LpPLA2人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测试剂盒ppt课件
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求北奥泰康
脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2的浓度。
1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=6.5）50mmol/L 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=8.0）50mmol/L 包被鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体的胶乳悬浊液<0.5%1.2.2校准品的组成校准品为液体，校准品组成是在磷酸盐缓冲液中加入含一定浓度的脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。
1个水平校准品目标浓度为800ng/mL，浓度有批特异性，具体定值详见瓶签。
1.2.3质控品的组成两水平液体质控品，在磷酸盐缓冲液中加入脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。
靶值范围分别为：（90～200） ng/mL、（200～500）ng/mL。
2.1 外观试剂R1为无色至淡黄色澄清液体；试剂R2为乳白色悬浊液；校准品为无色至淡黄色澄清液体；质控品为无色至淡黄色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度试剂空白吸光度应在0.2～2.0之间。
2.4 空白限试剂空白限应不大于10ng/mL。
2.5 分析灵敏度测定分析灵敏度：浓度为160ng/mL时，吸光度变化应≥0.01。
2.6 线性测试血清样本，试剂线性在(0，800] ng/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.99；测定结果在(0，200] ng/mL时绝对偏差不超过±20ng/mL；在（200，800] ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。
2.7 重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。
2.8 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。
2.9 准确度回收实验：回收率在90%～110%。
2.10质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。
2.11校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至脂蛋白相关磷脂酶A2纯品（来源：Sigma；纯度≥95%）。
脂蛋白相关磷脂酶A2 Lp-PLA2ppt课件
我们期待 更优的 预测动脉硬化性疾病及其心脑血管事件风险的 血清标志物！
——Lp-PLA2，脂蛋白相关磷脂酶A2——
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欧美各国指南一致推荐
无症状成人心血管疾病风险评估指南（2010版）
“可考虑对中等风险的无症状成人进行LpPLA2 检测以进一步评估心血管疾病风险。”
——美国心脏病协会基金会和美国心脏协会
7
来源：1Castelli , Atherosclerosis 1996, 124 suppl(1):S1-9 ; 2Genest et al. J Am Coll Cardiol . 1992; 19(4): 792-802.
HCY vs hs-CRP
生化特性 产生部位
作用机理
HCY
人体蛋氨酸代谢的中间产物
作用 • 水解血小板活化因子，因此也叫做血小板活化因子乙酰水解酶
摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告
中国工程院院士，美国心脏病学院院士 著名心血管专家 张运教授
“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)已成为AS 抗炎治疗的新靶点，初步研究发现通过抑制磷脂酶 A2，可以减少血管壁脂质的沉积和巨噬细胞的浸
润。”
摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》
11
Lp-PLA2的生化特性 Lp-PLA2的临床应用
血清标志物检测
操作简单，一管血清 即可完成检测，可与 其他项目同步测定， 非常适合大规模筛查。 对硬件要求不高，许 多POCT设备即可完 成检测，适合各医疗 单位和机构开展。
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多种细胞因子或趋化因子参与AS形成过程
泡沫细胞
脂纹
临界病变
动脉粥样化
纤维斑块
粥样斑块合并 病变/破溃
信号分子 细胞/趋化因子
人磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒说明书
人磷脂酶A2(PL-A2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中磷脂酶A2(PL-A2)含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PL-A2抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PL-A2抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PL-A2呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板：一块（96孔）2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000 ng/ml，请先稀释至100 ng/ml，再做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别稀释成100ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml 的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml。
4. 检测稀释液A：1×10ml。
5. 检测稀释液B：1×10ml。
6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
LpPLA2人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测试剂盒ppt课件
PC和ox-FA，因此具有促炎症和促动脉粥样硬 化的作用 。
Lp-PLA2在粥样斑块形成中的作用
血管腔 氧化型 LDL
内膜
单核细胞 细胞因子
粘附分子
粥样斑块形成
Lp-PLA2
溶血卵磷脂 氧化脂肪酸
巨噬细胞
泡沫细胞
中膜
稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比
是一个可用于冠心病药物干 在干预治疗中不是一个特异靶点 预治疗的特异靶点
Lp-PLA2生物变异性低
% with Elevated Biomarker % Intra-Individual CV
50% 40%
46%
50% 40%
42.6%
30% 20%
30% 20%
22.8%
10% 4%
0%
Lp-PLA2
hs-CRP
血管内皮炎症的标记物
全身性炎症的标记物
由巨噬细胞产生
全身炎症急性期由肝脏产生
在血管炎症过程的早期阶段 在心血管疾病中的具体作用不清
启动
楚
不受其他炎症性疾病影响 在所有炎症性疾病患者中均升高
是一个可用于冠心病药物干 在干预治疗中不是一个特异靶点 预治疗的特异靶点
Lp-PLA2 vs HCY
的炎性反应标志物
内容
• 心脑血管疾病现状及研发背景 • Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系 • 临床研究 • 临床意义 • 康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒简
介 • 产品详解与注意事项
Lp-PLA2
• 脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。 • 又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。 • 分子量为45KDa 。 • 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，
脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)
脂蛋白相关磷脂酶A2脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase2,Lp-PLA2)，亦称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH），由PLA2G7基因编码的441个氨基酸组成，分子量约为45 kDa。
Lp-PLA2经成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。
近年来越来越多的证据表明其具有促进动脉粥样硬化(AS)的作用，是AS中的一种新的炎性反应标志物。
Lp-PLA2在血液中的浓度可动态地反映动脉粥样斑块的炎症程度，浓度越高风险越大。
此外，检测血中Lp-PLA2水平可以用来识别冠心病的高危个体，根据Mayo Medical Laboratories的研究，当血液中Lp-PLA2浓度高于235ng/mL，提示心肌梗死、冠心病和缺血性脑卒中等心血管疾病的发生的风险。
Lp-PLA2为反映动脉粥样硬化斑块破裂及血栓形成事件的独立风险因子，与其具有高度一致性及精确性，是急性动脉粥样硬化血栓复发事件高风险患者的准确风险评估标志物。
人Lp-PLA2单克隆抗体科赛格最新推出一批高质量的抗人Lp-PLA2单克隆抗体，其中4株抗体能够用于高灵敏度的双抗夹心法免疫检测。
利用我公司化学发光检测平台对自产抗体对进行表征，显示其检测范围广，灵敏度高。
检测范围约为0.13-1000ng/mL，最低检出限可达0.13ng/mL。
将所推荐的抗体对经过大量的正常血清样本、贫血样本和炎症病理样本测试，临床检测结果显示符合率高。
性质参数靶标种属人类宿主Balb/c小鼠融合细胞Sp2/0免疫原人脂蛋白相关磷脂酶A2纯化方式Protein G亲和纯化保存缓冲液磷酸盐缓冲液（pH7.4）应用范围化学发光法，胶乳增强免疫比浊法等货号CSB-DA113BmN①, CSB-DA113BmN③, CSB-DA113BmN④, CSB-DA113BmN⑤.校准曲线所有的单克隆抗体分别用作捕获抗体和标记抗体，然后组合成不同抗体对，用于双抗夹心法免疫检测。
脂蛋白相关磷脂酶ALpPLA课件
（PAF-AH） • 水解LDL上氧化的磷脂，生成促炎物质溶血卵磷脂(Lyso-PC)和氧
化游离脂肪酸(ox-FA)，具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。
来源：Koenig et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007;27:15-26
操作简单，一管血清 即可完成检测，可与 其他项目同步测定， 非常适合大规模筛查。 对硬件要求不高，许 多POCT设备即可完 成检测，适合各医疗 单位和机构开展。
多种细胞因子或趋化因子参与AS形成过程
泡沫细胞 脂纹
临界病变
动脉粥样化
纤维斑块
粥样斑块合并 病变/破溃
信号分子 细胞/趋化因子
IL-1 IL-6* TNF-α IL-18*
Lp-PLA2致动脉粥样硬化机理
吸烟、药物、高血压、糖尿病、高HCy
血 管 腔
内膜
ROS
LDL ox-LDL
溶血卵磷脂 游离脂肪酸
Lp-PLA2 LDL
中膜 外膜
吞噬
单核细胞
巨噬细胞
中膜平滑肌细胞增殖
来源：胡大一 .临床内科杂志. 2004,21(1): 2-4
及早预防能降低动脉粥样硬化的风险
针对性的干预和治疗 >>>>动脉粥样硬化高危人群筛选
血管造影
操作复杂，受临床医 生个人经验影响大， 病人依从性差，不适 合大规模筛查。 硬件要求高，不适合 在乡镇卫生院等医疗 条件相对较差的地方 开展。
血清标志物检测
冠心病患者LDL-C水平： 72%的患者低于130 mg/dL
LDL-C < 130 (mg/dL)
LpPLA2人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测试剂盒2 48页PPT文档
2019 ESC 欧洲心血管疾病预防临床实践指南 •对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测
Lp-PLA2 以进一步评估风险。
国内专家一致认可
中华医学会心血管病学分会 主任委员，著名心血管专家
胡大一教授
——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)是 血管内皮炎症的独立危险因子，也是目前 检测血管内皮炎症的新指标。对心脑血管 栓塞性疾病的预测、治疗和预后的判断具 有重要意义。”
耿庆山
• 中国医药生物技术协会副会长
于修成
• 科技部火炬高技术产业开发中心处长
雷庆西
• 中国医师协会心脏外科医师分会副会长 孙立忠
• 中国医师协会检验医师分会会长
丛玉隆
• 北京大学第三医院心内科主任
高炜
• 北京大学首钢医院心血管医学中心主任 王宏宇
• 卫生部北京医院心内科主任
许峰
心脑血管疾病是造成人类死亡的 主要病因
“心血管医生最关心的一点就是高危患者心血管事件发生风险。 如果能够早期预防，在发生重大事件之前把危险控制住，那就可以减 少病死率。但目前临床常用的检测指标如肌苷激酶等出现时为时已晚， 而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为临床提供了一个预警及风险评估的 有力工具。”——北京大学第三医院心内科主任 高炜
“现有的检验指标如胆固醇、LDL、HDL确实在心血管疾病风险 评估方面发挥一定作用，但并不全面。甚至有些方法如血小板活化检 测还不够稳定。因此实验室迫切需要一个方法稳定、特异性强又独立 于胆固醇之外的风险评估方法，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测就提 供了这样一个方法。”—— 中国医师协会检验医师分会会长 丛玉隆
的炎性反应标志物
内容
Lp-PLA2(人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2)定量检测试剂盒
不受其他炎症性疾病影响
是一个可用于冠心病药物干 预治疗的特异靶点
在所有炎症性疾病患者中均升高
在干预治疗中不是一个特异靶点
Lp-PLA2 vs HCY
Lp-PLA2
血管内皮炎症的标记物
HCY
人体蛋氨酸代谢的中间产物
当血管内皮受损时，由巨噬 细胞产生
在血管炎症过程的早期阶段 启动，具有促进炎症和动脉 粥样硬化的作用
中华医学会心血管病学分会 主任委员，著名心血管专家 胡大一教授
摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告
——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)已 成为AS抗炎治疗的新靶点，初步研究发现 通过抑制磷脂酶A2，可以减少血管壁脂质 的沉积和巨噬细胞的浸润。”
摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》
中国工程院院士，美国心脏病 学院院士，著名心血管专家 张运教授
Packard (WOSCOPS), N Engl J Med 2000 – CHD Blake (WHS), J Am Coll Cardiol 2001 – CHD Blankenberg (AtheroGENE), J Lipid Res 2003 - CAD Ballantyne (ARIC), Circulation 2004 - CHD LDL < 130 Winkler, J Clin Endocrinology and Metabolism 2004 – CHD Oei (Rotterdam), Circulation 2005 – CHD Brilakis (Mayo Heart), Eur Heart J 2005 – CHD Ballantyne (ARIC), Arch Intern Med 2005 – Stroke Oei (Rotterdam), Circulation 2005 – Stroke Winkler (LURIC), Circulation 2005 – CHD Khuseyinova (HELICOR), Atherosclerosis 2005 – CHD Koenig (KAROLA), Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005 – CVD May (Intermountain Heart), Am Heart J - CHD Jenny (CHS), AHA-EPI Abstract 2006 – MI Elkind (NOMAS), Arch Intern Med 2006 – Stroke O’Donoghue (PROVE IT), Circulation 2006 – CVD Corsetti (THROMBO), Clinical Chemistry 2006 - CHD Gerber (Olmsted County), ATVB 2006 - Death S/P MI Oldgren (GUSTO / FRISC), Eur Heart J 2007 - Acute ACS Sabatine (PEACE), AHA-Scientific Sessions 2006 - CVD Persson (Malmo), Arterioscler Thromb Vasc Biol 2007 - CVD Mockel (NOBIS-II), Clin Res Cardiol 2007 – CVD Hatoum (Nurse’s Health Study), Circ Suppl 2007 – MI Daniels (Rancho Bernardo), JACC 2008 – CHD Corson MA et al, Am J Card Suppl 2008:101 (41F-50F)
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2011.7.16 北京 钓鱼台国宾馆
国家863高科技成果 中国首家和唯一上市产品
• 中国首家和唯一上市产品
• 国家863科技攻关项目高科技成果
• 快速监控和预测心脑血管栓塞性疾病
• 填补中国心脑血管疾病快速预警检测的空白
• 与会专家：
• 中国人民解放军总后卫生部原副部长
陈新年
• 广东省卫生厅副厅长
Lp-PLA2检测比hs-CRP具有更高的特异性。
2012 ESC 欧洲心血管疾病预防临床实践指南 •对有复发急性血栓事件的高风险患者可以检测
Lp-PLA2 以进一步评估风险。
国内专家一致认可
中华医学会心血管病学分会 主任委员，著名心血管专家
胡大一教授
——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)是 血管内皮炎症的独立危险因子，也是目前 检测血管内皮炎症的新指标。对心脑血管 栓塞性疾病的预测、治疗和预后的判断具 有重要意义。”
小型坏死脂质池
厚纤维帽
薄纤维帽
大型坏死脂质池
血管腔
血管腔
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
血栓
Lp-PLA2
稳定斑块 • Lp-PLA2 含量较低(深色染色) • 纤维帽厚，胶原含量高 • 小型坏死脂质池 • 炎症程度较轻
Lp-PLA2
易损斑块 • Lp-PLA2 含量较高(深色染色) • 纤维帽薄，胶原含量低 • 大型坏死脂质池 • 炎症程度较重
的炎性反应标志物
内容
• 心脑血管疾病现状及研发背景 • Lp-PLA2与动脉粥样硬化的关系 • 临床研究 • 临床意义 • 康尔克Lp-PLA2定量检测试剂盒简
介 • 产品详解与注意事项
Lp-PLA2
• 脂蛋白相关磷脂酶A2，英文缩写Lp-PLA2。 • 又称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。 • 分子量为45KDa 。 • 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，
人血浆脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2) 定量测定试剂盒
中美合资·天津康尔克生物科技有限公司
国际研究一致结果
125,000+
受试者
在国际主流专业杂志和会议报告中，已有超过100项临床研究和
综述分析的结果支持Lp-PLA2 作为一个心血管疾病的标志物 在传统危险标志物的基础上提供了新的信息
国际权威指南一致推荐
2010 ACCF/AHA 无症状成人心血管风险评估指南
•可考虑对中等风险的无症状成人进行Lp-PLA2 检测
以进一步评估风险。
2011 AHA/ASA 卒中一级预防指南 •在未有心血管疾病的患者中检测炎症指标如hs-CRP或
Lp-PLA2可以鉴别出有较高卒中风险的患者。
2012 AACE 高脂血症管理与动脉粥样硬化预防指南 •一些研究证明，在有必要进一步对患者进行风险评级时，
摘自2012中国脑卒中大会主题论坛报告
——“脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2)已 成为AS抗炎治疗的新靶点，初步研究发现 通过抑制磷脂酶A2，可以减少血管壁脂质 的沉积和巨噬细胞的浸润。”
摘自《动脉粥样硬化不稳定斑块的研究进展》
中国工程院院士，美国心脏病 学院院士，著名心血管专家 张运教授
临床一线期待已久
Myerburg R J , Junttila M J Circulation 2012;125:1043-1052
Copyright © American Heart Association
Myerburg RJ et al. Circulation.2012;125:1043-1052
研发背景
Corson MA et al, Am J Card Suppl 2008:101 (41F-50F)
耿庆
• 中国医药生物技术协会副会长
于修成
• 科技部火炬高技术产业开发中心处长
雷庆西
• 中国医师协会心脏外科医师分会副会长 孙立忠
• 中国医师协会检验医师分会会长
丛玉隆
• 北京大学第三医院心内科主任
高炜
• 北京大学首钢医院心血管医学中心主任
王宏宇
• 卫生部北京医院心内科主任
许峰
心脑血管疾病是造成人类死亡的 主要病因
“我国一年心外科手术量已达到18.5万例，但还远不能满足我国 患者需要，原因就在于我国心血管疾病发病率太高，每年新增冠心病 患者300万。因此预防的作用比治疗更重要，并且其社会效益要远高 于手术。而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为心血管疾病预防提供了一 个有力武器。” ——中国医师协会心脏外科医师分会副会长 孙立忠
“心血管医生最关心的一点就是高危患者心血管事件发生风险。 如果能够早期预防，在发生重大事件之前把危险控制住，那就可以减 少病死率。但目前临床常用的检测指标如肌苷激酶等出现时为时已晚， 而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测为临床提供了一个预警及风险评估的 有力工具。”——北京大学第三医院心内科主任 高炜
“现有的检验指标如胆固醇、LDL、HDL确实在心血管疾病风 险评估方面发挥一定作用，但并不全面。甚至有些方法如血小板活化 检测还不够稳定。因此实验室迫切需要一个方法稳定、特异性强又独 立于胆固醇之外的风险评估方法，而脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测就 提供了这样一个方法。”—— 中国医师协会检验医师分会会长 丛 玉隆
并受炎性介质的调节。 • 水解ox-LDL-C上的磷脂，生成促炎物质lyso-
PC和ox-FA，因此具有促炎症和促动脉粥样硬 化的作用 。
Lp-PLA2在粥样斑块形成中的作用
血管腔 氧化型 LDL
内膜
单核细胞 细胞因子
粘附分子
粥样斑块形成
Lp-PLA2
溶血卵磷脂 氧化脂肪酸
巨噬细胞
泡沫细胞
中膜
稳定斑块vs易损斑块组织学特征对比
动脉粥样硬化（AS)是造成心脑血管疾病的主要原因
AS是一种炎症反应性疾病
在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性 介质的参与
寻找一个能够反映这种动态变化过程的炎性介质就能 够检测并跟踪动脉粥样硬化的严重程度
目前脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-Associated Phospholipase A2，Lp-PLA2)已被国际专家公认为一种新
男 性
女 性
恶恶性性肿肿瘤瘤心心脏脏病病脑脑血血管病管病呼呼吸吸系统系疾统病 疾 病
来源：《2012中国卫生统计年鉴》
来源:美国国家健康中心2012年统计数据
心脏猝死：经常是首次心脏病爆发
Clinical circumstance at the time of sudden cardiac arrest.