昆虫基因组DNA的提取(CTAB法)
果蝇基因提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉并掌握果蝇基因提取的基本原理和实验操作步骤。
2. 学习利用CTAB法从果蝇唾腺中提取DNA。
3. 探讨不同提取方法对果蝇DNA提取效率的影响。
二、实验原理果蝇作为遗传学研究的经典模式生物，其基因提取实验对于后续的分子生物学研究具有重要意义。
本实验采用CTAB法从果蝇唾腺中提取DNA，该方法简单、高效，适用于小量DNA的提取。
CTAB法的基本原理是利用CTAB与DNA的结合能力，以及酚-氯仿抽提法去除蛋白质和RNA等杂质，从而获得纯净的DNA。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）唾腺2. 试剂：CTAB缓冲液、酚-氯仿、异丙醇、70%乙醇、TE缓冲液、琼脂糖凝胶电泳试剂盒等四、实验步骤1. 果蝇唾腺的制备：将果蝇麻醉后，用解剖针轻轻挑取唾腺。
2. DNA提取：a. 将唾腺置于1.5ml离心管中，加入CTAB缓冲液（含EDTA）；b. 加入酚-氯仿，充分振荡混匀；c. 12,000r/min离心10min，取上清液；d. 加入等体积的异丙醇，充分混匀；e. 12,000r/min离心10min，弃上清液；f. 用70%乙醇洗涤沉淀，12,000r/min离心5min，弃上清液；g. 将沉淀溶于TE缓冲液中，即可获得DNA溶液。
3. DNA纯度检测：采用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA纯度。
五、实验结果与分析1. 通过CTAB法从果蝇唾腺中提取的DNA，在琼脂糖凝胶电泳中呈现出清晰的DNA条带，说明提取的DNA质量较好。
2. 与其他DNA提取方法相比，CTAB法具有操作简便、提取效率高、DNA纯度好等优点。
六、实验结论本实验成功从果蝇唾腺中提取了高质量的DNA，为后续的分子生物学研究奠定了基础。
CTAB法是一种简单、高效的果蝇DNA提取方法，适用于小量DNA的提取。
七、实验注意事项1. 操作过程中要避免DNA的污染，实验器材要清洗干净，操作时要戴口罩和手套。
CTAB法提取动物DNA
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组Ｄ Ａ Ｎ 的提 取 。结 果表 明，改进后 的Ｃ Ａ 法具有 时间短 、质量 高 、成 本低 的优 点 ，与实验教 学 中植物Ｄ Ａ Ｎ 提 取 的方 ＴＢ Ｎ 和Ｒ Ａ
法 相 一 致 ，使 分 子 生 物 学 教 学 用 品 一 体 化 ，价 格 低 廉 化 ， 效 果 改进 ， 是 一 个 不 仅 可 以 用 于研 究 ，也 可 以 大规 模 用 于 实 验
ctab法提取dna的原理
ctab法提取dna的原理
CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide）是一种常用于
提取DNA的方法，原理是利用CTAB结合DNA形成稳定的DNA-CTAB复合物。
与DNA相结合的CTAB可以将其他细
胞组分如蛋白质和RNA等溶解。
下面将介绍CTAB法的操作
步骤：
1. 准备样品：将待提取DNA的生物材料如植物叶片或动物组
织切碎，并放入离心管中。
2. 加入CTAB溶液：向离心管中加入含有CTAB的提取缓冲液，CTAB会结合DNA并分离细胞组分。
3. 细胞破碎：将离心管置于60-65°C的水浴中，短暂加热使细
胞完全破碎。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇匀并离心。
这一步可以将DNA从细胞残渣和其他溶解物中提取出来。
5. DNA沉淀：将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的
异丙醇，再次轻轻摇匀。
在冰上静置几分钟后离心，可使
DNA沉淀到离心管底部。
6. 溶解DNA：倒掉上清液，加入70%乙醇洗涤DNA沉淀，
离心去除乙醇。
再次离心后，将残留的乙醇洗涤液倒掉，将离心管倒置在纸巾上，将DNA自然风干。
通过以上步骤，利用CTAB法可以提取到高质量的DNA样品。
此方法的优势在于CTAB的高度阳离子性可以有效溶解其他
细胞组分，而不影响DNA的稳定性。
同时，CTAB法适用于
不同种类的生物材料，如植物，微生物和动物组织等。
ctab法提取dna
ctab法提取dnaCTAB (cetyltrimethylammonium bromide) is a detergent that is commonly used in DNA extraction protocols. It helps to break down the cell wall and release the DNA, which can then be purified using techniques such as centrifugation or precipitation. To extract DNA using CTAB, you will need to follow a protocol that typically involves the following steps:1.Grind the tissue or cells that you want to extract DNA from using a mortarand pestle or other mechanical method.2.Add a lysis buffer (usually containing CTAB and other reagents) to the groundtissue or cells and incubate at a high temperature (usually around 65-70°C) to denature the proteins and release the DNA.3.Add a precipitation agent (such as isopropanol or ethanol) to the lysis mixtureto help the DNA come out of solution and form a precipitate.4.Spin the mixture in a centrifuge to pellet the DNA.5.Carefully remove the supernatant (the liquid above the pellet) and wash thepellet with a wash solution (such as 70% ethanol) to remove any remaining contaminants.6.Dissolve the DNA pellet in a suitable buffer (such as Tris-EDTA or TE) andstore it at 4°C until you are ready to use it.7.It is important to carefully follow the steps of the protocol and use goodlaboratory practices when extracting DNA, as contaminants or mistakes can affect the quality and yield of the final DNA sample.翻译CTAB（乙基三甲基氨基甲酸铬）是一种洗涤剂，常用于DNA提取协议。
CTAB法提取植物总DNA
CTAB法提取植物总DNACTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide法）是一种常用的植物总DNA提取方法，其优点是简单、高效、成本低、适用性广，能够快速提取高质量的DNA。
CTAB法利用季铵盐CTAB（Cetyltrimethylammonium bromide）和NaCl共同提取植物样品中的DNA。
下面就CTAB法的步骤进行详细介绍。
材料：- 植物样品- CTAB提取缓冲液（含0.6 M CTAB和NaCl）- 65℃和37℃的水浴- 70%、95%和100%的乙醇- TE 缓冲液（含10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA，pH 8.0）步骤：1. 准备植物样品将新鲜植物样品（约0.1g）用液氮粉碎成粉末，加入2 mL CTAB提取缓冲液中，研磨均匀。
可以使用带球磨器或者手持器具进行研磨。
2. 加入蛋白酶K加入加入50μL蛋白酶K (20mg/L) 溶液后，65℃恒温振荡2~3 h。
蛋白酶K的作用是降解蛋白质，提高DNA的纯度。
3. 加入腰芽菜素和EB加入5μL腰芽菜素（10mg/mL）和5μL EB（1mg/mL）后，65℃水浴12~15min，使溶液呈现棕黄色，使样品中的腰芽菜素结合到DNA上。
4. 加入氯仿和异丙醇加入等体积氯仿和异丙醇后，轻轻摇匀，离心10min。
离心之后，样品分为四层：上层是异丙醇、第二层是氯仿，中间是粘稠的蛋白质、细胞碎片和杂质，最下面是DNA层。
5. 取出DNA层用200μL的容器沿着DNA层边缘吸取DNA，转移到新管中，并加入300μL75%乙醇洗涤，旋转离心5min，弃上清液，重复一次，最后用吹风机将残留的乙醇风干。
6. 测定DNA浓度用TE缓冲液稀释后测定DNA的浓度和纯度，可以用紫外线光度计进行测定。
测定的结果应该控制在1.8-2.0左右。
总之，CTAB法是一种有效、简单的DNA提取方法，与其他方法相比具有简便易行、节省时间和成本的优势。
CTAB法提取植物基因组DNA
CTAB法提取植物基因组DNACTAB法原理CTAB（Cetyl trimethyl ammonium bromide），十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸的特性。
当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，CTAB-核酸的复合物从溶液中沉淀，通过离心就可将其与蛋白，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质。
最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。
CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。
主要试剂与溶液的配制：PVP（聚乙烯吡咯烷酮K30）巯基乙醇氯仿︰异戊醇（24︰1）异丙醇70%乙醇Tris-苯酚RNaseA无水乙醇CTAB 溶液：CTAB——20g/LNaCl（58.44）——1.4 mol/L（81.816g）EDTA（292.25）——10 mmol/L（2.9225g）Tris（121.14）——100 mmol/L（12.114g）pH 8.01×TE 缓冲液：EDTA（292.25）——1 mmol/L（0.29225g）Tris（121.14）——10 mmol/L（1.2114g）pH 8.0NaAC溶液：NaAC（82.03）——3mol/L（246.09g）pH 4.0植物总DNA的提取1、取适量甘薯新鲜叶片，用液氮迅速研磨，中间加PVP（聚乙烯吡咯烷酮K30）少许，成粉末后转入10mL的离心管中，放入液氮或-80℃冰箱储存（在研磨样品时，研的细和研的粗，提出的DNA量可以相差几倍，所以，在液氮保护的很好的情况下尽量多研磨几次）。
CTAB法提取基因组DNA
CTAB法[30]提取玉米（或其余植物）基因组DNA1) 取 ~1 g 玉米叶片，加入液氮粉碎，加入2mL 2% 65℃保温的 2×CTAB抽提液，混匀， 65℃保温 30～60min。
2)加入等体积的氯仿 / 异戊醇（24：1），轻缓颠倒混匀， 10000r/min ，离心 5min。
3)取上清，加入 1/10 体积（约）的 65℃的 10× CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。
4)用等体积的氯仿 / 异戊醇（ 24：1）抽提， 10000r/min ，离心 5min。
5)取上清，加入（正好）等体积的 CTAB积淀液，颠倒混匀，如积淀可见，持续做下步，否则， 65℃保温 30min。
6)4℃， 2700 r/min ，离心 5min。
7)去上清，用高盐的 TE buffer 重悬（～）。
（可 65℃保温 30min，至大多数溶解）。
8) 加入体积的异丙醇积淀核酸，充分混匀， 4℃， 10000 r/min ，离心 15min。
9) 去上清， 80%乙醇洗涤积淀，干燥，用尽可能少的 TE buffer 重悬。
高盐的 TE buffer终浓度配制 50ml10mM , (1M 母液 )0.1mM EDTA, (0.5M 母液 )1M NaCl 1.8g室温可保留几年CTAB提取液终浓度配制 200ml2%(W/V) CTAB 4g100mM , 20ml(1M 母液 )20mM EDTA, 8ml(0.5M 母液 )1.4M NaCl 10.22g室温可保留几年10×CTAB/NaCl溶液 (10%CTAB/0.7M NaCl)在 80ml H2O 中溶解 4.1g NaCl ，迟缓加入 10g CTAB，同时加热并搅拌。
如果需要，可加热至 65℃溶解。
定容至 100ml。
CTAB积淀液终浓度配制 100ml1%(W/V) CTAB 1g50mM , 5ml(1M 母液 )10mM EDTA, 2ml(0.5M 母液 )室温可保留几年CTAB法提取植物干品（或真菌）基因组DNA（自己改良版）10)取 0.2g 叶片，加入液氮粉碎，加入 800μL 2% 65℃保温的 2×CTAB抽提液，混匀， 65℃保温 30～60min。
CTAB法提取DNA原理及步骤、制胶、电泳
CTAB法提取DNA的原理及步骤：冷冻的植物组织，在低温干燥状态下机械磨碎。
通常精提DNA，都要加液氮使材料变脆，易于研磨。
低温降低了DNase的活性，利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）去污剂溶解细胞膜，使核蛋白等解聚，使DNA游离出来。
CTAB作为一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，与核酸形成复合物，可使核酸沉淀出来。
通过离心将CTAB-核酸复合物语糖类、蛋白质等分离开来。
随后将复合物溶于高盐溶液中，再加乙醇使核酸沉淀，而CTAB溶于乙醇，从而去除CTAB 。
1.研磨2.加1000ul预处理液，10-15min，4000r，10min,弃上清（重复）预处理液：Tris-hcl (PH8.0)提供缓冲环境，防止核酸被破坏。
EDTA （螯合二价阳离子）0.5M抑制DNase活性。
Nacl 5M提供高盐环境，使DNA充分溶解。
β-巯基乙醇抗氧化剂，去除酚，糖，能与酚形成络合物，也可与糖结合。
3.加800ul2×CTBA(预热），10ul β-巯基乙醇，65℃水浴1-2h。
15min 震荡4.冷至室温，离心1000r ,10min ,取上清750ul，加800ul氯仿-异戊醇（24:1），抽提10min，1000r，15min,重复3次。
氯仿：加速有机相与水相分层，去除核酸溶液中残余酚，抽提蛋白质等杂质。
5.取上清，加2倍体积的无水乙醇，-20℃,1h,沉淀DNA.无水乙醇：DNA不溶于酒精，CTAB和一些蛋白质可以，低温乙醇可抑制DNase 活性，降低分子运动，易于DNA沉淀。
6. 4℃，1000r,10min,倒乙醇，收集DNA.7. 70％乙醇洗涤2遍，风干（不可太干），溶于40-60ul dd水。
DNA在凝胶中涌动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的PH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于相同数量的双链DNA几乎具有等量的静电荷，因此能以同样的速率向正极移动。
在一定电场强度下，DNA分子的歉意速率取决于分子筛效应，即DNA本身的大小。
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昆虫基因组DNA提取方法—CTAB法
1. 将95% 酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本表面的乙醇，用1×TE Buffer浸泡两次，每次20min；
2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入1mL 液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末。
3. 然后加入600μL预热至60℃的2%CTAB提取缓冲液（2% CTAB，0.1mol/L Tris•Cl pH8.0，0.02 mol/L EDTA，1.4 mol/L NaCl），20mg/mLProK 2.5μL(终浓度100mg/mL)，和β-巯基乙醇溶液1.0μL，轻轻混匀，60℃下恒温水浴2.0-3.0 hr，不时加以轻轻混匀。
4. 水浴后取出，等体积氯仿/异戊醇（24：1）混合液混匀，然后7,000 rpm 离心10min，取其上层清液，量体积；重复一次。
5. 在上层清液中加入2倍体积冷冻的无水乙醇于－20℃沉降2小时( 或1倍体积异戊醇于－20℃沉降1hr)。
4℃、10,000 rpm下离心15min，取沉淀, 小心弃上清。
6. 用500μL 70% 预冷的乙醇洗涤沉淀，10,000 rpm下离心5min，弃上清；重复一次。
7. 室温晾干或抽真空干燥；用40μL TE Buffer重溶。
8. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase（每次使用前90℃灭活10min），于37℃消化1.0-1.5hr。
9. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3μL DNA样品及2μL Load-buffer (含溴酚蓝和缓冲液)，加入点样孔。
实验所用Marker是 DNA（EcoR/HindIII），100V 电压电泳90分钟。
凝胶成象分析仪进行检测。
10. 用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。