食蟹猴人工授精及体外受精实验初步程序
人工受精操作规程

人工授精操作规程一.准备工作1.双层乳胶手套2.预热好的37℃保温杯内装一次性专用集精袋二.清洗挤出公猪包皮积尿,然后用清水冲洗干净,再用高级纸巾擦干,避免纸屑沾在阴部后掉入采精杯。
清洗结束后,采精的手要戴上采精专用手套。
三.采精刺激公猪爬跨假台畜,然后将手握成空拳在公猪阴茎伸出同时,导入空拳拳内,用手紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头,顺其向前冲力将阴茎的奜奓夢状弯曲拉直,让其抽送转动片刻,用手指由轻到紧带弹性有节奏握紧螺旋阴茎龟头不让转动,随阴茎充分勃起时顺伸向前(不要强牵),手指有弹性、而有节奏调节压力.公猪即行射精。
另一手持带有过滤纱布和保温的采精瓶收集精子部分的精液。
公猪射精停止,可按上法再次施加压力,即可第二或第三次射精。
直到完全射完为止。
射精过程约为5-7分钟。
公猪射精一般分三部分,第一部份为清亮液体,多为尿道球腺分泌物,其中只含少量或不含精子,一般不采集。
第二部份为乳白色浓精,精子浓度高,应全部采集。
第三部份是含胶状物的较透明液体,精子浓度中偏低,采集时应滤去胶状物。
四.采精频率1.青年公猪(1岁左右)每周1-2次2. 成年公猪每周2-3次五.注意事项1.采精期间不准殴打公猪,防止出现性抑制2. 环境保持安静3. 采精完毕后彻底清洗采精栏4.精液必须经过滤纸再到集精袋六.精液颜色判断正常的精液应为乳白色,以下情况为不正常的精液:1. 淡黄色:内含尿液2.褐色或红色:内含血3. 绿色或黄绿色:化脓七.精液气味正常的精液气味为微腥味。
如有其它特殊臭味,可能是内含尿液或其他异物。
八.精子活力精子活力是指呈直线运动的精子百分率。
精子活力大于或等于0.7(+++)才可以使用,活力低于0.7不可以使用。
活力测定的标准为1.+++最活泼前进运动时呈涡状2.++活泼前进运动3.+微弱前进运动4._原地停止运动九.精液的稀释1. 精液稀释前准备(1)将稀释粉(专用)和蒸馏水搅拌均匀。
(2)恒温水浴锅开启并设至37.5℃。
人工授精操作规程

人工授精操作规程一、采精的操作规程1、采精员一手带双层手套,另一手持37度保温杯用于收集精液。
2、饲养员将待采精的公猪赶至采精栏,用0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部及包皮、再用温水(夏天用自来水)清洗干净,避免药物残留对精子的伤害。
3、采精员挤出公猪包皮积尿,按摩公猪包皮部,刺激其爬跨假台畜。
4、公猪爬跨假台畜并逐渐伸出阴茎,脱去外层手套,将公猪阴茎导入空拳。
5、用手(大拇指方向与龟头方向相反)紧握伸出的公猪阴茎成螺旋状龟头,顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲拉直,握紧阴茎龟头防止其旋转,公猪即可射精。
6、用滤纸过滤收集浓份精液于保温杯内的一次性食品袋内,最初射出的少量精液含精子很少,可以不必接取,有些公猪2—3个阶段将浓份精液射出,直到公猪射精完毕,射精过程历时5—7分钟。
7、采精员应注意安全,一旦公猪出现攻击行为,采精员应立刻逃至安全角。
8、经常保持采精栏的清洁干燥。
9、采精频率:成年公猪每周2次,青年公猪(1岁左右)每周1次,最好固定每头公猪的采精频率。
10、公猪采精调教:(1)后备公猪7月龄开始进行采精调教;(2)每次调教时间不超过15分钟;(3)采精调教可采用发情母猪诱导,观摩有经验公猪采精,以发情母猪分泌物刺激等方法;(4)调教公猪要有耐心,不准打骂公猪;(5)一旦采精获得成功,分别在第2、3天各采精1次,以利公猪巩固记忆;(6)注意公猪和调教人员的安全。
二、猪人工授精实验室管理规范人工授精站实验室是精液检查、处理、贮存的场所,为了生产出优质的、符合输精要求的精液,一定把好质量关,保证出站的每一瓶精液的活力不低于0.7,72小时之内保存活率不受影响,特对实验室日常运作做如下规定:1、实验室要求清洁、干净、卫生,每周彻底清洁一次。
2、非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室,采精员也不准进入实验室,如有需要,则要更换衣、鞋,洗手。
3、实验室工作人员进入实验室要更换衣、鞋,洗手。
4、各种电器设备应按其要求选择适应插座,除冰箱、精液保存箱、恒温培养箱等外,一般电器要求人走断电,干燥箱无人时设定温度不应高于100度。
人工受精流程是怎样

人工受精流程是怎样
人工受精是一种辅助生殖技术,主要用于治疗不孕不育症,也
被广泛应用于家畜繁殖。
人工受精流程包括以下几个主要步骤:
首先,女性需要接受促排卵治疗。
促排卵治疗通常包括使用促
排卵药物,以促进卵巢排卵。
这些药物可以帮助卵巢产生多个卵泡,增加受精的机会。
然后,医生会监测卵泡的生长情况。
这通常通过超声波检查和
血液检测来进行。
一旦卵泡达到合适的大小,医生会使用人工受精
技术来获取卵子。
接下来,男性需要提供精子样本。
这通常是通过手动射精或精
液捐赠来完成的。
精子样本会被送到实验室进行处理,以获取高质
量的精子。
然后,实验室技术人员会将精子与卵子结合。
这可以通过直接
将精子注入卵子中,也可以通过体外受精(IVF)来完成。
在体外受
精中,精子和卵子在培养皿中结合,然后移植到女性子宫内。
最后,女性需要进行妊娠测试。
这通常在受精后两周进行,以确定是否成功妊娠。
总的来说,人工受精流程包括促排卵治疗、卵泡监测、卵子获取、精子提供、受精过程和妊娠测试。
这一流程需要医生、实验室技术人员和患者之间的密切合作,以确保成功受精和妊娠。
人工受精技术的不断发展和进步,为许多不孕不育夫妇带来了生育的希望。
然而,人工受精也面临着许多伦理和法律问题,需要严格的监管和规范。
希望通过不断的科研和实践,人工受精技术能够更好地服务于社会,为更多的家庭带来福音。
【高中生物】高中生物知识点:体外受精和早期胚胎培养

【高中生物】高中生物知识点:体外受精和早期胚胎培养体外受精与胚胎的早期培养:1、体外受精的原理:人工模拟体内环境(包括营养、温度、pH等),使初级卵母细胞成熟和精子获能,最终完成受精和胚胎保存。
2、体外受精主要操作步骤(1)卵母细胞的采集和培养:方法一:对小型动物一般用促性腺激素处理,使其排出更多的卵子,然后,从输卵管中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精。
方法二:对大型动物是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞,在体外经人工培养成熟后,才能与获能的精子受精(或从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞)(2)精子的采集和获能:在体外受精前,要对精子进行获能处理。
采集方法:假阴道法、手握法和电刺激法等。
获能方法:培养法和化学法。
(3)受精:获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
3、胚胎的早期培养:(1)培养目的:精子与卵子在体外受精后,应将受精卵移入发育培养液中继续培养,以检查受精状况和受精卵的发育能力。
(2)培养液成分:除一些无机盐和有机盐外,还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分,以及血清等物质。
(3)当胚胎发育到适宜的阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻保存。
不同动物胚胎移植的时间不同。
(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植,小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植,人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植)。
知识拓展:1、早期胚胎是指可用于移植的胚胎,在原肠胚之前的囊胚、桑椹胚甚至更早的阶段。
2、受精后形成的受精卵需经早期发育培养,才能完成植入或着床。
3、胚胎早期培养液成分与动物细胞培养液成分基本相同,除无机盐、营养成分和调节物质外,还需要血清、抗生素等,两者都是液体培养基,但植物组织培养为固体培养基,其中加入琼脂,所需植物激素主要是生长素和细胞分裂素两大类。
感谢您的阅读,祝您生活愉快。
教学设计3:3.2体外受精和早期胚胎培养

3.2体外受精和早期胚胎培养一、教学目标1.简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
2.简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。
3.认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
二、教学难点与重点1.教学重点(1)体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
(2)哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
2.教学难点(1)卵母细胞的采集和培养。
(2)精子的采集和获能。
三、教学过程教学过程一定要根据学生的具体情况、教材的内容、教学的条件综合考虑进行。
本节教材是在哺乳动物体内受精和胚胎发育的理论基础上,着重简述哺乳动物体外受精和胚胎早期培养的技术方法。
本节内容简单,学生通过阅读基本能明白。
另外,由于所讲内容技术性较强,与学生的生活相距较远,不易引起学习兴趣,所以可采用探究式的学习方法,以“试管牛”为例,创设出一种新的学习情景,在的带领下,让学生以胚胎工程学家的身份出现,亲历其境地去思考和探究“体外受精和早期胚胎培养”的过程,领悟其探究的方法,以达到激发兴趣、培养能力、获取知识的目的。
对具体的教学方法如下。
课前搜集有关“试管牛”技术及其发展的资料,并制作“利用屠宰厂牛卵巢收集卵母细胞,并工厂化生产试管胚胎”的计算机辅助教学软件(或投影片)。
同时,布置学生搜集有关“试管牛”的资料。
在课堂活动中,首先提出问题:“你听说过试管牛、试管羊吗?你知道什么是试管动物技术吗?”从而引出试管动物技术的概念及体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义,提出本节主题。
接着,请学生回忆第一节课的内容,并思考讨论以下各题:(1)哺乳动物体内胚胎的形成需要经过哪些过程?(精子和卵子的发生—受精—胚胎的发育)(2)哺乳动物体外胚胎的发育需要完成哪些环节?(获得精子和卵子—体外受精—体外胚胎培养)。
在学生讨论出结果的基础上,告诉学生,胚胎工程专家就是根据这几个环节来研究哺乳动物体外受精和胚胎早期培养方法的。
今天请大家来扮演胚胎工程专家,共同模拟研究“试管牛”工厂化生产的技术流程。
实验食蟹猴饲养繁殖的初步研究

高仔猴的成活率 。本场仔猴年成活率 8 .%。 3 95
253 母 猴哺乳 期长 短与 随后 的繁 殖效 果 的关 系 .. 断乳 日期
24 繁殖 间 隔 .
不 同 哺乳 期 的母猴 在 下一 个 生 产期 的怀 孕率 较接近 。 19 98年上 半 年 ,我们 对 10只 带仔 母 猴 0
期 晚。关 于这 个 问题 ,还 需 作 进一 步 的研 究 ,探 讨 泌乳与 排卵和 妊娠 的关系 。
37 0 4 ±1 5天 ,生殖 间隔最密者 为连续二年 3 , 胎
约 占生产 母猴 1.% 12
维普资讯
第2 6卷
20 0 6年
第 4期
8月
农 业 与 技 术
A e l r  ̄T e n l g u t e e h oo y u
V0 . 6 N 4 12 o. Au g. 2 O O6 ‘2 9
实验食 蟹 猴饲 养繁 殖 的初 步 研 究
黄 国锋 周 惠 云
590 ) 230
( 平市 动 物 防 疫 检 疫 站 ,广 东 开 平 开
【 要】 蟹 的 工 殖 十 年 发 迅 由 食 猴 为 验 物 地 越来 重 促 内 非 灵 类 物 相 { 商 食 猴 人 养 近 多 来 展 速, 于 蟹 作 实 动 的 位 越 要。 使国 外 人 长 动 场 继
经过多年 的努力 ,我场人工饲养食蟹猴群体数 已
达 4O OO头 左 右 ,其 中繁 殖 种 猴 群 10 50头 左 右 。 本 文仅就 我场 19 年 ~20 98 00年间参 与配 种食蟹 猴 的饲养 繁殖情 况 作 一介 绍 ,以探 讨 提高 食 蟹猴 的 繁 殖率 途径 。
建立。 但有关的饲养繁殖报道尚属不多。 我场 自1 1 9 年引进食蟹猴 以来,已有多年的饲养繁殖经验 。 9 现将有关情况作综合讨论 。
提高食蟹猴繁殖率的方法初探

猴组 群 , 8只 /栏 。 整栏 母猴 同期 断奶 后 , 置 2 在 放
实 验 猴 选 自从 化 市 华 珍 动 物 养 殖 场 的 部 分
经 产 食 蟹母 猴 和 公猴 。 第一 组 共 2 0只食 蟹 猴 繁 7 殖 群 (0只 公 猴 ,4 3 2 0只 母 猴 ) 第 二 组 共 3 0只 , 0 食 蟹 猴 繁 殖 群 (0只 公 猴 ,4 6 2 0只 母猴 ) 。两 个 繁 殖 群 的 种 母 猴 主 要 是 青 壮 年 ( ~1 5 0岁 ) 生 长 且
食蟹猴属 于猕猴 (a a am l ta属 , M cc u a t) 繁殖 率 较低 , 只有 5.2 [ 食蟹 猴具 有攻 击性 , 以使用 6 1% ] ; 难 人工授精 的方法来 提高繁殖 率 。 文从不 同的公母 本
猴 搭配 比例 研究提 高食蟹猴 繁殖 率 的方法 。
14 饲 养 管理 .
发育 良好 , 重 3 k 体 g以上 ; 猴 都 是 6 1 的 公 ~ 0岁 青 壮 年 且 身 体 强 壮 、 器 官发 育 良好 , 重 4 k 性 体 g 以上 。所 有 猴 都 经 过 微 生 物 ( 核 杆 菌 、 门 氏 结 沙
菌 、 贺 氏菌 ) 寄 生 虫 ( 原 虫 、 丝 虫和 肠 道 志 和 疟 血
第 二组 妊 娠率 是 9 . 2 , 未知 公猴 精 子 质量 和 04% 在 繁殖 性 能 的情 况下 ,适 当提 高公猴 的搭 配 比例可 以直 接提 高母 猴 的妊 娠率 。
32 从 表 2可 以看 出 ,第 一 组 的流 产 死 胎 率 是 . 8 7% 第 二组 的流产 死 胎 率 是 3 2 % 可 见 , 理 .2, .3 , 合
简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤

试管动物技术
是指通过人工操作使卵子和精子在 体外条件下成熟和受精,并通过培 养发育成早期胚胎后,再经移植产 生后代的技术。
体外受精
1.卵母细胞的收 集和培养
对不同动物,采 取卵母细胞的 方法不同
2.精子的收集和获能
试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精并通过培养发育成早期胚胎后再经移植产生后代的技术
§3.2体外受精和早期胚胎培养
一、教学目标: 1.简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 2.简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。 3.认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 二、教学重点: 1.体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 2.哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 三、教学难点: 1.卵母细胞的采集和培养。 2.精子的采集和获能。
1)收集的方法:假阴 道法,手握法和电 刺激等
2)获能处理: 培养法:啮齿动物、
家兔和猪 化学法:牛、羊
3.受精
在获能 溶液或专用 的受精溶液 中完成受精 过程
胚胎的早期培养
培养液: 水、无机盐、有机盐、维生素、激素、
氨基酸、核苷酸以及动物血清等.
课后思考:
1、你能用通俗的语言把试管牛的培养过程向 家人讲清楚吗?请回去试一试。
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食蟹猴人工授精及體外受精實驗初步程序
KHI Bioservices(Hong Kong)Limited 袁濤 D.V.M
1人工授精及體外受精實驗初步程序 :
1人工授精 (artificial insemination)
1.1母猴準備
利用獨立籠檢視母猴月經, 選擇有正常及規律性月經之猴子進行
利用腹腔鏡(Laparoscopy)或超聲波(Ultrasound)檢查卵巢及卵泡發育情況, 自月經後第5天每隔一天檢查, 接近排卵期時每天進行檢查, 直至確定排卵.
[ 另有學者進行荷爾蒙測試 (estrogen, progesterone, LH) 確定排卵 (estrogen ,↓
↑↑腹腔鏡(Laparoscopy)或超聲波(Ultrasound)較能直接檢視卵泡發育狀progesterone , LH ),
況 ]
1.2公猴取樣
-電激棒取樣
一般分有penile stimulation 及 rectal probe stimulation
電激棒之規格
-精子處理
方法
1取樣後, 凝固精液放於37C 30分鍾 5% CO2 培育箱液化
2液態精液以Tyrode albumin lactate pyruate-HEPES (TALP-HEPES)稀釋1:5
3抽取小許檢視精子活力, 形態及數量
4稀釋至2.0 – 4.0 x 108精子/ml [另有日本研究用2.5 – 5.0 x 107精子/ml 濃度進行
授精]
5培育於30 – 32 , 2-3小時 [另有加入1mM Caffeine使精子活能化(capacitation) ] 1.3授精程序
有文獻提及, 日本獼猴人工授精實驗中, 授精於陰道內之猴不能授精,而只有授精於子官內方可成功. 於食蟹猴陰道及子官均可.
1當母猴証實排卵時, 每天進行0.2ml輸精, 一般由11-14天
2麻醉母猴
3利用1ml 針筒及老鼠餵管或人工授精導管進行子官內輸送精子
4另外手指進入直腸確定子官頸及子官位置, 協助引導管道進入子官, 伸入管道於母猴陰道及子官頸, 管道輕輕引導進入子官內.
5如進入子官頸有困難, 可利用擴張器擴大陰道, 然後繼續找尋
6導管進到子官內, 慢慢注射
-懷孕檢測程序
1Progesterone測試
1progesterone 於最近之月經30天後進行測試. [月經後30天Progesterone應該
降低, 如升高代表懷孕]
2超聲波 Ultrasound 測試
於50-60天可進行超聲波 Ultrasound 測試
1.4冷凍精液
-程序方法
培養液製法
Tris-base medium:300mM Tris. 28mM glucose, 95mM critric acid, 5%(v/v) glycerol,
1000IU/ml gentamicin, 1mg/ml streptomycin, 20% (v/v) chicken egg yolk.
1取樣後, 固態精液放於37C 30分鍾液化
2液態精液以Tris-based medium稀釋5倍
3稀釋精液慢慢冷凍至5 C 在90-120分鐘內於4 C雪櫃
4精液以200ul分裝, 以乾冰冷凍60 – 90s, 貯存於liquid nitrogen, -196 C
5於IVF或AI 前, 試管內冰凍顆粒於37 C水箱搖動45-60s解凍
6解凍精液供IVF以TALP稀釋至20x10^6 精子/ml, 精液用於人工授精則不用稀釋, 直接採用.
2試管受精 (In vitro fertilization)
2.1 超排 (Superovulation)
-藥物注射程序
方法1
一般超數排卵方法是給予促性激素(FSH, LH, HCG, eCG) 於不同時期注射, 引致卵巢超數排卵, 但注射激素同時易引起排出未成熟卵子, 一般在程序上加入GnRH/GnRH
antagonist(拮抗劑) 注射1至數天, 作用防止卵子未有成熟發育,
1月經開始後, 替母猴皮下注射0.75 – 3.75 mg GnRH
2在第10天至14天時, 以腹腔鏡確定沒有卵胞發育
3肌肉注射9天eCG(孕馬血清) 25 IU/kg/天
4在第5天開始注射eCG後, 每隔一天利用腹腔鏡檢查卵胞發育程度
5在9天注射eCG後, 卵泡上的白皮質(tunica albuginea of the follicle) 開始變薄及透明,卵胞發育足夠成熟後, 注射400 IU/kg hCG
方法2
1月經開始後, 替母猴皮下注射6天0.5 mg/kg GnRH antagonist (Antide)
2在此段時間, 同時注射rh FSH, 每天兩次(30IU)
3注射1-3天rh FSH及 rhLH(各30 IU)每天兩次
4在第7天進行超聲波檢視卵泡生長情況
5當卵泡3-4mm, 注射1000 IU hCG
627 小時後, 收集卵母細胞
2.2收集卵胞
117 – 41 (27 - 32小時for Rhesus monkey) 小時注射hCG後, 以3ml 針筒加有18或19 號針 (70mm 長) 抽取0.2ml Tyrode albumin lactate pyruate-HEPES (TALP-HEPES) 2在腹腔鏡檢視下, 以針頭插入及抽取成熟卵母細胞(oocyte), 抽掉卵泡及其液體
3用顯微鏡檢視成熟卵母細胞, 有cumulus cell為Metaphase II (MII)
[Germinal vesicle, Metaphase I eggs 未夠成熟, 需人工培養方可進行試管受精, 只有
MII egg 適合受精]
4於37 C 5% CO2培育 3-4 小時
5成熟卵母細胞準備試管受精
2.3 精子準備
方法1
1取樣後, 凝固精液放於37C 30分鍾 5% CO2 培育箱液化
2液態精液以2 ml BWW-0.3%BSA 稀釋
3加80% Percoll於試管內, 然後在上面加入60%Percoll, 最後加入精子
4離心20分鍾, 1300 rpm
5抽取BWW-0.3%BSA層, 60%percoll及80%percoll, 留下底部精液部份
6加入5-10ml BWW/BSA, 離心清洗3分鍾, 1300 rpm
7加入10ml BWW/BSA含有1mM咖啡因(Caffeine)及1mM dibutyryl cyclic AMP
於管內, 培育於37 C 30分鍾, 使精子活能化(capacitation)
8離心1000rpm, 2分鐘
9倒去液體部份, 加入0.5 ml 至1.0 ml 培育60分鐘
10抽取游離液體面之精子, 移到另一枝管子
11檢視動力 (Motility) 及 數目(Count)
12加入BWW/BSA, 稀釋至1.0 – 2.0 x 105精子/ml
方法2
1取樣後, 凝固精液放於37C 30分鍾 5% CO2 培育箱液化
2液態精液以2 ml Tyrode albumin lactate pyruate-HEPES (TALP-HEPES) 稀釋
3離心清洗2次, 每次8分鍾, 1300 rpm
4培育於37 C, 4-5小時, 5%CO2
5離心8分鍾, 1300 rpm
6加入10ml TALP-HEPES含有1mM咖啡因(Caffeine)及1mM dibutyryl cyclic
AMP 於管內, 培育於37 C 15分鍾, 使精子活能化(capacitation)
2.4 試管培養 (In vitro fertilization)
1 1 至 5 個成熟卵母細胞(oocyte)及cumulus cells放入100ul TALP-HEPES 培養液
2加上礦物油蓋面
3加入100 ul 稀釋精液
4培育於37 C 5% CO2 培育箱
515 – 16小時後, 若出現2個pronuclei, 卵母細胞成受精
6受精卵母細胞清洗及更換培養液
736至66個小時, 2 至 8個細胞之胚胎選擇進行胚胎移植
3胚胎移植(Embryo transfer)
胚胎移殖方法有不同, 有提及利用腹腔鏡或超聲波引導下進行, 另有剖腹手術(laparotomy), 傳送卵子到輸卵管.
3.1受體選擇
1選擇母猴有正常月經
2於胚胎移植前2-3天排卵之母猴選擇為受體
3胚胎應移入含有黃體之子官輸卵管內
3.2 胚胎移植程序
11至2個胚胎混和於10 ul TALP-HEPES培養液在胚胎移植之導管內
2胚胎移植導管利用平時腹腔鏡插管位插入腹部.
3導管尖移到接近繖(fimbria) 及套入輸卵管(oviducal orific in the fimbria)
4導管尖部插入輸卵管內部15-20mm, 注入胚胎.。