天然药物化学实验指导
天然药物化学试验与指导第三版
天然药物化学实验与指导编者：杨长水于红艳扬州大学医学院药学系目录实验室安全守则 (1)实验一掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 (3)实验二槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定 (8)实验三人参皂苷的提取、分离与结构鉴定 (11)实验四粉防己生物碱的提取、分离与结构鉴定 (14)附录 (18)1. 常用有机溶剂及有关数据表 (18)2. 常用层析材料及有关数据表 (21)实验室安全守则天然药物化学实验是天然药物化学课程的重要组成部分，是更好掌握天然药物有效成分提取、分离和检验的基本操作技能，是提高学生分析和解决问题能力，使同学进一步理论联系实际，养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节，为此，提出如下实验须知：1. 遵守实验制度、维护实验室安全。
不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏电等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2. 实验前做好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天的计划，争取准时结束，实验时应养成及时记录的习惯，凡是观察到的现象以及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录。
实验完毕后认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（写下日期、样品名称、纯度、m.p.、b.p.、TLC、重量）交给老师。
3. 实验室中保持安静，不许大声喧哗，不许抽烟，不迟到，不随便离开。
实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净后，存放在指定位置。
废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4. 公用仪器及药品用完后立即归还原处，破损仪器应填写破损报告单、注明原因。
将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电（是否关闭水龙头，拔下电插头）。
关闭门窗。
23实验一 掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定【简介】药典收载的正品大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf.）及药用大黄（R. officinale Baill.）的根及根茎。
天然药物化学实验指导书
天然药物化学实验指导书前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其目的主要是：1．通过实验检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
2．通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3．通过设计性实验，培养学生独立从事科研工作的基本能力。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面1．要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液—固提取法（浸渍、渗漉、煎煮、回流提取）、液—液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
２．掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱）、薄层色谱的原理及基本操作。
以后要创造条件，使学生能逐步地学到气相色谱、高效薄层及高压液相的基本操作。
（二）鉴定方面１．化学方法①掌握一般定性反应在结构鉴定中的应用。
②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及其在结构鉴定中的应用。
（芦丁的酸水解）２．光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然产物结构鉴定中的应用。
目前要求学生能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱，蒽醌的IR、NMR谱特征。
通过设计性实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
对某些实验内容，要求学生有一定的设计能力，为今后从事科研工作打下必要的基础。
本实验指导书主要是供理科基地班天然药物化学实验的参考书。
天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，实验操作又经常在加温、加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强责任心和防患意识，提高警惕、消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
天然药物化学实验指导
天然药物化学实验指导目录实验室注意事项 (1)实验一芦丁的提取分离与鉴定 (2)实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定 (5)实验三从红辣椒中分离红色素 (7)实验四咖啡因的提取与分离 (8)自选实验薯蓣皂苷元的提取与分离 (10)自选实验甘草皂苷元的提取与分离 (10)自主设计实验 (15)实验室注意事项天然药物化学实验课具有实验周期长、使用有机溶剂品种多，用量较大等特点，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、实验操作经常在加温，减压下进行，需要使用各种热源和电器，再加上实验室较为拥挤，若操作不慎，易引起着火、触电、中毒、爆炸等事故，为确保实验安全顺利进行，特作如下要求。
一、实验前必须预习实验内容，了解实验原理和操作程序，检查仪器是否完整，装置是否正确，检查合格后方可开始实验。
二、实验室内要保持严肃、安静，不得大声说话打闹；室内严禁吸烟，实验进行时不得擅自离开，必要时委托专人看管。
三、未经教师允许不得擅自使用明火，需使用明火时，实验台周围不得放置易燃有机溶剂，如发生火情,应保持镇静，立即报告指导教师，同时切断火源，移走易燃品！用湿布闷盖或用灭火器进行灭火，切勿轻易用水，以免扩大火势。
四、实验时要做到整齐、清洁、用过的仪器要及时清洗并收人仪器柜内，保持水槽、仪器、桌面、地面四洁。
五、回流、蒸馏有机溶剂时，注意检查冷凝水是否通畅，装置不得密闭，接收有机溶剂时不得使用广口仪器，溶剂瓶不得敞口存放。
在进行减压操作时，必须使用安全瓶，弄清操作程序，以免造成回水等事故。
六、使用挥发性试剂或喷显色剂时，应在窗口或通风橱内操作，不慎溅在桌面上的化学药品必须立即清除。
身体直接接触化学物品后应及时用肥皂及大量水冲洗，如碱性试剂可用l％HAc溶液冲洗，酸性试剂可用3％NaHCO3溶液冲洗。
不要用酒精、丙酮等洗涤皮肤上的有机物，以免增加皮肤对有毒物质的吸收，眼睛里溅入化学试剂后，应立即用大量水冲洗，及时到校医室就诊。
天然药物化学试验
残渣
滤液
在60—70℃下用浓盐酸调 pH4—5, 静置1小时, 抽滤
芦丁精品
注: ①加石灰乳时pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出； ②加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH8—9； ③pH ④可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，
按芦丁在热水中1: 200溶解度加蒸馏水进行重结晶。
实验原理
利用乙醇为提取溶剂, 可把不同类型性质互异的蒽醌类成分 提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度, 故回收乙醇后得总提 取物可用乙醚提取总苷元；
根据蒽醌衍生物的酸性强弱, 用不同的碱液进行萃取, 最后 得到不同的蒽醌苷元。
实验方法
1.大黄中总蒽醌成分的提取分离
大黄粗粉100g
置1000ml 圆底烧瓶中, 加入95%乙醇250ml, 回流提取2hr, 趁热抽滤
醇液
醇液
药渣
加入95%乙醇200ml, 回流提取1.5hr, 趁热抽滤
药渣
乙醇提取液
静置冷却, 抽滤
滤液
减压回收乙醇至糖浆状, 将浓缩物转移至250ml三
角瓶中 乙醇总提物
放冷, 加入乙醚60ml冷浸, 振摇20′将乙 醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
2.芦丁的鉴定
（1）芦丁的定性反应:
取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述试验。
① 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察 颜色变化情况。
② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记 录
颜色变化情况。 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等体积的10%α—萘酚乙醇溶液，摇匀，
(医疗药品管理)天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离与.
（医疗药品管理）天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离与NATURAL MEDICINAL CHEMISTRY（天然药物化学）EXPERIMENTAL GUIDENCE（实验指导书）Edited byRongmin Yu(于荣敏)Chunyan Yan(严春艳)Yin Yin(殷茵)College of Pharmacy, Jinan UniversityDecember 2006PREFACE天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
主要目的为：1通过实验，了解学生在课堂上所学的基本理论知识的理解和掌握情况，并进一步加深学生对理性知识的理解和掌握。
2通过实验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：3.1提取分离方面：3.1.1掌握常用提取分离方法的原理及操作：包括液－固提取法（渗渍、渗漉、回流提取）、液－液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
3.1.2掌握纸层析、薄层层析、柱层析（包括吸附柱离子交换层析）的原理及基本操作。
了解气相层析、高效薄层及高效液相层析的基本操作。
3.2鉴定方面3.2.1化学方法A 掌握一般定性反应鉴定中的应用B 掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物、生物碱盐等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
C 了解重要降解反应的原理及应用。
如碱降解、霍夫曼降解、臭氧氧化等。
3.2.2 光谱方法了解UV,IR,NMR,MS在天然产物结构测定中的应用。
目前，要求学生能了解黄酮类化合物的UV,NMR波谱，蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。
3.2.3天然产物的结构修饰要求学生了解天然产物结构改造的意义，并能进行某些简单的结构修饰工作，如由小檗胺制备檗肌松。
通过实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
天然药化实验指导书
《天然药物化学实验》课程课程编号：实验指导书主撰人解军波审核人天津商业大学生物技术与食品科学学院二零零九年十月前言1．实验总体目标天然药物是人类防病治病药物的一个重要来源。
提取、分离天然药物中具有生理活性的化学成分，是天然药物化学研究的一个重要课题。
天然药物化学实验主要是学习天然药物有效成分的提取、分离、纯化、鉴定的方法。
通过实验，加深学生对理论知识的深入理解，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，为将来从事相关研究打下坚实的实践基础。
⒉适用专业年级制药工程专业三年级（第五学期）⒊先修课程分析化学、有机化学⒋实验课时分配⒌实验环境实验室的标准温度为20℃,实验室内的相对湿度一般应保持在50－70％。
实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀等方面的环境条件应符合在室内开展的检定项目之检定规程。
⒍实验总体要求提取、分离、纯化、鉴定是贯穿于天然药物化学实验的全过程的基本操作单元。
正确掌握和灵活处理各个环节的操作技能是训练学生严格认真的科学态度与良好工作习惯，促进理论与实践结合的一个重要环节。
通过本实验让学生掌握、熟悉天然药物化学提取、分离、鉴识技术的基本原理与基本方法，能够进行日常的天然药物研究工作。
⒎本实验的重点、难点及教学方法建议为了保证实验的正常进行和培养学生良好的实验作风及保证实验质量，学生必须遵守下列要求：1、实验前必须充分预习实验讲义，明确实验目的、要求，防止实验盲目性，讲求实验质量。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。
要善于思考，学会运用所学理论知识解释实验现象，研究实验中的问题。
3、重视安全操作，遵守实验室安全守则，使用易燃、易爆、有毒物品时要小心谨慎，避免事故发生。
4、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。
目录实验一、芦丁的提取、分离与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 实验二、汉防己生物碱的提取、分离、鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 实验三、甘草酸的制备与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6实验一芦丁的提取、分离与鉴定一、实验目的1了解黄酮类化合物的一般性质。
天然药物化学实验指导
实验须知 (1)第一章天然药物化学实验技术 (5)第一节经典的提取和分离方法 (5)第二节结晶和重结晶 (9)第三节层析分离方法 (11)第二章实验部分 (18)实验一中草药化学成分的鉴别法 (18)实验二薄层板的制备、活度测定及应用 (25)实验三秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别 (28)实验四虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别 (31)实验五芦丁的提取分离和鉴别 (36)实验六黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别 (40)实验七挥发油成分的提取和鉴别 (44)实验八穿心莲内酯的提取分离鉴别与亚硫酸氢钠加成物的制备 (48)实验九女贞子中齐墩果酸的提取分离和鉴别 (54)实验十薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别 (57)实验十一粉防己生物碱的提取分离和鉴别 (60)实验十二绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别(设计性实验) (65)附录一中草药化学成分检出试剂配制法 (67)附录二常用有机溶媒的性质 (74)实验须知一、天然药物化学实验的特点1．实验周期长。
本实验指导中一般一个提取分离和鉴别实验需要用去8学时，时间长。
因此，在实验过程中，应该注意仪器、试剂尤其是提取物的妥善保管或者保存。
2．所用试剂和溶剂品种较多，用量较大，许多试剂易燃、有毒或有腐蚀性，在一定条件下可能会和空气会形成爆炸混合物。
许多实验需用电炉加热或进行减压操作，学生用到的热源和电器较多，因此应切实注意实验安全，严防产生触电、中毒、烫伤等意外发生，谨防发生火灾、爆炸等重大事故，并保证实验室通风良好。
二、实验规则天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和鉴定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严谨的科学态度和良好的工作作风是必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验注意事项：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生，若发生事故应立即报告指导教师，进行适当处理。
天然药物化学实验指导书
药用植物学实验指导适用专业：（本科）药学、药物制剂（专科）药物制剂技术郑州华信学院医学院药学系药学教研室目录实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造 (2)实验二植物细胞后含物——淀粉粒、草酸钙结晶体 (6)实验三保护组织和分泌组织 (9)实验四机械组织和输导组织 (12)实验五根的显微构造 (15)实验六单子叶植物地上茎和地下茎观察 (18)实验七双子叶植物茎的初生构造和次生构造 (20)实验八大黄、甘草、人参的鉴定 (22)实验一显微镜的构造、使用和保护以及植物细胞的构造一、实验目的：1.了解显微镜的基本构造并掌握显微镜的正确使用方法和保养。
2.掌握撕取表皮的制片方法。
3.掌握植物细胞的基本构造。
二、实验仪器与材料1.仪器：生物显微镜。
2.用具：镊子、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、玻璃皿、吸水纸、擦镜纸、棉布块。
3.材料：洋葱鳞茎的磷叶或大葱磷叶。
4.试液：蒸馏水、稀碘液、10%硝酸钾溶液。
三、实验内容：（一）显微镜的构造1.机械部分次部分是显微镜的骨架，是安装光学部分的基座。
包括：镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调焦装置等。
（1）基座是显微镜的底座，支持整个镜体，使显微镜放置平稳。
（2）基柱镜座上面直立的短柱，支持镜体上部的各部分。
（3）镜臂弯曲如臂，下连镜柱，上连镜筒，为取放镜体时手握的部分。
直筒显微镜的镜臂下端与镜柱连接处有一活动关节，可使镜体在一定范围内后倾，便于观察。
（4）镜筒上端置目镜，下端与物镜转化器相连。
（5）物镜转换器连接于镜筒下端的圆盘，可自由转动，盘子有3－4个安装物镜的螺旋孔。
当旋转转换器时，物镜即可固定在使用的位置上，保证物镜与目镜的光线合轴。
（6）载物台放置玻片标本的平台，中央有一通光孔，两侧有压片夹或机械移动器，既可固定玻片标本，也可以前后左右各方向移动。
（7）调焦装置调节物镜和标本之间的距离，得到清晰的物像。
在镜臂两侧有粗细调焦螺旋各1对，旋转时可使镜筒上升或下降，大的一对为粗调焦螺旋，旋转一圈可使镜筒移动2mm左右。
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天然药物化学实验注意事项天然药物化学试验的特点是实验周期长,所用溶剂和试剂品种多,而且用量较大。
许多有机溶剂具有易燃、有毒、腐蚀性,刺激性和爆炸性等特点。
在实验操作过程中又经常需要加热或减压等操作,学生将接触各种热源和电器。
如果操作不慎,易引起中毒、触电、烧伤、烫伤、火灾、爆炸等事故。
所以要求每个实验操作者,必须加强爱护国家财产和保障人民生命安全的责任心,严格遵守操作规程,树立严密的科学实验态度,提高警惕,消除隐患,预防事故的发生。
为了确保实验的安全进行,特作如下要求:一、实验前要必须充分预习实验内容,明确实验原理、操作步骤及注意事项。
实验开始前应检查仪器是否完整无损,装置是否正确,经检查合格后方可开始实验。
二、实验时要保持室内整齐、清洁、安静。
不准做与实验无关的事情,不得擅自离开岗位。
在实验过程中应密切观察实验进程是否正常,仪器又无漏气,破裂等现象。
三、倒取和存放易燃性有机溶剂时,要远离火源。
不得随意将易燃性、易爆性的有机溶剂及药品倒入水槽或污水缸内。
不得在烤箱内烘烤留有易燃性有机溶剂的仪器或物品。
四、使用精密仪器及电气设备时,应先了解其原理及操作规程,检查好电路,按操作规程进行。
遇到不明了的问题应及时向老师请教,切忌自作主张,乱倒以仪器。
电线及仪器不应放在潮湿处,不要用湿手接触电器。
电器用完后,应立即清理,关好电源。
五、回流或蒸馏易燃性有机溶剂时,应检查冷凝水是否畅通,仪器装置是否漏气。
不得用明火直接加热,应根据其沸点选用水浴、油浴或砂浴。
蒸馏溶剂时要加入沸石,否则将发生爆沸。
添加溶剂时要移开水浴,待溶剂冷却后再加,并应重新加沸石。
六、实验室中常用的苯、卤代苯、苯酚、苯胺、甲醇、二硫化碳、氰化物、汞和铅盐等化合物均为有毒或剧毒药品。
人体中毒的途径一般为消化道、呼吸道或皮肤吸收。
所以取用毒剧药时要注意切勿洒在容器外,不要接触皮肤或口腔。
室内要通风良好,产生毒气的操作应在通风厨内进行。
毒物及废液不得随意乱倒。
实验室内严禁进食。
七、实验结束时,应将水、电、门窗关妥后,方能离开实验室。
八、实验时一旦不慎起火,应沉着冷静,积极灭火。
首先立即切断实验室内所有电源及火源,搬走易燃易爆物品,同时针对起火点情况,选用适当灭火器材进行灭火。
九、急救常识。
(一)外伤:及时取出伤口中的碎玻璃屑或固体物质,用蒸馏水冲洗后涂上红药水,用消毒纱布包扎。
大伤口则先按紧主血管,急送医院治疗。
(二)火伤:轻伤可在伤面涂以硼酸凡士林。
重伤则须请医生诊治。
(三)试剂灼伤:1.酸灼伤:立即用大量水冲洗,然后用3%碳酸氢钠溶液蘸洗。
2.碱灼伤:立即用大量水冲洗,然后用1%醋酸溶液蘸洗。
实验一薄层板的制备、活度测定及薄层层析、纸层析的应用一、实验的目的要求：1.掌握TLC、PC的原理。
2.掌握薄层层析板的制备及薄层层析、纸层析操作的基本方法。
了解展开剂、吸附剂的选择以及与被分离物质的关系。
3.应用薄层层析法、纸层析法检识中药草中的化学成分。
二、层析分类与应用概述中草药的研究、鉴定工作中，对探讨中草药中含有哪些化学成分，如何将中草药中的有效成分提取、分离、精制，并鉴定结晶纯度等等。
除常用的经典方法外，仍因中草药中化学成分复杂，许多成分结构类似，有效成分含量极少，仅仅采用经典方法往往难以达到分离的目的，所以必须配合各种近代的分离方法，其中常用分离效率高、操作较简便的层析分离法（Chromatography）。
由于有效成分的类型不同、性质不同，因此选择层析法的种类也不同。
可参阅教科书第二章第二节层析法的内容。
本实验着重介绍薄层层析法（Thin-Layer Chromatograp-hy,TLC）以及纸层析法(Paper Chromatograp、PC)的应用。
这些方法主要用于选择粗提取物的分离条件;化合物纯度的鉴定;制备一定量的某些化合物;或在薄层选用不同配比的混合溶剂。
吸附层析主要考虑的是展开剂的极性;但被分离物质在展开剂中的溶解度也要影响到它的层析行为。
在一种吸附上用多种展开剂试验后如果分离不成功,可改用另一种吸附剂来试验。
分离的化合物在板上的比移值(Rf)在0.2-0.8之间为好。
二组分之间Rf差值＞0.05,以免斑点重叠。
(展开剂选用举例见教科书第19页表2-8)。
在吸附层析中，吸附剂的活度，展开剂的极性，被分离物质的极性，是层析条件三要素，这三者的关系是相互联系的，见图。
当A指向中极性物质时，则B就指向选用中等活度的吸附剂，C就指向选用中等极性的展开剂。
如分别转到A＇B＇C＇的位置，则又是另一种情况。
分配薄层层析—有些强极性化合物，能被吸附剂强烈吸附，用洗脱能力很强的溶剂仍很难推动。
这时就必须选用分配层析。
它是利用被分离物质在两相中（如水和非极性有机溶剂中）分配系数的不同而达到分离的目的。
分配薄层层析常用的担体有硅胶、硅藻土、纤维素等。
选择展开剂的根据是被分离的物质在展开剂（固定相、流动相）中的溶解度相差最大的溶剂组成不同的比例，为首用试剂。
化合物在流动相中的溶解度愈大，则它在分配层上移动得愈远，比移值就愈大。
流动相应先用固定相饱和，固定相种类有水、不同PH的缓冲溶液、亲水有机相（甲酰胺、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇等）。
流动相为含固定相（常用如水）的有机溶剂，有时为了防止弱酸、弱碱的解离，加入少量的酸和碱。
薄层层析展开后的斑点检出，通常先在可见光下观察，划出有色物质的斑点位置，然后在紫外光分析灯下观察有无吸收或荧光斑点，并记录其颜色、位置及强弱，最后利用各化合物的特性反应，用喷雾器均匀地喷洒适当的显色剂，使层析谱显色。
各类化合物所用的显色剂见附录4。
络合薄层层析—在络合剂处理的吸附剂上进行吸附薄层层析行为时，不饱和化合物（络合物的供体）与络合剂（金属离子既络合物的受体）形成π络合物。
Ag+在层析时可按照被分离的化合物不饱和度的位置、几何异构等情况，所形成络合物的络合强度不一，导致比值不同达到相互分离的目的。
饱和脂肪酸不与受体络合，推向薄层的最前沿；含双键的比含三键的吸附牢；末端双键或环外双键比不是这种类型的吸附牢。
由于硝酸银的存在影响一些显色剂的灵敏度，如碘蒸气很少用于该法的显色。
有关络合层析各类化合物的溶剂系统及显色剂见附录4。
三、一般操作技术（一）薄层层析薄层板的制备1. 不加粘合剂的薄层板涂布法（1）氧化铝薄层将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。
本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径均一的玻璃棒一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒套上厚度为0.3-1mm的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化铝粉均匀地铺在玻璃板上，按下图所示方式推动。
（2）纤维素薄层，一般取纤维素粉1份加水约5份，在研缸中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动，使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于100 2℃干燥30-60分钟即得。
（3）聚酰胺薄层，取锦纶丝（无色干净废丝即可）用乙醇加热浸泡2-3次，除去蜡质等。
称取洗净得锦纶丝1g，加85%甲酸5ml，在水浴上加热使溶，再加70%乙醇6ml，继续加热使完全溶解成透明胶状溶液。
将此溶液适量倒在水平放置的、用清洁液洗净的玻璃片上，并自然向周围摊匀，厚度约为0.3mm，薄层太厚时，干后会裂开。
将铺好的薄层水平放在盛温水的盘上，使盘中的水蒸气能熏湿薄层，盘子加玻璃板盖严密。
薄层放置1小时完全固化变不透明白色，再放数小时后，再泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干，后在烘箱中80℃恒温加热活化15分钟，冷后置干燥器中贮存备用。
2. 加粘合剂薄层的涂布法（1）硅胶G薄层，取硅胶G或硅胶GF1份，置研钵中加水约5份，研磨均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布）均匀涂布成0.25-0.5mm厚度，轻轻震动下玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中110℃烘干活化1-2小时，冷后贮于干燥器中备用。
活化烘干温度时间可依据需要调整。
一般鉴识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。
（2）硅胶（H）羧甲基纤维素（CMC—Na）薄层，取羧甲基纤维素0.2g，溶于25ml 水中，在水浴上加热搅拌，使完全溶解，倒入研钵中加硅胶细粉（一般硅胶细粉过300目筛的，约6-8g，过200目筛的，约需10-20g，）研磨成稀糊，照硅胶G薄层涂布法制备薄层。
或取2块2.5mm厚度的玻璃长板，中间夹一至几块2.2mm厚的薄层用玻璃片，将适量硅胶糊倒在中间，用药匙适当涂匀，另取一块边缘较平整的玻璃片将硅胶糊刮平，推出薄层板，水平放置，自然晾干后再活化贮存。
氧化铝G薄层、氧化铝羧甲基纤维素钠薄层的制备方法同上，一般所需氧化铝量比硅胶稍多。
硅胶烧结薄层采用硅胶细粉混合一定量的玻璃细粉，涂布在玻璃板上，在高温下将薄层烧结在玻璃板上，一般薄层厚度0.25mm，薄层用后经过处理，可以多次重复使用。
3.特制薄层的制备根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。
（1）酸、碱薄层和PH缓冲薄层为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如0.1N-0.2N草酸溶液）代替水制成酸性氧化铝薄层使用。
硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如0.1N-0.5N氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。
当用乙酸钠，磷酸盐等不同PH的缓冲薄层。
（2）络合薄层硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入5-25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，在按常法铺成薄层。
制成薄层避光阴干，于105℃活化半小时后避光贮存。
制成的薄层以不变成灰色为好，可保存三天内应用。
也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成10%溶液。
把预先制好的硅胶G薄层浸入此溶液中约1分钟，取出避光阴干按上法活化、贮存。
（二）点样将样品溶液滴到已制备好的薄层上，点的直径不大于2-3mm，样品滴加在距离薄层一端1-1.5cm的起始线上，点与点之间距离0.5-1cm，展开剂用量以浸没薄层起始线这边约为0.5cm的高度的量。
一般定性时可用普通毛细管，定量可用微量注射器（1、10、50μl）。
样品溶液应尽量选用易挥发的有机溶剂，以便点样后溶剂迅速挥发，以减少空气中水分对吸附剂活度的影响。
如果样品为水溶液或不易挥发的溶剂，此时可用电吹风或红外灯加热，要注意遇热不要破坏化合物。
点样量一般为几到几十微克。
斑点要集中，所以点样时应点在原点上，直径要小。
（三）展开剂选择的方法前面已提到选择展开剂的原则。
在实际工作中大都还要经过实验而确定合适的展开剂。
微量圆球技术（见柱层析）可对吸附薄层的展开剂进行初选。
好的展开剂应要求是能把混合物的成分很好的分离。
展开剂的质量对于展开结果的影响较大。