幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序

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幽门螺杆菌鉴定操作步骤

幽门螺杆菌鉴定操作步骤

幽门螺杆菌鉴定生化鉴定:(1) 尿素酶试验(自己配置)用灭菌的接种环挑取适量菌落接种于尿素酶琼脂中,放入恒温培养箱中37℃培养约5min 后观察,幽门螺杆菌尿素酶阳性,可以分解周围试剂中的尿素,使培养基由酸性变成碱性,指示剂酚红由黄色变成红色。

(2) 氧化酶试验(公司购买试纸条)用牙签刮取适量菌落轻轻涂抹于白色的氧化酶试纸条上,幽门螺杆菌阳性则在接触部位出现深蓝或黑色的反应。

(3) 触酶试验在载玻片中央滴加1~2 滴3%H2O2溶液,用牙签挑取适量菌落,幽门螺杆菌阳性则立即可见连续气泡产生,反应剧烈形成持久的泡沫。

革兰染色镜检(革兰染液可购买)(1) 涂片:滴加1 滴生理盐水于洁净的载玻片上,用接种环挑取固体培养上生长的可疑菌落少许,在生理盐水中均匀涂开。

(2) 固定:待水分完全挥干后,在酒精灯火焰处来回通过2~3 次固定标本。

(3) 初染:在玻片上滴加革兰染液1 至覆盖菌膜,染色1min,用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去,沥去水分。

结晶紫色染色:将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1分钟。

(4) 媒染:滴加革兰染液2 至覆盖菌膜,染色1min,用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去,沥去水分。

滴加卢哥氏碘液,媒染1min。

(5) 脱色:滴加革兰染液3,并轻轻晃动约30s,用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去,沥去水分。

连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色,立即水洗。

(6) 复染:滴加革兰染液4,染色1min,用自来水缓缓冲掉染液直至颜色基本退去,用吸水纸吸掉水滴。

滴加蕃红复染5min。

(7) 观察:待标本干燥后置于光学显微镜下,观察细菌的染色特征以及形态特征。

从临床标本分离的Hp形态往往很典型,呈细长,弯曲,S型或海鸥展翅状,革兰染色阴性。

研究认为当菌液的OD660=1 时,此时幽门螺杆菌菌液浓度约为108cfu/ml[19],测得实验所用原菌液OD660=1.12,粗略推算原菌液菌液浓度≈1.12×108 cfu/ml。

幽门螺旋杆菌检测方法

幽门螺旋杆菌检测方法

幽门螺旋杆菌检测方法幽门螺旋杆菌是一种能在胃黏膜中生存的螺旋形细菌,它是导致胃溃疡和胃癌的主要原因之一。

因此,及时准确地检测幽门螺旋杆菌对于胃部疾病的预防和治疗至关重要。

在本文中,我们将介绍几种常用的幽门螺旋杆菌检测方法。

首先,最常见的方法是呼气幽门螺旋杆菌检测。

这种方法通过让患者饮用含有尿素的溶液,然后通过呼出的气体中检测尿素酶来确定是否感染了幽门螺旋杆菌。

这种方法简单、非侵入性,并且准确率高,是目前常用的检测方法之一。

其次,幽门螺旋杆菌抗体检测也是一种常用的方法。

这种方法通过采集患者的血液样本,检测其中的特定抗体水平来确定是否感染了幽门螺旋杆菌。

尽管这种方法简单易行,但是需要注意的是,抗体检测结果可能会受到其他因素的影响,因此在临床应用中需要综合考虑其他因素。

另外,幽门螺旋杆菌的粪便检测方法也是一种常用的检测手段。

这种方法通过采集患者的粪便样本,检测其中的幽门螺旋杆菌抗原或DNA来确定感染情况。

与其他方法相比,粪便检测方法的优势在于操作简单,且对患者没有特殊要求,因此在临床实践中得到了广泛应用。

最后,内窥镜下的组织活检也是一种确诊幽门螺旋杆菌感染的重要手段。

通过内窥镜检查,医生可以直接观察胃黏膜的情况,并在需要时取样进行组织活检,通过病理学检查确定是否感染了幽门螺旋杆菌。

尽管这种方法具有一定的创伤性,但是其准确率非常高,是确诊幽门螺旋杆菌感染的“金标准”。

综上所述,针对幽门螺旋杆菌的检测方法有呼气检测、抗体检测、粪便检测和内窥镜下的组织活检等几种常用方法。

在临床实践中,医生需要根据患者的具体情况和检测手段的特点选择合适的方法,以确保诊断的准确性和及时性。

希望本文所介绍的幽门螺旋杆菌检测方法能够对临床工作者有所帮助,也能够提高患者对于幽门螺旋杆菌感染的认识和重视程度。

幽门螺旋杆菌标准值

幽门螺旋杆菌标准值

幽门螺旋杆菌标准值幽门螺旋杆菌是一种常见的胃肠道病原菌,也是胃癌和十二指肠溃疡的主要致病因素之一。

因此,对于幽门螺旋杆菌的检测和诊断具有重要意义。

下面是幽门螺旋杆菌检测的标准值及相关内容。

一、幽门螺旋杆菌检测标准值1. 快速尿素酶测试(RUT):阴性2. 红细胞凝集试验(RBC):阴性3. 呼气氢试验:正常值<20ppm4. 尿素酶链式反应(PCR)检测:阴性5. 幽门螺旋杆菌抗体检测(血清学):血清幽门螺旋杆菌抗体IgG数值正常值<10IU/ml,IgA数值正常值<4IU/ml。

二、幽门螺旋杆菌检测方法1. 快速尿素酶测试(RUT):该方法利用特定酶判定幽门螺旋杆菌存在的方法,需要从胃部粘膜分泌物中采集样本进行检测。

2. 红细胞凝集试验(RBC):该方法通过测定幽门螺旋杆菌抗体处理红细胞的凝集能力来判定幽门螺旋杆菌是否存在。

3. 呼气氢试验:该方法是一种无创检测方法,通过检测呼气气体中氢气浓度的变化来判断幽门螺旋杆菌的存在。

4. 尿素酶链式反应(PCR)检测:该方法是一种高度敏感和特异性的分子生物学检测方法,能够快速准确地检测幽门螺旋杆菌。

5. 幽门螺旋杆菌抗体检测(血清学):该方法通过检测血清中的IgG 和IgA抗体来判断幽门螺旋杆菌的感染情况。

三、幽门螺旋杆菌感染的症状常见的幽门螺旋杆菌感染症状包括:1. 腹痛和不适感。

2. 消化不良和胃灼热。

3. 恶心和呕吐。

4. 食欲下降和体重减轻。

5. 腹泻和便秘。

四、幽门螺旋杆菌感染的危害1. 导致胃炎和胃溃疡,甚至胃癌的发生。

2. 导致恶心、呕吐、腹泻等症状,严重者可能导致水分和电解质的失衡。

3. 幽门螺旋杆菌感染也与其他疾病如心血管疾病、胆囊炎、关节炎等有关。

五、幽门螺旋杆菌感染的预防和治疗1. 加强个人卫生,避免食用不洁食物和饮水。

2. 定期进行消化系统检查,避免病情进一步恶化。

3. 采用幽门螺旋杆菌治疗方案进行治疗,包括抗生素、质子泵抑制剂、降酸药等。

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测标准操作规程

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测标准操作规程

幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测标准操作规程【目的】体外检测血清幽门螺旋杆菌尿素酶抗体(HP)。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP,室负责人监督落实。

2.本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任【标本类型及实验前准备】1.由静脉抽取全血,将全血放入试管里(内无任何抗凝剂),等待血液凝固,大约室温30分钟,离心分离血清。

2.取出试剂盒、检测样本及对照等,待恢复室温后方可使用。

待一切准备就绪之后撕开水平台面上试剂盒的铝箔袋,取出试剂盒放置在【检验原理】本品系用胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗原及其单克隆抗体分别固定于硝酸纤维素膜,并和包被有胶体金标记的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗原的玻璃纤维纸片及其他试剂组成。

应用胶体金免疫层析技术,采用双抗原夹心的原理检测人血清血浆全血中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体。

检测过程中,血液标本加到试剂盒的加样孔中,样品首先和玻璃纤维纸片上的HP尿素酶抗原混合,接着再往硝酸纤维素膜上层析。

如果样本中含有胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体,这些抗体首先与包被HP尿素酶抗原的胶体金结合,这样混合物往硝酸纤维膜上层析时,便会被固定有HP尿素酶抗原的检测线(T线)捕获而形成胶体金标记抗原-抗体抗原的双抗原夹心免疫复合物,因而在T线出现一条红色线条,为阳性结果。

如果被检者血液中没有胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体存在,则不会在检测线(T线)上形成红色线条,为阴性结果。

在试剂盒上的质控线(C线)包被有抗HP尿素酶单克隆抗体无论任何情况下在检测时质控线上都应有红色线条出现以证明试剂盒工作正常。

【主要组成成分】1.胃幽门螺旋杆菌(HP)尿素酶抗体检测试剂盒:每人份试剂盒用铝箔袋单独包装;每人份试剂盒由一个试剂条组成试剂条的检测区(T线)包被有HP尿素酶抗原,质控区(C线)包被有抗HP尿素酶抗体,检测试纸的另一端是包被7HP尿素酶抗原-胶体金的纸片2.每人份1支加样吸管样只稀释液3.每盒1瓶样品稀释液【储存条件】430C避光储存,有效期24个月。

胃幽门螺旋杆菌抗体测定标准操作规程

胃幽门螺旋杆菌抗体测定标准操作规程

幽门螺旋杆菌抗体测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请:幽门螺旋杆菌抗体测定,临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 常规静脉采血约2 ml ,不抗凝,置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态,对不合格标本予以拒收。

2.1.8 下列标本为不合格标本 2.1.8.1 标本量不足。

2.1.8.2 严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.8.3 无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.8.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2 标本保存2.2.1 标本保存时间:立即测定或放置2~8℃冰箱内。

2.2.2已完成测试的标本保持完整的识别号,置4~8℃冰箱内保存7天。

3、方法原理胃幽门螺旋杆菌抗体检测试剂盒是利用胶体金技术定性检测人血清、血浆或全血中抗胃幽门螺旋杆菌抗体,是一种间接固相免疫层析技术。

当测试样品从样品孔向上迁移时,固定在幽门螺旋杆菌抗原先与测试样品中的抗体形成抗原-抗体复合物,接着抗原-抗体复合物与胶体金标记的抗人IgG 结合物结合而被检测出。

质控线含有蛋白A ,它可以与人IgG 胶体金标记抗人IgG-结合物结合,作为样品正确加入的质控指标。

4、试剂及其他用品准备厂家:MP 生物医学亚太私人有限公司。

5 质控品与室内质控规则每个测试都有质控。

6操作步骤6.1取25ul新鲜的血清标本,加入反应孔中间,等待薄膜吸入;6.2在样品刚过质控线时,加入2滴缓冲液等待薄膜吸入;6.3液刚过质控线时,拉下标有HP样的分离片直到感觉有阻力,加入1滴缓冲液等待薄膜吸入;6.4 在15钟后读取结果。

7 结果判断7.1 阴性结果:仅在质控线(A)显示颜色条带。

7.2 阳性结果:7.2.1质控线(A),CIM线(B)和测试线(C)皆显示颜色条带。

幽门螺旋杆菌金标法

幽门螺旋杆菌金标法

幽门螺旋杆菌金标法一、幽门螺旋杆菌简介幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)是一种革兰氏阴性菌,属于螺旋菌科。

它存在于人类胃黏膜表面,并与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等多种胃部疾病有着密切的关系。

二、金标法原理金标法是一种常用的HP检测方法,也被称为尿素酶快速测定法(urease rapid test)。

其原理是基于HP细菌特有的尿素酶,该酶可以将尿素分解为二氧化碳和氨。

金标试剂中含有一种指示剂,当尿素被分解后产生的氨使指示剂变色,从而可以判断样本中是否存在HP 细菌。

三、金标法操作步骤1. 准备样本:取得患者的胃黏膜组织或呼出空气样本。

2. 打开试剂盒:将试剂盒从密封袋中取出,打开包装。

3. 取样:使用采样棒或吸管等工具取得样本。

4. 滴加样本:将采集的样本滴在试剂盒上。

5. 等待反应:等待约10分钟,观察试剂盒上的指示剂是否变色。

6. 判断结果:根据指示剂颜色变化判断样本中是否存在HP细菌。

四、金标法优缺点1. 优点:(1)操作简便,快速方便;(2)对患者无创伤,不需要进行胃镜检查;(3)准确率较高,可作为初步筛查方法。

2. 缺点:(1)金标法只能检测到HP的存在与否,不能确定感染程度;(2)可能会出现假阴性或假阳性结果;(3)金标试剂需要保存在低温下,否则易失效。

五、金标法应用范围金标法适用于初步筛查HP感染患者,特别是对于不能进行胃镜检查的患者。

同时,该方法也可以用于评估治疗效果和复发情况。

六、注意事项1. 采样前应告知患者相关注意事项,并征得其同意。

2. 采集样本时要避免污染和误差。

3. 操作过程中要遵守严格的消毒规范。

4. 金标试剂要保存在低温下,不要暴露在阳光下和高温环境中。

七、总结金标法是一种简便快速的HP检测方法,可以作为初步筛查方法。

但该方法也存在一定的局限性,如不能确定感染程度和可能出现假阴性或假阳性结果等。

因此,在使用该方法时需要注意操作规范,同时结合其他检测手段进行综合分析和诊断。

幽门螺杆菌呼气检测流程

幽门螺杆菌呼气检测流程

幽门螺杆菌呼气检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。

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胃幽门螺旋杆菌抗体检测的标准操作程序

胃幽门螺旋杆菌抗体检测的标准操作程序

胃幽门螺旋杆菌(HP)抗体检测的标准操作程序【目的】本方法利用体外定性检测人血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体,辅组诊断有胃炎症状的患者是否感染了胃幽门螺旋杆菌。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、科主任。

【标本的采取和保存】(1)指尖采血:常规采集指尖末梢血,拭去第一滴血,直接让第二、三滴血滴入加样空内,或用尖吸管吸取40微升以上的新鲜全血加在加样空内,立即检测。

(2)全血:EDTA,枸橼酸钠及肝素抗凝全血均可用于检测,若不能及时检测应放置2〜8C,但一般不应超过3天(3)血清及上述抗凝血浆均可用于本检测,若不能及时检测应放置2〜8.但一般不应超过2周。

【方法原理】利用胶体金技术检测人血清、血浆或全血中胃幽门螺旋杆菌的特异性抗体。

在检测条中硝酸纤维素膜的测试区包被有胃幽门螺旋杆菌抗原,质控区标有胃幽门螺旋杆菌抗体,在样品端的玻璃纤维纸上固定有胃幽门螺旋杆菌胶体金颗粒。

检测时,加入的样品首先与包被抗原的胶体金混匀,并因毛细管作用混合液沿膜向检测区移动。

当病人样品中含有胃幽门螺旋杆菌抗体时,即与检测线上的抗原形成抗原-抗体-抗原胶体金颗粒混合物,并显示红线;质控区总会因胶体金颗粒的结合出现一条红线。

【试剂盒组成】(1)反应板:由包被有胃幽门螺旋杆菌抗原和固定有胃幽门螺旋杆菌胶体金颗粒玻璃纤维纸组成。

(2)缓冲液:0.05MTris缓冲液,添加剂和0.1%叠氮钠。

(3)其它:一次性长吸管和说明书。

【检测步骤】(1)测试前,将试剂盒、缓冲液、患者样品及阴阳性对照液恢复至温室(20 - 30°C)。

(2)待一切准备就绪之后再打开检测盒的密封袋。

标明患者姓名或对照。

(3)加样:血清或血浆样品:用所提供的尖吸管往加样孔内垂直滴加1滴(大约20ul )血清或血浆、或者使用定量加样器滴加20ul血清或血浆。

全血样品:用尖吸管往加样孔内垂直滴加2滴(大约40ul )全血,或者使用定量加加样器滴加40ul全血。

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幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测操作程序
(胶体金法)
1.目的
用于定性检测人血液样本中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体,可用于临床辅助诊断消化道胃幽门螺旋杆菌感染。

2.范围
适用于临床对幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的检测。

3.检验原理
试剂盒应用渗滤式间接法原理,将幽门螺旋杆菌尿素酶固定在硝酸纤维素膜载体上,待检血清中幽门螺旋杆菌尿素酶抗体IgGY与抗原结合形成抗原抗体复合物,加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体与复合物结合,根据是否形成肉眼可见的红色圆斑(T端),判断结果。

硝酸纤维素膜上的质控区固定有兔抗鼠IgG,加入胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体后与之结合形成红色圆斑(C端)。

4.主要组成成分
反应板:××上下对合、中央有直径为±小孔的塑料小盒,其内主要为固定有油门螺旋杆菌尿素酶抗原的硝酸纤维素膜和吸水材料
试剂Ⅰ:L PH PBS溶液,内含吐温-20.
试剂Ⅱ:主要含有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体、稳定剂和防腐剂。

5.储存条件及有效期
产品应储存在2℃-8℃条件中,不能冷冻;有效期9个月。

拆封后未用完的反应板应放入密封袋2℃-8℃保存,应在一个月内用完。

6.样本要求
样本采集:按照临床采血技术规范操作采集静脉血,采集的静脉血置室温30分钟或37℃水浴15-20分钟后,低速离心(2000转/分-3000转/分)5-10分钟,分离血清。

样本保存:若分离后的血清不能及时检测,应将样本保存在2℃-8℃条件下,若保存时间超过7天,则需将样本保存在-20℃以下并避免反复冻融,以免抗体效价降低。

当明显溶血(血红蛋白浓度>L)、黄疸(胆红素浓度>L)、高血脂(甘油三酯
浓度>L),影响血清的渗透性并明显增加反应膜的背景颜色,对结果的判断有影响,此类标本不宜使用。

7.检测步骤
滴加二滴试剂Ⅰ于反应板孔中,待完全渗入;
滴加100ul血清于反应板孔中,待完全渗入;
滴加二滴试剂Ⅰ于反应板孔中,待完全渗入;
滴加二滴试剂Ⅱ于反应板孔中,待完全渗入;
滴加二滴试剂Ⅰ于反应板孔中,待完全渗入;
操作完成后5分钟内判断结果。

8.检测结果的判断
阳性:反应板孔中C端出现红色圆斑,T端出现红色圆斑,为幽门螺旋杆菌尿素酶抗体阳性。

阴性:反应板孔中C端出现红色圆斑,T端不出现红色圆斑,为幽门螺旋杆菌尿素酶抗体阴性。

失效:反应板孔中C端不出现红色圆斑,或C、T端均不出现红色圆斑,表示失效。

可能是由于操作不正确或试剂盒失效,应重试。

9.参考范围
正常:阴性异常:阳性。

10.临床意义
本方法仅用于定性检测人血液中的胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体。

阳性结果仅表明:胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体的存在,但不能作为胃幽门螺旋杆菌感染的唯一判断标准,确诊应结合临床症状及其他诊断技术。

也可根据问诊结果,3-6个月内没有进行根除治疗者,阳性结果即为现症感染;3-6个月内有进行根除治疗者,阳性结果为疑似感染,需进行其它方法检测,或过一段时间进行重复检测。

病人曾经感染过幽门螺旋杆菌,其抗体也在较长时间存在于体内,因此抗体阳性结果并不能说明病人正感染着幽门螺旋杆菌。

阴性结果表明:样本中检测不到幽门螺杆菌抗体,但不能完全排除胃幽门螺旋杆菌感染的可能性,可能是胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体没有出现或是抗体水平过
低不能被本试剂盒检测出来。

也可根据问诊结果,3-6个月内有进行治疗者,阴性结果即为根除治疗成功;3-6个月内未进行根除治疗者,阴性结果即为未感染幽门螺杆菌。

11.检验方法的局限性
本试剂仅用于检测幽门螺旋杆菌尿素酶抗体而非直接检测幽门螺旋杆菌,因而阳性结果并不能确诊是幽门螺旋杆菌感染。

检测结果仅供临床参考,不能单独作为确诊或排除病例的依据,为达到诊断目的,对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和其他的检测结果综合分析。

抗体含量低的血清样本,不能被检测出来是可能的。

部分幽门螺旋杆菌感染的患者,不产生抗体或产生少量的抗体。

此时,可能显示阴性结果。

当检测结果与临床不符时,应用培养基进行培养或用其他方法确诊。

感染初期,IgG未产生或滴度很低会导致阴性结果,应提示患者在7-14天内复查,复查时同时平行检测上次采集的标本以确认是否出现血清学转阳或滴度明显升高。

免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者,其血清学抗体检测的参考价值有限。

12.产品性能指标
渗透时间:膜的渗透时间小于60秒。

符合率:阳性符合率和阴性符合率为100%。

批内精密度:阳性参考品和阴性参考品检测的重复性为100%。

批间精密度:阳性参考品和阴性参考品检测的重复性为100%。

最低检出限:阳性参考品用阴性参考品进行倍比稀释至1:2作为最低检出限。

交叉反应:本试剂盒的检测与解脲支原体抗体阳性血清存在交叉反应,未发现与以下病原体抗体阳性血清存在交叉反应:乙肝病毒、丙肝病毒、克莱伯氏菌。

干扰试验:样本中含有EDTA、柠檬酸钠、肝素钠等抗凝剂时不影响结果,当RF 浓度高于350IU/ml时,有假阳性出现,ANA、ENA自身抗体,通常不影响试验结果。

血清中胆红素、血红蛋白、血脂在通常情况下不会影响试验结果,但当它们的浓度分别超过L、L、L将干扰结果观察,此类标本不宜使用。

13.注意事项
本品仅供体外检测之用。

在盒签标明的有效期内使用。

血液收集后尽快分离血清或血浆避免溶血,只有清亮的非溶血样本可用。

请将低温保存的血清或血浆样本恢复到室温后使用,不要反复冻融。

试验中所有样品均应作为传染性物品处理。

检测线的颜色强度随样品中幽门螺杆菌尿素酶抗体浓度的变化而变化,但不宜用于检测幽门螺杆菌尿素酶抗体的浓度。

14.参考文献:
尚红,王毓三,申子瑜主编《全国临床检验操作规程》
三明博峰生物科技有限公司幽门螺旋杆菌尿素酶抗体检测使用说明书。

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