ALT,AST测定方法
ALT活性测定
血清中丙酮酸2,4-二硝基苯腙
505nm处有强吸光度
临床意义：
ALT在肝、肾、心和骨骼肌中含量丰富，其中ALT在肝细胞中的 浓度比血清高7 000倍，且主要位于肝细胞的可溶性部分。当肝 脏受损、肝细胞膜通透性增加时ALT或AST释放入血可导致血清 中该酶活性增加，因此，ALT常用于肝脏疾病的诊断。主要应用 于以下几种肝脏疾病的检测： 急性病毒性肝炎； 慢性活动性肝炎、脂肪肝、恢复期的急性病毒性肝炎患者； 肝硬化、肝癌；
实验八、血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT）活性测定 ——赖氏法（比 色法）
目前测定ALT的方法主要有两大类：
分光光度法（速率法）
比色法（赖氏法）
实验目的
实验原理
实验步骤
结果分析
实验报告
实验目的：
熟悉ALT活性测定的方法
掌握ALT活性测定的临床意义
实验原理：
红棕色
丙酮酸2,4-二硝基苯腙的颜色深浅与丙酮酸的生成量成正比； 反应体系中丙酮酸的量与血清中ALT的活性成正比。
0.1
0.5
2,4-二硝基苯肼溶液 ALT 底物缓冲液
0.5 0.5
0.5 —
混匀，置37℃保温20min 0.4mol/LNaOH溶液 5.0 5.0
混匀，室温放置10min,于30min内比色(505nm)
结果分析：
1.以吸光度值为纵坐标，对应的ALT活性单位为横坐标，
作图，绘制标准曲线；
2.根据测得标本的吸光度值，从已经绘制好的标准曲 线中查得标本中ALT的卡门单位。
由其它原因引起的肝脏损害等。
实验步骤：
1.ALT标准曲线绘制
试剂(ml)/管号 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液 ALT底物缓冲液 2,4-二硝基苯肼溶液 0 0.10 0.00 0.50 0.50 1 0.10 0.05 0.45 0.50 2 0.10 0.10 0.40 0.50 3 0.10 0.15 0.35 0.50 4 0.10 0.20 0.30 0.50
转氨酶活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。
2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。
ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。
本实验采用分光光度法测定ALT活力。
ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。
PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。
ALT和AST测定方法
ALT和AST测定方法ALT（Alanine Aminotransferase）和AST（Aspartate Aminotransferase）是两种常用的生物化学指标，用于评估肝脏功能和肝细胞损伤程度。
本文将详细介绍ALT和AST的测定方法。
一、ALT的测定方法1.酶动力学法：该方法是最常用的ALT测定方法。
原理是将肝脏组织或血浆样品与丙酮酸转氨酶（LDH）反应，通过测定产生的谷草转氨酶（AST）的酶活力来反映样品中ALT的含量。
该方法准确可靠，具有较高的灵敏度和特异性。
2.免疫测定法：ALT测定的另一种常用方法是免疫测定法，包括免疫比浊法、免疫荧光法和免疫酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这些方法利用ALT特异性抗原和抗体的结合反应来测定ALT的浓度，具有高灵敏度和高特异性。
二、AST的测定方法1.酶动力学法：AST的测定方法类似于ALT的测定方法，也是通过与丙酮酸转氨酶（LDH）反应来测定AST的酶活力。
该方法较为简单快速，适用于大量样本的测定，但其灵敏度和特异性相对较低。
2.免疫测定法：AST的免疫测定法与ALT的免疫测定法类似，包括免疫比浊法、免疫荧光法和免疫酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这些方法通过AST特异性抗原和抗体的结合反应来测定AST的浓度，具有高灵敏度和高特异性。
三、ALT和AST测定的注意事项1.样本的采集：ALT和AST的测定常用的样本是血浆或血清。
在采集样本时，应避免血液污染或其他杂质的干扰，以保证测定结果的准确性。
2.技术操作：在进行ALT和AST的测定过程中，需要严格遵守相关实验操作规范，确保实验条件的一致性和稳定性。
包括标本处理、试剂配制、反应时间和温度的控制等。
3.器材和试剂的选择：选择合适的测定仪器和试剂是保证测定结果准确性和重复性的重要因素。
一般情况下，空白对照组和阳性对照组的选取是测定中的重点之一4.数据解读：在进行ALT和AST的测定后，需要对测定结果进行合理的解读和分析。
ASTALT比值检测
AST／ALT比值检测
1 检验目的
测定、计算样品中AST/ALT比值。
2 检测原理
计算型项目，公式为：AST/ALT
3 样本
血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：20～25℃稳定1天
4～8℃稳定7天
-20℃稳定1周
4 仪器
美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5 校准
5.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
5.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
6 操作步骤
上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作
程序。
7 警告/危急值
未规定。
8 临床意义
AST/ALT之比对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断及判断转归有很重要的临床意义。
常
见情况如下：
8.1 急性肝炎时AST/ALT<1。
8.2 肝硬化时AST/ALT≥2。
8.3 肝癌时AST/ALT≥3。
ALT,AST测定方法
ALT,AST测定⽅法3.8.2.1⼩⿏肝、肾、⼼组织ALT含量测定1实验原理⾕丙转氨酶作⽤于由丙氨酸及α-酮戊⼆酸组成的基质，在⼀定的反应条件下，产⽣⼀定量的丙酮酸。
在酶反应到规定时间时，加⼊2,4-⼆硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终⽌了酶反应。
2,4-⼆硝基苯肼分别与反应产⽣的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊⼆酸形成各⾃对应的2,4-⼆硝基苯腙。
在碱性条件下，虽然⼆种苯腙分别显出红棕⾊，但由于丙酮酸⽣成的颜⾊较深，以同等克分⼦计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊⼆酸⽣成的颜⾊的3倍，利⽤这⼀差别可以反映出丙酮酸的⽣成量。
本实验设⾕草转氨酶活⼒为：样品液与ALT 基质液在37℃下反应60min时每⽣成1µmol丙酮酸所需的酶量为1个活⼒单位（U）。
2试剂配制（1）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏⽔中，定容到1000mL。
（2）20µmol/L丙酮酸钠标准溶液称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。
现配现⽤。
（3）ALT基质液称取α-酮戊⼆酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78mg（L-丙氨酸0.85mg）溶解于30mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）中，溶解后校正pH⾄7.4，再⽤pH7.4的磷酸缓冲液定容⾄100mL，置冰箱中保存备⽤（可保存⼀周）。
可加⼊氯仿数滴防腐。
（4）0.02% 2，4—⼆硝基苯肼溶液称取20mg2，4—⼆硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待2，4—⼆硝基苯肼全部溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100mL，过滤后盛于棕⾊中，置冰箱中保存备⽤。
（5）1mol/L NaOH溶液：称取4g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到100mL。
（6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16 g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到1000mL。
双项目同测法测定ALT和AST
双项目同测法测定ALT和AST
钟方财;蒋维国;李顺康
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】2003(018)004
【摘要】目的探讨双项目同测法与单项目测定法测定ALT和AST结果的差异.方法分别使用双项目同测法和单项目测定法测定定值血清和30例样本ALT和AST 含量,并将定值质控血清分别做日内、日间精密度测定.结果两方法测定结果相关性良好,γ=0.999,检测结果差异无显著性(P＞0.05),ALT和AST日内变异分别为
2.63%、2.47%,日间变异分别为
3.84%、3.77%.结论双项目同测法可以节约仪器通道,提高工作效率,节约资源,有一定推广应用价值.
【总页数】3页(P94-96)
【作者】钟方财;蒋维国;李顺康
【作者单位】内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000;内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000;内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.电子水准仪单程双测的一种方法——单程双测在大连庄河Ⅲ场海上风电场项目三等水准中的应用 [J], 张开
2.一测双评法测定咳特灵胶囊中牡荆苷与异牡荆苷的含量 [J], 员荣;孙丽丽;杨立伟
3.双项同测法测定血清丙氨酸转氨酶和天门冬氨酸转氨酶 [J], 蒋洪敏
4.溶血对速率法测定ALT／GPT和AST／GOT的影响 [J], 周美芬;赵岩
5.双波长微孔板赖氏法测ALT含量 [J], 刘玉振;陶玉生;温涛;王君
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ast和alt机制
AST和ALT机制一、AST和ALT机制概述AST（谷草转氨酶）和ALT（谷丙转氨酶）是两种常见的肝酶，它们在人体内发挥着重要的生理功能。
AST主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中，而ALT主要存在于肝脏中。
当肝脏受损或疾病发生时，AST和ALT的活性会发生变化，因此检测AST和ALT的活性可以作为肝脏疾病的诊断和监测指标之一。
二、AST和ALT的生理功能AST和ALT在人体内具有重要的生理功能。
AST参与糖代谢和能量代谢，是维持人体正常生理功能所必需的酶之一。
同时，AST也参与了某些药物的代谢和排泄，对于药物的疗效和毒性具有重要影响。
ALT则参与蛋白质代谢和糖代谢，对于维持人体正常生理功能同样具有重要作用。
三、AST和ALT在临床上的应用AST和ALT检测在临床上广泛应用于肝脏疾病的诊断和监测。
当肝脏受损或疾病发生时，肝细胞内的AST和ALT会释放入血，导致血清中AST和ALT的活性升高。
因此，检测血清中AST和ALT的活性可以作为肝脏疾病的辅助诊断指标之一。
此外，AST和ALT检测还可以用于监测肝脏疾病的病情变化和疗效评估。
四、AST和ALT检测的方法和正常值范围AST和ALT的检测方法有多种，包括酶法、比色法、荧光法等。
其中，酶法是最常用的一种方法，具有灵敏度高、特异性好的优点。
正常值范围因检测方法和个体差异而有所不同，一般而言，AST的正常值范围为0-40U/L，ALT的正常值范围为0-40U/L。
五、AST和ALT升高的常见原因及意义1.肝细胞损伤：肝脏疾病是引起AST和ALT升高的最常见原因之一。
各种肝病如肝炎、肝硬化、肝癌等均可导致肝细胞损伤，使肝细胞内的AST和ALT 释放入血，导致血清中AST和ALT的活性升高。
AST和ALT的升高程度与肝细胞损伤程度呈正相关，因此检测AST和ALT的活性可以反映肝细胞损伤的程度。
2.心肌损伤：心肌中的AST含量较高，当心肌损伤时，AST的活性会升高。
ALTAST测定方法
ALTAST测定方法ALT（Alanine Aminotransferase）和AST（Aspartate Aminotransferase）是评估肝功能的常用酶学指标。
它们通常通过血液样本进行检测。
在本文中，我们将介绍ALT和AST的测定方法、应用以及血液样本的预处理。
首先，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。
当ALT和AST存在于细胞内时，它们通常以较低的浓度存在。
在细胞损伤或炎症发生时，细胞膜破裂，导致ALT和AST释放到血液中，使其浓度升高。
因此，通过测定血液中ALT和AST的浓度，可以评估肝脏的炎症程度和损伤程度。
目前，常用的ALT和AST测定方法主要有两种：荧光法和颜色反应法。
荧光法是利用荧光探针，例如NADH（尼克酸腺嘌呤二核苷酸还原型）或NADPH（尼克酸腺嘌呤二磷酸盐还原型），与ALT和AST进行反应，生成发射荧光信号。
该方法的优势是灵敏度高、特异性好，可以测定低浓度的ALT和AST。
颜色反应法是利用一些物质与ALT和AST进行反应后，形成可见光吸收的化合物。
这些化合物的光密度和ALT和AST的浓度成正比，可以通过比色法或分光光度法来测定。
在血液样本测定ALT和AST之前，还需要进行一些预处理步骤。
首先，采集血液样本时要注意避免氧化和污染。
其次，血液样本需要离心分离血清或血浆。
一般来说，血清是指凝结后，离心除去凝块，得到的液体部分；而血浆是指在血液凝结前，通过添加抗凝剂，离心除去细胞和凝块，得到的液体部分。
这是因为ALT和AST主要存在于细胞内，测定它们的浓度需要去除细胞成分的干扰。
因此，选择适当的分离方法非常重要。
最后，ALT和AST的应用非常广泛。
它们不仅用于评估肝脏疾病，还用于监测药物治疗的副作用，例如肝毒性。
此外，一些非肝脏疾病，如心肌梗死、肌肉炎等，也会导致ALT和AST的升高。
因此，ALT和AST的测定可以提供有关这些疾病的重要信息。
总结起来，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。
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3.8.2.1小鼠肝、肾、心组织ALT含量测定
1实验原理
谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及α-酮戊二酸组成的基质，在一定的反应条件下，产生一定量的丙酮酸。
在酶反应到规定时间时，加入2,4-二硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终止了酶反应。
2,4-二硝基苯肼分别与反应产生的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊二酸形成各自对应的2,4-二硝基苯腙。
在碱性条件下，虽然二种苯腙分别显出红棕色，但由于丙酮酸生成的颜色较深，以同等克分子计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊二酸生成的颜色的3倍，利用这一差别可以反映出丙酮酸的生成量。
本实验设谷草转氨酶活力为：样品液与ALT 基质液在37℃下反应60min时每生成1μmol丙酮酸所需的酶量为1个活力单位（U）。
2试剂配制
（1）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）
称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏水中，定容到1000mL。
（2）20μmol/L丙酮酸钠标准溶液
称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。
现配现用。
（3）ALT基质液
称取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78mg（L-丙氨酸0.85mg）溶解于30mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）中，溶解后校正pH至7.4，再用pH7.4的磷酸缓冲液定容至100mL，置冰箱中保存备用（可保存一周）。
可加入氯仿数滴防腐。
（4）0.02% 2，4—二硝基苯肼溶液
称取20mg2，4—二硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待2，4—二硝基苯肼全部溶解后，用蒸馏水稀释至100mL，过滤后盛于棕色中，置冰箱中保存备用。
（5）1mol/L NaOH溶液：
称取4g NaOH溶解于蒸馏水后，定容到100mL。
（6）0.4 mol/L NaOH溶液
称取16 g NaOH溶解于蒸馏水后，定容到1000mL。
3实验方法
（1）样品的处理按 3.5方法进行。
（2）ALT标准曲线的制作
○1将测定所用试剂除氢氧化钠溶液外全部置于水浴箱内，预温37℃至然后使用．取6支试管，按表4进行配制
表4 ALT标准曲线的配制
20μmol/L丙酮酸
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
钠标准溶液
ALT基质液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
0.1mol/L磷酸缓
0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
冲液（pH7.4）
混匀，将各管置于37℃水浴中保温60min
2,4-二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀，将各管置于37℃水浴中保温20min
0.4 mol/L NaOH
5 5 5 5 5 5
溶液
混匀，将各管置于37℃水浴中保温10min
○2冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
○3以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线(见图3)。
图3
ALT标准曲线见图3，建立回归方程为：
y =1.4149x (线性相关系数：R＝0.9965)
其中：x－吸光度；
y－丙酮酸含量(μmol/L)
(3) 小鼠肝、肾、心组织ALT含量测定
○1将测定所用试剂除氢氧化钠溶液外全部置于水浴箱内，预温至然后使用．取2支试管，按表5进行配制
表5 ALT含量测定
样品0.10 0.10 ALT基质液- 0.50
混匀，将各管置于37℃水浴中保温60min
ALT基质液0.50 - 2，4—二硝基苯肼0.5 0.5
混匀，将各管置于37℃水浴中保温20min
0.4 mol/L NaOH溶液 5 5
混匀，将各管置于37℃水浴中保温10min
○2冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
○3在标准曲线中读出样品丙酮酸的生成量(见图3) 。
3.8.2.2小鼠肝、肾、心组织谷草转氨酶（AST）含量测定
1实验原理
AST作用于门冬氨酸和α-酮戊二酸组成的基质，在一定的反应条件下，产生一定量的草酰乙酸，草酰乙酸在反应过程中又自行脱羧成为丙酮酸。
在酶反应到规定时间时，加入2,4-二硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终止了酶反应。
2,4-二硝基苯肼分别与反应产生的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊二酸形成各自对应的2,4-二硝基苯腙。
在碱性条件下，虽然二种苯腙分别显出红棕色，但由于丙酮酸生成的颜色较深，以同等克分子计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊二酸生成的颜色的3倍，利用这一差别可以反映出丙酮酸的生成量。
本实验设谷草转氨酶活力为：样品液与AST基质液在37℃下反应60min时产生的草酰乙酸自行脱羧成为1μmol丙酮酸所需的酶量为1个活力单位。
2试剂配制
(1) 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）
称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏水中，定容到1000mL。
(2) 20μmol/L丙酮酸钠标准溶液
称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。
现配现用。
(3) AST基质液
称取α-酮戊二酸29.2mg，DL-门冬氨酸2.66 g，置于亦小烧杯中，加入1N 氢氧化钠溶解，丙校正pH至7.4，再用pH7.4的磷酸缓冲液定容至100mL，置冰箱中保存备用（可保存一周）。
(4) 0.02% 2，4—二硝基苯肼溶液
称取20mg2，4—二硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待
2，4—二硝基苯肼全部溶解后，用蒸馏水稀释至100mL，过滤后盛于棕色中，置冰箱中保存备用。
(5) 1mol/L NaOH溶液：
称取4g NaOH溶解于蒸馏水后，定容到100mL。
(6) 0.4 mol/L NaOH溶液
称取16 g NaOH溶解于蒸馏水后，定容到1000mL。
3实验方法
(1) 样品的处理按 3.5 方法进行。
(2) AST标准曲线的制作
○1将测定所用试剂除氢氧化钠溶液外全部置于水浴箱内，预温至然后使用．取6支试管，按表6进行配制
表6AST标准曲线的配制
20μmol/L丙酮酸
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
钠标准溶液
AST基质液0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25
0.1mol/L磷酸缓
0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
冲液（pH7.4）
混匀，将各管置于37℃水浴中保温60min
2,4-二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
混匀，将各管置于37℃水浴中保温20min
0.4 mol/L
5 5 5 5 5 5
NaOH溶液
混匀，将各管置于37℃水浴中保温10min
○2冷却后以0管为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
○3以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线(见图4)。
图4 AST标准曲线见图4，建立回归方程为：
y =1.3294x (线性相关系数：R＝0.9992)其中：x－吸光度；
y－丙酮酸含量(μmol/L)
(3) 样品AST含量测定
测定方法同ALT含量测定。