实验六 种子生活力的快速测定
种子生活力的测定资料
三、实验原理 1 .四唑染色测定原理 四唑盐类的无色溶液是一种可被种子组织吸 收的指示剂，参与活细胞的还原过程 DPNH2+TTC→DPN+TTCH+HCL
（辅酶ⅠH2) （四唑）（辅酶Ⅰ）（甲 月替）（氯化氢）
2 .红墨水染色测定原理 种子活细胞的细胞膜均能选择性地吸收外界 有用物质，而死亡的细胞则丧失了这一能力。 有生活力的种子，胚部细胞不让染料进入，因 而不容易被染色；而丧失生活力的种子，胚部 细胞丧失了选择透过性，染料可以自由的进入 到细胞内，使胚部染色。
实验六 种子生活力的测定
生活力Seed viability：种子发芽的潜在能力或种胚 具有的生活力
种子生活力测定的必要性：
1、休眠种子必须进行生活力测定： 2、快速预测种子发芽能力
2
一、实验目的 1.了解四唑染色及红墨水染色测定种子生活力 的原理和方法。 2.掌握判别种子有无生活力的鉴定标准。 二、材料和用具 1. 种子材料：小麦、玉米、大豆 2. 试剂：0.1%四唑溶液、5%红墨水 3. 用具：镊子、刀片、吸水纸、烧杯、放大镜
11/4/2018
大豆种子红墨水染色测定结果的鉴定结果标准
五、计算种子生活力 种子生活力=有生活力种子的数量/种子总数× 100%
实验七 种子重量和重的测定方法及种子自流 角和静止角的测定 二 材料用具 小麦、玉米、大豆种子 容重器、真空数种器、电子自动数粒仪、玻璃 缸、玻璃板、量角器
11/4/2018
小麦种子四唑测定结果的鉴定标准
2.大豆种子红墨水染色测定
⑴ 浸种 ⑵ 染色 大豆：200n×(2-4) （20n×2） 剥种皮 浸入 5%红墨水中，0.5-1h ⑶ 漂洗 ⑷ 观察鉴定 除去种皮，掰开子叶，露出胚芽 鉴定：①整个胚不着色或着色很浅 ②胚根顶端染色，1/2 ③子叶顶端染色，1/2 ④胚芽顶部染色，1/4
实验六 植物种子生命力的快速测定
2）取完好小麦种子，将种胚轻稳地向下插入BTB琼脂胶中。
7. 思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同?
2）取30粒完好的小麦种子，种胚向下略斜插入胶（不软 不硬）。
3）将培养皿置于35 ℃下培养 1 h，对光观察，如果种胚 附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。
实验步骤
TTC/红墨水法：
1）将种子用温水（约30℃）浸泡2~6h，使种子充分吸胀。 2）随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，每切1粒确认各半种子皆 含胚后，分别放置两只培养皿中。 3）在上述一只培养皿中加入TTC溶液（至其中种子全部浸入为止），恒 温箱（30~35℃）中保温至少30 min。从TTC溶液中取出种子，直接观 察种胚颜色变化。
种子活力检测评估方法：
(1) 还原力：呼吸→NADH → 还原TTC，胚呈红色。
(2) 原生质着色：活种子不易着色，原生质膜具有选择透性。
(3) 呼吸释放CO2，pH下降，酸碱指示剂显色。
(4) 细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。
(5) 外观目测法：用肉眼观察玉米种胚形状和色泽。凡种胚凸
周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变。
BTB变色范围为pH6.0~7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色， 中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
3. 材料、仪器设备与试剂
材料：小麦种子 仪器设备：小烧杯；刀片；镊子；温箱
试剂：
0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈 中性，pH7±0.5，不宜久藏，应随用随配）。 0.02％～0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G）。
出或皱缩、显黑暗无光泽的，则种子新鲜，生活力强，可
植物生理学 实验6__种子生活力的测定
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表 方法 TTC 红墨水 有生活力 无生活力 供试粒数 种子粒数 种子粒数 30 30 有生活力种子 占供试粒数的%
BTB
30
注意事项
沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶 中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。
实验六 植物种子生活力的快速测定
实验目的
1. 了解种子生活力快速测定的方法
2. 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理
种子生活力（seed viability）：指种子能够萌发 的潜在能力或种胚具有的生命力。 种子活力（seed vigor）：
实验原理
TTC法
1. 2. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应， 而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被NADH或 NADPH还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染 成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软 不硬)；
3. 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。
TTC/红墨水染色法
1. 2. 3. 4. 5. 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（3035℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
实验六_植物种子生命力的快速测定
种子活力检测评估方法：
(1) 还原力（TTC法） ：呼吸→NADH → 还原TTC，胚呈红色。
(2) 原生质着色（红墨水法）：活种子不易着色，原生质膜具有选
择透性。 (3) 呼吸释放CO2，pH下降，酸碱指示剂显色。 （BTB法） (4) 细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。 (5) 外观目测法：用肉眼观察玉米种胚形状和色泽。凡种胚凸出或
5. 结果与分析
不同方法测定种子生活力记录表
方法
TTC 红墨水 BTB
供试粒数
30 30 30
有生活力种 子粒数
无生活力 种子粒数
有生活力种子 占供试粒数的%
分析TTC法和红墨水法测定的种子生活力结果，比较三种 方法快速检测种子活力的优缺点。
6. 注意事项
TTC法：
1）TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中， 放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2）取30粒完好的小麦种子，种胚向下略斜插入胶（不软 不硬）。
3）将培养皿置于35 ℃下培养 1 h，对光观察，如果种胚 附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。
实验步骤
TTC/红墨水法：
1）将种子用温水（约30℃）浸泡2~6h，使种子充分吸胀。 2）随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，每切1粒确认各半种子皆 含胚后，分别放置两只培养皿中。 3）在上述一只培养皿中加入 TTC溶液（至其中种子全部浸入为止），恒 温箱（30~35℃）中保温至少30 min。另一培养皿中加入约5 ml红墨水， 室温下浸5 min；
皱缩、显黑暗无光泽的，则种子新鲜，生活力强，可作生产用
种。
（6）浸种催芽法
先将100粒种子用水浸约两小时吸胀，放于湿润草纸上，盖 以湿润草纸，置于氧气充足，室温 10-20 ℃环境中，让种子 充分发芽；再以发芽的种子粒数除以100，乘以100%，求得 发芽率。
种子活力测定
实验六种子活力测定一、原理由于指示活力特性和指标是多种多样，而且因不同作物或种子生理发芽特性不同，幼苗生长表现各异，因此活力测定的方法也是种类很多。
大致可将这些方法分为直接法和简接法两大类：所谓直接法，是利用实验室可控制的条件，模拟田间不良的因素，观察种子田间出苗能力或幼苗生长的整齐健壮的程度。
如玉米低温试验、棉花低温发芽，及大小麦砖砂试验（低温及机械抑制力）等。
间接法是在实验室中测定与田间出苗力相关的种子特性、生理生化特性指标，如酶的活性、呼吸强度、种子浸泡液的电导率等。
如何正确选用活力测定方式是很重要的，通常应该考虑以下几点：首先是所采用的方法，其测定结果能否真正反映一批种子的活力水平；其次是所用方法要简单易行，节用费用；第三是测定方法最好能快速及时；最后是测定结果要有重演性，即不同地区、不同实验室所测结果比较一致。
二、目的要求1、了解种子活力测定原理和生产意义。
2、掌握重要种子活力测定方法和评定标准。
三、材料和器具1、材料准备不同活力的大麦、小麦、玉米、大豆和豌豆等种子样品。
2、器具培养箱、老化箱、老化盒、电导仪、天平、玻璃培养皿、发芽纸或滤纸、烧杯、镊子、尺子等。
四、方法和步骤（一）幼苗生长测定本法适用于具有直立胚芽和胚根的禾谷类和蔬菜类作物种子。
其测定方法是取试样4份，各25粒种子。
取发芽纸3张（30cm×45cm），取其中1张画线，先在纸长轴中心画一条横线，距顶端15cm。
并在其上、下每隔1cm画平行线。
在中心线上平均间隔画25点，在每点上放1粒种子，胚根端朝向纸卷底部，再盖二层湿润发芽纸，纸的基部向上折叠2cm，将纸松卷成4cm直径的筒状，用橡皮筋扎好，将纸卷竖放容器内，上用塑料袋覆盖。
置于黑暗恒温箱内培养7d，温度为正常发芽所规定温度，然后统计苗长：计算每对平行线之间的胚芽或胚根尖端的数目，按下列公式求出幼苗平均长度：式中：L 胚芽平均长度（cm）；n 每对平行线之间的胚芽尖端数；x 中点至中线之间的距离（cm）。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定一、实验原理通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。
二、实验原理（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。
三、实验材料、药品和器具1、实验材料：花生、黄豆2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等四、试验方法1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。
胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。
2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。
胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。
五、实验结果品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93%黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。
结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。
六、注意事项1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。
2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。
种子生活力测定
料垫板（切种子用）、放大镜、标签纸等。
项目五. 实验步骤
任务1 浸泡：将种子用温水（约30--35℃）浸泡5h左右，使种 子充分吸胀，便于染色（一般用先泡好的种子）。 任务2 试样数取与切取：随机数取4份，每份50粒种子。沿种 胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要 完整的暴露在切3 样品染色：向上述 4 个培养皿中加入 5%的红墨水溶液，将切好的种子浸没，室 温下浸10min染色。
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少 2 次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗， 不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情 况（可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活 力的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生 活力的种子。 有 生 活 力 的 种 子
无生活力的种子
任务5 计算：
种子生活力（ % ） = （有生活力的种子数／检测种子数） ×100%（保留整数）
先计算每份实验的种子生活力。再计算其平均生活力。
项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称 品种名称 重复 检验粒数 种子 生活 力测 定 有生活力种子数 种子生活力 平均种子生活力
填表日期： 年 月 日
种子生活力测定的记载 表
产地 送检样品重（g）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中；
3）染色时间不足或太长，否则不易区分；
4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
模块三
快速测定种子生活力
红墨水染色法
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验六种子生活力的快速测定
一、实验目的
1.加深对种子作用的理解；
2.掌握种子生活力的测定方法。
二、实验原理
在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。
因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。
种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）
有生活力的种子进行呼吸
作用，呼吸代谢途径催化产
种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；
死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；
三、实验材料及用品
材料：绿豆种子
实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片
实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）
四、实验步骤
1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。
b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚
好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。
c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，
以刚好浸没种子为宜，恒温（
32℃）中保温1h。
3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染
色情况。
有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染
色。
生活力的种子数
计算种子生活力的比率= ————————X 100%
实验组测定种子数
五、实验现象与结果
保温1h后种子染色情况：
被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6
煮沸的种子 0 20
表一种子染色情况记录表
图1 未煮沸的种子染色情况
图2 煮沸的种子染色情况
生活力的种子数
未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%
实验组测定种子数
生活力的种子数
煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0
实验组测定种子数
六、分析和讨论
1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。
2.实验中，在恒温室中取出种子染色结束要马上鉴定，因为如果久放已染色的种子可能会褪色。
七、思考题
1、为什么要以杀死的种子作为空白对照？
答：在分光光度法的实验过程中，样品及标样加了处理剂，处理剂就可能会含有被测物质，使用空白对照就是去掉除被测物质外所带来的结果误差。
进行对照，可以清晰观测出实验的结果。
2、为什么需要进行恒温处理？
答：使种子保存在相对稳定的条件下进行反应，以减少环境所照成的误差，且该温度是种子参与氧化活动的最适温度，有利于实验的进行。
（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。
可复制、编制，期待你的好评与关注）。