鱼类淋巴细胞的分类和研究
鱼类免疫学概述-精品文档
7.粘膜免疫组织及粘膜免疫应答： 分布于皮肤、鳃和肠等器官中的粘膜相关淋巴组织,又称为粘 膜淋巴组织（mucosa-associated lymphoid tissue, MALT）， 它们共同构建了鱼体免疫的组织细胞学基础（Dalmo et al., 201 9; Delamare-Deboutteville et al., 2019; Cain et al., 2000; Ro mbout et al., 1993）。由其承担的免疫应答反应为粘膜免疫应 答。
1.1.3 肠 免疫组织与细胞： 比较解剖学研究结果表明，大量的白细胞群分布于肠道粘膜组织中；Rom ano等（2019b）及Heidi（2019）对鲤鱼、Santos等（2019）、Scapigliati (2019)对鲈鱼的肠单细胞悬液中的白细胞进行单抗间接荧光标记及流式细胞 计数后发现，鱼肠组织中存在一定数量B、T细胞。 免疫因子： 诸多学者已经证明鱼类肠道内分泌粘液（Jones et al., 2019; Hart et al., 1988; Joosten et al., 2019; Esteve-Gassent et al., 2019）及胆汁（Romb out et al., 1986; Lobb et al.,1981b; Jenkins et al., 1994; Vervarcke et al., 2019）中存在抗体蛋白；Mulder等（2019）认为，在虹鳟鱼肠粘膜组织中存 在能够合成干扰素IL-1b，IL-8,TNF-α和IFN-γ的功能细胞；另外，一些学者 还在肠组织检测到一些非特异免疫因子，如补体（Lange et al., 2019）、蛋 白酶及溶菌酶等（MagnadÓ ttir et al., 2019；华育平等，2019）。
鱼类免疫学概述
鱼类免疫学专题讨论
鱼类细胞因子研究现状免疫系统是指机体识别和消除异物的防卫系统, 主要功能是防御和维护机体自身稳定。
经典的免疫学理论将机体的抗病毒免疫分为两部分，即特异性免疫及非特异性免疫。
在进化过程中，鱼类处于连接高等脊椎动物和低等无脊椎动物的特殊地位。
其特异性免疫机制不完善，非特异性免疫占重要地位；鱼类免疫系统包括细胞免疫和体液免疫; 细胞因子( Cytokine) 是其中重要的组成部分。
它们行使非特异性和特异性免疫防御，在维持机体内环境的稳定方面发挥重要作用。
细胞因子是一类由免疫细胞和非特异性免疫细胞合成或分泌的小分子多肽物质, 具有调节多种细胞生理功能的作用。
在一般状况下, 细胞因子的分泌量很低, 或处于失活状态; 但在机体的免疫细胞或组织受到刺激发生新的基因转录后, 其含量将会大幅度上升, 并识别细胞上高亲和性的表面受体, 以协同形式合其他的细胞因子或者抗病毒分子发挥生物学效应, 发挥免疫调节作用。
目前检测鱼类体内细胞因子的方法主要有四种：1.利用遗传学分析和蛋白质/核酸序列数据；2.检测同源分析系统内的细胞因子生物学活性；3.对细胞因子和细胞因子受体的抗原交叉反应；4.生物学交叉反应，目前已经证实含有细胞因子的鱼类包细胞悬液对于哺乳动物具有影响，而哺乳动物的细胞因子对于鱼类免疫细胞也有影响。
运用以上的方法，在鱼类体内检测和推断出了几十种细胞因子的存在；目前已经分离出了包括肿瘤坏死因子（TNF），白细胞介素（IL），干扰素（IFN），一氧化氮合成酶(INOS) 和一些趋化因子在内的细胞因子。
除此之外，许多实验还证实，鱼体内细胞因子的结构、作用机制和哺乳动物的具有相似性。
细胞因子的研究在医学和兽医学领域已取得巨大的发展，但鱼类的细胞因子研究相对滞后。
目前在鱼类中已发现多种细胞因子，并且利用分子生物学技术，已经克隆到部分细胞因子的基因。
随着分子生物学和细胞生物学等理论研究的进一步透彻，目前国内外鱼类细胞因子相关研究政治多层次多方面的展开，但国内对于鱼类细胞因子相关的免疫研究领域还缺乏系统的总结。
鱼类的非特异性免疫概述
鱼类的非特异性免疫概述李新文1 吕延玲2(1.虎林市宝东镇政府农业综合服务中心 黑龙江 虎林 158407)(2.哈尔滨市农业科学研究院水产分院 黑龙江 哈尔滨 150070)对于鱼类免疫的研究很早就出现,鱼类是特异性免疫和非特异性免疫并存的脊椎动物。
但与哺乳类相比,鱼类的特异免疫系统尚不够发达,特异性免疫机制还不完善。
因此,在鱼类对外界刺激及病原生物侵袭的防御反应中,非特异性免疫起着重要作用。
现已知参与鱼类非特异性免疫反应的因子主要包括巨噬细胞、粒细胞和细胞毒性细胞等一些具有吞噬作用的细胞,以及介导一系列免疫或应激反应的蛋白分子,如补体、细胞因子、趋化因子及溶菌酶和抗菌肽等。
非特异性免疫在鱼类等水生动物的防御反应中起到重要的作用,在水产动物防病治病中具有巨大的应用潜力。
存在于鱼类血液或粘液中的具有非特异性抵抗作用的分子包括溶菌酶、抗蛋白酶(如a-巨球蛋白)、转移因子、补体、C-反应性蛋白、几丁质酶、I型干扰素。
这些物质可以直接分解细菌(如溶菌酶、补体)或真菌(如几丁质酶),抑制细菌(如转移因子)或病毒(如干扰素)的复制,或作为调理素增加吞噬细胞的吞噬量(C-反应性蛋白、补体),乃至中和细菌(如a-巨球蛋白)。
先天性的细胞反应在炎症反应中起着重要的作用,吞噬细胞受病原或宿主产生的趋化因子的作用而接近抗原。
宿主产生的化学引诱因子包括补体成分和二十碳酸,如三烯酸和脂素。
由于分离纯化巨噬细胞较容易,它们的吞噬或杀伤功能亦得到了充分的研究。
鱼类的巨噬细胞具有杀伤细菌及寄生虫幼虫的作用。
对于灭鲑产气单胞菌(A ero monas sal m onic i d a),这种杀伤能力取决于吞噬作用引起的对这种细菌的吞入以及氧化物的产生。
鱼类吞噬细胞除作为辅佐细胞具有特异性免疫功能外,是组成非特异性防御系统的关键成分,在抵御微生物感染的各个阶段发挥重要作用:粘膜吞噬细胞构成抗感染的第一道屏障;单核细胞和粒细胞等血细胞作为第二道防线可以破坏出现在循环系统中的病原生物;最后,器官和组织中具有吞噬活性的细胞能够摄取和降解微生物及其产物。
鱼类外周血淋巴细胞的分离和体外培养
∃黑龙江畜牧兽医 %科技版
2011年 2月 ( 上 ) 139
100 g /mL链霉素的 RPM I 1640液悬浮, 取 1滴细胞 悬液计数, 将细胞悬液稀释至 5 ∀ 106 个 /mL。 2. 2 鲫鱼、鲤鱼、草鱼外周血淋巴细胞的培养
将稀释至 5 ∀ 106 个 /mL 的细胞悬液分装于细胞 培养瓶中, 于 25 、5% CO2 培养箱中分别培养 12 h、 18 h、24 h后, 取 1滴细胞悬液并用 0. 4% 台盼蓝染色 计数淋巴细胞活率。
1. 080 1. 085 1. 092
4. 98 5. 43 4. 81
81. 51 88. 87 78. 72
鲤鱼
6. 52 6. 52 6. 52 6. 52
1. 077 1. 080 1. 085 1. 092
5. 12 5. 34 5. 76 5. 25
78. 53 81. 90 88. 34 80. 52
将鲫鱼、鲤鱼、草鱼断尾, 用 若干支装有 500 L 肝素钠的 5 mL 针筒取血液, 分别加入 500 m L的塑料 离心管中, 加入 2倍以上 D - H ank s液稀释; 分别取 浓度为 1. 077, 1. 080, 1. 085, 1. 092 g /m L 的淋巴细胞 分离液 2 mL 于另一离心管中, 在上面加入稀释血液 4 mL, 20 、2 000 r /m in离心 20 m in; 取出中间白细 胞层, 加入等量的 RPM I 1640液, 20 、2 000 r /m in 离心 20 m in; 弃上清液, 同上离心 2次, 弃上清液; 沉 淀细胞 分 别用 含 有 30, 50, 100 g /mL 的 ConA 或 PHA、100 mL /L 的胎牛血清、0. 01 IU /m L 青霉素和
中山大学鱼类红细胞的渗透脆性和鱼类白细胞形态和分类计数生理学实验报告
鱼类红细胞的渗透脆性与鱼类白细胞形态和分类计数一、实验目的1.学习鱼类采血取样的方法并探究红细胞的渗透脆性2.学习血液涂片的制作和染色方法3.了解鱼类血液中的白细胞特征二、实验原理1.血液由血浆和血细胞组成，血细胞中含量最高的是红细胞。
红细胞的渗透压与血压相等，使进出红细胞的水分平衡。
当血浆渗透压降低时，过量水分进入细胞，细胞膨胀成球形，甚至破裂，进而导致血红蛋白逸出，该过程称之为溶血；反之，若血浆的渗透压升高，水分析出过多，致使红细胞皱缩，沉积于试管底部。
2.将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCl溶液中：在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30% 时成为球形，体积增加45%～60% 则细胞膜损伤而发生溶血，仅留下一个双凹圆碟形细胞膜空壳。
红细胞置于低渗溶液中而引起此特性称为渗透性脆性。
3.白细胞是位于血液中的一类无色、球形的有核血细胞。
鱼类白细胞的数量因为鱼种属不同而不同，其大小与红细胞相差不大。
作为免疫系统的重要组成，白细胞比例的任何异常变化都可能意味着疾病的发生。
4.鱼类白细胞可以分为颗粒白细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞）和无颗粒白细胞（单核细胞、淋巴细胞）。
其分类计数可以通过在显微镜下观察并统计50-100个白细胞样品中不同白细胞数量，来确定不同白细胞比例。
三、实验材料、仪器、试剂与方法1.实验材料：鲈鱼2.实验仪器：显微镜、一次性采血注射器、针头、载玻片、试管、滴管、移液枪3.实验试剂：瑞氏染液（A、B液）、171 mM NaCl溶液、草酸盐抗凝剂、蒸馏水4.实验方法：将从鲈鱼身上取得的血液滴入配置的不同浓度的NaCl溶液，观察得到红细胞的渗透脆性；将血液滴到载玻片上涂片后染色，洗净后显微镜下观察白细胞形态特征图1 Wright染色条件下不同血细胞形态模式图（包含中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞）四、实验步骤1.配置不同浓度的NaCl溶液：将10支完全相同的试管分别编号1～10，按照下图向不同试管中加入不同体积的171 mM NaCl溶液和蒸馏水。
鱼类免疫学概述
7.粘膜免疫组织及粘膜免疫应答：
分布于皮肤、鳃和肠等器官中的粘膜相关淋巴组织,又称为粘 膜淋巴组织（mucosa-associated lymphoid tissue, MALT）， 它们共同构建了鱼体免疫的组织细胞学基础（Dalmo et al., 201 9; Delamare-Deboutteville et al., 2019; Cain et al., 2000; Ro mbout et al., 1993）。由其承担的免疫应答反应为粘膜免疫应 答。
鱼类免疫学概述
前言
鱼类具有与高等脊椎动物相似免疫防御系统调控基因及基因控制产物， 具备机体行使免疫功能的组织、细胞及分子基础。鱼体免疫组织除了分布 于胸腺、脾脏及头肾等器官中的系统淋巴组织（Systemic lymphoid tissu e）外，还包括分布于皮肤、鳃和肠等器官中的黏膜相关淋巴组织,又称为 粘膜淋巴组织（mucosa-associated lymphoid tissue, MALT），它们共同 构建了鱼体免疫的物质基础 ）。
关的一对免疫过程，两者相互协同、彼此加强, 两者具有部分相同的功能细胞， 例如巨噬细胞，其既可以行使非特异性免疫的吞噬功能，同时其在特异性免 疫中又具有抗原吞噬、加工、处理及呈递的功能 (Yano,2019；安庆云，201 9)。
6.系统免疫组织及系统免疫应答： 除了分布于胸腺、脾脏及头肾等器官中的免疫组织成为系统淋巴组织（Sy
鱼类的系统淋巴组织一般是由网状细胞作为框架支撑着能迁移或不能迁 移的细胞群所构成，具有一定的组织结构，其中的主要细胞群是行使淋巴 组织特异性和非特异性免疫防御的主要功能细胞，如：B、T淋巴细胞、巨 噬细胞、粒细胞等。与系统淋巴组织相比，鱼类粘膜免疫系统的组织细胞 学基础研究还不深入，其组织结构及功能细胞没有被充分认识，特别是鳃 及皮肤免疫组织的相关研究则更为薄弱，一定程度上阻碍了鱼类免疫学的 发展及免疫技术的应用。
鱼类免疫系统
鱼类免疫系统概述1 基本概念鱼类免疫系统是鱼体执行免疫防御功能的机构，包括免疫组织、免疫细胞和体液免疫因子三大类。
免疫组织和细胞是鱼类防御系统的基础，是鱼体抵御病原入侵的最初防线。
体液免疫因子作为免疫应答的效应分子对病原具有直接的防御作用。
鱼类免疫系统类似于高等哺乳动物。
分为非特异性免疫(nonspecific immunity)和特异性免疫(specific immunity)两个阶段。
前者基本等同于固有免疫应答反应(innate immune response)，后者基本等同于适应性免疫应答反应(acquired immune response)。
2 免疫组织和器官免疫组织是免疫细胞发生、分化、成熟、定居和增殖以及产生免疫应答的场所。
鱼类主要的免疫器官有胸腺（thymus）、肾脏(kidney)和脾脏(spleen) 和粘膜淋巴组织(Mucosa-associated lymphoid tissue, MALT)。
在免疫器官组成上与哺乳动物相比，鱼类最主要的区别在于没有骨髓和淋巴结。
2.1胸腺（thymus）鱼类中枢免疫器官，由淋巴细胞，淋巴母细胞，浆母细胞，分泌样细胞以及其他游离间充质细胞（巨噬细胞，肌样细胞，肥大细胞等）组成，分布于由网状上皮细胞形成的基质网孔内。
胸腺是T细胞源，主要承担细胞免疫功能。
硬骨鱼类胸腺中存在形态学上的“血胸屏障”，与高等脊椎动物相似。
2.2肾脏(kidney)分头肾(Pronephros)、中肾(Mesonephros)和后肾(Opisthonephros)三部分。
头肾是鱼类继胸腺之后第二个发育的免疫器官，同时具有造血功能。
后肾在造血及免疫方面亦有一定作用。
硬骨鱼类头肾具有类似哺乳动物中枢免疫器官及外周免疫器官的双重功能。
在不依赖抗原刺激是头肾可以产生红细胞和B淋巴细胞等细胞，是免疫细胞的发源地，相当于哺乳动物的骨髓；在受抗原刺激后，头肾和后肾造血实质细胞出现增生，而且存在抗体产生细胞，表明头肾是硬骨鱼类重要的抗体产生器官，相当于哺乳动物的淋巴结。
鱼类的免疫组织研究
鱼类的免疫组织研究近几十年来，随着世界人口的增长和消费水平的提高，世界渔业也得到了长足的发展。
但与此同时，高密度养殖模式也引起水产动物病害的频繁发生，并造成一定的环境污染。
作为主要水产养殖对象的鱼类，在其与病原和环境之问相互作用的过程中，主要是靠其免疫系统来抵御外来病原生物的侵害，通过非特异性和特异性的免疫防御机制来维持体内环境的稳定。
因此，对鱼类免疫系统的研究，不仅可以认识鱼体同病原问的作用方式，反映鱼类赖以生存的水环境的质量，还可用以研究脊椎动物免疫系统的进化规律。
1 免疫组织和器官免疫组织和器官是免疫细胞发生、分化、成熟、定居和增殖以及产生免疫应答的场所。
鱼类与哺乳动物在免疫器官组成上的主要区别在于前者没有骨髓和淋巴结，头肾为其主要的造血器官。
胸腺、肾脏和脾脏是鱼类最主要的免疫器官，黏膜淋巴组织(MALT)同样是其免疫系统的重要组分。
1．1胸腺鱼类胸腺为一成对器官，是位于鳃盖骨背连合外皮下的一对卵圆形淋巴组织，由与咽囊上皮结合在一起的原基发育而成。
淡水鱼类免疫淋巴器官发育的研究结果表明：胸腺原基是最早形成的，其淋巴化即小淋巴细胞的出现也是最早的。
海水鱼类胸腺原基的出现与淡水鱼类有所不同，出现最晚，而淋巴化最早。
鱼类胸腺淋巴细胞的起源是鱼类免疫学家们争论的焦点。
关于胸腺的起源和淋巴细胞的分化有两种假说：一种假说认为胸腺起源于咽上皮，所有的淋巴细胞来自于胸腺，直接由胸腺上皮细胞转化而来；另一种假说提出胸腺起源于外源干细胞，即来自于其他部位的于细胞移植并定居于胸腺。
胸腺细胞起源于外源干细胞这一观点在鸟类、两栖动物、爬行动物和哺乳动物已普遍接受。
在鱼类，究竟是胸腺细胞控制头肾和脾脏分化，还是由头肾造血干细胞迁移到胸腺，控制胸腺的分化呢?据报道金头鲷胸腺与头肾之间有细胞桥，在发育过程中胸腺与头肾靠拢，与头肾相连，并伴有明显的细胞迁移。
在罗非鱼、虹鳟鱼和鲽鱼也出现这种现象，因此认为头肾的淋巴细胞是从胸腺迁移来的。
鱼类免疫研究
鱼类免疫研究1.免疫球蛋白（immunoglobulin,简称Ig）是指存在于人和动物血液（血清）组织液及其他外分泌液中的一类具有相似结构的球蛋白。
依据化学结构和抗原性差异，免疫球蛋白可分为IgG,IgM,IgA,IgE和IgD。
[1]免疫球蛋白在免疫防御中起一定的作用。
对它的研究既有助于人们对高等动物Ig的个体发生及系统发育的理解;又在鱼类免疫和鱼病防治方面有重要意义。
鱼类对抗原刺激可以产生免疫应答，形成抗体。
对各种鱼类的研究表明，鱼的免疫球蛋白主要是19S型，相当于人的IgM，是系统发育中最原始的免疫球蛋白。
近年来，发现鱼的免疫球蛋白有同种异型，存在有IgD，并有膜型和分泌型两种形式。
[1]现就国内外在这方面的研究进展综述如下。
２鱼类血清Ig在真骨鱼类血清中，目前多数人认为只存在1种Ig,类似于哺乳动物的IgM,它由2条轻链(L链)和2条重链(H链)所组成的单体通过连接链“J”将4个单体连接成一个四聚体[2]。
在沟鲇、大鲮鲆、鲤和羊头鲷血清中皆发现血清Ig是四聚体，分子量700～800kD(1=1000Dalton),H链的分子量约为70kD[3-5]，也存在78kD(大鲮鲆)和45kD(羊头鲷)2种异型；L链的分子量约为19kD，但也存在25kD(鲤)、27kD(大鲮鲆)和22kD、24kD、26kD5种异型(羊头鲷)[6]。
但也有人认为真骨鱼类血清中存在着2种以上的Ig，Trump等人[7]发现鲫血清中存在着抗原性和电泳图谱各不相同的2种Ig。
软骨鱼类血清中Ig软骨鱼类的血清中目前发现有2种Ig，大的Ig分子与人的IgM相似(分子量为900kD,19S)；小的Ig分子与人IgG类似(分子量为150kD，7S)；Clem等[8]发现鲨鱼、角鲨和沙洲鲨血清Ig具有19S的五聚体和7S的单聚体2种形式。
这2种Ig皆由同一类L链和H链组成。
从斑鳐的血清中也分离出2种Ig；高分子量免疫球蛋白(HWMIg)和低分子量免疫球蛋白(LWMIg)。
鱼类免疫系统研究概况
第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese FisheriesVol.42No.5October 2023文章编号:1674-2419(2023)05-0344-03作者简介:赵露(1996-),女,汉族,天津人,硕士研究生㊂研究方向:水产动物疾病学㊂Email:441426878@㊂鱼类免疫系统研究概况赵㊀露(天津农学院水产学院,天津300384)摘㊀㊀要:随着养殖的高度集约化和养殖环境的污染,鱼类出现各种各样传染疾病,造成较大经济损失㊂人们也越来越关注鱼体自身免疫健康,其中鱼类免疫系统是一套严密的防御体系,也是机体抵御病原微生物感染㊁维持机体自身稳定和组织器官正常发育不可缺少的重要机制㊂鱼类免疫系统不仅参与宿主体内病原与免疫活性物质的识别㊁清除㊁激活和应答,而且还能够通过细胞信号传导参与各种细胞功能调控或其他基因表达调控㊂文章概述鱼类免疫系统中免疫组织与器官㊁细胞免疫和体液免疫因子的研究进展,为鱼类绿色养殖以及病害免疫防控提供基础参考㊂关键词:鱼类;免疫系统;免疫器官;免疫组织;体液免疫因子;细胞免疫中图分类号:S917.1文献标志码:A㊀㊀近年来,采用生态养殖㊁化学药物和中草药等防治鱼病,效果并不理想㊂由于养殖规模的扩大,导致鱼类疾病的大面积爆发,因此大量使用抗生素等药物来应对鱼类疾病的产生㊂由于长期大量使用抗生素等化学药品,以及饲料中部分抗营养因素的影响,导致了鱼体自身免疫系统的损伤,从而导致鱼体对疾病的抵抗力显著下降[1]㊂同时,部分细菌也开始产生耐药性,这使得抗生素等药物失效,宿主细胞的吞噬能力显著降低[2]㊂在病原菌的作用下,养殖鱼类会出现大范围的炎症反应,而目前常用的药物治疗手段效果不佳,甚至会造成鱼类疾病爆发[3]㊂大量病鱼腐烂污染水质,对养殖业绿色发展造成极大危害[4]㊂此外,由于疾病爆发导致鱼类大量死亡,养殖企业会面临巨大经济损失,而其养殖经济效益也会因此大打折扣㊂因此,了解鱼类免疫系统的结构和功能,对于开发新技术和新品种以提高鱼体的抗病能力至关重要㊂文章总结了鱼类免疫系统的研究进展,以期为更深入了解鱼类免疫应答规律,从而更好的防治各种条件性致病菌引起的鱼类感染提供参考㊂1免疫组织与器官鱼类免疫组织与器官对免疫系统细胞的分化和成熟具有重要作用㊂鱼类和哺乳类动物的免疫器官构成最大区别在于,鱼类没有骨髓,也没有淋巴㊂其免疫器官主要包括胸腺㊁肾脏㊁脾脏和黏膜相关淋巴组织(MALT)等[5]㊂胸腺:鱼类的胸腺可以促进淋巴细胞的增殖,分泌相关激素,从而增强鱼体的免疫调节能力,是一种重要的中枢免疫器官㊂在发育过程中,胸腺可最先获得成熟的淋巴细胞,而后与头肾逐渐靠拢[6]㊂鱼类胸腺大体可划分为内区㊁中区和外区,其中内区与中区为鱼体T 淋巴细胞的成熟和分化提供重要场所,并将成熟的T 细胞释放到外周血中[7]㊂肾脏:肾脏是鱼类最主要的淋巴组织,被认为是一种高度异质性器官㊂除了实现造血功能外,前肾还起着内分泌腺的作用,能自主分化为红细胞㊁淋巴细胞和多种粒细胞㊂在后肾中,与前肾不同,具有完成过滤和排泄功能㊂同时,鱼类肾脏还具有与哺乳动物淋巴结相似的免疫系统,可以直接产生相应的免疫细胞,能够抵抗外来病原体的侵袭[8]㊂脾脏:脾脏是鱼体内重要的免疫器官,具有造血和储血功能㊂它由红髓和白髓组成,能为鱼类机体供应足够的血液及大量的免疫细胞㊂在硬骨鱼类中,一般仅有一个脾脏,靠近胃部或肠部,是一种较为稳定的淋巴组织,具有清除大分子物质,降解和加工抗原以及产生抗体等功能㊂黏膜相关淋巴组织:主要位于机体黏液组织的淋巴细胞生发中心,广泛存在于鱼类的皮肤㊁鳃和消化道等上皮组织中,是鱼类除上述免疫器官外的㊃443㊃Copyright ©博看网. All Rights Reserved.第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report另一个重要免疫器官[9]㊂由于其不具有完整的淋巴结构,故称为黏膜相关淋巴组织㊂当鱼体受到外源性因素的刺激时,产生了许多针对巨噬细胞处理的抗原特异的抗体分子㊂与其它免疫因子相结合,可以增强机体的免疫力,从而保护和抵御机体不受病原微生物的侵害㊂2细胞免疫鱼类的免疫细胞主要分布于鱼体免疫器官和组织以及血液和淋巴液中㊂国内外对于鱼体免疫细胞的相关研究也有报道㊂吴璇等[10]发现灵芝多糖可以有效提高鱼机体免疫细胞活性㊂草鱼IL-2可以调控免疫细胞功能,对免疫细胞具有积极的保护作用[11]㊂药用草药可以提高免疫细胞的参数,从而提高机体免疫能力[12]㊂因此,免疫细胞的数目和分布情况在某种意义上反映出机体免疫功能的强弱㊂在机体内可以进行非特异性免疫反应的吞噬细胞以及能够产生自身特异性免疫反应的淋巴细胞都属于免疫细胞㊂这两种免疫细胞在机体的免疫调控中起着至关重要的作用㊂淋巴细胞是一种白细胞,它是机体免疫应答中的一种重要的细胞组成㊂与高等脊椎动物一样,鱼类中的B淋巴细胞和T淋巴细胞协同发生适当的免疫反应㊂T淋巴细胞起着调节机体免疫功能的作用,B淋巴细胞则起着调节机体体液免疫的作用㊂在特定的免疫应答阶段,B淋巴细胞的功能是产生抗体,以特异性地方式结合病原体,并标记它们从而被免疫系统清除㊂T淋巴细胞主要作为其他免疫细胞反应的协调者,并作为效应细胞直接杀死被感染或标记的细胞㊂鱼类的吞噬细胞主要由单核细胞㊁粒细胞㊁巨噬细胞和自然杀伤细胞等组成㊂其中,单核细胞是鱼类的天然免疫系统,在抗菌㊁抗病毒和吞噬等方面发挥着重要作用㊂粒细胞和巨噬细胞也是鱼类的主要免疫细胞,可通过分泌细胞因子㊁参与抗体产生等方式发挥免疫调节功能㊂研究发现,半滑舌鳎和鲤鱼的粒细胞在体外被细菌㊁真菌或病毒抗原刺激时会产生一种抗菌效应物,从而达到抑菌的效果[13]㊂3体液免疫因子在鱼体免疫系统中,当抗原进入机体时,非特异性免疫系统就会发挥作用,产生相应的抗体;而当抗原进入机体后,特异性免疫系统则会立即产生相应的淋巴细胞与抗体,对抗原进行清除㊂它的两个系统都包含着不同的体液免疫分子[14]㊂非特异性免疫因子和特异性免疫因子是鱼类体液免疫因子的重要组成部分㊂它们是维持机体正常免疫功能的重要分子基础㊂抗体:抗体是指当机体在遭遇抗原刺激下,一种由淋巴细胞分泌的能够与相应的抗原特异性结合的免疫球蛋白,是一种重要的免疫调节因子,参与B淋巴细胞向浆细胞转化,可增强体液免疫反应㊂目前研究人员已从许多鱼类中分离得到免疫球蛋白IgM,能参与鱼类的特异性免疫反应㊂此外,在某些鱼类中观察到了其他免疫球蛋白,如IgD㊁IgZ和IgT 等㊂抗体具有多种功能,如在鱼的上皮细胞㊁鳃和皮肤上具有抗粘附素功能,防止细菌粘附;中和无数细菌产生的毒素,避免细菌渗入未受保护的细胞㊂抗菌肽:抗菌肽(AMPs)是一类由21~35个氨基酸残基组成的多肽,能够特异性识别并结合细菌细胞膜上的脂质分子或蛋白质分子而发挥抗菌作用㊂抗菌肽具有非常广泛的生物学功能,其对于脊椎动物的先天性免疫反应(包括黏膜免疫系统)具有调节作用,特别是在黏膜感染及黏膜损伤时㊂当鱼体受到微生物刺激或损伤时,机体可以快速产生抗菌肽,从而抵御微生物及其病原菌的侵袭,在机体防御细菌及病毒等免疫过程中㊁肿瘤细胞分化和细胞凋亡方面有重要作用[15]㊂溶菌酶:溶菌酶主要分布于鱼的体表㊁血清㊁肠道黏液㊁吞噬细胞和单核细胞的胞质中,对病原细胞壁产生有效的侵袭㊂研究发现,鱼体内溶菌酶含量可随年龄和性别变化,幼鱼的溶菌酶含量高于成鱼,幼鱼中的活性最高,随着成鱼体内溶菌酶含量的减少,其活性逐渐降低[16]㊂因此,对鱼类进行定期的免疫注射可有效地提高体内溶菌酶的水平㊂溶菌酶可以作为免疫佐剂来提高免疫效果,如在饲料中添加0.05%~0.08%溶菌酶,对提高鱼类的免疫力具有良好的效果[17];此外,利用溶菌酶作为免疫佐剂还能提高机体对病原菌的抗性[18]㊂补体:鱼类的补体系统可以参与特异性和非特异性免疫反应,是鱼类免疫系统中重要的组成部分㊂研究发现,尼罗罗非鱼的补体系统分析可以作为水质和鱼类总体健康状况的生物标志物,是一种重要的免疫学指标[19]㊂在鱼类中,已鉴定出几种补体蛋白,并与哺乳动物的补体蛋白同源㊂补体系统由30多种血浆和细胞组成的蛋白质组成㊂这些蛋白一旦被激活,补体系统能够发挥重要的免疫功能,如调理㊁裂解炎症㊁调节先天和适应性免疫反应㊂4结语综上所述,由于抗生素的长期使用会造成水体㊃543㊃Copyright©博看网. All Rights Reserved.第42卷㊀第5期2023年10月黑龙江水产Northern Chinese Fisheries研究报告The research report环境恶化㊁水质污染严重,在水产动物中不断积累从而产生耐药性,甚至严重危害到人体的健康㊂因此,深入了解鱼类免疫应答规律,从而更好地防治各种条件性致病菌引起的鱼类感染至关重要㊂为了更好地预防和控制鱼类疾病的爆发,提高水产品质量安全水平㊂深入了解鱼类免疫系统,基于鱼体抗病毒天然免疫应答机理,以天然免疫反应负调控因子作为分子靶点,应用基因编辑技术选育新的抗病性鱼类新品种,从而增强鱼体自身抵御病原微生物侵袭的能力,这对水产养殖病害防控具有一定现实意义,是水产养殖业绿色发展的重要方向㊂参考文献:[1]赵奇.浅析水产养殖中的鱼病防治措施[J].南方农业, 2022,16(04):189-191.[2]文国东.水产养殖中有效强化鱼病防治工作的策略[J].乡村科技,2019,240(36):109-110.[3]史艳伟,孟丽华,蒋帮铜,等.四环素类抗生素对渔业生态环境的影响研究[J].科学养鱼,2016,322(06):52-53. [4]张骞月,赵婉婉,吴伟.水产养殖环境中抗生素抗性基因污染及其研究进展[J].中国农业科技导报,2015,17 (6):125-134.[5]姚一彬,刘臻,鲁双庆,等.鱼类免疫因子作用机制及其应用[J].湖南饲料,2011(3):32-35.[6]王俊相,李玉萍,孔令富,等.鱼类免疫系统的研究进展[J].四川畜牧兽医,2010,37(07):29-31.[7]张永安,孙宝剑,聂品.鱼类免疫组织和细胞的研究概况[J].水生生物学报,2000(6):648-654.[8]王朋辉.斑马鱼肾脏发育研究进展[J].安徽农业科学,2013,41(08):3393-3394.[9]张永安,孙宝剑,聂品.鱼类免疫组织和细胞的研究概况[J].水生生物学报,2000(6):648-654. [10]吴旋,白东清,杨广,等.灵芝多糖对黄颡鱼免疫细胞活性的影响[J].华北农学报,2011,26(3):195-198. [11]吕梦圆.草鱼白介素-2对免疫细胞功能的调控及其相关机制的研究[D].成都:电子科技大学,2022. [12]Elham Awad,Amani Awaad.Role of medicinal plants on growth performance and immune status in fish[J].Fish and Shellfish Immunology,2017,67:40-54.[13]Buchmann K.Neutrophils and aquatic pathogens[J].Par-asite immunology,2022,44(6):12915.[14]李凤玲.草鱼α2巨球蛋白的纯化㊁特性研究㊁基因扩增及其初步应用[D].南京:南京农业大学,2004. [15]王庆丰,韩跃武.鲶鱼抗菌肽parasinⅠ原核表达载体的构建与鉴定[J].国外医药(抗生素分册),2011,32(6): 279-282+286.[16]王志平,韩彦军,李亚琳,等.斑马鱼个体发育过程中的溶菌酶表达模式及其对LPS处理的应答[J].甘肃农业大学学报,2014,49(06):14-18.[17]王坛,华雪铭,朱伟星,等.饲料中添加溶菌酶对吉富罗非鱼生长㊁免疫-抗氧化功能及血清抗菌性能的影响[J].水生生物学报,2016,40(04):663-671. [18]张盛静,赵小金,宋晓玲,等.饲料添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群㊁Toll受体及溶菌酶基因表达及抗感染的影响[J].中国水产科学,2016,23(04):846-854. [19]Bavia Lorena,Santiesteban-Lores Lazara Elena,Carneiro Milena Carvalho,et al.Advances in the complement system of a teleost fish,oreochromisniloticus[J].Fish and Shell-fish Immunology,2022,123:61-74.Overview of studies on the fish immune systemZHAO Lu(School of Aquatic Sciences,Tianjin Agricultural College,Tianjin300384,China)Abstract:With the highly intensive scale of aquaculture and the poor aquaculture environment,a variety of infec-tious diseases have appeared in fish,resulting in huge economic losses.People are paying more and more attention to the autoimmune health of fish,in which the fish immune system is a set of strict defence system,which is also an indispensable mechanism for the organism to resist the infection of pathogenic microorganisms,to maintain the sta-bility of the organism itself and the normal development of tissues and organs.The fish immune system not only par-ticipates in the recognition,removal,activation and response of pathogens and immunoreactive substances in the host,but also participates in the regulation of various cellular functions and other gene expression through cellular signal transduction.The article outlines the research progress of immune tissues and organs,cellular immunity and humoral immune factors in the fish immune system,and provides a basic reference for the green culture of fish as well as the immune prevention and control of diseases.Keywords:immune system;immune organs;immune tissues;humoral immune factors;cellular immunity ㊃643㊃Copyright©博看网. All Rights Reserved.。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Thank you!
6.Fournier和Abelli分别对大菱鲆( Scophthalmus 6. 分别对大菱鲆( maximus)和海鲈( maximus)和海鲈( Dicent rarchus labrax )进行研究发现 它们的肠粘膜和粘膜下层分布有较多的T细胞, 它们的肠粘膜和粘膜下层分布有较多的T细胞,而B 细胞主要在固有层中参与粘膜免疫应答。
（1）B细胞的个体发育
如同T细胞在胸腺的发育过程，B 如同T细胞在胸腺的发育过程，B前体细胞 在骨髓中须经历选择过程，才能发育为成 熟B细胞。 ①是抗原非依赖期 ②是抗原依赖期
（2）B细胞的表面标志
① B细胞抗原受体：简称B细胞受体（B cell receptor, BCR），是指镶嵌于细胞膜脂质分子中的免疫球蛋白，称 膜表面免疫球蛋白（Surface membrane immunoglobulin, SmIg）。BCR为膜表面单体IgM和IgD，其主要功能是识别、 结合相应特异性Ag。 ② Fc受体：是B细胞表面能与IgG的Fc段结合的结构，简 称FcγR。 ③ 补体受体（CR）：主要是指能与补体裂解片段C3b和 C3d结合的受体。 ④ 有丝分裂原受体：B细胞表面的有丝分裂原受体有： LPS-R、SPA-R和PWM-R。
2.Blaxhall[25]用Percoll不连续梯度对褐鳟 (Salmo trutta)外周血淋巴细胞进行分离,发 现分布于低密度的淋巴细胞表面光滑,对 PHA的刺激较敏感,可能相当于人类的T细 胞;分布于高密度的淋巴细胞大多表面被 毛,电镜下其胞质内具有较多的线粒体,可 能相当于人类的B细胞。然而人类T细胞 的密度却高于B细胞。
③ 有丝分裂原受体：有丝分裂原是指能非特异性地刺激细 胞发生有丝分裂的物质。
④ 白细胞介素受体：如白细胞介素（Interleukin, IL） 受体有：IL-1R、IL-2R、IL-4R和IL-6R等。
此外,还有CD3,CD4和CD8等T细胞表面标志。
（3）T细胞亚群
T 细胞亚群的分化是基于 CD抗原的不同 , 而分为 细胞亚群的分化是基于CD 抗原的不同, CD4+ 和 CD8+ 两大亚群 , 然后在根据其在免疫应答 CD4 CD8 两大亚群, 中的不同功能进一步划分为不同的亚群. 中的不同功能进一步划分为不同的亚群. ① CD4+T细胞 包括幼稚辅助T细胞（TH）、TH1细胞和TH2细 胞等三种。 ② CD8+T细胞 主要包括细胞毒性T细胞（TC或CTL）和抑制性 T细胞（TS）。
鱼类淋巴细胞的分类 和研究
汪文庆 200750002135 指导老师:简纪常(教授) 指导老师:简纪常(教授)
一.鱼类淋巴细胞的分类
在淋巴细胞（Lymphocyte）中,受抗原物质刺激后 能分化增值,产生特异性免疫应答的细胞,称为免 疫活性细胞(immunocompetent cell,ICC),主要是 指T细胞、B细胞,在免疫应答过程中起核心作用. 除此之外,还有第三类群淋巴细胞，第三类群淋巴 细胞又包括自然杀伤细胞（Natural killer cell, NK）、淋巴因子激活的杀伤细胞（Lymphokine activated killer cell, LAK）和非特异性细胞 毒性细胞（Nonspecific cytotoxic cell, NCC）， 后者是鱼特有的。
二.鱼类淋巴细胞的研究
鱼类抗病的免疫功能, 鱼类抗病的免疫功能,很大程度上取决于 免疫细胞的作用. 免疫细胞的作用.而鱼类的淋巴细胞是其最 重要的免疫细胞,主要参加特异性免疫, 重要的免疫细胞,主要参加特异性免疫,因此 对鱼类淋巴细胞的研究具有重要的意义. 对鱼类淋巴细胞的研究具有重要的意义. 从上个世界七十年代开始科学工作者就 对鱼类淋巴细胞展开了研究. 对鱼类淋巴细胞展开了研究.
3.夏春, Kaattari等人发现当使用抗鱼类免疫球蛋 白的多抗时,几乎所有的淋巴细胞都呈现SmIg+ 反应,这可能是因为多抗具有抗碳水化合物活性, 与所有淋巴细胞非特异性地发生了反应 .
4.近年来单克隆抗体技术、分子生物学技术和 流式细胞术等新技术的应用,为淋巴细胞的辨别 和分离提供了有效的手段和有力的证据, Secombes, Partula, Scapigliati等人证实了鱼类同 样存在相当于哺乳动物T、B细胞的两类淋巴细 胞.
（1）T细胞的个体发育 ） 细胞的个体发育
T祖细胞(pro-T)进入胸腺后，其分化发育可分为2 祖细胞(pro-T)进入胸腺后，其分化发育可分为2 个阶段: 个阶段: ①早期T细胞主要表型为CD4-和 CD8-，称为双阴 早期T细胞主要表型为CD4 性细胞(double 性细胞(double negative cell , DN)，分化为 DN)，分化为 CD4+ CD8+双阳性细胞(double positive 双阳性细胞(double cell,DP) ; ② DP细胞经历阳性选择并获得MHC限制性识别能 DP细胞经历阳性选择并获得MHC限制性识别能 力;经历阴性选择，获得对自身抗原的耐受性，最 终发育为成熟的、仅表达CD4或CD8的单阳性 终发育为成熟的、仅表达CD4或CD8的单阳性 (singlepositive cell,SP)T细胞，然后迁出胸腺， cell,SP)T细胞，然后迁出胸腺， 移居于周围淋巴器官。
1.T淋巴细胞 1.T淋巴细胞
T细胞是胸腺依赖性淋巴细胞(thymus-dependent 细胞是胸腺依赖性淋巴细胞(thymuslymphocyte)的简称。淋巴样前体细胞(lymphoid lymphocyte)的简称。淋巴样前体细胞(lymphoid precursor)须进入胸腺，经历一系列有序的分化 precursor)须进入胸腺，经历一系列有序的分化 过程，才能发育为成熟T细胞。依据T 过程，才能发育为成熟T细胞。依据T细胞表面标 志及功能特征，可将T 志及功能特征，可将T细胞分为不同亚群。各亚群 T细胞既相互协作，又有各自功能特点，共同完成 免疫应答并发挥免疫调节功能。
（2）B细胞亚群
研究较少，分类也不统一。根据SmIg分为B1细胞和B2细 胞。B1细胞具有SmIgM，B2细胞具有SmIgM和SmIgD。
（三）第三类群Βιβλιοθήκη 巴细胞第三类群淋巴细胞是一类无典型T 第三类群淋巴细胞是一类无典型T、B细胞表面标志和特征的淋巴细胞， 细胞表面标志和特征的淋巴细胞， 主要包括以下几种。 主要包括以下几种。 1．自然杀伤细胞 自然杀伤细胞（NK）主要存在于血液和淋巴组织中， NK细胞无 自然杀伤细胞（NK）主要存在于血液和淋巴组织中， NK细胞无 特异性抗原受体，能非特异性地杀死肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞， 特异性抗原受体，能非特异性地杀死肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞， 其杀伤作用不受MHC分子的限制，故称自然杀伤细胞。 MHC分子的限制 其杀伤作用不受MHC分子的限制，故称自然杀伤细胞。 2．淋巴因子激活的杀伤细胞 ． 动物的外周淋巴细胞在IL-2诱导下生成一种新的具有杀伤作用的 动物的外周淋巴细胞在 诱导下生成一种新的具有杀伤作用的 细胞，称为淋巴因子激活的杀伤细胞，简称LAK细胞 细胞. 细胞，称为淋巴因子激活的杀伤细胞，简称 细胞
5.Romano发现鲤在孵化后几周内, T 细胞 在胸腺中达到70 % ,在头肾中也有分布。 但是以后除胸腺外,其余免疫器官中的T细 胞逐渐减少甚至消失;孵化后第二周B细胞 在头肾中出现,随后出现在脾和血液中,但 是在胸腺和肠道中却很少。而Thuvander, Navarro发现在成体鱼类的头肾、脾和外周 血中B细胞达到22—40% ,而胸腺中仅有2— 5%。
1.B淋巴细胞 1.B
B淋巴细胞是指始祖B淋巴细胞在哺乳类动物骨髓或禽类腔 上囊中发育分化成熟的淋巴细胞，故称骨髓依赖性淋巴细 胞（Bone marrow dependent lymphocyte）或腔上囊依赖 性淋巴细胞（Bursa dependent lymphocyte），简称B细 胞。鱼类的来源于肾脏，习惯称B细胞。 一般认为，B细胞是体内惟一能产生抗体(免疫球蛋白)的细 胞。B细胞的特征性表而标志是膜表面免疫球蛋白，其作 为特异性抗原受体(BCR)，通过识别不同抗原表位而使B细 胞激活，分化为浆细胞，进而产生特异性抗体，发挥体液 免疫功能。
1.植物血凝素(PHA)和刀豆蛋A(ConA)可刺激 植物血凝素(PHA)和刀豆蛋A(ConA)可刺激 T细胞,而脂多糖(LPS)等只能刺激B细胞 。. 细胞,而脂多糖(LPS)等只能刺激B Sizemore等用抗斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)免疫球蛋白的抗体从外周血细胞 中分离出SmIg+细胞,能与LPS作用,而SmIg细胞只有当辅佐细胞存在时才能对ConA或 LPS产生应答。Ellsaesser等[24]用ConA刺 激斑点叉尾鮰胸腺细胞,在辅佐细胞存在情 况下增生,但也有少数细胞对LPS产生应答。 以上报道中“ SmIg-细胞”或“胸腺细胞” 对LPS产生应答,反映了细胞分离技术不够成 熟,或是胸腺中滞留有少量的B细胞。
（2）T细胞的表面标志
T细胞的表面标志是指 细胞膜表面的多种膜 细胞的表面标志是指T细胞膜表面的多种膜 细胞的表面标志是指 分子， 包括各种表面受体和表面抗原。 分子 ， 包括各种表面受体和表面抗原 。 包 括:
①T细胞抗原受体（TCR）:由α、β两条链经二硫键组成 的异二聚体，每条链有两个功能区，即可变区（V区）和 恒定区（C区）。 。 ② CD2分子：称为红细胞（E）受体，一些动物和人的红 细胞在体外能与绵羊红细胞结合,形成红细胞花环. ③ 有丝分裂原受体：有丝分裂原是指能非特异性地刺激 细胞发生有丝分裂的物质。