微生物细胞工程
细胞工程的原理及应用
细胞工程的原理及应用概述细胞工程是一种基于细胞生物学和工程学的交叉学科，旨在通过利用先进的细胞培养技术和工程设计原理，对生物体内的细胞进行改造和重构，从而实现对细胞行为的精确操控和调控。
细胞工程的原理和应用已经在生物医学、生物能源和环境保护等领域得到广泛应用，为解决许多重大问题提供了希望。
细胞工程的原理细胞工程的原理涉及多个方面，包括细胞培养技术、基因编辑和调控、生物反应器的设计等。
1. 细胞培养技术细胞培养技术是细胞工程的基础，通过优化培养基组分、培养条件和培养器具等，可以实现对细胞生长和代谢的控制。
常用的细胞培养技术包括批培养、连续培养和悬浮培养等，这些技术可以根据需要选择，并通过调整培养条件来满足特定的研究目的。
2. 基因编辑和调控基因编辑和调控是细胞工程中的关键技术，通过对特定基因的编辑和调控，可以实现对细胞行为的精确控制。
常用的基因编辑工具包括CRISPR/Cas9、TALEN 和ZFN等，这些工具可以针对特定基因进行精确的编辑和调控，从而实现对细胞功能的改造和优化。
3. 生物反应器的设计生物反应器的设计是细胞工程中的重要环节，通过合理设计和优化反应器结构和操作条件，可以实现对细胞培养的控制和调控。
常用的生物反应器包括摇瓶培养器、旋转床反应器和生物膜反应器等，这些反应器可以根据需要选择，并通过调整其结构和操作条件，以实现对细胞行为的调控和优化。
细胞工程的应用细胞工程的原理和技术在许多领域都有广泛的应用，以下列举了一些常见的应用领域：1. 生物医学细胞工程在生物医学领域的应用非常广泛。
例如，通过细胞工程可以开发新型的药物传递系统，用于精确地将药物送达到特定的细胞或组织；同时，细胞工程还可以用于生产具有特定功能的细胞，用于组织工程和再生医学等领域。
2. 生物能源细胞工程在生物能源领域的应用主要集中在生物燃料的生产方面。
通过利用细胞工程技术，可以改造细胞的代谢途径，使其能够高效地合成生物燃料，如生物柴油和生物乙醇，从而实现可持续能源的生产和利用。
微生物工程
微生物复习资料1.发酵工程：即微生物工程。
是渗透有工程学的微生物学，是传统的发酵技术与基因工程、细胞工程、蛋白质工程等相结合，具体包括菌种选育、菌体生产、代谢产物的发酵以及微生物机能的利用等。
发酵：借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动，来制备微生物菌体本身，或其代谢产物的过程。
2.菌种：用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
来源于自然界大量的微生物，从中经分离并筛选出有用菌种，再加以改良，贮存待用于生产。
3.培养基：供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。
有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。
4.菌种退化：菌种的发酵能力降低、繁殖能力降低、发酵产品的得率降低5.下游技术：发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液和动植物组织细胞与体液等中提取、分离纯化、富集生物产品的过程称为下游加工过程6.工业微生物育种方法：A、自然选育；B、生产选育；C、诱变育种；D、细胞工程育种E、基于代谢调节的育种；F、代谢工程育种G、基因重组育种；H、蛋白质工程育种；J、组合生物合成育种；K、反向生物工程育种7.菌种选育目的：改善菌种的特性，使产量提高，改进质量、降低成本、改革工艺、方便管理及综合利用等8.影响微生物生长的环境因素：温度ph 氧9.好氧发酵罐：机械搅拌式通风发酵罐、自吸式发酵罐、气升式发酵罐和塔式发酵罐10.影响种子质量的主要因素1、培养基：2、种龄与接种量3、斜面冷藏时间4、温度：温度直接影响生长和酶的合成；5、pH值：对微生物有明显的影响。
[调节方法有三种方法：用酸碱溶液中和法；使用缓冲溶液法；使用生理缓冲剂.]6、通气搅拌：[溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用]7、泡沫：8、染菌的控制9、种子罐级数11）大规模工业生产的培养方法A、固体培养（曲法培养）：浅盘固体培养，深层固体培养B、液体培养：浅盘液体培养，液体深层培养（目前几乎所有的好气发酵均采用此法）；C、载体培养：用天然（或人工）多孔材料代替麦麸之类固态基质作微生物生长的载体，营养成分可严格控制。
细胞工程在生活中的应用
细胞工程在生活中的应用
细胞工程是一种应用生物技术的领域，它涉及到利用基因工程、细胞培养、组织工程等技术，来改造、增殖、分化和运用细胞的功能。
目前，细胞工程已被广泛应用于医学、农业、环保、食品等领域，为人们的生活带来了巨大的改变。
在医学方面，细胞工程为治疗多种疾病提供了新的思路和方法。
例如，利用干细胞技术，可以培养出具有特定功能的细胞，如心肌细胞、神经细胞等，这些细胞可以被用来治疗心脏病、脑部疾病等。
此外，基因治疗也是细胞工程的一项重要应用，通过改变人体细胞的基因，可以治疗遗传疾病，如血友病、囊性纤维化等。
在农业方面，细胞工程可以被用来改良农作物、畜禽品种，提高它们的产量和质量。
例如，通过基因工程技术，可以使作物抵御病虫害的能力更加强大，提高产量，减少化学农药的使用，对环境保护也有积极的作用。
在环保方面，细胞工程可以被用来治理水体和土壤污染。
例如，通过利用细菌等微生物来分解污染物，可以达到净化水体和土壤的目的。
在食品方面，细胞工程可以被用来生产更健康、更安全的食品。
例如，利用细胞培养技术，可以生产出不需要宰杀动物的肉类，这对动物保护和环境保护都有积极的作用。
细胞工程的应用不仅推动了科技的发展，也为人们的生活带来了福音。
未来，随着技术的不断进步，细胞工程的应用领域也将不断扩
大。
细胞工程工作方案
细胞工程工作方案一、综述细胞工程是人类对生物细胞进行改造和调控的一种途径，它涉及细胞的遗传工程、代谢工程、信号转导工程、蛋白质工程等多个方面。
其应用范围广泛，包括但不限于制药工业、生物能源与环境保护等领域。
二、研究目的本研究拟以细胞工程技术为手段，旨在解决生物能源领域中的核心问题，具体包括：1. 利用细胞工程技术提高生物能源的生产效率；2. 利用细胞工程技术解决生物能源生产过程中的废弃物处理问题；3. 利用细胞工程技术开发新型生物能源生产工艺。
三、研究内容为实现研究目的，本研究将开展以下工作：1. 研究细胞工程技术在生物能源生产中的应用潜力，包括利用代谢工程手段提高生物质降解产物的生产效率；2. 开展基因编辑技术在微生物中的应用研究，以期望实现对生物降解微生物的遗传改造；3. 筛选和改良生物能源产业链中的重要微生物菌株，提高其生产能力及稳定性；4. 探索并优化新型生物能源生产工艺，包括利用特定菌株和酶的协同作用提高生物质降解效率；5. 研究细胞工程技术在废弃物降解和生物能源生产中的综合应用。
四、研究方法1. 采用代谢工程技术对生物降解微生物进行遗传改造，提高其降解效率和选择性；2. 利用基因编辑技术（CRISPR/Cas9等）对微生物菌株进行基因的精准修饰，使其适应特定的生产环境；3. 采用系统生物学的方法和生物信息学分析工具，研究并优化微生物菌株的代谢途径；4. 通过分子生物学和生物化学手段筛选并改良具有生物降解功能的酶，并进一步构建工程菌株；5. 利用微生物发酵技术和生物反应器对新型生物能源生产工艺进行优化和扩大应用。
五、研究方案的预期成果1. 已有工程菌株代谢途径的合成和调控技术；2. 具有高效降解性能的工程微生物菌株；3. 新型生物能源生产工艺的优化方案。
六、研究预期影响本研究的成果将为生物能源领域提供新的技术支持，提高生物能源的生产效率，降低生产成本，促进可持续发展。
综上所述，本工作方案将以现代生物技术手段为基础，通过对细胞工程技术在生物能源生产中的应用研究，期望为我国生物能源产业的发展提供技术支持。
科技基础知识大全
科技基础知识大全现代生物技术是以dna分子技术为基础，包括微生物工程、细胞工程、酶工程、基因工程等一系列生物高新技术的总称。
现代生物技术在农作物改良、医药研究、食品工程、治理污染、环境生物监测等方面发挥着重要的作用。
由于现代生物技术对解决人类面临的重大问题如：粮食、健康、环境和能源等将开辟广阔的前景，因此越来越为各国政府和企业界所关注，与信息、新材料和新能源技术并列成为影响国计民生的四大科学技术支柱，是21世纪高新技术产业的先导。
(一)遗传工程遗传工程的研究发展，为器官移植提供更多了一个很存有前途的新手段——利用动物的器官替代人的器官。
科学研究说明人体异种器官移植，猪较为最合适。
首先猪器官的大小与人的相当，生理上也比较吻合;其次猪在并无病原体条件下比较难圈养和难确保排钱的供体;此外猪的繁殖率低，每窝会产十几只猪崽，存活率也较低。
为了确保植入的器官不被排挤，生物学者正在培育具备人的基因的新型猪，这种猪叫转基因猪。
(二)基因治疗基因治疗就是21世纪国际生物技术的又一个热点。
基因治疗就是将外源基因通过载体引入人体内并在体内(器官、非政府、细胞等)抒发，从而达至医治的目的。
基因治疗开拓了医学防治和化疗的崭新领域。
自从年临床上首次将腺苷酸脱氨酶(ada)基因引入患者白细胞，化疗遗传病——重度联手免疫缺损病以来，利用基因治疗的手段化疗囊性纤维化(cf)、血友病，还不断扩大用作化疗肿瘤和艾滋病的临床试验已数以百计，基因治疗将引发临床医学的一场革命，将为化疗目前未有理想化疗手段的大部分遗传病、关键病毒性传染病(例如各型肝炎、艾滋病等)、恶性肿瘤、心脑血管疾病和老年病等开拓了十分宽广的前景。
可以比较悲观地指出，随着人类基因组计划的成功实行，随着“后基因组”时代的即将到来，人类23对染色体大约60亿个核苷酸的排序顺序被测量，人类基因组所涵盖的约3万个基因中与人的关键生命功能和关键疾病相关的基因将不断被辨认出，多种人类单基因遗传病和一些严重危害人类身心健康的多基因病(例如恶性肿瘤、心血管疾病等)将有可能由此获得防治、确诊和化疗。
生物工程分为哪几大工程
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回首萧瑟处，处处皆有情情，情书画不成，心中常忧叹 009911
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菌”或“工程细胞株”。后三者的作用则是这一 有巨大潜在价值的新物种创造良好的生长与繁 殖条件，进行大规模的培养，以充分发挥其内在
潜力，为人们提供巨大的经济效益和社会效益。 生物工程的应用领域非常广泛，包括农业、工业、 医学、药物学、能源、环保、冶金、化工原料、
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
回首萧瑟处，处处皆有情情，情书画不成，心中常忧叹
发酵罐生物工程包括五大工程，即遗传工程 (基因工程)、细胞工程、微生物工程(发酵工程)、 酶工程(生化工程)和生物反应器工程。在这五大
领域中，前两者作用是将常规菌(或动植物细胞 株)作为特定遗传物质受体，使它们获得外来基 因，成为能表达超远缘性状的新物种——“工程
回首萧瑟处，处处皆有情情，情书画不成，心中常忧叹
简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容
简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容一、基因工程基因工程，又称为遗传工程，是利用分子生物学技术，对生物体的遗传物质进行操作和改造，以达到定向改变生物性状和性能的目的。
基因工程的研究内容包括基因克隆与表达、基因突变与功能研究、基因组编辑等。
基因工程在农业、医药、工业等领域有着广泛的应用，如转基因作物、基因治疗、生物制药等。
二、细胞工程细胞工程是指利用细胞生物学和分子生物学技术，对细胞进行培养、改造和繁殖，以获得具有特定性状的细胞或组织。
细胞工程的研究内容包括细胞培养与繁殖、细胞分化与发育、细胞融合与基因转移等。
细胞工程在农业、医学、环保等领域有广泛的应用，如组织工程、干细胞治疗、胚胎工程等。
三、酶工程酶工程是利用酶学和生物化学技术，对酶进行分离、纯化、改造和大规模生产，以获得具有特定催化性能的酶。
酶工程的研究内容包括酶的分离与纯化、酶的改造与定向进化、酶的生产与应用等。
酶工程在工业、医药、环保等领域有广泛的应用，如生物传感器、生物催化、环保治理等。
四、发酵工程发酵工程是指利用微生物的代谢特点和反应机制，通过大规模培养和控制发酵条件，生产出具有特定性能的代谢产物。
发酵工程的研究内容包括微生物的代谢调控、发酵过程优化、发酵产物分离纯化等。
发酵工程在食品、饮料、化工、医药等领域有广泛的应用，如酒精制造、抗生素生产等。
五、蛋白质工程蛋白质工程是指利用分子生物学技术，对蛋白质进行设计和改造，以达到改变蛋白质的性状和性能的目的。
蛋白质工程的研究内容包括蛋白质结构与功能分析、蛋白质设计与合成、蛋白质修饰与改造等。
蛋白质工程在医药、农业、工业等领域有广泛的应用，如抗体药物研发、酶制剂生产等。
总结：生物技术涉及的五大工程各有其独特的研究内容和应用领域，但它们之间也存在相互联系和交叉。
基因工程和细胞工程是其他三大工程的基础，酶工程和发酵工程则分别涉及到生物催化和大规模培养技术，而蛋白质工程则更侧重于蛋白质的设计和改造。
生物细胞工程必背知识点
生物细胞工程必背知识点生物细胞工程是一门综合性学科，涉及到细胞、生物学、生物化学、遗传学、工程学等多个领域的知识。
下面是生物细胞工程的一些必背知识点，供参考。
1.细胞结构：生物细胞工程要求对细胞的结构有深入的理解，包括质膜、核膜、线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器的形态和功能。
2.细胞生理过程：了解细胞的代谢、分裂、信号传导、蛋白质合成等生理过程。
包括细胞的呼吸、光合作用、三磷酸腺苷（ATP）合成等。
3.生物分子：了解细胞内的生物分子，包括蛋白质、核酸、碳水化合物、脂类等。
理解它们在细胞功能和代谢中的作用。
4.基因组学：了解基因组结构和功能，包括DNA序列、基因编码、DNA复制和转录等。
5.蛋白质工程：了解蛋白质的结构和功能，包括蛋白质的折叠、修饰、定位等。
掌握蛋白质工程的方法和技术。
6.遗传工程：了解基因的遗传规律和遗传变异的机制。
掌握基因工程的基本原理和技术，包括基因克隆、基因表达等。
7.细胞培养技术：了解细胞培养的基础知识，包括培养基的配方、细胞传代、细胞凋亡等。
掌握细胞培养的实验技术和设备操作。
8.细胞工程应用：了解细胞工程在医学、农业、环境保护等领域的应用。
包括组织工程、干细胞治疗、转基因植物等。
9.生物伦理学：了解生物伦理学的基本概念和原则，包括生物实验伦理、生命伦理等。
掌握生物实验的伦理标准和操作规范。
10.研究方法：了解常用的实验方法和技术，包括PCR、蛋白质电泳、免疫细胞化学等。
掌握实验的设计和数据分析的方法。
11.研究文献：了解生物细胞工程领域的前沿研究和重要文献。
掌握查阅文献的方法和技巧。
12.安全知识：了解生物安全的概念和方法，包括实验室安全、实验废物处理等。
掌握实验室安全规范和操作流程。
以上是生物细胞工程的一些必背知识点，但仅仅了解这些知识还不足以掌握生物细胞工程的实践操作和理论研究。
这些知识需要通过实验实践和阅读相关文献来加深理解和应用。
希望这些知识点对你有所帮助。
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三 真菌的原生质体融合
• 真菌主要包括单细胞的酵母类和多细胞菌丝类。 • 降解真菌细胞壁、制备原生质体是融合的关键。 • 真菌的细胞壁成分较复杂，主要由几丁质及各类葡聚糖构 成纤维网状结构，夹杂着少量的甘露糖、蛋白质和脂类。 • 因此可在含有渗透压稳定剂的反应介质中加入消解酶进行
酶解，也可用蜗牛复合酶进行处理，原生质体的得率都在
（2） 原生质体的分离、再生和回复
• 直接选择法是将融合原生质体直接接种在
MM或选择性MM上，形成异核体，体内
核迁移融合形成二倍体，用理化因素处理 二倍体孢子，发生核分离和重组，生成包 括重组体在内的高频率分离子，对重组分 离子的细胞大小，核数目和DNA含量，形 态以及分离子标记进行签定和分类。
2. 种内原生质体融合
出现。
• 至今国内外已成功地进行过诸多真菌的种内、种间、
属间的原生质体融合，多为大型食用真菌，如蘑菇、 香菇、木耳、凤尾菇、平菇等，取得了相当可观的经
济效益。
四 微生物细胞工程 研究进展与应用
• （学生综述）
思考题
• 1微生物细胞工程的主要研究内容 • 2微生物细胞融合工艺
迅速发生染色体分离；赤霉素产生菌具有类似情况。
（2）原生质体融合和重组
• 原生质体融合有低频率的自发融合和高频率的诱发融合， 两者相差几个数量级。诱发融合是以等量原生质体相混合， 以CaCl2作高渗稳定溶液(pH为7)，用PEG融合，取样镜检，
达到最高融合率时，离心洗涤除去大部分PEG-Ca2+。
一种菌落形态正常，在CM上有选择地产生营养缺陷的娄 地青霉孢子；第二种菌落是由松散网状菌丝组成的异常形
态，在CM上亦产生营养缺陷的娄地青霉孢子。第三种菌
落，在MM上形成大的原养型孢子。 • 而用产黄青霉培养条件的三种菌落都能产生与产黄青霉产 生一祥的青霉素，第一和第二种菌落是异核体，第三种菌 落是异倍体或部分异倍体。
（一） 微生物细胞融合工艺
菌种选择 扩大培养 大量菌体细胞 ①高渗溶液 (SMM液、DP液) ②脱壁酶 (蜗牛酶、溶菌酶)
去融合剂 融合剂(PEG) 融合原生质体 原生质体融合 原生质体 培养基
细胞壁再生
菌落繁殖
融合体筛选
（二） 影响微生物细胞融合的因素
• 微生物原生质体融合受下列因素的影响： • ①参与融合菌株的遗传性状。 • 参与融合的菌株一般都需要有选择标记，标记主要通过诱变获得。在
下阶段原生质体破裂；
• ③混合双亲本，加适量溶菌酶，作用 20~30min；
• ④离心后得原生质体，用少量高渗培养基制成菌悬液；
（二） G+细胞融合的过程
• ⑤加入10倍体积的PEG促使原生质体凝集、融合； • ⑥数分钟后，加入适量高渗培养基稀释； • ⑦涂接于高渗选择培养基上进行筛选。 • 长出的菌落很可能已结合双方的遗传因子，要经数代筛选 及鉴定才能确认已获得能稳定遗传的杂合菌株。
• 不论近亲或远亲的种间原生质体融合，其频率比种内约 低5个级数。融合产物及其性质可能有下列几种情况： • ①形成异核体和二倍体：构巢曲霉和皱孢曲霉，其融合
产物表现为构巢曲霉种内融合产物的各种特性。
• ②形成异核体和异倍体： • 首先形成异核体，异核体状态稳定，继则核融合。娄地青
霉和产黄青霉融合可得到三种生长缓慢的原养型菌落，第
• ③形成部分异倍体： • 构巢曲霉和烟曲霉融合，种间融合频率比种内至少低5个 级数。异核体或完全异倍体状态极短，故分离不到，异核 体或二倍体状态可能是致死的。互补细胞内含有亲株一方
的完整基因组和另一方的少数染色体，是部分异倍体。在
MM上用菌丝或孢子传代可以长期保持。但在CM上的互 补细胞迅速分离为构巢曲霉或烟曲霉，但双方同不会同时
进行融合时，应先测定各个标记的自发回复突变率。若回复突变率过
高，则不宜作为选择标记。 • ②制备原生质体的菌龄。
• 制备细菌原生质体应取对数生长中期菌龄的细胞，因为此时的细胞壁
中肽聚糖的含量最低，对溶菌酶也最敏感。
（二） 影响微生物细胞融合的因素
• ③培养基成分。 • 细菌在不同的培养基中培养对溶菌酶的敏感程度不一。培养 用基本培养基比用完全培养基效果更好。 • ④细胞的前处理。 • 由于细胞壁结构的差异，同样是革兰氏阳性菌，对溶菌酶的
线照射灭活后与另一方活的原生质体融合，可提高其融合
频率5~10倍。 • 推测紫外线灭活原生质体一方或双方，诱导遗传物质的单 向传递或是致死损伤互补，而紫外线照射是否能引起附加 突变而影响遗传分析，这些问题至今未见报道。
（2） 原生质体的分离、再生和回复
• ④原生质体与脂质体融合： • 青霉素产生菌突变阻断三肽前体的生物合成，这种不产生 青霉素突变型原生质体，与包裹着α-三肽的脂质体相混合，
• 1. 霉菌原生质体融合方法
• 2. 种内原生质体融合
1. 霉菌原生质体融合方法
• （1）亲株的选择和标记： • 由于原养型亲株特性的多样化，选择不同特性的亲株进行融 合很有必要，例如：选择一株高产(或优质)、孢子形成率少或 生长速率缓慢；与另一株低产(或劣质)、孢子形成率多或生长 速率快的两菌株进行融合，很有希望获得高产(或优质)和孢子 形成率多或生长快速的融合产物。
生物原生质体。
一 微生物细胞融合
• 1972年，匈牙利Ferernczy等首先报道在微生物中的原生 质体融合，他们采用原生质体融合技术使白地霉营养缺陷 型形成强制性异核体。
• 1976年巨大芽抱杆菌、枯草杆菌、裂殖酵母等原生质体融
合取得成功，构巢曲霉和烟曲霉、娄地青霉和产黄青霉等 真菌种间原生质体融合也获得成功。
90％以上。此外还有纤维素酶、几丁质酶、新酶等。
三 真菌的原生质体融合
• 真菌原生质体融合的要点与前述细胞融合类似，多以PEG 为融合剂，在特异的选择培养基上筛选融合子。 • 但真菌多为单倍体，只有形成真正单倍重组体的融合子才
能稳定传代；杂合双倍体和异核体的融合子遗传特性不稳
定，需经多代考证才能最后断定是否为真正的杂合细胞。
• 根据细胞壁成分的差异将细菌分成革兰氏阳性细菌和革兰
氏阴性细菌两大类。 • 前者肽聚糖约占细胞壁成分的90％，而后者的细胞壁上除 了部分肽聚糖外还有大量的脂多糖等有机大分子。由此决 定了它们对溶菌酶的敏感性有很大差异。
二 原核细胞的原生质体融合
• 溶菌酶广泛存在于动植物、微生物细胞及其分泌物中。它 能特异地切开肽聚糖中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰葡萄糖胺之 间的β-1，4糖苷键，从而使革兰氏阳性菌细胞壁溶解。
用PEG诱导融合，融合产物可产生较大量青霉素。
• 脂质体可作为遗传物质和其他生物活性化合物或代谢中间 物的载体，通过与原生质体融合而传递。
（2） 原生质体的分离、再生和回复
• ⑤融合产物的选择：
• 间接选择法是将融合原生质体涂布于CM上生长，再 影印于MM或选择性MM上，由于多数融合原生质体 在核融合前就发生分离，成为两亲株标记的分离子， 少数菌落即为异核体并长成二倍体。
• 由于革兰氏阴性细菌细胞壁组成成分的差异，处理革兰氏
阴性菌时，除了溶菌酶外，一般还要添加适量的EDTA(乙 二胺四乙酸)，才能除去它们的细胞壁，制得原生质体或 原生质球。
（一） PEG融合示意图
（二） G+细胞融合的过程
• ①分别培养带遗传标志的双亲本菌株至细胞壁最易被降解 指数生长中期； • ②分别离心收集菌体，用高渗培养基制成菌悬液，以防止
（三） G-细胞融合的过程
• 革兰氏阴性细菌，在加入溶菌酶数分钟后，应添
加0.1 mol/L的 EDTA-Na2共同作用15~20min，则 可使90％以上的革兰氏阴性细菌转变为可供细胞
融合用的球状体。
• 尽管细菌间细胞融合的检出率仅在10-5～10-2之间，
但由于菌数总量十分巨大，检出数仍是相当可观
三 真菌的原生质体融合
• （一）酵母的原生质体融合 • （二） 霉菌的原生质体融合
（一）
酵 母 的 原 生 质 体 融 合
融 合 技 术 要 点
（一） 酵母的原生质体融合
（一）
酵 母 的 原 生 质 体 融 合
（二） 霉菌的原生质体融合
• 简要介绍霉菌（丝状真菌）原生质体融合的基本方法，种 内和种间原生质体融合和融合产物的生化遗传分析，以及 原生质体融合在工业上的应用。
敏感程度也不一样。芽孢杆菌对溶菌酶的敏感性大于棒状杆
菌。在棒状杆菌制备原生质体前，菌体前培养需要添加少量 青霉素以阻止肽聚糖合成过程中的转肽作用，从而削弱细胞
壁对溶菌酶的抗性。
二 原核细胞的原生质体融合
• 细菌是最典型的原核单细胞生物，细胞外有一层成分不同、 结构相异的坚韧细胞壁，形成抵抗不良环境因素的天然屏 障。
• 融合原生质体接种到MM或选择性MM平板上再生和回复 成为正常细胞。
（3）原生质体回复
• 细胞壁合成后立即发生细胞分裂，分裂几代后，才能回复 成为正常细胞形态。 • 形态多样化取决Biblioteka 各自细胞分裂方式。当细胞分裂受到干
扰时，会出现各种畸变形态的细胞；不受干扰的细胞分裂，
将回夏成为正常细胞。 • 所有回复体细胞都能保持稳定的传代。
• （1）异核体形成：
• 营养标记互补的原生质体融合，导致异核
体形成。异核体产量取决于融合频率，
Ca(NO3)2或CaCl2和低浓度PEG于pH则可
获得优良结果。
• 异核体发展产物有以下几种。
• ①形成异核体和偶见的稳定二倍体——曲霉和青霉属的一
些种是这种异核体的典型代表。 • ②形成异核体和常见的短暂二倍体—— 顶头孢霉在原生 质体融合中容易产生高频率的异核体，但异核体极不稳定， 只分离到极少数杂合原养型茵落，二倍体阶段相当短暂，
一 微生物细胞融合
二 原核细胞的原生质体融合