石大生药学实验指导14显微标本片的制作方法
显微制片技巧
显微制片技巧显微制片技巧一、粉末制片法1．粉末的制备选取有代表性的样品适量，剪成长约0.1cm的小段，置50~60℃的烘箱中干燥（含挥发油的药材温度应更低，把持在30~40℃），然后用粉碎器粉碎，常用的粉碎器有冲窝、铁碾、微型粉碎机等。
粉碎后的粉末过50~60目筛，成药则应过100目筛，置清洁的瓶中备用。
制备粉末时应注意不得有其它的杂物混入，样品应全体过筛，不得留有残渣弃取，过筛后的粉末需充足混匀方可装片。
2．制片方法依据须要不同，可作成临时或永久制片。
（1）临时制片：作临时观察用，随用随作，通常仅能保留1~2周。
直接封片法不经任何处理，直接用于封藏液装片后即可视察。
常用的封躲液有如下几种：a．水：常用蒸馏水。
用于观察淀粉粒等多糖类物质，但易引起淀粉粒膨胀变形，欲测定粉粒大小时不宜用水作封藏剂。
b．稀甘油：用于观察糊粉粒、淀粉粒及其它多糖类物质，为显微制片中最常用的封藏剂。
经水合氯醛透化的电影多加稀甘油一滴，还可防止水合氯醛结晶的析出。
配制时应注意冬气象温低，粘度小，装片时易产赌气泡，可适当配浓一点，而夏天则相反，可配稀一点。
c． 50%甘油酒精：适用范畴同上，透明度较上者强。
d．甘油醋酸液：专用于观察淀粉粒的形态，是目前观察淀粉粒最幻想的封藏剂，可使淀粉粒坚持本来的状况而不膨胀变形，便于测定其大小。
e．乙醇：主要用于观察菊糖及橙皮柑结晶。
因乙醇易挥发，故装片后应立即观察，放置稍久则乙醇挥发产生大批汽泡。
f．水合氯醛：一般作为透明剂，在观察菊糖时，用其作为封藏液，不加热，装片后立即观察，往往能得到比乙醇装片更为幻想的后果。
方法：取干净载玻片，滴加封藏剂1～2滴，用解剖针或火柴杆挑取粉末少许与封藏剂混匀，然后用镊子夹住盖玻片的边沿中部或用食指及拇指拿住盖玻片的边沿，将其一侧边缘压在封藏液旁的载玻片上，慢慢放下至程度地位，用滤纸屑干净载片即可。
装片过程中应注意封藏液要适量，若不足则封藏液不能充斥盖片；过多则溢出盖片，使盖玻片浮动，并易将封藏液溢到盖玻片上面。
显微制片的一般原理与方法
第四章显微制片的一般原理与方法第一节石蜡切片显微制片是生命科学实验技术中的重要组成部分，石蜡切片是动物﹑植物和病理组织切片工作中最重要﹑最常用的一种方法，一般包括材料的固定﹑洗涤﹑脱水﹑透明﹑包埋以及切片和染色等过程，其中的每个步骤都能影响制片的效果和质量。
1. 材料的选择与分割(1) 应选取新鲜的材料，然后立即固定处理。
(2) 材料大小要适当（直径5 mm左右）2. 固定及保存(Fixation and Store)固定：将器官、组织、细胞按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，这样才达到固定的要求。
保存：组织块经杀生固定后，能较长时间保存下来。
经久保存下来的组织块，仍能制片，但不同试剂的保存效果差异较大，如酒精、醋酸、福尔马林液保存时间较长，而铬酸类固定液，常须转换至70％酒精液后，才可较长时间保存。
需注意以下有关问题：(1) 要注意固定目的物本身的结构性质，以便选用适合的固定液，如一般根、茎、叶的组织切片用FAA，根尖、花药压片材料用卡诺固定液，另外，固定时间的长短，要根据材料的特点而增减。
(2) 固定微小材料可直接投入固定液中，而对于较大的材料，则须先将其解剖成较小的材料，并迅速投入固定液，以完成固定作用。
(3) 当体积较大的材料，出现外部已超过固定作用，而内部仍未达到固定目的时，必须考虑用透入快的固定液，如醋酸酒精或苦味酸混合液。
3. 脱水(Dehydration)常用的脱水剂有乙醇（酒精）、正丁醇、叔丁醇、丙酮等药剂，其目的：(1) 除去组织内的水分，并使其组织细胞变硬；(2) 脱净水的组织，才能使溶解的石蜡顺利进入细胞内，以便进行石蜡切片；(3) 脱水后的组织再经透明剂（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能经加拿大树胶封藏，否则组织材料不透明，无法在显微镜下观察。
4. 透明()透明是制片过程中的基础工作，材料经各级酒精脱水以后，要经过常用的有机榕剂（氯仿、二甲苯等）进行透明，这样便于包埋浸渍石蜡及封片过程中加拿大树胶进入和溶合。
山西高校显微镜实验切片制作方法
山西高校显微镜实验切片制作方法一、材料准备1.细胞或组织样本（动物或植物的骨骼、内脏、血液、细胞等）2.生理盐水或PBS缓冲液3.10%正常缓冲福尔马林4.蜡块（用于包埋）5.切片刀6.显微镜玻片和盖玻片7.高温抗性胶黏剂8.显微镜二、样本处理1.将细胞或组织样本放入生理盐水或PBS缓冲液中，用精细剪刀或组织刀割成适当大小的块状。
2.将样本浸泡在10%正常缓冲福尔马林中，固定样本，一般固定时间为24-48小时。
3.将固定的样本从福尔马林中取出，用流水冲洗掉福尔马林。
4.样本去水化，对于脆弱的样本，可用梯度浓度的酒精（如70%，80%，90%和100%）进行去水化处理。
5.去水化后，将样本置于4%熔点蜡中，尽量避免空气泡。
6.以适当的约束器将样本浸泡在蜡中，冷却固化。
三、切片制备1.将冷却固化的样本切割成薄片，使用切片刀进行切割。
切割时，可根据需要调整切片厚度。
2.将切片用温水浸泡，顺时针或逆时针转动切片刀，使蜡片逐渐脱落。
3.使用镊子或编织纤维棒，将切好的切片转移到显微镜玻片上。
4.将切片平铺在玻片上，用加热器轻轻加热玻片，使蜡片与玻片结合更牢固。
5. 将切片浸泡在xylene中，使用毛刷或精细棉签去除余留的蜡块，并使切片透明化。
6.将切片浸泡在渐变乙醇溶液（如95%，75%，50%，30%乙醇溶液）中，以去除余留的酸性蜡和脱脂。
7.取出切片，用流水清洗背面，并用吹风机将水分吹干。
8.将盖玻片涂上高温抗性胶黏剂，将其覆盖在切片上，并用手轻轻压平，使切片和盖玻片结合更牢固。
四、观察和保存1.将制作好的切片放入显微镜中，使用合适的倍镜进行观察。
2.根据需要进行染色处理，以提高对细胞或组织结构的辨识度。
3.将观察完毕的切片小心地保护起来，以防止损坏。
4.用质量较好的玻片盒保存切片，并在盒子上标明样本名称、切片日期等信息。
制作显微镜实验切片是一个复杂且需要耐心和技巧的过程。
不同类型的样本可能需要不同的处理方法和染色技术，以上方法只是一般的制作流程，具体操作还需根据实际情况进行调整。
高校生物玻片标本制作方法
高校生物玻片标本制作方法生物玻片标本制作是生物学实验教学和科学研究中不可或缺的一部分。
本文旨在介绍高校生物玻片标本制作的基本方法，包括取材、固定、染色和封存等步骤，以期为生物学相关专业学生和教师提供参考。
下面是本店铺为大家精心编写的5篇《高校生物玻片标本制作方法》，供大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
《高校生物玻片标本制作方法》篇1一、取材生物玻片标本制作的第一步是取材。
取材的质量直接影响到制成的玻片标本质量，因此必须十分谨慎。
取材时应根据实验或研究的需要选择合适的材料，如植物的花、叶、果实，动物的组织、器官等。
同时，取材时要避免污染和损伤材料，保证材料的完整性和真实性。
二、固定固定是将生物材料固定在玻片上的过程，目的是防止材料在后续操作中变形或腐烂。
常用的固定方法有化学固定和物理固定。
化学固定使用化学药品，如福尔马林、酒精、醋酸等，将材料浸泡在固定液中，使其固定在玻片上。
物理固定则是通过加热、压缩等方式将材料固定在玻片上。
三、染色染色是使生物材料着色的过程，以便在显微镜下更清晰地观察其结构和形态。
染色常用的方法有天然染色和合成染色。
天然染色使用天然染料，如碘液、苏木精等，合成染色则使用合成染料，如荧光染料、碱性染料等。
染色时要根据材料的类型和研究目的选择合适的染料和染色方法，以获得最佳的染色效果。
四、封存封存是将制成的玻片标本密封保存的过程，以防止污染和损坏。
常用的封存方法有蜡封、树脂封等。
蜡封使用石蜡或蜂蜡将玻片标本密封在载玻片上，树脂封则是将玻片标本浸泡在树脂中，待树脂凝固后将其密封在载玻片上。
封存时要注意选择合适的封存材料和方法，以保证玻片标本的长期保存和安全。
高校生物玻片标本制作方法包括取材、固定、染色和封存等步骤，是生物学实验教学和科学研究中不可或缺的一部分。
《高校生物玻片标本制作方法》篇2高校生物玻片标本制作方法包括涂片法、装片法、切片法等。
涂片法是将材料均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法，适用于单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织、精巢、花药等材料。
切片标本制作方法
切片标本制作方法
一、样品准备
1. 选择合适的样品：选择需要观察的生物或组织样品，并确保其具有代表性。
2. 样品处理：将样品进行固定、脱水、渗透等处理，以备后续切片制作。
二、切片制作
1. 包埋：将处理后的样品进行包埋，以便于后续切片。
2. 切片：使用轮转式或冰冻式切片机将包埋好的样品切成薄片。
3. 贴片：将切好的切片贴在载玻片上。
三、染色处理
1. 染色：对切片进行染色，以突显组织结构或细胞特征。
2. 脱水：将染色后的切片进行脱水处理，以便于观察。
3. 封片：用封片剂将切片封住，以保护其不受损坏。
四、封片保护
1. 保护载玻片：在封片剂封住切片后，保护好载玻片，以免受损。
2. 标签标注：在载玻片上标注样品名称、染色方法等信息。
五、显微镜观察
1. 显微镜准备：调整显微镜焦距、光线等参数，确保观察清晰。
2. 观察：将封片好的切片放在显微镜下观察，记录观察结果。
3. 分析：根据观察结果进行分析，得出结论。
显微标本制作的一般原理及步骤(精)
二、实验用品
1器械 2 常用试剂 2.1 常用固定剂 2.2 常用脱水剂 2.3 常用透明剂 2.4 常用粘贴剂 2.5 包理剂 2.6 封固剂 2.7 常用染剂
2.7 常用染剂
代氏（Delafield`s）
苏木精 95%酒精
4g 25ml
苏木精
10%铵明矾水溶液 400ml
（上述试剂配好后，瓶口用纱布
封盖，置向阳处，3-4天后加入下
列试剂。）
该液两月后成熟，色彩蓝紫色， 时间越长效果越好，为生物制 片技术中最常用 的核染剂，染 色后，一般用0.1% 盐酸水溶液 褪去浮色，可使染色显出不同 层次（此过程称为分色）。
• 修块： 切片前需修整蜡块，即将包埋好的一大块蜡 块切开，使每一小块都含有一块组织，并将这块组 织周围的石蜡切除，将组织修成一小块蜡块并粘在 大小适宜的硬木块上，以便于固定在切片机上。
• 贴片： 一手持毛笔，一手转动切片机，切片的蜡片 连成一长条蜡带。
• 切下的蜡带放在一干净黑纸上，用小刀根据需要切 成数段，分别贴在干净载玻片上。在恒温展片台上 展平，烘干。
• 尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适 于切片；
• 增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时 增加媒染作用和染色能力； 固定液同时是防腐液，使材料不致变质腐败。
2.3 脱水
• 脱水过程的作用是用一种既能与水又能与透明液混 合的液体来逐渐置换样品中游离的水。
• 现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水。 脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。
药材显微鉴别检查法标准操作规程
目的：建立显微鉴别法检查标准操作规程范围：确定药材中有效成份在组织中分布状况及其特征1．仪器与用具1.1不仪器生物光谱显微镜架盘天平1.2 用具1.2.1 放大镜、刀片、镊子、剪刀1.2.2 载玻片、盖玻片1.2.3培养皿或小烧杯（放切片用、切片后的处理均可在其中进行），酒精灯、滴瓶、玻璃棒（粗与细）1.2.4铅笔、滤纸、火柴2．试液2.1水合氯醛试液：按《架盘天平标准操作规程》称取水合氯醛50g ，加水15ml，与甘油10ml使溶解即得。
或使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉，树脂、蛋白质及挥发油等。
2.2甘油醋酸试液：取甘油，冰醋酸与水各等份，混合即得，此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉粒不膨变形。
便于测量大小。
2.3甘油—乙醇溶液：取甘油1 份，50％乙醇1 份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3．显微标本片的制作3.1切片制作标本片（横切或纵切）3.1.1药材的预处理先将药材表面泥沙刷洗干净，将应观察的部位，切成适当大小的块或段，一般长3cm,宽1cm为宜，切面削平整。
质地软硬适中的药材可直接进行切除；质地坚硬的则须先使其软化后再切片。
软化方法可放在水中浸软或煮软。
有些根、根据茎、茎及木类药材，质地虽坚实，可将削平的切面浸水中片刻，表面润湿时取出，直接切片也能切成较完整的薄片。
过于柔软的材料，可将其浸入70％—95％乙醇中，约20分钟后可变硬些，即可进行切片。
对于细小，柔软而薄的药材，如种子或叶片，不便直接手持切片。
药材在预处理时应注意不能影响要观察的显微镜鉴别特征。
如要观察菊糖，粘液等在软化、切片、装片等过程中，均不可与水接触，以免溶解消失，观察挥发油，树脂等则不可与高浓度乙醇或其它有机溶媒接触。
3.1.2徒手切片在检验工作中，此法最常用，操作简便，迅速，制成的切片保持其细胞内含物的固有形态，便于进行各种显微镜化学反应观察。
3.1.2.1切片右手持刀片，左手拇指和食指夹持药材，中指拖着药材的底部，使药材略高出食，拇二指指，肘关节应固定，使材料的切面保持水平，刀口向内并使刀刃从左前方向右后方切削，即可切得薄片。
石大生药学实验指导12中成药的显微鉴定
实验十二中成药的显微鉴定【目的要求】掌握中成药显微鉴定的基本方法与技能。
【实验主要仪器及试剂】显微镜、培养皿、刀片、解剖针、载玻片、盖玻片、研钵、酒精灯；蒸储水、水合氯醛试液、稀甘油、甘油醋酸试液。
【实验材料】知柏地黄丸、六味地黄丸。
【实验内容】--、单味■粉"未^生药鉴定、一般用甘油醋酸试液、水装片观察淀粉粒；水合氯醛试液装片不加热观察菊糖；加热透化后观察细胞组织特征。
二、中成药的显微鉴定制片方法同单味粉末药材，如为散剂或粉末，可用刀尖或牙签挑取少量粉末；如为蜜丸，可将药丸切开，从切面中央挑取少量制片；如为水泛丸或片、锭，可刮取全切面取样，或用乳钵将整个丸、片研碎取样；如为朱砂包衣丸、丹，可将丸衣及丸心分别制片观察。
三、知柏地黄丸的显微鉴定（一）甘油醋酸试液、水装片：1.山药：淀粉粒较大者呈三角卵形或矩圆形，直径20~40μm,脐点呈短缝状或人字状，层纹可见；草酸钙针晶束长94~240μm,存在于浅黄色粘液细胞中。
2.茯苓：无色不规则分枝状团块易见，菌丝无色或淡棕色，直径3~8μm°遇水合氯醛试液成胶冻状，加热团块溶化。
（二）水合氯醛试液透化：1.熟地黄：暗棕色或黑棕色组织碎片易见，细胞皱缩，内含一棕色核状物。
2.山茱萸：果皮表皮细胞橙黄色，表面观呈多角形，垂周壁略呈连珠状增厚。
3.牡丹皮：草酸钙簇晶直径约至37μπι,存在于无色或淡黄色薄壁细胞中，有时数个含晶细胞纵向连接，簇晶排列成行。
4.泽泻：薄壁细胞形大，呈类圆形，具多数椭圆形纹孔，集成纹孔群。
5.知母：草酸钙针晶成束或散在，一般长26~30μm06.黄柏：纤维束鲜黄色，周围细胞中含草酸钙方晶，形成晶鞘纤维，含晶细胞的壁多增厚。
【作业】检定报告检定单位:检定人:检定日期: 【思考题】中成药显微鉴定的方法。
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二、显微标本片的制作方法
生药的显微鉴定是使用显微镜检查药材内部构造特征,因此必须将药材制作成适当的显微标本片，才能在显微镜下进行观察。
显在鉴别根据观察对象、目的、要求的不同，制作不同的标本片，一般可分为徒手切片、石蜡切片、表面装片、粉末制片、组织解离片等。
一、徒手切片
徒手切片法可以直接而又准确地观察和了解药材组织的本来面目，其设备简单、操作方便，不需经过复杂的处理，但是，此法对微小、柔软、硬型或水分过多及肉质药材不易切成薄片以供观察。
］、基本操作
⑴取材：选取材料时要注意有一定的坚韧性，材料不宜太硬或太软。
⑵切片：先将材料的断面削平，用左手的姆指和食指夹住材料，材料上端伸出1〜2111111的长度，右手执刀，刀口向里（刀片可用单面刀片或剃刀），刀口与材料的断面平行，切时自左方向右方斜滑，亦可自内向外切，同时挥刀要快，用力要均匀，不可拉锯样切割。
每切1〜2片，用毛笔蘸水取下切片放于水中或50〜70%乙醇中，同时用水湿润材料的切面和刀口，不可使之干燥。
如材料较薄或较小，可用萝卜或向日葵茎等解剖一切口将材料在切口内夹住再切。
选取较好的切片备用或直接放置在载玻片上，在显微镜下观察。
2、制片
临时观察的切片，可自水或乙醇中取出切片，放置在载玻片上，加一滴水或甘油或先滴水或甘油，再放入材料，盖上盖玻片，置显微镜下观察。
二、永久制片法（略）三、粉末标本片
粉末标本片主要用作粉末、丸、散、膏、丹等成药材料的观察，所用材料不宜有粗颗粒混入，否则可将盖玻片顶起，不便观
察，故须将材料用三号筛（60目）筛筛过。
1、临时性粉末标本片
用解剖针尖挑取少量粉末药材放置在载玻片的中央偏右一些，根据需要加入适宜的试液1~2滴，用解剖针或细玻棒（试液为酸或碱时）轻轻搅匀，然后用小镣子（或盖片镒）夹住盖玻片的一边，使相对一边与液面接触，将盖玻片轻轻放下（注意放盖玻片时动作要轻而慢，以免产生气泡或使材料溢出），盖玻片放好后，若有液体溢出，可用滤纸吸去溢出的液体，最后在载玻片左端做上标记。
挥发性强的液体（如乙醇）很容易挥干，制片后须立即观
察。
如果要保存标本片达数小时以上，通常可加稀甘油；如需要保存数天以上，则应在盖玻片下及时补加甘油，并防止灰尘落在盖玻片上。
2、半永久性粉末标本片
将粉末药材放在载玻片上，加一滴稀甘油使粉末充分湿润后，用滤纸吸去过多的甘油，将盖玻片在酒精灯上略加热，使盖玻片稍温热，立即用玻棒滴加熔化的甘油明胶1~2滴，并按前法加盖盖玻片，注意加甘油明胶的量须适当，不宜过少也不宜过多。
标本片应在无尘处放置，待其充分冷却凝固后用小刀轻轻刮去溢出盖玻片的甘油明胶，后用湿布擦净，加贴标鉴，即可使用。
如须将经过水合氯醛试液透化处理过的粉末标本片改用甘油明胶封藏，则可先将水合氯醛试液尽量滤去，加入1~2滴甘油混匀，再滤去甘油，然后加熔化的甘油明胶封藏。
3、永久性粉末标本片
粉末一般以能通过《中华人民共和国药典》五至六号筛为度。
方法一：将粉末药材放在载玻片上，先用无水乙醇充分湿润，滤去无水乙醇，加二甲苯1滴，使其充分混匀，滤去二甲苯，再加1滴二甲苯，使材料透明，将二甲苯吸去，用加拿大胶封片。
方法二：取粉末药材少量，放置于离心管内，加50~70%乙醇使药材完全被浸没，用玻棒不断搅拌，10分钟后，离心，使粉末沉集于管底，倾去醇液，再加50%洒精，搅拌，倾去醇液，再加无水乙醇二次，每次10分钟，然后加入纯二甲苯（中间更换一次），使材料透明，搅匀后，用滴管吸取混悬液少量置于载玻片上，滴加加拿大胶，加盖玻片封藏。
永久性粉末片制作时可以染色，染色方法可在脱水、透明之前进行。
四、表面标本片
需要制作表面标本片的药材主要是叶片、萼片、花瓣和雄蕊，此外草质茎、浆果等的表皮也常需要做成表面标本片观察其表皮特征。
制做表面片，较薄的材料可以进行整体封藏。
整体封藏
此种制片法适用于很薄的叶片、花瓣、萼片。
剪取需要的部分二小片，各约4mm见方，一正一反，放置在载玻片中央，加水合氯醛试液1~2滴，以能完全浸泡材料为宜，加盖盖玻片，在小火焰上慢慢加热，加热时应使载玻片保持水平状态，在火焰上缓缓移动，保持透化液处于微沸状态，并随时补加透化液，注意勿使火焰过猛，加热到材料略呈透明时,常约需1~2分钟，可放置待凉，然后在显微镜下观察。
如发现透化不完全，可再反复加热，直至透明为止。
为了防止干燥和水合氯醛试液结晶的析出，可加稀甘油一滴。
稍厚的叶片、花瓣等材料，当用上法不能完全透明时，可剪取2mm见方的所需材料，放入试管中，加透化液2~3ml,在沸腾的水中加热至呈透明状态（通常约需20~30分钟）,将材料小心取出，放在载玻片上，切成大小相近的两片，一正一反，放置在载玻片上，加透化液或稀甘油1滴，盖上盖玻片即可观察。
很厚的叶片、花瓣或茎的表皮材料，用上法直接透化不能使材料透明，因此需要将表皮撕离下来，将撕下的表皮表面朝上，放置于载玻片上，加透化液1滴，加盖盖玻片，稍稍加热，就可使其透化。
五、组织解离片法
在鉴别生药时，为了观察某些单个细胞（如纤维、石细胞、导管等）的完整形状，可利用化学试剂来进行药材的组织解离，使胞间层溶解，细胞互相分离，这种方法叫做组织解离。
所选用的试剂依所鉴定药材的性质而异，如药材的木质化组织少，可用氢氧化钾法；如药材的木质化组织较多，则可用硝铭酸法或氯酸钾法。
在进行组织解离前，应将要解离的材料切成不粗于火柴杆的细长
条或小片。
1.氢氧化钾（钠）法：将少量材料放置在试管中，加50%氢氧化钾（钠）溶液适量（应将材料完全淹没），加热，用玻棒挤压至材料全部离散时为止，倾去碱液，材料用水洗涤后，取少许放置在载玻片上，用解剖针撕开，以稀甘油封藏后观察。
2.硝铭酸法：将材料切成小薄片放入小玻璃皿中，加20%硝酸与20%格酸的等量混合液放置2小时至一日，或以加温（35。
C左右）缩短浸渍时间，然后用水冲洗，取少量材料于载玻片上，用解剖针或镶子轻压，使其细胞分离，制成临时装片，即可观察。
3.氯酸钾法：将材料置试管中，加50%硝酸，投入少量氯酸钾粉末，并在小火上或沸水浴中加热，待产生气泡减少时，再及时投入少量氯酸钾，至用玻璃棒挤压材料，能散离时为止，其余同上法。
组织分离后也可以进行染色，或再经脱水透明，封藏于加拿大胶中。