微生物学实验三
微生物学 实验三 平板菌落计数法
微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法微生物学实验三平板菌落计数法实验三平板菌落计数学习菌种的平板菌落计数的基本原理和方法。
平板菌落计数法就是将试样样品经适度吸收之后，其中的微生物充份集中成单个细胞，挑一定量的吸收样液注射至平板上，经过培育，由每个单细胞生长产卵而构成肉眼可知的菌落，即为一个单菌落应当代表原样品中的一个单细胞。
统计数据菌落数，根据其吸收倍数和采样注射量即可折算出来样品中的含菌数。
但是，由于试样样品往往难于全然集中成单个细胞，所以，孵出的一个单菌落也可能将源自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往相对较低，为了确切地阐释平板菌落计数的结果，现在已女性主义采用菌落形成单位（colony-formingunits,cfu）而不以绝对菌落数去则表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。
1．菌种：大肠杆菌菌悬液。
2．培养基：lb培养基。
3．仪器或其他用具：1ml无菌液体，无菌平皿，器皿4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10、10、10（稀释度）各3套，另-1-2-3-4-5挑6支盛存有4.5ml无菌水的试管，依次标是10、10、10、10、10、用1ml无菌吸管吸取1ml已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放-10.5ml至10的试管中，此即为10倍吸收。
将多余的菌液送回原菌液中。
-6-4-5-6将10试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支1ml吸管插入10试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
微生物期末实验总结报告
微生物期末实验总结报告一、绪论微生物学是研究微生物的形态、生理、代谢以及与宿主和环境之间的关系的学科。
微生物广泛存在于自然界中的各个环境中，对地球上的物质转化和生物循环起着重要的作用。
本次微生物期末实验旨在通过实际操作，加深对微生物学理论知识的理解，并培养实验技能。
二、实验目的本次实验的主要目的包括：1. 学习微生物实验操作方法，包括无菌操作、菌种接种、菌液稀释、培养基制备等；2. 学习常见的细菌菌种特性的鉴定方法；3. 学习观察和记录微生物生长过程的方法；4. 学习细菌的培养方式和生长规律。
三、实验步骤1. 实验一：无菌操作技术实验一旨在学习无菌操作技术，以避免微生物实验中的污染。
实验中我们按照实验标准操作程序，准备好所需的培养基、试剂和设备，并在无菌条件下进行操作。
2. 实验二：菌种接种和菌液稀释实验二旨在学习菌种的接种方法和菌液的稀释方法。
我们先接种已知菌种，然后用菌液稀释系列倍数，并在不同条件下进行培养观察。
3. 实验三：硫醇呼吸性菌的鉴定实验三主要学习硫醇呼吸性菌的鉴定方法。
我们选择已知菌种进行划线培养，观察菌落形态、气味和色素的产生，以确定菌种的鉴定结果。
4. 实验四：细菌的营养需求和生理特性根据不同的营养需求和生理特性，我们选择不同的培养基进行培养，观察菌落的形态和生长情况，从而推测菌株的特性。
5. 实验五：细菌的菌液稀释和菌群分析实验五主要学习菌液的稀释方法和菌群的分析。
我们将菌液经过稀释，并通过涂布法和铺平法将菌液均匀涂布到培养基上，待菌落形成后进行菌群分析。
四、实验结果与讨论在本次实验中，我们成功学习了无菌操作技术、菌种的接种方法和菌液的稀释方法，掌握了硫醇呼吸性菌的鉴定方法以及菌株的营养需求和生理特性。
通过实验操作，我们观察到了不同菌种在不同培养条件下的生长情况，并得出了一些有关微生物生理特性的结论。
然而，本次实验中也存在一些问题。
首先，在实验操作过程中，有时会因为操作不慎或设备不合适而导致菌液的污染，降低了实验结果的准确性。
微生物学 实验3 放线菌的形态观察
3 、染色及干燥。滴加适量番红染液，染色 1 min ；水 洗至流出液为无色； 在酒精灯高处加热干燥。
4 、镜检。先用低倍镜寻找视野，然后用油镜进行观察。 注意区分气生菌丝、孢子丝和孢子的形态及排列方式。
五、观察与绘图
1.描述放线菌5406的菌落特征（大小、形 状、颜色、边缘情况等特征）。 2.绘制观察到的放线菌气生菌丝及孢子丝 形态。
3、孢子丝——有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺 旋状、波浪形或分枝状等，着生形式有丛生、互生和轮 生三种。
孢子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆和线菌的重要依据。
分生孢子形态
三、材料
1、菌种：“5406”放线菌培养72 h的 平板培养物； 2、染料：蕃红； 3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、镊 子、接种针、接种铲等。
四、方法及步骤
1、印片。取2片干净的载玻片，用解剖刀无菌挖取一块 放线菌的菌落（注：带培养基切下），放在一块载玻 片的中央（注：菌落面朝上）；用另一干净的载玻片 盖在这一菌落上轻轻按压，再小心取下这块载玻片 （注：不要使菌落移动）。 2、干燥固定。将取下的上面的载玻片在酒精灯火焰高 处烘烤干燥（注：有菌落的面朝上）；然后迅速通过 火焰2～3次，加热固定。
细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)
显微形态：单细胞菌丝体，菌丝内一般无隔膜。
菌丝体分为三部分： 1、基内菌丝—深入培养基中的营养型一级菌丝 （较透明、颜色浅色）。一般无隔膜，直径 0.2～0.8 µ m，可产生各种色素。 2、气生菌丝—由基内菌丝从培养基向上伸展的 二级菌丝（颜色较深），直径1～1.4 µ m。
实验三 放线菌的形态观察
一、实验的目的
1、学会用”印片法” 法制作标本片。 2、观察放线菌的群体形态及个体形态 特征。
微生物学3 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
（6） 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片 倾斜，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色 时为止，约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
倒立的虚像
图1-1-2 光学显微镜的成像原理
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
2、用无菌的接种环挑少量大肠杆菌与右边水滴充 分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量大肠杆 菌菌液延伸至玻片中央，与金黄色葡萄球菌混合 成含有两种细菌的混合区。
（四）、革兰氏染色的操作方法
涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检
无菌操作
葡萄球菌
大肠杆菌
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平
三.显微镜油镜观察操作方法
在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后 将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏 油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到 最合适的观察点。
油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭 去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏 油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净 的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
1.涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样? 2.分析影响革兰氏染色结果的因素。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
微生物学试验
微生物学实验Lab work on Microbiology三峡大学生物与制药学院 微生物学教学组实验指导老师：涂 璇实验三 放线菌、霉菌形态观察一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验步骤 五、实验报告一、 实验目的• 学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本 方法。
• 初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形 态特征。
二、基本原理• 放线菌（原核微生物）：由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌 丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营 养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基以上的 气生菌丝。
有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋 形、波浪形或分枝状等。
孢子常呈圆形、椭圆形 或杆状。
气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分 类的重要依据。
放线菌培养和观察方法• 扦片法：在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使 放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生 长而附着在盖玻片上。
观察时直接取出盖玻片置 于载玻片上镜检。
镜检：用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将 有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。
宜用略暗光线观察，低倍镜—高倍镜；染色后观 察效果更好。
• 玻璃纸法：将玻璃纸覆盖在平板表面，接种放 线菌、培养，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。
观 察时取下玻璃纸固定在载玻片上镜检。
• 镜检：先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃 纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。
• 优点：可观察到放线菌自然生长状态 下的特征，和不同生长期的形态。
注意:整过程勿触动菌面培养物。
• 印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印在 载玻片上，经染色后观察。
• 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基一起 切下，菌面朝上。
另取一载玻片，微热后，轻轻按 压菌苔，固定，染色后镜检。
• 主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状 等，但形态特征可能有所改变。
• 霉菌（真核微生物）：霉菌是一类可产生复杂分枝菌丝的真 核微生物的统称。
分枝菌丝分为基内菌丝 和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分 化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
微生物学实验报告
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。