人感染猪链球菌病样品采集与实验室检测方法
猪链球菌的检测-课件
• 2、管理传染源 应在当地有关部门的指导下，对病（死）家畜进行消毒、
焚烧、深埋等无害化处理。严禁屠宰、加工、贩卖病（死） 家畜及其制品。
• 3、切断传播途径 1）对直接接触（如宰杀、洗切加工、搬运等）感染的病 （死）猪或猪肉制品的人员，开展为期1周的医学观察， 主要观察体温变化，一旦出现发热应立即就诊。
• 6）呼吸系统表现：部分严重患者继发急性呼吸窘迫综合 征（ARDS），出现呼吸衰竭表现。 7）听力、视力改变：听力下降，视力下降，且恢复较慢。 8）其他：少数患者可出现关节炎、化脓性咽炎、化脓性 淋巴结炎等，严重患者还可出现肝脏、肾脏等重要脏器的 功能损害。
2、临床分型
• 根据临床表现的不同，可以分为以下类型。
• 3）猪链球菌溶血素（suilysin）：溶血素被认为是几种 细菌的主要毒力因子，可能在猪链球菌侵入和裂解细胞的 过程中发挥着重要作用。 4）44000蛋白、IgG结合蛋白及其他因素：44000蛋白为2 型猪链球菌的胞壁蛋白，IgG结合蛋白属热休克蛋白，有 报道认为也与毒力相关。菌毛(fimbriae)、黏附因子 (adhesions)也是一些细菌常见的毒力因子。
剂都敏感。
2、毒力因子
• 目前认为，较为重要的猪链球菌毒力因子主要有： 1）荚膜多糖（CPS）：是目前惟一被确认的，也是最为重 要的毒力因子。 2）溶菌酶释放相关蛋白（muramidase-released protein, MRP）和细胞外蛋白因子（extracellular factor, EF）： 除荚膜多糖外，这两种蛋白是最常用于评价猪链球菌毒力 的指标。
• 重症猪链球菌感染者可合并DIC。病理表现为全身多器官、 组织内毛细血管漏出性出血，血液不凝固，继而导致多器 官功能衰竭和休克。 休克是强烈的致病因子作用于机体引起的全身危重病理过 程，多种原因可致休克。重症人感染猪链球菌病患者发生 休克应是多种原因所致，包括①某些炎性介质的作用引起 静脉和毛细血管扩张，致血管总容积增加；②DIC致广泛 性毛细血管漏出性出血使血容量减少；③心肌病变致心输 出量减少等。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
19
试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
猪链球菌的分离与鉴定
猪链球菌的分离与鉴定
猪链球菌（Streptococcus suis）是引起猪链球菌病的病原菌，能感染猪只，特别是幼猪。
下面是猪链球菌的分离和鉴定方法：
1. 分离：
- 从疑似患有猪链球菌病的猪只或组织样品中采集样品。
- 将样品接种到适宜的富营养培养基上，如含有血液的琼脂平板或在琼脂深培养基上。
- 在适当的条件下培养，如在37°C下孵育一夜。
- 观察培养基上的生长情况，猪链球菌通常呈灰白色圆形菌落。
2. 纯化：
- 选取疑似猪链球菌的单个菌落，用无菌线形勺或钝尖的无菌环划取。
- 将菌落转移到含有猪链球菌病人血清的琼脂平板上，进行纯化。
- 用琼脂深培养基进行进一步的纯化。
3. 形态和生理鉴定：
- 使用显微镜观察猪链球菌的形态特征，如形状、大小和排列方式。
- 进行革兰染色，猪链球菌显示革兰阳性，表现为圆形或椭圆形细胞。
- 进行氧需要实验，猪链球菌为厌氧菌，不需要氧气进行生长。
- 进行糖发酵试验，猪链球菌通常能产生酸和气体。
4. 生化鉴定：
- 进行羟吲哚试验，猪链球菌通常产生羟吲哚。
- 进行尿素酶试验，猪链球菌通常不产生尿素酶。
- 进行乳糖巴氏杆菌液功效和TM产品试验，猪链球菌通常不能生长。
5. 分子鉴定：
- 使用PCR技术进行特异性扩增，引物可以选择猪链球菌特异性基因，如16S rRNA基因等。
- 进行凝胶电泳分析，观察PCR产物的大小和特异性。
通过以上步骤的分离和鉴定，可以确认是否存在猪链球菌，并确保纯化的菌株为猪链球菌，以便进一步研究和处理。
人感染猪链球菌病的治疗体会：附1例报告
２ 讨 论
人感染 猪链 球菌病是 由猪链 球菌感染 人而引起 的人畜 共 患疾病 ， 主要通过皮 肤伤 口感染 ， 临床表 现为发热 、 寒战、
猪链球 菌属于链球 菌属 ， 为革兰 阳性球菌 ， 培养 和生化 反应显示该 菌为需氧 或兼性厌 氧菌 ］ 。 目前全球 已报告 ４ ０ ０ 多例人感染猪链 球菌病病例 ， ２ ０ ０ ５年至 ２ ０ ０ ８年我 国报告病 例的病死率为 ９ ． ０ ９ ％～１ ８ ． ２ ７ ％， 合并 Ｔ Ｓ Ｓ者高达 ８ ０ ％ｔ 。
仍持续 低血压状态超 过 ３ ０ ｈ ， 患者 出现 了明显水肿 、 心排 血
指 数（ Ｃ Ｉ ） ３ ８ ． ６ ７ ｍ ｌ ・ ｉ ｎ 、 血管外 肺水指 数 （ Ｅ ｖ Ｌ ｗＩ ） 上升 至 １ ２ ｍｌ ／ ｋ ｇ 可能与严重的毛细血管渗漏 和心肌损伤所致心排血 量减少有关 ，在调整 晶胶 比为 １： １ 并 联合 应用去 甲肾上腺 素４ ０ Ｉ ． ｚ ｇ ／ ｍ ｉ ｎ 、多巴酚丁胺 ２ ０ Ｉ ｘ ｇ ・ ｋ ｇ － １ ． ｍ ｉ ｎ 后 ，血压开始 回 升、 尿量增加。治疗 期间也采 用血必净等中药进行辅助治疗 以清除内毒素 、 抑制炎症 反应 、 改善微循环 ， 从而保护机体 ］ 。 ２ ． ４ 机械通气 与撤机 ： 本 例患者就诊 时 已发生 Ａ Ｒ Ｄ Ｓ ， 无创 通气无效后 改用有创正压通气 ，模式为 同步 间歇指令通气 ／
沙星后 ， 患者体温在 ２ ４ ｈ内恢复至正常。
２ ． ３ 脓毒性休 克 ： 早期 目标导 向治 疗（ Ｅ Ｇ Ｄ Ｔ ） 是抢救脓毒 性 休克常见的干预措施 ，监测全心舒张期末 容积指数 （ Ｇ Ｅ Ｄ Ｉ ） 、 胸腔 内血容量指数 （ Ｉ Ｔ Ｂ Ｉ ） 能准确判断血容量状态 ， 常用 于指 导脓毒性休克患者实施 Ｅ Ｇ Ｄ Ｔ口 ］ 。本 例患者实施 Ｅ Ｇ Ｄ Ｔ初期
人感染猪链球菌病样品采集运送与实验室检测方案
• 人感染猪链球菌病概述 • 样品采集方案 • 样品运送方案 • 实验室检测方案 • 安全防护措施 • 应急预案
01
人感染猪链球菌病概述
疾病定义与特性
疾病定义
人感染猪链球菌病是由猪链球菌感染 引起的一种人畜共患病。
疾病特性
该病具有潜伏期短、起病急、病情严 重等特点，病死率较高。
运送方式与流程
冷链运输
01
对于需要冷藏的样品，应使用冷藏车或带有冷藏设备的运输工
具进行运输，确保样品在整个运输过程普通物流或快递方式进行运输。
流程
03
采集样品后，应尽快进行包装和密封，然后按照规定的运送方
式将样品送至实验室。
运送注意事项
防止污染
在运送过程中，应避免样品受到污染，特别是避 免交叉污染。
专家团队
组建由专业人员组成的专 家团队，提供技术指导和 支持。
执行机构
指定专门的执行机构，负 责具体实施应急预案。
应急流程与措施
预警发布
根据疫情情况及时发布预警信息，启动应急 预案。
样本采集
按照规定程序采集相关样本，确保样本质量 和安全性。
现场处置
组织专业人员赶赴现场，采取隔离、消毒等 措施，控制疫情扩散。
检测流程与步骤
样品采集
样品处理
采集疑似感染者的血液、 脑脊液、痰液等体液样 本，以及相关环境样本。
对采集的样本进行预处 理，如离心、过滤、提
取核酸等。
检测实施
根据所选的检测方法， 进行免疫学试验、核酸
检测或微生物培养。
结果判定
根据试验结果，判定是 否为猪链球菌感染。
检测结果分析与报告
人感染猪链球菌病
• 此后，在香港、英国、加拿大、德国、法国和瑞典 也陆续报道
• 近年来，美国、澳大利亚、比利时、巴西、西班牙 、日本、泰国、中国台湾等地等先后有过报道
4
烟台市莱阳中心医院 潍坊医学院附属医院
仁爱•敬业•诚信•创新
• 1998年夏在江苏南通地区发生一起 因接触病死猪而引起的STSS 16例， 病死13例（81.25%），从该事件看流 行主要由2天内接触感染的猪和猪肉 制品经破损皮肤等感染人体。
止共有35个血清型，最常见的致病血清型为2型。
不同血清群对不同的动物宿主有不同的致病性。化脓性链 球菌是A群中唯一对人类致病的细菌。
引起猪病并感染人的主要有：D群的猪链球菌II型，F群的 咽峡炎链球菌，L、R、S、T、U、V群链球菌等。
猪链球菌的主要毒力因子包括荚膜多糖，溶菌酶释放蛋白 ，细胞外因子，以及溶血素等，其中溶血释放蛋白和细胞外蛋 白因子是猪链球菌的两种重要毒力因子。
抢救休克，以先快后慢为原则。第1小时可以输入1000 ～2000ml，随血容量补充，速度减为500ml以至更低。
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胶体液：白蛋白30g，血浆500ml，低分子右旋糖酐 500ml，静脉点滴，与晶体液配合使用。每10g白蛋白可 与500ml晶体液联合使用，每100ml血浆可与200ml晶体 液联合使用。
小于20×109/L， 2单位/天
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肝素抗凝：如果经过以上积极替代治疗1天后出血 症状不改善，血小板数和PT不能恢复正常，在继续 替代输注治疗基础上可以给予肝素抗凝治疗。
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人感染猪链球菌病样品采集与试验室检测方案
附件1 人感染猪链球菌病样品采集与实验室检测方法一、样品采集1．采样器材⑴无菌封闭性好的试管，最好使用负压采血管或带螺口盖的塑料管，避免使用玻璃试管。
⑵可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。
⑶可以方便采集组织标本的无菌容器。
⑷无菌的剪刀、镊子和手术刀。
⑸血平皿和增菌培养瓶。
⑹乳胶手套、隔离服、防护口罩等。
⑺带有冰袋或者冰排的安全可靠的保温运输容器。
⑻采样送检单。
2．样品种类⑴现症病人非抗凝全血⑵现症病人抗凝血⑶脑脊液标本⑷尸体解剖应无菌采集淋巴结、脾、肝、心腔血、胸（腹）水⑸如有病死猪也可进行解剖，取淋巴结、脾、肝、心腔血、肉3．血液和脑脊液标本采集方法⑴无菌抽取血液10ml分置于有抗凝剂和无抗凝剂的无菌试管或者负压采血管中⑵按常规方法腰穿采集3～5ml脑脊液标本置于无菌试管中。
⑶采集的标本立即接种血平皿和/或增菌培养瓶，置于35～37℃培养。
4．样品运输保存⑴所有的原始标本在转运过程中应置于安全密闭的容器中。
⑵标本应冷藏运输。
⑶用于检测的标本可在4~8℃冰箱暂放。
⑷剩余标本应放置于-70℃保存。
5．注意事项⑴严格无菌操作，防止标本污染。
⑵用于分离培养的标本应在抗菌治疗前采集。
⑶应尽可能床边接种血平皿和增菌培养瓶。
如无法床边接种，样品应尽快送实验室，并立即检测。
⑷在标本采集过程中，注意安全防护。
使用乳胶手套、隔离服、防护口罩。
采取预防措施，防止针头等锐器刺伤。
二、实验室检测1．推片镜检抗凝血或脑脊液可推片进行革兰氏染色镜检。
阳性标本可见中性粒细胞内吞噬颗粒，细胞外偶尔可见革兰氏阳性链球菌。
2．猪链球菌分离鉴定⑴血平板接种血液或脑脊液等标本可直接接种于新鲜羊血琼脂平板（如无血平板可用含8 %胎牛血清的营养琼脂平板代替）。
组织标本可直接涂抹平板或剪碎用无菌生理盐水洗涤，洗液接种平板。
平板置37℃5% CO2培养箱或者烛缸中培养24～72小时。
也可在37℃普通培养箱中培养。
⑵增菌培养无菌部位采集标本置脑心肉汤或含8%新生牛血清葡萄糖肉汤或商品化血培养瓶中，37℃增菌培养24小时～1周，逐日观察，接种新鲜羊血琼脂平板，置37℃5% CO2培养箱或者烛缸中培养24～72小时。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施猪链球菌病是由链球菌科猪链球菌引起的一种常见的猪类传染病。
猪链球菌病主要病变部位在皮肤和淋巴系统，病猪常表现为皮肤红肿、淋巴结肿大以及发热等症状。
猪链球菌病严重影响了猪的生产性能和养殖效益，因此对其进行准确的实验室鉴定和合理的防治措施非常重要。
实验室鉴定猪链球菌病的方法主要包括病原学鉴定、生物学特性鉴定和分子生物学鉴定。
病原学鉴定是通过采集病猪的临床标本，在适当增菌基质中培养猪链球菌，观察和分离纯种菌株。
通常可以采集病猪的皮肤切片、淋巴结组织和关节液等标本进行培养，常用的培养基有血琼脂、亚硝酸盐琼脂和巴氏液等。
培养到纯种菌株后，可以进行生物学特性的鉴定。
生物学特性鉴定主要包括菌体形态、生理生化特性以及药敏试验等。
通过菌体形态特征，如菌落形态、菌体形状、胞外多糖产生等，可以初步确认猪链球菌；而通过生理生化特性鉴定，如氧需求性、pH值耐受性、产气等，可以进一步确认该菌种。
分子生物学鉴定是目前较为先进的鉴定方法，通过PCR反应扩增猪链球菌特异性的基因或基因片段，如16S rRNA基因等，然后进行DNA序列测定和分析，最终确定该菌种。
分子生物学鉴定方法具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优势。
对于猪链球菌病的防治，主要采取以下措施：1. 强化卫生和消毒。
加强猪舍的清洁消毒工作，定期对猪舍进行内外环境消毒，包括对猪栏、饮水设备、饲料器具和兽医器械等进行清洁和消毒操作，减少猪链球菌的传播源。
2. 合理养殖管理。
根据疫情的流行特点，合理调整猪群的密度，避免猪只之间的交叉感染；同时加强对饲料、饮水和环境的管理，保证猪只的饲养条件良好，增强其免疫力。
3. 接种疫苗。
针对猪链球菌病，可以选择适当的疫苗进行接种，以增强猪只的防御能力。
疫苗接种应根据猪只的年龄、季节和病情等因素来确定接种时间和剂量。
4. 应对突发疫情。
一旦发生猪链球菌病的疫情，应及时采取隔离和治疗措施，对病死猪只进行尸检和埋葬处理，避免病菌的扩散和传播。
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附件1 人感染猪链球菌病样品采集与实验室检测方法
一、样品采集
1．采样器材
⑴无菌封闭性好的试管，最好使用负压采血管或带螺口盖的塑料管，避免使用玻璃试管。
⑵可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。
⑶可以方便采集组织标本的无菌容器。
⑷无菌的剪刀、镊子和手术刀。
⑸血平皿和增菌培养瓶。
⑹乳胶手套、隔离服、防护口罩等。
⑺带有冰袋或者冰排的安全可靠的保温运输容器。
⑻采样送检单。
2．样品种类
⑴现症病人非抗凝全血
⑵现症病人抗凝血
⑶脑脊液标本
⑷尸体解剖应无菌采集淋巴结、脾、肝、心腔血、胸（腹）水
⑸如有病死猪也可进行解剖，取淋巴结、脾、肝、心腔血、肉
3．血液和脑脊液标本采集方法
⑴无菌抽取血液10ml分置于有抗凝剂和无抗凝剂的无菌试管或者负压采血管中
⑵按常规方法腰穿采集3～5ml脑脊液标本置于无菌试管中。
⑶采集的标本立即接种血平皿和/或增菌培养瓶，置于35～37℃培养。
4．样品运输保存
⑴所有的原始标本在转运过程中应置于安全密闭的容器中。
⑵标本应冷藏运输。
⑶用于检测的标本可在4~8℃冰箱暂放。
⑷剩余标本应放置于-70℃保存。
5．注意事项
⑴严格无菌操作，防止标本污染。
⑵用于分离培养的标本应在抗菌治疗前采集。
⑶应尽可能床边接种血平皿和增菌培养瓶。
如无法床边接种，样品应尽快送实验室，并立即检测。
⑷在标本采集过程中，注意安全防护。
使用乳胶手套、隔离服、防护口罩。
采取预防措施，防止针头等锐器刺伤。
二、实验室检测
1．推片镜检
抗凝血或脑脊液可推片进行革兰氏染色镜检。
阳性标本可见中性粒细胞内吞噬颗粒，细胞外偶尔可见革兰氏阳性链球菌。
2．猪链球菌分离鉴定
⑴血平板接种
血液或脑脊液等标本可直接接种于新鲜羊血琼脂平板（如无血平板可用含8 %胎牛血清的营养琼脂平板代替）。
组织标本可直接涂抹平板或剪碎用无菌生理盐水洗涤，洗液接种平板。
平板置37℃5% CO2培养箱或者烛缸中培养24～72小时。
也可在37℃普通培养箱中培养。
⑵增菌培养
无菌部位采集标本置脑心肉汤或含8%新生牛血清葡萄糖肉汤或商品化血培养瓶中，37℃增菌培养24小时～1周，逐日观察，接种新鲜羊血琼脂平板，置37℃5% CO2培养箱或者烛缸中培养24～72小时。
对污染标本接种选择增菌培养液（含15微克/毫升多粘菌素B，30微克/毫升萘啶酮酸的脑心培养基）增菌约15小时后接种血平板，或直接划线接种含两种抗生素的羊血琼脂平板培养基，在蜡烛缸或CO2培养箱中培养24～72小时。
⑶形态学鉴定
猪链球菌在血平板上呈直径l～2毫米的细小菌落，灰白色，半透明，边缘整齐，凸起，光滑，α溶血（偶尔也有弱β溶血或α溶血、β溶血现象均不明显）。
挑取平板上可疑菌落革兰氏染色镜检。
猪链球菌无芽胞，刚分离的猪链球菌为典型的革兰氏阳性链球菌，链长达二十多个，多次传代培养后细菌形态不典型，结晶紫着色不良，多为短链或不成链的球杆菌。
⑷筛检生化试验
猪链球菌触酶试验阴性，可与葡萄球菌区别。
⑸血清学检测
用标准分型诊断血清，进行乳胶凝集试验或玻片凝集试验。
确定所分离的菌株为R群，与2型猪链球菌分型血清反应。
目前国内无血清供应。
据报道,加拿大和澳大利亚有商品化血清分型试剂。
⑹生化鉴定
在血平板上挑选可疑菌落进行革兰氏染色和触酶试验，如符合链球菌特征，接种血平板纯培养后进行生化鉴定。
梅里埃API 20 strep等生化鉴定系统可鉴定2型猪链球菌。
⑺PCR检测
采用PCR技术可以检测猪链球菌种特异性基因16S rDNA、猪链球菌2型和1/2型特异的荚膜多糖基因(cps2j)、毒力因子溶菌酶释放蛋白基因(mrp)和细胞外蛋白因子基因(ef)，有条件的实验室可以采用。
猪链球菌种特异性基因16S rDNA检测可以鉴定猪链球菌；猪链球菌特异的荚膜多糖基因(cps2j)检测可以鉴定猪链球菌2型和1/2型；毒力因子溶菌酶释放蛋白基因（mrp）和细胞外蛋白因子基因（ef）检测可以鉴定高致病性的猪链球菌。