水产乳酸菌扩培方法
微生物制剂使用过程中“活化”与“扩培”
微生物制剂使用过程中“活化”与“扩培”微生物水质改良剂在水产养殖广泛的应用过程中，为了增强使用效果，很多用户在使用之前通常进行活化或扩培，本文就活化或扩培的适用场景、培养基质等方面谈点个人看法供同行参考。
1、活化与扩培的概念理论上活化与扩培应是两个不同的概念。
活化简单的讲就是让微生物激活，恢复活力，在一个营养、温度等相对较好的环境条件下，使菌种在较短的时间内合成并完善生长所需要的多种酶系及其它细胞成分，从而缩短细菌生长的迟缓期。
特点是时间短（几个小时之内）操作简单，未必充氧，尚未繁殖和无菌量增加；扩培，就是扩大培养，其应是活化基础上的延续，给予适合的营养、温度等生长条件，让菌种生长繁殖，菌数由少到多，目的是菌量增殖。
其特点是时间相对较长，在此阶段细菌繁殖，伴随着代谢产物产生和菌量增加，对于需氧菌而言，这个过程要充气增氧。
2、活化与扩培的适用场景微生物制剂进入水体分解污染物净化水质的过程就是一个先活化、后扩培的过程。
活化和扩培可以看作是微生物制剂发挥作用所经历的两个阶段，在实际操作中，活化和扩培在时间界限上很难截然分开，活化时间长了，就进行扩培了。
在实际使用中微生物制剂以活化为主还是扩培为主，要根据产品菌株特性以及组成数量和产品有效菌含量能否满足水体净化需要两个方面来决定。
微生物制剂的菌株组成数量是考虑活化或扩培的一个重要因素。
单一菌株或菌株不多的产品活化或扩培不存在改变产品菌种之间配比问题，可以根据产品配置菌量充足与否来决定活化扩培；而对于菌株较多的产品如有美国复合芽孢产品是七株菌复合而成，日本EM菌更是声称有几十种复配而成，对此类产品应以活化为主，并且注意活化时间不能太长，控制在0.5-2小时之内。
因为用户在有限的营养条件和空间内进行扩培极有可能导致菌株之间生长不同步，如快速繁殖的菌株产酸可能抑制其它菌株的生长，存在着潜在改变产品菌株之间配比和不能估计投入水体菌量的风险，从而对使用效果产生较大影响。
乳酸菌用于水产养殖
微生物菌剂-乳酸菌水产养殖中乳酸菌的作用：乾界复合乳酸菌是一种乳酸菌、丁酸复合菌，属于水生动物源益生菌。
乳酸菌早在20世纪40年代就开始投入使用，其效果已得到广泛认可。
该乳酸菌具有抗恶劣环境的生物学特性，在体内能耐受胃液、胆汁酸和消化液，在室温下具有良好的贮存和稳定性。
主要代谢产物是乙酸，它还产生丁酸、短链脂肪酸、丙酸、各种氨基酸、b 族维生素如叶酸、维生素k，以及多种酶、乳酸菌素、胞外多糖，其中主要产物乙酸具有以下生物学作用:1是肠上皮细胞的能量代谢，增殖，分化和再生主要营养成分，是基于细胞的合成基质2增强患者肠道进行防御技术屏障系统功能:影响以及结肠上皮细胞黏液中TFFS （TrefoilFactors）和粘蛋白的表达3抑制组蛋白脱乙酰，对所引起的反应的氧化应激损伤的肠组织。
4乳酸菌可以具有一定抑制肠出血性大肠埃希菌、痢疾志贺菌、霍乱沙门菌、霍乱弧菌等肠道主要致病菌的生长进行繁殖，抑制中国艰难梭菌生长迅速繁殖，促进双岐杆菌、乳酸菌等肠道健康有益的生长影响繁殖主要代谢产物醋酸，可供给肠上皮细胞以加强肠黏膜的营养代谢，改善肠黏膜屏障，激活免疫细胞，改善和恢复正常的肠道免疫。
二使用乳酸菌注意事项1. 由于其自身的生理特性，乳酸菌需要用40-50 °c 的稳定水和1:1的葡萄糖来提供能量，整个过程不需要氧气，密封发酵状态最佳。
2、由于其生长需要ph 偏酸，对于ph 值在8.2以上的池塘采用混料喂养效果较好，全池喷洒时，建议早上活化，晚上使用。
图3。
藻类较少的池塘应与生物水培剂一起使用，以防止水变得更干净乾界生物乳酸菌是一种复合乳酸菌，以嗜酸乳杆菌为主导的有益微生物菌群及多种微元素和生长因子等，颜色是褐色液体，1刺激水产品消化系统和内分泌系统，调节新陈代谢，促进水生动物生长。
2可阻断弧菌和发光菌的养分来源，抑制有害菌生长。
3改善养殖水体，维持生态平衡。
2. 使用本产品切记不要使用抗生素，消毒剂，杀虫剂等强酸，强碱等杀菌物质。
菌种扩大培养的一般流程
菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学实验中常见的一项操作，其目的是在较小的培养基中培养并扩大菌种数量，以满足后续实验的需要。
下面将介绍一般的菌种扩大培养流程，以帮助读者了解和掌握这一技术。
第一步：选择适当的培养基菌种扩大培养的第一步是选择适当的培养基。
不同的菌种对培养基的要求不同，因此选择合适的培养基是非常重要的。
一般来说，培养基应包含适当的营养物质，如碳源、氮源、矿物质和水等，以满足菌种生长的需要。
第二步：制备培养基制备培养基是菌种扩大培养的关键步骤之一。
一般情况下，制备培养基需要将适量的培养基粉末溶解在适量的蒸馏水中，并进行加热煮沸，以杀灭其中的细菌和其他微生物。
然后，将煮沸的培养基倒入无菌培养皿或试管中，并在冷却后加入适量的菌种。
第三步：接种菌种接种菌种是菌种扩大培养的关键步骤之一。
接种菌种时，首先需要将菌种从原始培养基中转移到新的培养基中。
这可以通过采用无菌的接种环、接种针等工具，将菌种从原始培养基中接种到新的培养基中完成。
为了确保接种的无菌性，可以在接种后进行密封和贴标。
第四步：培养菌种在接种菌种后，需要将培养基置于适当的环境条件下进行培养。
一般来说，菌种的生长需要适宜的温度、湿度和氧气条件。
因此，在培养过程中需要注意保持适宜的培养环境，并定期观察菌落的生长情况。
第五步：检测菌种的生长情况在培养一定时间后，需要检测菌种的生长情况。
这可以通过肉眼观察菌落的形态、颜色和大小等特征来判断。
同时，也可以采用显微镜观察菌落的细胞形态和结构，以进一步确定菌种的生长情况。
第六步：收获菌种在菌种生长到一定程度后，可以进行菌种的收获。
一般来说，菌种可以通过离心、过滤和冻干等方法进行收获。
收获后的菌种可以用于后续的实验操作或保存在冷冻库中。
菌种扩大培养的一般流程包括选择适当的培养基、制备培养基、接种菌种、培养菌种、检测菌种的生长情况和收获菌种等步骤。
通过掌握和熟练操作这一流程，可以有效地扩大菌种数量，并满足后续实验的需要。
乳酸菌在水产养殖中的应用
乳酸菌在水产养殖中的研究进展乳酸菌是一群能从可发酵性碳水化合物中产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的通称。
乳酸杆菌有44个种，连同亚种共51个种，是革兰氏阳性、无芽孢、细长、有弯曲的杆菌。
有9个属：其中5个属呈球状，如乳酸球菌(1actococcus)、链球菌(streptococcus)等；4个属呈杆状，如乳酸杆菌(1actobacillus)、双歧杆菌(bifidobactrium)等。
乳酸菌是被人类作为食品微生物利用的一大类菌，尤其在增强牛奶保健功能、提高青贮品质、提高畜禽生产性能、降低畜产品贮藏对肉品风味的影响等方面已取得较好效果，广泛应用于食品、医药、轻工业和畜牧业等领域。
目前在水产上对乳酸菌的报道主要集中于乳酸菌在水产动物肠胃和其他内脏器官中的栖息情况。
乳酸菌在水产上的应用较多，主要是拌入饲料一起投喂给养殖动物，或做为EM菌的主导菌在水体泼洒。
1、生理功能及代谢产物1.1 乳酸菌的生理功能乳酸菌在动物体内能发挥许多生理功能。
大量研究资料表明，乳酸菌能调节动物胃肠道正常菌群、维持微生态平衡，从而改善胃肠道功能；提高食物消化率和生物效价；降低血清胆固醇，控制内毒素；抑制肠道内腐败菌生长；提高机体免疫力等。
乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、细菌表面成分等物质具有一定生理功能，可刺激组织发育，对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和应激反应等产生作用。
1.2 乳酸菌的代谢产物乳酸菌最终代谢产物除乳酸、乙酸外，还能代谢产生其他形式的有机酸、细菌素、过氧化氢、乙醇和罗伊氏素等多种抑菌物质。
这些代谢产物不仅能抑制致病菌的生长，对其近缘相关的种或菌株也有生长抑制作用。
乳酸菌产生的乳酸现已证明无论是在体内还是在体外都可以对大肠杆菌等革兰氏阴性菌产生抑制作用。
尽管乳酸抑制革兰氏阴性菌的作用机理目前尚无明确结论，但其中的一个原因是乳酸菌发酵的代谢终产物之一是乳酸，乳酸的积累导致周围环境pH值下降，降低氧化还原点位，可对许多革兰氏阳性或阴性细菌产生广泛的抑制作用。
水产用乳酸菌发酵方法
水产用乳酸菌发酵方法水产用乳酸菌发酵方法是一种利用乳酸菌对水产产品进行发酵处理的技术。
通过发酵，乳酸菌可以消化水产中的蛋白质、糖类等营养物质，产生乳酸等有益物质，提高水产的品质和营养价值。
水产用乳酸菌发酵方法可以应用于多种水产产品，如鱼类、虾类、贝类等。
下面将介绍水产用乳酸菌发酵方法的步骤和一些应用案例。
第一步是选取适宜的乳酸菌菌株。
根据不同的水产产品和需求，选择适合的乳酸菌菌株。
常用的乳酸菌菌株有嗜热乳酸杆菌、乳酸菌杂交菌株等。
第二步是培养乳酸菌。
将选取的乳酸菌菌株接种到培养基中，进行预培养，使其繁殖增殖。
培养基的选择要考虑到菌株的特性和生长所需的条件，常用的培养基有MRS培养基、Lactobacillus基础培养基等。
第三步是准备水产原料。
将水产产品洗净、解剖，并去除不可食用的部分。
可根据需要进行切割、刨皮等加工处理，以利于乳酸菌的渗透和作用。
第四步是发酵处理。
将培养好的乳酸菌菌液加入水产原料中，进行发酵处理。
发酵温度一般控制在30-40摄氏度，发酵时间根据水产品种和要求的风味、质地等因素而有所不同，一般在6-24小时左右。
发酵过程中，乳酸菌会分解水产中的糖类，产生乳酸和其他有益物质。
第五步是停止发酵和保存。
当发酵达到预期效果后，停止发酵过程，防止产物继续酸化和变质。
可以采用冷却、加热、调节pH值等方法停止乳酸菌的活动。
之后，将水产产品按照需要进行包装、贮存或加工。
水产用乳酸菌发酵方法的应用案例有很多。
例如，乳酸菌发酵可以使鱼肉变得细嫩多汁，增强其口感和风味。
同时，发酵过程中的乳酸还可以抑制有害菌的生长，延长水产产品的保鲜期。
此外，水产产品经过乳酸菌发酵后，还可以增强其抗氧化能力，提高其营养价值。
总而言之，水产用乳酸菌发酵方法是一种有效改善水产产品品质的技术。
通过合理选择乳酸菌菌株、培养乳酸菌、发酵处理等步骤，可以使水产产品在口感、香气、保鲜性等方面得到改善。
未来，随着科技的不断进步，水产用乳酸菌发酵方法有望得到更广泛的应用，为水产养殖和加工行业带来更多的益处。
“乳酸菌扩培液”的制作和使用方法（201906版）
“乳酸菌扩培液”的制作和使用方法（201906版）“天道酬勤，好事多磨”，菌是有生命的，固体菌剂类产品活菌含量高，保存性好，但使用前活化处理是必须的，麻烦的事总能给您带来意想不到的效果和效益；同时也建议养殖户自己发酵制作一些液态“乳酸菌扩培液”，虽然麻烦，却可以显著降低使用成本；1、有经验的水产养殖户，经常会自己制作“乳酸菌扩培液”：“乳酸菌扩培液”概念：用比较纯的乳酸菌产品如强微的：壮肠QW100、强微靓水素（乳酸菌为主，少量复配环保功能菌），用红糖+ “强微水产苷”或“强微培藻酵素”（补充氮源和细菌生长营养因子）加水来扩大培养，用来做为补充水体乳酸菌相的活菌发酵液，也可以拌料内服使用；“乳酸菌扩培液”的自制成本一般仅0.55元/公斤左右，一次即便泼洒20-40公斤/亩，也比直接使用乳酸菌产品（强微靓水素、弧菌藻毒净、壮肠QW100等）的泼洒成本要低很多强微公司的其他水产微生态产品：如强微反硝化细菌，强微水精翠，强微生物脱硫剂（芽孢杆菌类）、强微生物蓝藻净（低耗氧芽孢杆菌类），弧菌藻毒净（王者归来）等，则不适合用于静置厌氧扩培使用，因为它们大都是复合菌，大多情况下，长时间静置厌氧扩培后，各菌株的比例会发生分离和变化，最终影响到各菌株之间的协同效果，所以只能用活化的方法，即加和产品等重量的红糖，再加红糖20倍以上的水，浸泡活化1～12小时以内就直接泼洒使用；2、“乳酸菌扩培液”的制作方法：⑴ “乳酸菌扩培液”的静置厌氧扩培方法① 静置厌氧扩培方法一：壮肠QW100（育苗专用菌）取250克+ 20公斤红糖+ “强微水产苷”250克（或者“强微培藻酵素”2公斤）+ 300公斤水，密封发酵培养2～3天，即可使用，平时密封保存，但最好在20天内用完效果最好，最长保存期建议为30天。
② 静置厌氧扩培方法二：方法同上，只是用强微靓水素一包（500克），代替以上的壮肠QW100（育苗专用菌）250克；注意事项：①“强微培藻酵素”中含有丰富的氨基酸和小肽、维生素、微量元素等，是培养液中的小分子氮源和维生素微量元素来源，所以，也可以用“强微培藻酵素”代替“强微水产苷”，只是用量要加大到2公斤；② 静置厌氧扩培法中，繁殖速度慢一些，所以扩培时间要几天，厌氧扩培消耗营养少，所以“强微水产苷”或“强微培藻酵素”的用量也少，保存时间也更长一些，建议30天以内用完即可，超过30天保存期的，也可使用，只是效果不是最佳而已；③ 静置厌氧扩培的活菌含量可达1～5亿/毫升。
养殖户自己如何扩培益生菌该怎么操作
养殖户自己如何扩培益生菌该怎么操作？现在关于益生菌在水产方面的好处不用多讲，运用也是越来越多，咱们做养殖实际上就是在做生产，生产就需要考虑成本，一些养殖户朋友为了降低成本就希望能够自己在塘口培养益生菌，能不能培养呢？当然能，但是前提是您需要把这些工作做好。
首先，就是菌种的选择。
一定要选择一些活力好，更容易保存的菌种拿来发酵。
一些市场上已经装成大瓶，甚至是出现很多菌膜，沉淀的益生菌产品一般是不适合拿来发酵的。
这些产品往往活菌的数量及活力，都不怎么好，一些大瓶子包装的产品，在我个人看来应该叫做益生菌代谢物，可能更合适，比如像一些大瓶装的液体乳酸菌，光合菌之类，经常往货架上随便一摆放，早晚温差变化大，不利于活菌生存，一些甚至还能被太阳直接照射到，太阳里面会有紫外线，对细菌的杀灭作用很强，所以像这些没有专门保存的产品，一般就是一些代谢物，用一下也会有些好处，但是拿来当菌种继续扩培，是不合适的。
其次，培养基的准备工作。
一般像实验室扩培细菌，会有专门的一些蛋白胨，葡萄糖等做成的培养基，营养均衡而且全面，但是成本很高，肯定不太适合我们在塘头扩培。
大家根据细菌生长的需求，需要的基础营养物就是碳源，氮源，无机盐和维生素类，我们如果能够满足，也是可以的。
一些给水产上用的产品，实际上也会自带一些营养基，降低了扩培的难度。
我们自己一般需要准备像糖蜜或者红糖，作为主要氮源，同时像糖蜜或者红糖，比单纯葡萄糖的优势在于，里面还会有一些无机盐类微量元素，而且是多糖类混合物，不是单糖，这样会阻止一些有害的革兰氏阴性菌利用，而葡萄糖，是目前已知的，所有的微生物都能直接利用的糖。
而且我们根据情况，还可以加少量的玉米粉，一般在10%就好，玉米粉也是多糖，而且还含有一些纤维，能够给菌种繁育提供介质。
最后就是扩培工具的准备。
像我们常见的复合菌，一般要求是遮光，密封扩培，熟悉的朋友可能都知道，那种蓝色带盖子的大桶，其实就是很不错的扩培桶。
不过我们在进行扩培工作以前，一定要进行清洗消毒，再用自来水反复冲洗干净，一些相应的工具也是一样，都需要进行消毒处理，不然别人扩培出一桶酸香可口的菌群，您大手大脚，可能就是弄出一桶白色酸臭的东西。
EM菌、乳酸菌的简易扩大培养
2020.4咨询热线：4008-1212-60**************绿科生物科技专栏江苏绿科生物技术有限公司协办路庆鹏金雪霞荣志敏(江苏绿科生物技术有限公司，江苏高邮225600)EM 菌和乳酸菌在水产养殖上的应用已有近20年的历史了，多年的实践证明，这些微生态制剂对于水产养殖水体环境的调控及水产生物机体内环境的调节均十分有效。
水产微生态制剂已成为水产养殖的必备物品，然而在实际应用中养殖户发现，水产用EM 菌等品种五花八门，应用范围基本相同、菌体含量参差不齐，价格相差极大，但作用效果并无天壤之别，这些因素限制了微生态制剂的进一步应用和发挥功效，打击了广大养殖户使用微生态制剂的热情。
特别是微生态制剂是通过生物间的资源竞争和相互拮抗来发挥作用的，起效有一定的时间，需要定时、定量使用才有效果。
优质高价的产品养殖户用不起，劣质低价的产品效果又不好。
在这种情况下，养殖户自主扩培微生态制剂的现象越来越多，且取得了一定的效果，逐渐成为一种趋势。
一、目前EM 菌、乳酸菌扩培中存在的主要问题EM 菌是有效微生物的一种统称，其为一种复合菌制剂。
当前水产上所用的虽然都称为EM 菌，但各厂家所生产的EM 菌差别还是很大，有的以兼性厌氧性菌群为主，有的富含好氧性的菌群，而乳酸菌同样因保存条件、作用性能等也是多种菌种的复合产品。
既然EM 菌是多菌属、多菌种复合制剂，那么不同菌群的扩培条件肯定也存在差异，简单的操作不可能扩培出稳定的EM 菌液。
1.缺乏专一化的扩培菌种当前市场上生产用于EM菌、乳酸菌扩培的专一化菌种的厂家极少，多数是生产相应的培养基，再以市售的商品化EM 菌、乳酸菌为菌种。
市售的EM 菌差异极大，较为经典的EM 菌以兼性厌氧菌为主要菌群，而现有很多的EM 菌中又加入了多种好氧菌，这样会造成有的扩培效果不错，有的则很差。
即使使用同一种EM 菌做菌种，有时扩培很好，有时又很差。
乳酸菌同样如此。
更值得注意的是，养殖户为了节省成本，将一次扩培后的菌液留做菌种，再次或3次扩培，导致扩培液越发不稳定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
水产乳酸菌扩培方法
一、引言
水产乳酸菌是一种重要的益生菌，具有调节肠道菌群、增强消化功能、提高免疫力等益处。
因此，研究水产乳酸菌的扩培方法对于生产高质量的水产乳酸菌产品具有重要意义。
二、水产乳酸菌的筛选和培养基选择
1. 筛选水产乳酸菌菌株：从水产养殖环境中采集样品，如水、沉积物、鱼体等，通过微生物学分离技术，筛选出具有乳酸菌特征的菌株。
2. 培养基选择：水产乳酸菌的培养基应具备适宜的营养成分和pH 值。
常用的培养基包括MRS培养基、LBS培养基等。
三、水产乳酸菌的扩培方法
1. 前处理：将采集到的样品经过初步处理，如过滤、稀释等，以获得较为纯净的样品。
2. 接种：将样品接种到含有适宜培养基的试管或培养皿中，接种量应适量，避免过度接种导致菌落过于致密。
3. 培养条件：将接种后的培养基置于适宜的温度（一般为30-37摄氏度）下静置培养，培养时间根据所需的菌量和菌株特性而定。
4. 培养基的pH调节：根据水产乳酸菌的特性，可适当调节培养基的pH值，一般在
5.5-
6.5范围内为宜。
5. 培养基的营养成分调节：根据水产乳酸菌的需求，可适当调整培养基中的营养成分，如碳源、氮源等，以促进菌株的生长。
6. 培养基的气氛控制：水产乳酸菌属于厌氧菌，因此在培养过程中需要采取适当的气氛控制措施，如用氮气代替空气，或在培养器中注入一定量的二氧化碳。
四、水产乳酸菌的培养结果分析
1. 菌落形态观察：观察培养基上的菌落形态，如形状、颜色、边缘等特征，以初步判断菌株的纯度和特性。
2. 鉴定菌株：通过生化试验、分子生物学技术等方法对菌株进行鉴定，确认其属于乳酸菌的范围，并进一步确定其种属。
3. 菌株保存：将获得的纯培养物进行保存，常用的保存方法包括冷冻保存和冻干保存等。
五、结论
水产乳酸菌的扩培方法是研究水产乳酸菌的基础工作，通过适当的筛选、培养基选择和培养条件控制，可以获得高质量的水产乳酸菌菌株。
此外，对于菌株的鉴定和保存也是非常重要的工作，可以为后续的应用研究提供有力的支持。
希望通过不断的研究和探索，能够为水产乳酸菌的应用开发和水产养殖提供更多的可能性。