和分离生物碱是研究和开发生物碱的重要工作之一，以下
介绍几种常用的生物碱提取和分离技术。
1. 溶剂浸提法
溶剂浸提法是最常用的生物碱提取方法之一。
通过物质溶解度差异，利用某种溶剂将
生物碱从生物材料中提取出来。
常用的溶剂有乙醇、乙醚、醋酸乙酯等。
该方法简单易行，但对溶剂的选择、浓度的控制和提取时间等条件要求较高。
2. 离子交换树脂法
离子交换树脂法是一种分离和富集生物碱的有效方法。
树脂对生物碱具有较高的亲和性，可以通过串联多个离子交换柱进行逐步分离和纯化。
该方法适用于生物材料中生物碱
含量较低的情况，但操作复杂，需要灵活控制洗脱液的浓度和pH值。
3. 气相色谱法
气相色谱法是一种常用的生物碱分离和检测方法，通过GC柱将混合物中的生物碱分离并测定其相对含量。
该方法准确、灵敏度高，对样品要求低，但需要纯化样品并进行衍生
化反应，操作复杂，且只适用于描记类生物碱。
5. 薄层色谱法
薄层色谱法是一种常用的生物碱质量分析方法，通过物质在薄层层析板上的迁移速度
差异，分离和鉴定混合物中的生物碱。
该方法操作简便，不需要专门的仪器设备，但分离
效果一般，只适用于样品中生物碱含量较低的情况。
生物碱类药物的分析
三、色谱法
—吸附或分配性质的差异
（一）薄层色谱法 ——自身稀释对照法 （二）高效液相色谱法
薄层色谱法
第四节 含量测定
一、非水溶液滴定法（非水碱量法）
原料药 （一）原理
水溶液中滴定突跃不明显，在非水
介质中，碱性增强，使滴定顺利进行
置换滴定：
BH A HClO4 BH ClO HA
（三）方法适用范围
• 主要用于Kb<10-8的有机碱盐，对于不同碱 性的杂环类药物只有选择合适的溶剂和指 示终点方法才能获得满意的滴定结果
注意酸根的影响
• 冰醋酸溶液中各酸根的酸性强弱如下： 高氯酸 > 氢溴酸 > 硫酸 > 盐酸 >
硫酸氢根 > 硝酸 > 磷酸、有机酸
置换滴定：
BH A HClO4 BH ClO HA
4ml 与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴 定液（ 0.1mo1/L ）滴定至溶液显翠绿 每 1ml 高氯酸滴定液（ 0.1mol/L ）相
色，并将滴定的结果用空白试验校正。 当于 20.17mg 的C10H15NO· HCl。
2. 硫酸盐的测定
生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只 能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。
难溶于水 易溶于有机溶剂
H 生物碱盐
OH
易溶于水 不溶于有机溶剂
（三）旋光性 天然生物碱多为左旋体
一般左旋体有生理活性
阿托品虽有手性C，但为消旋体
第二节 鉴别试验
一、一般鉴别反应
（一）沉淀反应
生物碱 + 生物碱沉淀试剂
H+
↓
常用的生物碱沉淀试剂为：
1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、 I2—KI、二氯化汞等；
第一节 含生物碱类成分的分析 一、含生物碱类成分中药制剂的定性
实例 疏风定痛丸中麻黄碱含量测定 P144
第二节 黄酮类制剂的分析
一、含黄酮类成分的定性鉴别 定性鉴别方法主要有化学显色反应，纸色谱和薄层色谱
(一)化学显色反应 1.还原反应 盐酸-镁粉反应显色反应的机理是黄酮类 成分经还原反应后生成花色甙元及其二聚物。
定性鉴别的操作：将中药制剂用适当方法提取分离。组 分较少的制剂可用有机溶剂提取，常用的溶剂有甲醇、乙 醇或乙酸乙酯；取样品液5～10mL，加入数滴盐酸，然后 加入少许镁粉，如果有黄酮、黄酮醇或其二氢化合物存在， 数分钟后则可产生橙色或红色。必要时，需作空白试验。
W =（ A/ε）×M×V/1000 式中，M：生物碱雷氏盐沉淀的分子量，W：生物碱雷氏盐沉淀 的重量；A：吸收度；ε：克分子消光系数；V：丙酮毫升数。 本方法可不需要标准对照品，但需注意生物碱生成单盐或双盐， 并要注意样品的净化。
(2)酸性染料比色法：在一定pH的介质中，生物碱B与氢离子H+ 结合成盐(BH+)，与某些酸性染料的阴离子In-结合成有色化合物 [BH+In-]，它能定量的被有机溶剂提取出来，此结合物碱化或酸化 后，即定量放出染料可进行比色，或测定该有色的有机溶液。
2．与金属盐类试剂的络合反应
黄酮类成分能与金属离子如Al3+，Zr4+等产生络合 作用，产生荧光或颜色加深等。
黔产野生和栽培钩藤中生物碱类成分薄层色谱分析研究
１ ９６： ３ ２ ９ ３
作用 ，进一 步说 明黄 瓜 香对 平滑 肌 的抑制 作用 不单
纯 是通 过 阻断 Ｍ —Ｒ受 体所 致 。 ４ ３ 黄 瓜香对 平 滑肌 兴奋 —— 收缩 偶联 的影 响 ． ｃ “在 介导 平 滑肌 收缩 反应 中起 核心 作用 ，通 ａ
中药药理与临床 ，１９ ，（ ） ２ ９ ４ ２ ：８９
１ 戴 媛媛 ，刘保林 ，窦昌贵．吴茱萸氯仿提取物对 胃排空的 ｌ 影响 ［ ］ Ｊ ．中药药理与临床 ，２ ０ ，１ （ ） ６～１ ０ ３ ９ ３ ：１ ９ （ 收稿 日期 ：２０ ０ ７年 ６月 ２ ０日）
维普资讯
中 国 民 族 民 间 医 药
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总第 ８ ８期 ２ ０ ０ ７年第 ５期
Ｖｏ ． ８， Ｎｏ ５，２ ０ １８ ． ０ ７
２ ５２ ・
Ｃ ｉｅｅ ｏｒａ ｏ ｔｎ ｍ ｄｃｎ ｎ ｔｎｐ ａｍ ｃ ｈｎ ｓ ｕｎｌ ｆｅ ｏ ｅｉｉｅａ ｄｅｈ ｏｈｒ ａｙ ｊ ｈ
提示 在与 中枢 神经 、体液 调 控脱 离 的条 件下 ，黄 瓜 香对离 体肠 管有 显 著 的抑 制 作用 。
４ ２ 黄 瓜香 对胆 碱 能递质 系 统 的影 响 ．
乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质 ，能
激动 Ｍ 胆 碱 能 受 体 ，兴 奋 胃肠 道 ，使 其 收 缩 的 幅
度 、张力 增 加 。新 斯 的 明是抗 胆碱 酯 酶药 ，抑 制胆 碱 酯酶水 解 乙 酰胆 碱 活 性 ，发 挥 完全 拟 胆 碱 作 用 。 黄 瓜香在 离体 实验 中对各 种 乙酰胆 碱 和新 斯 的明 的
生物碱类天然产物的常用分离方法
生物碱类天然产物的常用分离方法
生物碱类天然产物是一类具有广泛生物活性的天然化合物，包括多种植物和微生物产生的化合物。
由于生物碱类天然产物在药物、农药和化妆品等领域具有重要的应用价值，因此针对这类化合物的分离和纯化方法得到了广泛的研究和应用。
常用的生物碱类天然产物的分离方法包括以下几种：
1. 溶剂萃取法：这是最常见的分离方法之一。
通过将原料与适当溶剂进行反复提取，将目标化合物从原料中分离出来。
该方法适用于溶解性好、极性适中的生物碱类天然产物。
2. 薄层色谱法（TLC）：这是一种简单且广泛应用的分离方法。
将样品涂于薄层色谱板上，然后通过在合适的溶剂中进行上样，待溶剂沿着色谱板上升时，不同成分会在不同位置上形成斑点，从而实现分离。
分离出的斑点可以进一步进行收集和纯化。
3. 柱层析法：柱层析法是一种高效的分离方法，可用于分离具有不同极性和相对分子质量的生物碱类天然产物。
通过将样品通过填充在色谱柱中的吸附剂上，然后通过适当的溶剂流动，不同成分会在不同的速度下通过柱层析分离。
4. 液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法是一种常用的分离和纯化生物碱类天然
产物的方法。
该方法利用高压将样品通过液相色谱柱，通过调整流动相和静相的性质，使得不同成分在柱上的停留时间不同，从而实现分离。
该方法具有高分离效率、高灵敏度和高选择性的优点。
以上仅是常用的分离方法之一，根据不同的实验目的和样品性质，还可以使用其他方法如气相色谱法、毛细管电泳等技术。
此外，还可以结合质谱技术对分离后的化合物进行鉴定和结构分析，以进一步确定生物碱类天然产物的结构和性质。
苦马豆生物碱成分薄层色谱分析
苦马豆生物碱成分薄层色谱分析白玛桑姆;杨晓雯;马烽;周启武;刘晓学;王磊;赵宝玉【摘要】In order to determine whether Sphaerophysa salsula contains swainsonine and analysis alkaloid, we used alkaloid extraction,thin layer chromatography analysis techniques and software of planar chroma-tography for quantitative image.The results showed that 5 kg Sphaerophysa salsula got 650.2 g total ex-tract by the reflow method of industrial alcohol (the rate is 13%).We chose 200 g extract and then pro-cessed by acidification,alkalization,chloroform and n-butyl alcohol.We got extract 3.01 g,0.53 g and 23.13 g in the parts of acidity chloroform,basic chloroform and basic n-butyl alcohol (the rate is 1.51%, 0.27% and11.57%).By thin layer chromatography analysis,we found that Sphaerophysa salsula con-tained at least 5 kinds of alkaloids in the parts of basic chloroform and basic n-butyl alcohol.Swainsonine was mainly in the part of basic n-butyl alcohol.We used the method of column chromatography on silica gel to isolate and purify this part,after comparing with swainsonine standard sample,our study found this part contained swainsonine.%为了确证苦马豆（Swainsona salsula ）是否含有苦马豆素等生物碱成分，采用生物碱系统提取法、薄层色谱分析、平面色谱图像定量分析软件及柱层析分离等技术，对苦马豆生物碱成分进行分析和分离。
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•
生物碱（alkaloid）是一类含氮的碱性 天然有机物，大多具有复杂的环状结构， 氮原子多在环内，具光学活性，有显著的 生理作用，是中药中重要的有效成分。
• 分布广泛，以双子叶植物最多，其次是单
子叶植物、裸子植物。
•
种类多，按结构可分为12类。大具有 重要生理活性的大多集中于异喹啉、吲哚、 莨菪烷类衍生物。
常用含生物碱的中药
•
• 生物碱的理化性质： • 1. 物理性质 • 2. 旋光性 • 3. 酸碱性 • 4. 溶解度 • 5. 沉淀反应
一．影响薄层色谱分析的主要因素
• （一）样品的预处理及供试液的制备
• • • • •
样品供试液的精制方法： 1．单一溶剂萃取法 2．分段萃取法 3．液液萃取法 4．固液萃取法
质能在Rf值0.3 – 0.7之间 • （2）溶剂的选择性：要求达到最佳分离度
• （六）温度对薄层色谱的影响 • （七）影响薄层色谱的其它因素
二．生物碱样品液制备
• （一）与天然药物化学提取、分离、定性
的不同点 • （二）生物碱提取 • 1．提取溶剂 • （1）非极性溶剂 • （2）极性溶剂 • （3）混合溶剂
（二）薄层色谱的上样技术
• 不良的上样是最主要的误差来源之一 • 1．原点位置对样品容积的负荷量是极
为有限的 • 2．上样环行色谱效应 • 3．供试液的溶剂在原点的残留 • 4．上样装置对薄层表面的机械损伤对 色谱质量的影响
（三）吸附剂的活性与相对湿度 对薄层色谱的影响
• • • •
• •
1．吸附剂的活性：是由表面能和表面积决定的。 (1) 硅胶 – 硅醇基 – 与化合物形成氢键 (2) 薄层板活化目的：水合硅醇基 – 游离硅醇基 (3) 在不同的相对湿度下，可达到不同程度的吸 附平衡 (4) 薄层色谱的重现性差，薄层板在不同的相对 湿度下操作是主要原因之一 2．相对湿度的控制方法：展开缸中放入适当浓度 的硫酸
• （1）斑点定位：不加显色剂显色；使用显
色剂（可挥去；有显色反应） • （2）洗脱：溶剂的选择 • （3）测定：薄层取样量一般为几微克-几 十微克，常用测定方法为UV或可见分光度 法。 • 注意事项：空白对照；回收率的检测
2．薄层扫描法
• （1）吸附剂和薄层板的选择 • （2）点样方法 • （3）色谱条件的选择：展开剂、显色剂 • （4）相关方法学考察 • （5）误差的来源
黄连的TLC
黄柏的TLC
山豆根 参 TLC-2
川贝母TLC
伊贝母TLC
淅贝母TLC
天仙子TLC
华山参TLC
洋金花TLC
马钱子TLC
青风藤TLC
罂粟壳TLC
延胡索TLC
四．生物碱薄层色谱的定量分析
• 1．薄层色谱 - 分光光度法
• 2．提取方法： • 冷浸、渗漉、超声波、索氏提取、热回
流提取
• （三）生物碱样品的精制
• 1．萃取法 • 2．色谱法 • 3．离子对法
三．生物碱薄层色谱的定性分析
• 1．展开剂 2．吸附剂 3．显色剂 • 4. 对照品定性分析 • （化学对照品、对照药材、阴性对照） • 5．以Rf值为基准定性分析 • （边缘效应及其它影响因素） • 6．薄层扫描定性分析 • （薄层指纹图谱）
（四）溶剂蒸气在薄层色谱中的作用： 饱和问题 （五）关于薄层色谱的优化及溶剂系统 的选择
•
1．依靠薄层色谱分离混合物物质需要解决 的主要问题有两个： • （1）相邻物质对的分离 • （2）在一个宽极性范围内的多组分混合 物的分离
• 2．展开剂的选择和优化 • 主要考虑两个方面： • （1）溶剂的极性：要求使欲分离的主要物