蛋白酶发酵培养基
枯草芽孢杆菌产蛋白酶的发酵培养基优化
在 国 内外 蛋 白酶研 究 领域 中 ，在 不 同发 酵 工艺 下 ， 同菌株 或 同一菌 株 的酶 活也 有 较大 的差 异 ， 不 酶 活 的高低 直接 影 响着 酶的应 用效 果 。 因此 ， 高 蛋 白 提 酶酶 活 的研究 是很 有 必要 的 ， 近几 年 ， 内对 提高 最 国 蛋 白酶酶 活 的研究 有 了较 大进 展 ， 卓林 霞 等 艮 的 道 枯 草 芽孢 杆菌 ， 发酵 酶活 力可 达 ６ ８ ／ ； 继 平等 其 ４ Ｕｇ 郭
方 进 行优 化 ， 定 了影 响 Ｂ 一 确 ＤＴ ３菌株 发 酵 液 含 菌 量 的 ３个 重要 因 子依 次 为 玉米 粉 、 白胨 和 淀粉 ； 这 ３个 因子 进 蛋 对 行 爬 坡路 径 试 验 ， 过 响 应 面 分 析 法 确 定 了主要 影 响 因 子 的 最佳 条 件 。优 化 后 的 发 酵 液 酶 活 力 为 ５．Ｏ ｍＬ 相 比 通 ５ Ｕ／ ， ９ 采 用 初 始 发 酵 培 养基 提 高 了 １．９ １ ％。 ４ 关 键 词 ： 草 芽孢 杆 菌 ； 酵培 养基 ； 应 面 法 ； 白酶 枯 发 响 蛋 中图分类号 ： ９９ ７ Ｑ ３． ９ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６４ ５ ６ ２ １ ）４ ０ ７ — ０ ５ １７ — ０ Ｘ（０ １Ｏ — ０ ７ ０ ０
Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ，Ｗｕ ａ ３ ０ ８ Ｃ ｉａ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｈ ｎ ４ ０ ６ ， ｈｎ ）
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｐ ａ ｋ ｔ— ｒ ｎ ｄ ｓｇ ｎ ｅ ｐ ｎ ｅ ｓ ｒ ｃ ｎ ｌ ｓｓ ｗｅ ｅ ｓ ｄ ｏ ｐ ｉ ｚ ｈ ｅ ｍｅ ｔｔ ｎ ｍｅ ｉ ｍ ｆ ｓｒ ｃ ： ｌｅ ｅ ｔ Ｂｕ ｍａ ｅ ｉ ｎ ａ ｄ ｒ ｓ ｏ ｓ ｕ ｆ ｅ ａ ａ ｙ ｉ ａ ｒ ｕ ｅ ｔ ｏ ｔ ｍｉｅ ｔ ｅ ｆ ｒ ｎ ａ ｉ ｄ ｕ ｏ ｏ Ｂａ ｉ ｕ ｕ ｔ ｉ Ｂ ｃ ｌ ｓ ｓ ｂ ｉ ｓ ＤＴ－ ．Ｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｅ ｕ ｔ ｏ ｌｃ ｅｔ Ｂ ｒ ｎ ｄ ｓｇ ， ｏ ｔ ｎ ａ ｔ ｒ ｆｅ ｔ ｇ ｔ ｅ ｙｅ ｄ ｏ ａ ｉ ｕ ｌ ｌ ３ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｓ ｌ ｆＰ ａ ｋ ｔ－ ｕ ｍａ ｅ ｉｎ ｉ ｓ ｍｐ ｒ ｔｆｃ ｏ ｓ ａｆｃ ｉ ｈ ｉｌ ｆＢ ｃ ｌ ｓ ａ ｎ ｌ ｓ ｂｉｓ ｕ ｔｉ ｌ ＢＤ － ｗ ｒ Ｏ Ｉ ｌ ｕ ， ｅ ｔ ｎ ， ｓ ｒ ｈ Ｔ ｅ ， ｅ ｈ ｅ ｆ ｃｏ ｓ ｗｅ ｅ ｕ ｔ ｅ ｐ ｉ ｚ ｄ ｓｎ ｒ ｓ ｏ ｓ ｓ ｒａ ｅ Ｔ ３ ｅ ｅ Ｃ Ｉｌ ｏ ｒ ｐ ｏ ｅ ｔ ｃ ． ｈ ｎ ｔ ｔ ｒ ｅ ａ ｔｒ ｒ ｆ ｒ ｒ ｏ ｔ ｆ ｐ ａ ｈ ｈ ｍｉ ｕ ｉ ｇ ｅ ｐ ｎ ｅ ｕ ｆ ｃ ｅ ａ ａｙ ｉ． ｈ ｈ ｅ ａ ｔｒ ｅ ｅ ｆ ｒｈ ｒｏ ｔ ｚ ｄ ｕ ｉ ｇ ｒ ｓ ｏ ｓ ｕ ｆｃ ｎ ｌｓｓ Ｔ ｅ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔ ｉ ｆ ｒｏ ｔｍｉａｉｎ ｆｒ ｎ ｌｓｓ ｔ ｅ ｔ ｒｅ ｆ ｃｏ ｓ ｗ ｒ ｕ ｅ ｐ ｉ ｅ ｓｎ ｅ ｐ ｎ ｅ ｓ ｒ ｅ ａ ａｙ ｉ． ｈ ｎ ｙ ｃｉ ｔ ａ ｔ ｐ ｉ ｚ ｔ ｏ ｔ ｍｉ ａ ｖｙ ｅ ｏ ５ ．０ ／ ， ｉ ｈ ｗａ ． ９ ｈ ｇ ｅ ａ ｎｔ ｌｍｅ ｉ ｍ． ５ ９ Ｕ ｍＬ ｗｈ ｃ ｓ １ ４ ％ ｉ ｈ ｒｔ ｎ ｉ ｉ ａ ｄ ｕ １ ｈ ｉ
微生物学类实验指导书(下)蛋白酶产生菌活力测定及果酒酵母分离纯化
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒,环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前,能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶,葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的.通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
2。
蛋白酶产生菌的分离与纯化2。
1 实验目的学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化.2。
2 实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌.本实验将土壤样品（或其他样品)悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛.也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。
2.3 实验仪器与材料土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
2。
4 实验方法与步骤2。
4.1 分离1)采集土壤样品，用无菌水制备1:10土壤悬液；2）取1:10土壤悬液5ml,注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75—80 ℃水浴中热处理10 min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置,于30-32 ℃培养24-48 h；4)对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片,做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
2。
4。
2 筛选1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基,再点接于含酪蛋白的平板，30-32 ℃培养24—48 h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径.2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。
蛋白酶的工厂设计
年产1500m³蛋白酶的工厂设计摘要蛋白酶是催化肽键水解的一类酶，它可迅速水解蛋白质为胨、肽类，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。
同时大多数微生物蛋白酶都是胞外酶。
微生物蛋白酶按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶三类。
酸性蛋白酶是一种羧基蛋白酶，它的分子质量为30-40kD，等电点（pH3.0-5.0）酸性蛋白酶现已广泛应用于食品、饲料、酿造、毛皮与皮革、医药、胶原纤维等各个行业之中。
本设计采用豆饼粉、玉米粉、淀粉为主要的培养基原料，并选用黑曲霉（Aspergillus niger ）3.350菌种发酵。
其中豆饼粉3.75%，玉米粉0.625%，鱼粉0.625%，氯化铵1%，氯化钙0.5%，磷酸氢二钠0.2%。
本设计利用通风搅拌式发酵罐进行发酵，同时利用离子交换树脂对母液进行提取，提高了酸性蛋白酶的生产效率，减少了生产成本。
设计还包括发酵罐，全厂平面图，车间平面布置图，工艺流程图。
关键词：酸性蛋白酶发酵工厂设计The Process Design of the Protease used forSection with the Capacity of 1500m³ AnnuallyAbstractprotease is a kind of Peptone and peptide. It has been discover across in animal giblets ,the stem of plant,fruit , microbial and so on.Most of the Microbial protease are ectoenzyme .According to its best Optimum pH function ,Microbial protease Can be divided into Acid protease ,Neutral protease and alkaline protease .Acid protease is a kind of Carboxyl protease , Its molecular weight is 30-40 kd, lower isoelectric point (pH3.0-5.0)Acid protease in food, medicine, textile, leather, feed, cosmetics, washing industries have applications, natural health, avirulent and harmless, quite safe. So in this paper the basic content of more acid protease, production process and application development were introduced. This design USES the bean cake powder, corn flour, starch as the main medium of raw materials, and selects the Aspergillus Niger, Aspergillus Niger) 3.350 bacterial fermentation. With bean cake powder 3.75%, corn flour 3.75%, 0.625% fish meal, 1% ammonium chloride, calcium chloride 0.5%, disodium hydrogen phosphate 0.2%.This design using the ventilation agitator in fermentor, using ion exchange resin in mother liquid was extracted at the same time, improve the efficiency of the acid protease production, reduce the production cost. The design also includes Fermentor, The factory plan, Shop floor plan, Flow Chart.Key Words: Acid protease ; fermentation; plant-design;前言酸性蛋白酶是一类最适pH值为2.5〜5.0的天冬氨酸蛋白酶，相对分子质量为KD30 。
发酵培养基及制备
同理，可以计算并确定B3、C3、D1分别为B、 C、D因素的优水平。四个因素的优水平组合 A2B3C3D1为本试验的最优水平组合，即酶法 液化生产山楂清汁的最优工艺条件为加水量 50mL/100g，加酶量7mL/100g，酶解 温度为50℃,酶解时间为1.5h。
• 根据生产实践和科学试验的不同要求选择 • 根据经济效益分析选择培养基
–价廉、来源Βιβλιοθήκη 富、运输方便、就地取材、无毒二、发酵培养基成分选择的原则
• 不同的微生物所需要的培养基成分是不同 的，要确定一个合适的培养基，就需要了 解生产根据不同生产菌种的培养条件、生 物合成的代谢途径、代谢产物的化学性质 等确定培养基。
3
2
1
3
2
1
3
18
3
3
2
1
42
不考察交互作用的试验结果分析
（1） 确定试验因素的优水平和最优水平组合
分析A因素各水平对试验指标的影响。由表3可以看出，A1 的影响反映在第1、2、3号试验中，A2的影响反映在第4、5、 6号试验中，A3的影响反映在第7、8、9号试验中。
A因素的1水平所对应的试验指标之和为
度。Rj越大，说明该因素对试验指
标判的断影因响素越的大主。次根顺据 序。Rj大1小. ，计可算以
Kjm，kjm
极差分析法－R法
Rj 因素主次
2. 判断 优水平
优组合
试验号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
因素
液化率
A
B
C
D
％
1
1
1
1
0
1
2
2
微生物发酵生产蛋白酶
妥善保存，才能保证其产酶特性不变异、不死亡、
不被杂菌污染。
❖ 2）菌种活化：产酶菌种在使用钱必须接种于斜
面培养基上，在一定条件下，进行培养，以恢复
细胞的生命活动能力。
❖ 3）扩大培养：活化了的菌种，一般还要经一级 至数级的扩大培养。
❖ 4）分离纯化：发酵结束后得到的酶可能含有一些杂
❖ 蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果 实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、 细菌，其次由酵母、放线菌生产。
二、酶发酵的方式
❖ 1、固体培养发酵 ❖ 2、液体深层发酵 ❖ 3、固定化细胞或固定化原生质体发酵
三、各种发酵方式发酵模式：
❖1、固定培养发酵：
❖ 以麸皮、米糠等为培养基的主要原料，加入 其它必需的营养成分而制成的固体或半固体 的麦曲，经灭菌、冷却后，接入产酶菌株， 在一定条件下，发酵产酶。
❖ 1、从菌种保存机构和有关研究部门获得 ❖ 2、通过筛选获得
五、培养基的配制
❖ 枯草杆菌ASL.398中性蛋白酶发酵培养基：
❖ 玉米粉8%，豆饼粉4%，麸皮3.2%，米 糠1%，磷酸氢二钠0.4%，磷酸二氢钠 0.03%.
六、发酵工艺流程
保藏菌种 菌种活化 种子扩大培养
发酵 分离纯化
酶
七、剖析：
质，所以需要进一步分离杂质，纯化目标酶。
八、蛋白酶的应用
❖ 蛋白酶已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食 品、酿造等方面 。eg：皮革工业的脱毛和软化已大 量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。 蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。 临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用 酸性蛋白酶治疗支气管炎，用惮性蛋白酶治疗脉管 炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创 口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是 洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上 的血渍和蛋白污物，但使用时注意不要接触皮肤， 以免损伤皮肤表面的蛋白质，引起皮疹、湿疹等过 敏现象。
胃蛋白酶生产工艺
胃蛋白酶生产工艺胃蛋白酶是一种重要的消化酶，能够在胃部分解蛋白质，帮助人体消化吸收。
胃蛋白酶的生产工艺主要包括菌种培养、发酵、提取和纯化等步骤。
以下是一个简要的胃蛋白酶生产工艺的介绍。
首先，选择合适的菌种进行培养。
常用的菌种是产胃蛋白酶的细菌，如枯草杆菌属的嗜热枯草杆菌（Bacillus thermoproteolyticus），也可以使用其他蛋白酶产生菌株。
菌种的选取要考虑其产量、生长速度和酶活性等因素。
然后，进行菌种的发酵过程。
将菌种接种到培养基中，控制好发酵条件，使菌株充分生长和繁殖。
发酵过程中要注意控制温度、pH值、氧气和营养物质等条件，以促进胃蛋白酶的产生。
接着，进行胃蛋白酶的提取。
发酵液经过离心分离，得到含有胃蛋白酶的上清液。
胃蛋白酶的提取过程中可能需要进行蛋白酶的激活或去除杂质等步骤，以提高酶的纯度和活性。
最后，进行胃蛋白酶的纯化和精制。
采用适当的分离技术，如层析、电泳等方法，将胃蛋白酶从提取液中分离出来，并去除其他成分和杂质。
纯化过程中要控制好条件，确保胃蛋白酶的纯度和活性。
在胃蛋白酶生产工艺中，需要重点考虑的因素有以下几点：1.菌种的选取和培养条件：选择产胃蛋白酶能力强、生长快速的菌株，并控制好培养基成分和发酵条件，以提高胃蛋白酶的产量和活性。
2.发酵条件的控制：控制好温度、pH值、氧气和营养物质等条件，以促进菌株的生长和胃蛋白酶的产生。
3.提取和纯化工艺的选择：根据实际情况选择合适的提取和纯化方法，以最大限度地提高胃蛋白酶的纯度和活性。
4.产品的质量控制：对生产的胃蛋白酶进行质量检测和控制，确保产品的活性和纯度达到要求。
综上所述，胃蛋白酶的生产工艺包括菌种培养、发酵、提取和纯化等过程。
通过合理选择菌种和优化发酵条件，以及采用适当的分离和纯化技术，可以获得高纯度、高活性的胃蛋白酶产品。
纤维素、脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶筛选培养基
1. 筛选产生纤维素酶菌株的培养基：
CMC-Na 10g，硫酸铵4g，磷酸二氢钾2g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，蛋白胨1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
121℃，20min 灭菌。
待菌生长良好后，加0.1g/L刚果红染色，用1mol/L氯化钠洗涤，观察透明圈。
2. 筛选产生蛋白酶菌株的培养基：
NA(营养琼脂)培养基+1.5%脱脂奶粉
即奶粉15g/100ml水分装，灭菌后以10%的量加入到NA中）
3. 筛选产生淀粉酶菌株的培养基：
可溶性淀粉2.5g，蛋白胨5g，硫酸铵2.5g，磷酸二氢钾3g，六水氯化钙0.25g，琼脂20g，水1000ml。
待菌生长良好后，加碘液染色，观察透明圈。
4. 筛选产生脂肪酶菌株的培养基：
乳化液15ml，酵母膏5g，硫酸铵5g，七水硫酸镁0.5g，六水氯化钙0.5g，七水硫酸亚铁0.1g，琼脂20g，水1L。
维多利亚兰：0.004%（40mg/l）(配维多利亚兰溶液2mg/ml，1L加20ml维多利亚兰溶液) 乳化液：橄榄油与2%聚乙烯醇（PV A）按1:3（V/V）的比例混合，20000r/min，破碎乳化2min，间歇5min，再次乳化2次。
胃蛋白酶生产工艺研究
胃蛋白酶生产工艺研究
胃蛋白酶是一种具有高度催化活性的蛋白酶，广泛应用于食品、制药、饲料等行业。
为了提高胃蛋白酶的生产效率和降低生产成本，需要对其生产工艺进行研究。
首先，选择适合胃蛋白酶生产的菌株是生产工艺研究的第一步。
常用的菌株有枯草芽孢杆菌、大肠杆菌等。
通过筛选、优化和改造菌株，可以获得高产胃蛋白酶的工程菌株。
其次，培养基的选择和优化是胃蛋白酶生产工艺的关键环节。
胃蛋白酶的生产需要提供充足的营养物质和适宜的环境条件。
常用的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐和一些辅助添加剂。
通过正交试验等方法，可以选择最佳的培养基配方，并优化培养条件，如温度、pH值、搅拌速度等。
然后，发酵工艺的控制和调节是胃蛋白酶生产工艺的关键步骤。
包括发酵罐的设计和操作，控制发酵过程中的温度、pH值、
氧气供应等条件，并添加辅助添加剂以提高胃蛋白酶的产量和活性。
最后，胃蛋白酶的提取和纯化是生产工艺的最后一个环节。
胃蛋白酶存在于发酵液中的细胞酶液中，需要通过离心、超滤、酒精沉淀、层析等方法进行提取和纯化。
同时，还可以通过酶活测定、蛋白质含量测定等方法对胃蛋白酶的活性和纯度进行分析。
在胃蛋白酶生产工艺研究中，需要综合考虑菌株、培养基、发
酵工艺和提取纯化工艺等多个因素的影响。
通过优化每个环节，可以提高胃蛋白酶的生产效率和品质，从而满足工业生产的需求。
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产高温蛋白酶微生物菌种资源的研究 微生物学杂志 1997，17（3）： 选择培养基：蛋白胨 1,葡萄糖 0.1,酪蛋白 0.5，NaCl 0.5，CaCl2 0.01，L-try 0.01，琼脂 1.5, pH7.2-7.4 PSY 培养基：蛋白胨 0.8，酵母粉 0.4，NaCl 0.3.，琼脂 1.5%，pH7.2 F5M 培养基：蛋白胨 0.5，酵母粉 0.1，NaCl 0.2，K2HPO4 0.05，MgSO4*7H2O 0.001,FeSO4 0.0001,pH7.2 F8 培养基(%) 蛋白胨 0．2，葡萄糖 0．2，(NH4)2SO4 l，CaCO3 0．2，FeSO4 0．05，MgSO4*7H2O 0.2，K2HPO4 0.2，KH2PO4*7H2O 0.05，pH7.0。 F12 培养基(%) 玉米粉 4，Na2HPO4 0.4， KH2PO4·7H2O 0.03，pH9.0- 9.3
（1）初筛培养基：干酪素 2.0%（用 2.0% NaOH 溶液加热溶解），琼脂 1.5%，pH 7.0；（2）斜面培养基： 牛肉膏 0.4%，蛋白胨 0.6%，酵母浸出粉 0.2%，NaCl 0.5%，琼脂 2.0%，pH 7.0； （3）发酵培养基Ⅰ：麸皮 4.0%，蛋白胨 0.1%，Na2HPO4·12H2O 0.4%，KH2PO4 0.03%，pH 7.0； （4）发酵培养基Ⅱ：玉米淀粉 2.0%，麸皮 2.0%，Na2HPO4·12H2O 0.4%，KH2PO4 0.03%，ZnCl2 0.1%，pH 7.0。 产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件的优化 湖南农业科学 2009，（5）：102~104，107
弹性蛋白酶发酵培养基 酪蛋白胨 3%，葡萄糖 4%，玉米提取液 0.2%，K2HPO4 0.1%，MgSO4*7H2O 0.01%，pH7.0.发酵菌种为芽孢杆 菌，发酵培养 24h.
对黑曲霉黄色变株 A 一 2580 产耐温酸性蛋白酶的发酵条件进行优化，由试验结果得如下结论： (1) 麸皮和豆饼粉分别是该菌发酵产生酸性蛋白酶的良好碳源和氮源. (2)通过正交试验优化培养基，确定其最适产酶培养基为(g/L)：麸皮 21.6、豆饼粉 48.4、NH C1 2.0、 KH2PO 0.8. (3)培养基起始 pH 为 4～5，接种量 30 ml 发酵液中 2×10 8 次方个孢子，发酵温度 30℃，时间 72 h， 酸性蛋白酶的产量达到最高，平均酶活达 6700 u/m1.
ELI 1 2 发酵条件的确定及弹性蛋白酶的纯化研究 现代食品科技 2009，Vo1．25，No5 Bacillus pseudofirmus 最佳碳源为葡萄糖，最佳浓度为 2.0%；最佳氮源为酵母粉，最佳浓度为 0.25%。其最佳发酵条件为在 pH 7.5
和 37℃的条件下进行 150 r/min 的摇瓶发酵。
上，还原糖含量低于 0.5%，镜检有大量芽孢产生时即可终止发酵，为保证后处理过程中酶活不会大量损失， 需迅速降温.
普通中温淀粉酶菌种 a 一淀粉酶 枯草芽孢杆菌 BF-7658 变异株具有较高的产活力，其最适 pH 为 7.5，最适碳氮比为 1.4：1。a-淀粉酶发酵 培养基：玉米粉 7%，豆饼粉 5%，磷酸氢二钠 0.8%，硫酸铵 0.4%，氯化钠 0.15%，灭菌前 pH7.0 一 7.5，灭 菌后 pH6.5—7.0。37.4±1℃下培养 44～48 小时。
不同菌株配伍摇瓶发酵蛋白酶的初探 江西农业大学学报 2009, Vo1．31，No．3 种子培养基 (%)：牛肉膏 0.5，蛋白胨 1.0，NaC1 0.5，pH 7.0～ 2。用于活化纳豆芽孢杆菌 NI、SH、TCP、 B，、B 株、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。 初筛培养基(%)：牛肉膏 0.3，酪素 1.0，NaC1 0.5，琼脂粉 1.5，pH 7.0—7.2, 0.1 MPa 压力灭菌 30 min。 发酵培养基(%)：可溶性淀粉 l，蛋白胨 0.5，Na2HPO4 0.4，KH2PO4 0.03，CaC12 0.1 。
产碱性蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及其酶学性质的初步研究 中国酿造 2009,(2) 富集培养基：牛肉膏 0.5g、蛋白胨 1g、NaCl 0.5g、水 100mL，pH10.5。 平板初筛培养基：将硼砂/NaOH 缓冲液（pH10.5）、脱脂乳溶液分别灭菌，混合倒平板，使得脱脂乳的最终 浓度在 10%。 种子培养基：酵母粉 0.5g、胰蛋白胨 0.5g、葡萄糖 1g、K2HPO4 1.8g、水 100mL。 摇瓶发酵培养基：酵母浸粉 1g、棉籽饼粉 2g、麦芽糊精 10g、柠檬酸钠 0.3g、CaCl2 0.3g、K2HPO4 1g、 水 100mL。
碱性蛋白酶发酵菌种为芽孢杆菌(Bacillus)， 37℃，培养 48 h， 1 发酵培养基 l：可溶性淀粉 1%、蛋白胨 0.5%、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、CaCl2 0.1% 、 pH 中性、121℃灭菌 25 min。 2 发酵培养基 Il：玉米粉 2% 、豆饼粉 3% 、麸皮 3% 、Na2HPO4*12H2O 0.4% 、KH2PO4 0.03% 、 ZnCl2 0.1% 、pH 8.0、121℃灭菌 25 min。 发酵培养基(1000mL)：黄豆饼粉 50g，玉米粉 50g，麸皮 25g，KH2PO4 0.3g，Na2HPO4 0.4 g，Na2CO3 lg； 自 然 pH，在 36℃下通风培养，前期通风 1：0.15，后期通风 1：0.2，搅拌 40 h 左右。
中性蛋白酶： 菌种耐热芽孢杆菌 XJT9503，从新疆吐鲁番火焰山土壤里分离筛选而得. 种子培养基组分(g/dI )：玉米粉 2，豆饼粉 1，磷酸氢二钠 0.4，硫酸镁 0.02，氯化钙 0.02. 发酵培养基组分(g/dI )：玉米粉 2，豆饼粉 1，葡萄糖 0.5，磷酸氢二钠 0.4，碳酸钠 0.085，硫酸镁 0.02， 氯化钙 0.02. 3 000 L 发酵罐发酵工艺参数为：将培养 8 h 的种子罐种子，以 5%接种量移种于 3 000 L 发酵罐， 46℃ 、180 r/min、4 L/(L·min)通气量下发酵培养 18 h 左右，测定发酵酶活达 10 000 u/mI 以
3 株高温蛋白酶产生菌的分离与鉴定 应用与环境生物学报 2007，13(4)：561～56 ① 酪素培养基 ：蛋白胨 10 g，葡萄糖 1 g，氯化钠 5 g，氯化钙 0．1 g，L-酪氨酸 0．1 g，琼脂 22 g， 酪素 5 g，蒸馏水 1 000mL，pH 7．2～7．4，112℃ ，灭菌 30 min． ② 牛乳脱脂培养基：用新鲜牛奶反复加热，除去脂肪．每次加热 20～30 min，冷却后用吸管从底层吸出 牛奶，弃去上层的脂肪．凋节 pH 至中性．112℃ ，灭菌 30 min． ③ 富集培养基：酵母膏 1 g，蛋白胨 2 g，硫酸铵 3 g，硫酸钾 0．5 g，氯化钾 0．1 g，甘氨酸 0．7 g， 1%氯化锰 80 L，1%绷酸钠 210 tLL，1%硫酸锌 11 tLL，0．1%硫酸铜 25 L，0.1%钼酸钠 15 L，0.1%硫酸钒 15 L，0.1%硫酸 5L，0.1%硫酸镍 5 L，1 mol L 氯化镁 500 L，0．3 mol L 硝酸钙 500/zL，1% 硫酸铁 100/xL， 0．5 mol L 氯化氢 100L，50%硫酸 200 L，蒸馏水 1 000 mL，pH 7．0，115℃ ，灭菌 30 min． ④ 葡萄糖铵盐培养基：葡萄糖 10 g，硫酸铵 1．5 g，磷酸二氢钾 0．5 g，磷酸氢二钾 1．5 g，硫酸镁 0．2 g，氯化钠 0．5 g，蒸馏水 l 000 mL，pH 7．0． ⑤ 发酵培养基(Fd 培养基) ：葡萄糖 10 g，酵母膏 2 g，蛋白胨 0.2 g，氯化钠 2 g，氯化钙 2 g，磷酸氖 二钾 5 g，磷酸二氰钾 1.25 g，硫酸镁 0.01 g，硫酸铁 0.0001g，蒸馏水 1000 mL，pH 7.0
产高温蛋白酶高温菌的筛选 武汉工业学院学报,2004, V01．23No．4 酪素培养基， 蛋白胨 1% ，葡萄糖 0.1% ，NaC1 0.5% ，CaCl2 0.01% ，L—Tyr 0.01% ，琼脂 1.8% ，酪 素 0.5% ，pH 7.2～7.4，113℃，灭菌 30 min。用于菌种分离。 PYS 培养基 酵母膏 0.4% ，蛋白胨 0.8% ，NaC1 0.3% ，琼脂 1.8% ，pH7.2 ～7.4，灭菌 30 min。用于菌 种保藏。
耐高温蛋白酶菌株的筛选 生物技术 2005, Vol115 ,No15 :20 培养基[6 ] :平板分离培养基、富集培养基、选择培养基、 液体发酵培养基。 [6 ]钱存柔,黄仪秀. 微生物学实验教程[M] . 第 1 版. 北京:北京大学出 版社,1999. 66 - 74.
原料乳中产耐高温蛋白酶菌株的筛选与鉴定 2009 年第 37 卷第 10 中国乳品工业 荧光假单胞菌 1.1802。 培养基：NB 固体[6]（质量分数）：胰蛋白胨 0.5 g，酵母浸膏 0.25 g，脱脂奶粉 0.1 g，葡萄糖 0.1 g， 琼脂 1.8 g，蒸馏水 100 mL，调节 pH 值至 7.2。 NB 液体[6] （质量分数）：胰蛋白胨 0.5 g，酵母浸膏 0.25 g，脱脂奶粉 0.1 g，葡萄糖 0.1 g，蒸馏水 100 mL，调节 pH 值至 7.2。 脱脂乳培养基：脱脂乳 100 mL，琼脂 1.8 g。
低温碱性蛋白酶：黄海黄杆菌 发酵培养基 (1) 豆饼粉(水解液，加 0.5%NaOH，121℃水解 30min，冷却、过滤)4.5%、玉米浆(酶解液.购自华北制药 厂)6%、Na2HPO4 0.4%、KH2PO4 0.03%、Na2CO，0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0，2%、泡敌约 0.5‰(视 具体情况及时补加)，pH 7，121℃灭菌 30 min。 (2)豆饼粉(水解液.加 0.5 NaOH，121℃水解 30 min，冷却、过滤)4.5%、葡萄糖 1%、Na2HPO40.4%、 KH2PO40.03%、Na2CO3 0.1%、MgSO4 0.02%、CaC12 0.2%、泡敌约 0.5‰(视具体情况及时补加)， pH7。 121℃灭菌 30min 分批发酵动力学试验 使用瑞士 Bioengineering 公司 NLF22 型自动控制发酵罐进行分批发酵。发酵罐容积 20 L .两层六平直 叶搅拌，双挡板。采用 1.2.3 节(1)培养基，装料系数 0.65，接种量 4%，培养温度 18℃ ，以 5mol/L NaOH 液调节 pH7 左右，通气量 1：1、搅拌速度 300～500r/min，控制溶氧在 35%～45%之间。 补料分批发酵试验 使用瑞士 Bioengineeri g 公司 NLF22 型自动控制发酵罐进行补料分批发酵。发酵罐容积 2OL，两层六平 直叶搅拌，双挡板。采用 1.2.3 节(2)培养基，装料系数 0.4，接种量 4%，培养温度 18℃，以 5mol/L NaOH 液调节 pH 7 左右，通气量 1：1、搅拌速度 300～500 r/min，控制溶氧在 35 ～4底物浓度并及时取样测定糖浓度、细胞浓度及总酶活力。