天然药物化学实验讲义
天然药物化学总论讲义
天然药物化学总论讲义教学时数：6学时目的与要求：把握天然药物化学的概念、研究内容；把握天然药物化学成分提取分离的原理及方法；了解天然药物生物合成途径；熟悉天然药物化学成分结构研究的要紧程序及采纳的方法；了解天然药物化学的进展史、现状及进展和学习天然药物化学的重要意义。
重点与难点：天然药物化学的概念、研究内容；天然药物化学成分提取分离的原理及方法；天然药物化学成分结构研究的要紧程序及采纳的方法。
§ 1－1 绪论一、天然药物化学的含义及研究内容1、天然药物化学的含义及研究内容天然药物化学是运用现代科学的理论与方法研究天然物中有效成分的结构特点，理化性质，提取分离方法，结构鉴定及生物合成途径等内容的一门实践性科学。
由于现代科学技术进步，专门是将波谱解析方法〔NMR、MS、IR、UV〕用于推导化合物的结构，甚至用X－晶体衍射来确定化合物结构的进展，以及分离手段的进步，天然药化的进展速度大为加快，发觉的新化合物数目大为增加，微量成分、水溶性成分的分离、提纯；稳固性差的活性物资的分离等也不再是难题了。
天然药物化学本身也已不再是原先的分离提取、结构鉴定，而是逐步进展成生物活性测定指导下的分离提取、结构鉴定，及半合成修饰和全合成紧密结合的一门学科。
目前我国天然药物化学研究依其目的不同可分为3个方面：①以阐明药用生物有效成分，获得具有新结构的化合物或具有生物活性的单体为目的，进行提取分离条件、结构鉴定、一样活性研究；②以解决自然资源有限的活性化合物或其前体的来源为目的，进行半合成及生物转化研究；③以获得高效低毒的创新药为目的，以天然活性化合物为先导物，合成一系列结构类似物进行构效关系研究。
由此可见，天然药物研究差不多从最初对天然来源活性化合物被动全盘地同意到积极主动地改进，研究在不断深入。
单体：即化合物。
指具有一定分子量、分子式、理化常数和确定的化学结构式的化学物质。
有效成分：具有生物活性、能起防病治病作用的化学成分。
天然药化讲义
黄河科技学院综合性、设计性实验讲义芦丁的提取、鉴定综合性实验项目名称和槲皮素的制备实验类型实验学时数12h课程名称天然药物化学实验适用专业药学实验指导教师张翠利、邢建华、李锟1、本实验涉及到了三门课程的知识：生药学、分析化学和实验涉及到天然药物化学。
并且本实验涉及了多方面的知识点和实的课程与相验方法。
关知识点2、实验中的实验药材涉及到所学的生药学知识，生药学为该实验提供了实验对象；对成分的分析涉及到了分析学的领域知识，天然药物化学提供了提取分离的工艺和方法。
3、本实验中除了提取分离之外，还涉及到了有效成分的检测，检测囊括了天然药物化学中的各个方面的知识：纸层析的使用方法、黄酮类化合物的理化性质和检测方法。
一、实验目的：1.以芦丁为实例，学习黄铜类成分的提取分离方法2.掌握黄铜类成分的主要性质及黄铜苷的鉴定方法3.学习掌握纸层析法的应用二、实验原理：1.芦丁（芸香苷）为浅黄色粉末，或极细的针状结晶，含三个结晶水，难溶于乙酸乙酯、丙酮、不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂，易溶于碱溶液中呈黄色，酸化后又析出。
故可用碱溶酸沉法提取分离。
2.槲皮素即芸香苷苷元，为黄色结晶。
能溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇。
可溶于冰醋酸、吡啶、乙酸乙酯、丙酮、甲醇，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿和水中。
3.盐酸 -镁粉（锌粉）反应为鉴定黄酮类化合物最常用方法，属于颜色反应，大多数黄酮类化合物显橙色～蓝色，当 ? 环上有 OH 或 OCH3 时，呈现颜色随之加深，其机制是因为生成阳碳离子的缘故三、实验药材：槐米四、实验器材与药品：器材： 500ml 烧杯、 1000ml 抽滤瓶、布氏漏斗、喷瓶、药匙、尖头滴管、毛细管，定性滤纸、白瓷板、电吹风、培养皿、铅笔和直尺药品：石灰乳（ CaO）、浓盐酸、 50%乙醇、镁粉、浓硫酸、蒸馏水、a- 萘酚、正丁醇、醋酸、草酸、苯胺和2%葡萄糖、鼠李糖水溶液五、实验方法和操作步骤：1、芦丁的提取槐米粗粉（20g）置 500ml 烧杯中，加水300ml, 在搅拌下加入石灰乳（CaO）（约 0.5g ）调至 pH6-9 ，加热至微沸 10-15min ，保持 pH8-9 ，倾出上清液，过滤，滤渣在加水 200ml ，重复提取一次，过滤，合并滤液滤渣滤液（稍冷）边搅拌边加入浓盐酸调pH4-5 左右，放置过夜抽滤，上清液倒掉滤液芦丁粗品（称重）悬浮于 400-800ml 蒸馏水中，加热（煮沸）使溶液趁热过滤滤液不溶物℃干燥放置过夜，抽滤，水洗70-80精制芦丁（称重）2、芦丁的测定⑴盐酸镁粉反应取自制芦丁少许，加 50%乙醇 2ml，加热使溶解，再加镁粉少量之后，滴加浓盐酸，观察现象。
天然药物化学实验讲义-长沙医学院
天然药物化学实验指导（供药学及药学相关专业使用）主编：马宁主审：朱绍雄副主编：魏丹丹李娟参编：王建芬徐芳肖志勇李媛肖海英肖艳刘卫平李云贵吴柱刘明长沙医学院药物化学教研室二O一O年六月前言《天然药物化学实验指导》是依据《天然药物化学》（第五版）理论教材，结合我院四年制本科药学专业学生的培养目标、实验教学大纲以及实验教学的实际情况，由药物化学教研室整理编写而成。
本教材主要目的是通过实验教学，使学生对理论知识的理解更加深入，掌握得更加牢固，通过实际操作加强对学生基本操作技能的训练，培养学生的动手能力，和分析问题解决问题的能力，使学生从中获得从事天然药物化学科研与生产实践活动的能力。
根据教学以及学生实际能力等方面的需要，本指导在原版教材基础上增加了验证性实验、综合性实验和设计性实验，切实提高实验教学的质量。
本教材共分两部分，第一部分介绍了天然药物化学实验技术，着重讲述了天然药物活性成分提取、分离和结构鉴定的原理和操作方法。
第二部分是实验部分，共十二个实验，实验内容包括苯丙素类、醌类、黄酮类、萜类、挥发油和生物碱等主要天然产物类别代表药物的提取、分离，鉴别原理和实验操作，其中新增了设计性和综合性实验相结合的挥发油提取分离实验；新增绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别实验的设计性实验；新增薄层板的制备活度测定及应用、秦皮中有效成分的提取分离和鉴别、穿心莲内酯的提取分离鉴定、薯蓣皂苷元的提取分离鉴别等验证性和综合性实验。
本教材的内容丰富，重点突出，实用性强，能满足四年制药学本科的实验教学，并且书后附有天然药物化学常用试剂、配制方法和常用有机溶媒的性质与回收方法，以方便读者查阅。
由于编者水平有限，编写时间仓促，书中难免有不妥之处，敬请使用本实验指导的老师和同学批评指正。
编者 2010年6月目录实验须知 (1)第一章天然药物化学实验技术 (5)第一节经典的提取和分离方法 (5)第二节结晶和重结晶 (9)第三节层析分离方法 (11)第二章实验部分 (18)实验一中草药化学成分的鉴别法 (18)实验二薄层板的制备、活度测定及应用 (25)实验三秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取分离和鉴别 (28)实验四虎杖中游离羟基蒽醌类成分的提取分离和鉴别 (31)实验五芦丁的提取分离和鉴别 (36)实验六黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别 (40)实验七挥发油成分的提取和鉴别 (44)实验八穿心莲内酯的提取分离鉴别与亚硫酸氢钠加成物的制备 (48)实验九女贞子中齐墩果酸的提取分离和鉴别 (54)实验十薯蓣皂苷元的提取分离和鉴别 (57)实验十一粉防己生物碱的提取分离和鉴别 (60)实验十二绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别(设计性实验) (65)附录一中草药化学成分检出试剂配制法 (67)附录二常用有机溶媒的性质 (74)实验须知一、天然药物化学实验的特点1．实验周期长。
天然药物化学实验讲义
青岛科技大学化工学院天然药物化学实验讲义第二版药剂教研室编二○○六年目录目录 (1)天然药物化学实验须知 (2)天然药物化学实验技术 (4)实验一大黄中蒽醌类成分的提取、分离和制剂鉴别 (30)实验二绞股蓝总皂苷的提取和制剂鉴别 (35)实验三汉防己生物碱的提取、分离和鉴别 (38)实验四芸香苷的提取、分离和鉴定 (444)实验五中药制剂薄层色谱鉴别的应用 (49)附录 (55)天然药物化学实验须知（一）实验要求1．实验前应认真预习，做好预习笔记，明确实验目的，掌握实验原理，了解实验步骤，安排好当天实验计划。
2．实验时要遵守实验室制度，按照操作要求，认真操作，正确使用各种仪器，努力掌握基本操作技术。
养成及时记录的习惯，观察到的现象和结果以及有关的重量、体积、温度或其它数据，应立即如实记录。
3．实验室内保持安静、整洁。
不许大声喧嚷，不许吸烟，不迟到不随便离开。
随时注意反应情况和做好下一步的准备工作。
保持桌面、仪器、水槽、地面四洁。
废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽和丢到窗外。
4．实验后要认真分析实验现象，作出合理结论，写出实验报告，提取纯化产品包好，贴上标签，交给老师。
必要时还需进一步查阅某些尚未理解的理论和知识。
5．每次实验完毕，值日生负责整理公用仪器，将实验台及地面打扫干净，倒清废物缸，检查水电开关，关好门窗。
（二）实验室规则1．在实验室中要穿白大衣，实验中不准做与实验无关的事。
2．必须遵守实验室的各项制度，听从教师指导，尊重实验室工作人员。
3．实验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后才能开始实验。
4．使用仪器时要轻拿、轻放，贵重仪器未经教师允许不得擅自动用。
一旦损坏仪器应及时报损、补领，不得乱拿，乱用别人的仪器。
5．公用仪器和药品，用完后立即归还原处，不可调错瓶塞，以免污染。
仪器使用完毕应清理干净。
节约用水、用电，节约试剂，严格掌握药品用量。
（三）实验室安全注意事项1．实验前应检查仪器是否完整无损，装置是否正确。
天然药物化学实验PPT课件
4） 接通冷凝水，接通电源220V/50Hz，与主机连接上蒸 发瓶（不要放手），打开真空泵使之达一定真空度松开 手。
5） 调正主机高度：按压下位于加热槽底部的压杆，左 右调节弧度使之达到合适位置后手离压杆即可达到所需 高度。
6） 打开调速开关，绿灯亮，调节其左侧旁的转速旋钮，蒸 发瓶开始转动。打开调温开关，绿灯亮，调节其左侧旁的 调温旋钮，加热槽开始自动温控加热，仪器进入试运行。 温度与真空度一到所要求的范围，即能蒸发溶剂到接受瓶。
药材作成对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录ⅥB)试验，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。
三、实验仪器与实验材料
1、实验仪器
索氏提取器 旋转蒸发器 烧杯 漏斗 展开缸 显色 瓶超声波提取器 玻璃棒 试剂瓶 电子天平 锥形瓶 研钵
玻璃板 布氏漏斗 真空泵 抽滤瓶
槐花米粗粉（20g）
置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。
残渣
滤液
在60~70℃下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。
滤液
沉淀（粗制芦丁）
重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤
3. 崔福德主编《药剂学》（第六版），人民卫生出版社， 2007年
实验三 芦丁粗提物的显色反应和PC鉴别
一、实验目的
① 学习黄酮类化合物理化性质和常用的显色方法。 ② 学习用纸色谱法分离和鉴定黄酮类化合物的混合液。
二、实验原理
8 7
1
O27
6 5
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2'
2024年天然药物化学课件(含多场景)
天然药物化学课件(含多场景)天然药物化学课件一、引言天然药物化学是研究天然药物中化学成分的提取、分离、鉴定、结构测定、生物活性及其应用的一门学科。
在我国，天然药物化学的研究已有数千年的历史，其研究成果广泛应用于中医药、民族医药等领域。
随着科学技术的不断发展，天然药物化学在药物研发、疾病治疗等方面发挥着越来越重要的作用。
本课件旨在介绍天然药物化学的基本概念、研究方法、进展及其在医药领域的应用。
二、天然药物化学的基本概念1.天然药物：指来源于植物、动物、微生物等自然界生物体的药物，包括中药材、民族药材等。
2.化学成分：指天然药物中的有效成分和辅助成分，具有生物活性和药理作用。
3.提取：指从天然药物中分离出化学成分的过程，包括溶剂提取、水蒸气蒸馏、超临界流体提取等。
4.分离：指将提取液中的化学成分进行分离纯化的过程，包括柱层析、薄层色谱、高效液相色谱等。
5.鉴定：指确定化学成分的结构和性质的过程，包括质谱、核磁共振、红外光谱等。
6.生物活性：指化学成分在生物体内的药理作用，包括抗炎、抗菌、抗肿瘤等。
三、天然药物化学的研究方法1.提取与分离：根据化学成分的溶解性、极性等性质，选择合适的溶剂和方法进行提取与分离。
2.结构鉴定：通过质谱、核磁共振、红外光谱等方法确定化学成分的结构。
3.生物活性评价：采用体外细胞实验、体内动物实验等方法评价化学成分的生物活性。
4.作用机制研究：通过分子生物学、细胞生物学等技术探讨化学成分的作用机制。
5.药代动力学研究：研究化学成分在生物体内的吸收、分布、代谢、排泄等过程。
四、天然药物化学的进展1.新型提取与分离技术：超临界流体提取、超声波提取、微波辅助提取等技术在天然药物化学研究中的应用。
2.高效液相色谱-质谱联用技术：提高了化学成分的分离鉴定速度和准确性。
3.系统生物学技术在天然药物化学研究中的应用：基因组学、蛋白质组学、代谢组学等技术在天然药物化学研究中的应用。
4.计算机辅助药物设计：基于化学成分的结构和生物活性，利用计算机技术进行药物设计。
天然药物化学试验教学课件
+ OH OMe OMe
粘液质的基本性质及对提取分离的影响
定义：与树胶结构相似的多糖类物质 ，多存于植物薄壁组 织的粘液细胞内
基本性质：干燥粘液质为白色粉末，有强烈的吸湿性，在 水中能迅速膨胀，溶解形成粘稠的胶浆，不溶于有机溶剂。 分子中含有酸性基团——游离的羧基。 在提取中药其他成分时，少量粘液质的存在使其水提取液 粘稠性较大而极难过滤 稀醇沉淀或加入石灰水形成钙盐沉淀
鉴定的理论依据
生物碱的碱性大小与pKa的关系：pKa＜2为极弱碱， pKa2~7为弱碱，pKa7~11为中强碱，pKa11以上为强碱
生物碱分子中碱性基团的pKa值大小顺序一般是：胍基＞季
铵碱＞N-烷杂环＞脂肪胺＞芳香胺≈N-芳杂环＞酰胺≈吡咯
一般来说双键和羟基的吸电诱导效应使生物碱的碱 性减小。但具有氮杂缩醛结构的生物碱常易于质子 化而显强碱性。
芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3 分子结晶水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上 熔融并开始分解。 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200， 沸乙醇中1:60，沸甲醇中1:7，可溶于乙醇、吡啶、 甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶 于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
实验二
槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别
目的要求
1.了解炮制对芦丁含量的影响。 2.掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 3.掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方 法。
槐米简介
槐米为豆科植物槐Sophora japonica L．的干 燥花蕾。主产于河北、山东、河南、陕西、 江苏、广东、广西、辽宁等地。以河北、山 东、河南产量大。 性能：苦，性微寒。 功效：凉血止血、清肝泻火 应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、 衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
天然药物化学实验讲义(四实验)
目录天然药物化学实验须知 (2)天然药物化学实验项目 (7)实验一黄柏中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定 (7)实验二槐米中芸香苷的提取、分离与鉴定 (11)实验三八角茴香中挥发油的提取、分离与鉴定 (15)实验四茶叶中咖啡因的提取、分离与鉴定 (19)天然药物化学基本操作技能 (23)天然药物化学实验天然药物化学实验须知（一）实验目的1.验证理论，加深对理论知识的理解。
2.掌握回流提取、连续回流提取、两相溶剂萃取（分液漏斗法）、溶剂回收、薄层色谱等基本操作技能。
3.熟悉结晶法、柱色谱法、化学成分预试验等实验技术。
4.了解四大光谱（紫外、红外、核磁共振、质谱）的基本操作规程。
5.培养观察、分析和解决问题的实际工作能力以及科研动手能力。
（二）实验要求1.实验前，认真阅读实验内容及其相关知识，掌握实验原理、各步操作方法以及实验注意事项。
2.天然药物化学实验时间长及操作多，实验前应作好有关实验内容在时间上的计划，尽量做到实验紧凑有序。
3.尊重实验指导老师，听从实验安排。
4.不迟到，不早退。
因急事中途离开实验室，必须向老师请假。
6.以科学的实事求是态度，认真及时记录操作步骤、实验现象、有关数据、实验结果等。
7.认真如实地填写实验报告，及时上交。
（三）实验室规则1.进实验室必须穿工作服。
2.进实验室后，首先清点本次实验所用仪器设备、溶剂、试剂，熟悉存放位置。
3.实验室严禁吸烟、饮食。
不做与实验无关的事情。
4.实验室应保持安静，不许在实验室大声谈笑、嬉戏打闹。
5.严格遵守安全规则和各种仪器操作规程。
对性能和操作不熟悉以及与本次实验无关的仪器设备，不要随便安装使用，贵重仪器设备，未经老师允许，不得随意动用。
6.正确取用药品、溶剂和试剂，避免交叉污染，确保实验的准确性。
7.实验药品、试剂以及仪器，用后及时归还原位，不要乱拿乱放。
8.保持实验室的干净整洁，实验药渣以及纸屑等固体废弃物投入垃圾箱，易污染环境的废弃液倒入废液缸，有毒、易燃、易挥发的废弃液倒入指定的有盖废液瓶中，一般废弃液冲入下水道。
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《天然药物化学实验讲义》实验须知天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验须知：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。
实验过程应养成及时记录的习惯。
凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。
节约用水、用电、药用试剂。
严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验一薄层板的制备、活度测定及应用一、目的要求1．掌握硅胶薄层板的制备及薄层层析的操作方法2．掌握硅胶薄层活度的测定方法3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分二、实验材料薄层层析用硅胶G，硅胶F，羧甲基纤维素钠，0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene），苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量点样管，10×20cm玻璃板20块，碾钵7套。
三、实验操作（一）薄层板的制备1．硅胶薄层的制备（1）硅胶G薄层取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加水约5份混合均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中100℃活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。
活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。
（2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层CMC-Na系碳水化合物，调制时应在水浴上进行。
羧甲基纤维素钠的溶液一般用0.5~1%浓度（常用0.8%），宜预先配制后静置，取其上层澄清溶液应用，则所制备的薄层表面较为细腻平滑。
取薄层层析用硅胶，按1：3~3.5的比例加入羧甲基纤维素钠溶液顺时针方向搅拌混合并排除气泡，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，让其自然阴干，100℃下活化30分钟。
活化温度不应过高，防止碳化。
冷后于干燥器内备用。
注：国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是：硅胶G（G是Gypsum石膏的缩写。
表示加了石膏），硅胶H（H表示不加石膏），硅胶GF254（F254表示加石膏和波长254显绿色荧光的硅酸锌锰）。
硅胶GF365（表示加石膏和波长365nm显黄色荧光的硫化锌镉）。
2．特殊薄层的制备根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。
（1）酸、碱薄层和pH缓冲薄层为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如0.1~0.5N草酸溶液）代替水制成酸性氧化铅薄层使用，硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如0.1~0.5N氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。
当用醋酸钠、磷酸盐等不同pH的缓冲液代替水铺层，制成一定pH缓冲的薄层。
（2）络合薄层硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于105℃活化半小时后避光贮存，制成的薄层以不变成灰色为好，在三天内应用。
也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成10%溶液，把预先制好的硅胶G薄层浸入此溶液中约1分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。
（二）、吸附剂的活度测定1．硅胶活度的测定一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。
欧洲药典1969年记载用0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）。
苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10μl点滴于硅胶G或硅胶H 薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20分钟），三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线。
二甲基黄斑点在薄层的当中。
苏丹红斑点与二甲基黄斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。
2．氧化铝活度的测定一般可用4~5种偶氮染料以薄层层析法进行测定。
染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan ⅢTetrazobenzol-β-naphthol），对氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分别溶于50ml重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化钠干燥）中。
常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端2~3 cm处间隔1cm左右轻轻点上5个可以看清的小点，各吸取约0.02ml染料试剂分别点滴于原点上，以四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为10~40°之间，展开后测出各斑点的Rf值，从表1确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。
另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3小时后取出，按上述方法测定活度。
观察有无变化。
表1 氧化铝活度与偶氮染料外值关系氧化铝活度级Rf值偶氮染料二级三级四级五级偶氮苯0.59 0.72 0.85 0.95对甲氧基偶氮苯0.16 0.45 0.69 0.89苏丹黄0.02 0.25 0.87 0.98苏丹红0.00 0.10 0.35 0.50对氨基偶氮苯0.00 0.05 0.08 0.19 （三）、薄层层析的应用薄层层析法在天然药物化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。
用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟知的条件有针对性地进行。
由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大小。
实验操作：蒽醌类成分的鉴别三、思考题1. 为何在铺板之前，色谱用的玻璃板要完全洗净并干燥？2. 为何铺好的TLC板用前要在烘箱中干燥？试验二大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），大黄（R. officinale Baill）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：O O OHR2OHR1R1R2名称晶形熔点-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶318~320℃-H -CH2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶206~208℃-H -CH3大黄酚(Chyrsophanol) 金色片状结晶196℃-CH3-OH 大黄素(Emodin) 橙色针晶256~257℃-CH3- 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶207℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。
3．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法实验试剂及试药：大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。
实验仪器设备：500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（5-10cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴锅5台，旋转蒸发仪2台1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g加20%的硫酸水溶液100ml，加氯仿250ml，水浴回流2小时，过滤，测量滤液体积残渣氯仿溶液注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
所以要用酸水解使其生成苷元。
蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。
氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。
2．总蒽醌苷元的分离与精制大黄酸的分离与精制将含有总游离蒽醌的氯仿液250ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液（5% NaHCO3溶液）125ml振摇萃取（3次，每次125ml，至碱液无色），静置至彻底分层，放出氯仿液后，倒出碱水液至置500ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。
大黄素的分离与精制将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液（5%NaCO3溶液）125ml振摇萃取（3次，每次125ml，至碱液无色），275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。