BD FACSCalibur流式细胞仪培训手册
BDFACSCalibur流式细胞仪简明操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程一．开机程序1.把稳压器电源开关设到ON。
2.打开储液箱，把黑色开关开到TANK CHANGE位置，鞘液桶加满鞘液，倒空废液桶，把黑色开关开到Pressurize位置。
3.将FACSCalibur右侧下面的绿色按钮按开。
4.打开电脑。
二．仪器条件设定1.点击“苹果”菜单项下的CELLQuest，建立一个新视窗。
2.点击“Acquire”菜单下的“Parameter description”建立自己的文件夹，保留在屏幕上。
3.点击“Acquire”菜单下的“Connect to Cytometer”联机，这时出现“Acquisiton Control”对话框，保留在屏幕上。
4.点击“Cytometer”菜单下的“Detectors/Amps”、“Threshold”、“Compensation”三个对话框，保留在屏幕上。
5.点击“Cytometer”菜单下的“Instrument settings”，出现对话框，点击对话框中“open”，选择自己的实验条件后，点击“set”，然后点击“Done”6.加上对照样本，样品支撑架置于中位，用LO 流速RUN，点击AcqusiotionControl 对话框的Acquire，观察样品的散射光和荧光参数是否合适，调节“Detectors/Amps”对话框的相关参数，直到各个参数都合适为止。
7.点击”Acqusiotion Control”对话框的“Setup”，开始测试样品。
当所有样品分析完毕，即换上双蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态，以保护激光管。
三．关机程序1.测试完毕样品后，从File中选择Quit, 退出软件，点击“Special”菜单项下的“Shutdown”关机。
2.试管中加入3 ml Clean液，将样品支撑架置于旁位清洗外管，以外管吸入1ml Clean液，将样品支撑架置于中位，用HI流速RUN5分钟清洗内管，。
流式细胞仪培训手册(完成版)_图文
流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器,然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。
本书介绍了流式细胞仪的基本知识,并从不同角度详尽阐述了各种台式机(FACScanTM , FACSortTM , FACSCaliburTM ,和 BD LSR与大型机(FACS VantageTM, FACSVantageTM SE, 和 FACStarPLUSTM 之间的不同。
阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
目录第 1章综述…………………………………………………………………… 4 第 2章液流系统………………………………………………………………第 3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第 4章光电系统………………………………………………………………4.1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4.4 阈值………………………………………………………………第 5章数据分析………………………………………………………………5.1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5.6 MutiSet 软件使用………………………………………………5.7 Simultest 软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5.10 FACSPress软件使用…………………………………………5.11 System II软件使用…………………………………………5.12 MultiCycle软件使用…………………………………………5.13 Modfit使件使用……………………………………………第 6章流式基本检测项目6.1淋巴细胞亚群检测 (双色、三色、四色,三种软件分析6.2 B27的检测………………………………………………………6.3 血小板抗体检测………………………………………………6.4 网织血小板及红细胞分析……………………………………6.5 干细胞检测……………………………………………………6.6 DNA倍体分析……………………………………………………6.7 凋亡检测…………………………………………………………第 7章分选6.1 分选………………………………………………………………第 8章激光器及光路校正……………………………………………………7.1 激光器的工作原理………………………………………………7.2 光路校正…………………………………………………………第 9章答案………………………………………………………………第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术,通常指细胞通过激光束时在液流中的特性,即粒子的大小,密度或是内部结构,以及相对的荧光强度。
Get清风BDFACSCalibur流式细胞仪培训手册
BD-FACSCalibur流式细胞仪培训手册BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook二、开机、关机标准操作2.1 FACS Calibur 开机1. 开启细胞仪电源。
2. 开启其它周边配备电源，如打印机及MO机。
3. 开启计算机。
4. 确认鞘流液筒有八分满的FACSFlow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。
5. 将废液倒掉，并在废液筒中参加200ml 家用漂白水(废液筒容量为4L)。
6. 将减压阀方向调在加压〔Pressurize〕位置。
7. 排除液流管路与过滤器中的气泡。
8. 取下样品管，执行PRIME 功能两次。
9. 使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。
10. 可开始分析样品。
2.2 FACS Calibur 关机关机前必要动作：清洗进样管和外套管，防止进样管堵塞、或有染料残留。
1. 将样品支持架左移，取2 mlFACSClean〔10%Bleach〕上样品，让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。
2. 将样品支持架回正，按HI RUN，然后让FACSClean 清洗管路10分钟。
3. 按Standby，取下样品管，执行PRIME功能两次。
4. 取2 ml dH2O，重复上述步骤1-3。
5. 注意最后只留约1 ml dH2O 在试管中。
6. 按STANDBY 五分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪〔必要动作，以保护雷射光源。
〕7. 倒掉废液，并回填200 ml漂白水。
8. 将减压阀放在「VENT 漏气」位置。
将鞘流液筒充填至八分满。
9. 退出软件“File〞→“Quit〞(如有对话选项，选择“Don‘t save〞)。
确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。
10. 关闭计算机。
“Special〞→“Shutdown〞。
三、上机分析流程建议首次试机防止进行大量试验，仅需准备以下样品。
〔1〕Negative Control〔不加任何抗体〕。
BD FACSCalibur流式细胞仪操作规范
BDFACSCa1ibUr流式细胞仪操作规范
1、目的
规范操作，正确使用仪器，保证检验结果准确无误。
2、适用范围
CD4+T淋巴细胞计数
3、职责
1.1科室负责人：负责监督仪器的使用和维护。
1.2操作人员：按规范操作，搞好日常维护，做好使用记录。
3.3保管人员：负责仪器定期维护，保养。
4、操作程序
4.1检查鞘液桶，确认鞘液充满状态，盖紧黑盖，管路畅通，无扭曲
4.2检查废液桶，确认废液桶充满40OnII漂白剂，管路畅通，无扭曲
4.3打开流式细胞仪
4.4打开电脑
4.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡
4.6做prime4.7等待机器预热5-10分钟后可开始实验。
BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。
3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。
3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。
3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。
BD Calibur流式细胞分析仪工作指南
流式细胞分析仪(BD Calibur)工作指南暨南大学生物医药研究院：周玉英2012年06月第一章流式细胞仪管理使用守则1. 优先权原则：本流式细胞分析分选仪器由暨南大学“211”重点学科“生物技术与生物工程药物”学科组所用并使用，故在同一时间段内：● 本校优先于外校使用；● 学科组优先于外单位使用；● 学科组内各单位使用优先权采用轮流制，相关单位优先权周可优先使用。
2. 专人使用原则：● 流式细胞分析仪（Calibur）必须由已培训合格的的实验技术老师或学生严格按照操作规程进行操作。
● 对于流式分选仪Influx，只能由培训合格的课题组负责老师操作，严禁学生操作。
● 课题组负责老师或学生需定期接受培训，培训后合格后若两个月之内未使用仪器，必须再次培训合格后才可使用流式仪。
3. 预约原则：● 请与操作老师沟通后至少提前一天预约，预约时先提交有导师签字的预约表，再由管理人员统一在网上预约。
●不能按预约时间使用流式时，至少提前一天取消预约，否则将正常收费。
●不接受提前超过2周以上的预约。
4. 做好使用登记：仪器使用完毕后，切记进行仪器使用记录登记，管理人员会核对是否与预约记录的一致性。
5. 随时保持清洁：●进入流式房请更换拖鞋，离开流式房时，请将拖鞋放回鞋柜内。
●禁止随手乱放杂物（如一次性手套、塑胶手套，用完的样品等）。
●走前请带走制造的垃圾（包括细胞垃圾、耗材垃圾和生理盐水瓶等）。
●实验老师在课题组的优先权周实验老每周二、周五下午清洁流式房卫生，包括清洁地面、桌面、倒掉除湿机水箱中的水。
7. 刻录数据：刻录数据只能用一次性的CD盘或DVD盘，严禁用自备U盘或可擦写光盘进行数据刻录。
8. 安全使用原则：● 必须严格按照培训时的流式使用规程操作仪器，严禁违规操作。
● 对有毒或者有污染的样品需提前对操作老师说明，严禁随处乱放有毒、有污染的样品。
● 仪器使用完毕后，离开房间时，一定要锁好门窗，包括流式房门和725房间的玻璃门。
FACSCalibur流式细胞仪中文操作手册
5. 上樣區： 上樣區是樣本管的上樣位置。它包括三個部 分，一個是進樣針 Sample Injection Tube，將 樣本輸入流動室，還有就是支撐架 Tube Support Arm、和液滴存留系統 Droplet Containment System。 進樣針：是一根不鏽鋼管，將細胞從樣本針中吸入流動室。進樣管外有一套管， 是液滴保留系統的一部分。 支撐架：用於支撐樣本管、並負責啟動液滴存留系統。支撐架有三個位置：位於 樣本管之下的中位，樣本管左側或右側。 液滴存留系統：系統由支撐架、真空幫浦和外套 管組成。當支撐架位於左側或右側位置時，真空 幫浦就會啟動，將液體從外管吸入廢液桶內。上 樣時，須注意將支撐架位於中位，以避免過多樣 品被抽吸到廢液筒內（當支撐架位於中位，真空 幫浦停止工作）。更換樣品時，讓儀器保持 RUN 的模式，使得進樣針可以反沖；切換到 STANDBY 模式前，確保液路已沖洗徹底以免碎片沈積到流 動室中。
FACS101 Handbook Pro
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4. 從 Acquire 功能表中選擇 Connect to Cytometer，建立儀器和電腦之間通訊。此時 會出現 Browser 方框。將之移至適當位置。
5. 從工具板中點擊散點圖圖示。在實驗文件的空白區點擊，拖曳對角線至適當大小， 然後放開滑鼠。此時應可以在右方看到 Inspector：Dot Plot 對話框。
FACS101 Handbook Pro
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6. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Duplicate 功能，可複製一個同樣大小的散點圖，完 成後可將重製圖移至原圖右方。
7. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Select All 功能，文件中所有圖譜的四角會出現黑色 方塊，表示被選取。可在出現之 Inspector：2 Objects 方框中將 Plot Type 改成 Acquisition。 8. 因應實驗需求來修改所有圖譜中顯示之參數。第一圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FSC-H 1024、SSC-H 1024；第二圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FL1-H 1024、FL2-H 1024。 修改動作為輕擊圖譜，並在出現之 Inspector 方框依需要選擇。 FSC：細胞大小 SSC：細胞顆粒性 FL1：FITC 綠色螢光 FL2：PE 橙色螢光 FL3：PerCP 紅色螢光 儀器設定 注意：實驗數據品質，取決於最適化儀器設定。儀器設定文件不能在數據收取後再更 改，研究人員必須在第一次就使用正確的儀器設定。 儀器設定（Instrument settings），含偵測器電壓（Detector/ Amps），閾值 （Threshold），螢光補償（Compensation）等儀器條件的組合。一般而言，儀器設 定的順序為 Detector/Amps -- Threshold -- Compensation。
bdfacscalibur流式细胞仪培训手册
BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。
如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本公司网站订阅FACSinformation电子报。
如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载。
如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载。
一、BD FACSCalibur基本结构仪器本体：1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。
2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例FSC Diode 只收488 nm波长散射光SSC PMT 只收488 nm波长散射光FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm）FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm）FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）3. 仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。
流速控制：LO：样品流速：12 l /minMED：样品流速：35 l /minHI: 样品流速：60 l /min功能控制：RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。
（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。
）STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。
PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。
PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态。
4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。
可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。
请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。
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BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。
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一、BD FACSCalibur基本结构1、1仪器本体:1、电源开关:在BD FACSCalibur仪器右侧下方,先启动仪器本体,再打开计算机。
2、光学系统:BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例➢FSC Diode 只收488 nm波长散射光➢SSC PMT 只收488 nm波长散射光➢FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围(波长515-545 nm)➢FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围(波长564-606 nm)➢FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围(波长 >650 nm)3、仪器面板:仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。
流速控制:LO: 样品流速:12 μl /minMED:样品流速:35 μl /minHI: 样品流速:60 μl /min功能控制:•RUN:此时上样管加压,使细胞悬液从进样针进入流动室。
(正常显示绿色;黄色时表示仪器不正常,请检查就是否失压。
)•STANDBY:无样品或暖机时之正常位置,此时鞘液停止流动,雷射功率自动降低。
•PRIME:去除流动室中的气泡,流动室施以反向压力,将液流从流动室冲入样品管,持续一定时间后,以鞘液回注满流动室。
PRIME 结束,仪器恢复STANDBY状态。
4、储液箱抽屉:在主机左下方之储液箱抽屉。
可向前拉开,内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter,及空气滤网 Air filter。
请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
•鞘液筒:位于抽屉左侧,容积4升。
装八分满鞘液筒,仪器可以运行大约 3小时。
筒上装有液面感应器,鞘液用完时,仪器软件上会有显示。
鞘液筒盖上有金属环扣,保证鞘液筒密闭。
•废液筒:位于抽屉右侧,容积4升。
筒上装有液面感应器,废液盛满时,仪器软件上会有显示。
注意废液可能有潜在的生物传染性。
•鞘液过滤器:0、22μm过滤器,去除鞘液中的杂质,保证进入流动室的鞘液就是干净的。
•气路减压阀:沿箭头方向移动阀门开关,鞘液筒减压,气压恢复正常。
在鞘液筒添加鞘液时,需要减压。
•空气过滤网:用于过滤冷却雷射的空气。
5、上样品区:上样品区就是样本管的上样位置。
它包括三个部分,一个就是进样针 Sample Injection Tube,将样本输入流动室,还有就就是支撑架 TubeSupport Arm、与液滴存留系统 DropletContainment System。
•进样针:就是一根不锈钢管,将细胞从样本针中吸入流动室。
进样管外有一套管,就是液滴保留系统的一部分。
•支撑架:用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。
支撑架有三个位置:位于样本管之下的中位,样本管左侧或右侧。
液滴存留系统:系统由支撑架、真空帮浦与外套管组成。
当支撑架位于左侧或右侧位置时,真空帮浦就会启动,将液体从外管吸入废液筒内。
上样时,须注意将支撑架位于中位,以避免过多样品被抽吸到废液筒内(当支撑架位于中位,真空帮浦停止工作)。
更换样品时,让仪器保持RUN的模式,使得进样针可以反冲;切换到STANDBY模式前,确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到流动室中。
1、2 Macintosh计算机与打印机:准备您的细胞样品1. 理想样品浓度调至1-10 X 105 cells/m l？一般实验只需0、5 ml的样品。
2. 细胞样品务必放至BD FALCON 352052 试管中,否则无法上机。
3. 上机前务必去除样品中之细胞团块,以防止管路堵塞？可使用附滤网BDFALCON试管 (Cat、 No、352235) 或35-55 μm的尼龙筛网。
4. 供流式分析的样品就是单细胞悬浮液,而且大部分样品都需经荧光染色。
表面抗原荧光染色的方法大致有两种:直接免疫荧光、间接免疫荧光染色。
研究生可至本公司网站下载染色方法m、tw/bdb/10-5-4-1、html•直接免疫荧光染色•Lysed - No - Wash Procedure•Lysed - And - Wash Procedure, SimulTEST & HLA-B27•Peripheral Blood Mononuclear Cell Procedure•Leukemia and Lymphoma Procedure 1•Leukemia and Lymphoma Procedure 2, B-cell Clonality Assay•间接免疫荧光染色•滴定抗体浓度•常用试剂5. 如因特殊因素无法下载上述实验方法,请e-mail:或。
二、开机、关机标准操作2、1 FACS Calibur 开机1. 开启细胞仪电源。
2. 开启其它周边配备电源,如打印机及MO机。
3. 开启计算机。
4. 确认鞘流液筒有八分满的FACS Flow,确实旋紧 (鞘液筒容量为4L)。
5. 将废液倒掉,并在废液筒中加入200 ml 家用漂白水 (废液筒容量为4L)。
6. 将减压阀方向调在加压(Pressurize)位置。
7. 排除液流管路与过滤器中的气泡。
8. 取下样品管,执行 PRIME 功能两次。
9. 使用1ml PBS,HIGH RUN 两分钟。
10. 可开始分析样品。
2、2 FACS Calibur 关机关机前必要动作:清洗进样管与外套管,防止进样管堵塞、或有染料残留。
1. 将样品支持架左移,取 2 ml FACSClean(10%Bleach)上样品,让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。
2. 将样品支持架回正,按 HI RUN,然后让 FACSClean 清洗管路10分钟。
3. 按 Standby,取下样品管,执行 PRIME功能两次。
4. 取 2 ml dH2O,重复上述步骤1-3。
5. 注意最后只留约1 ml dH2O 在试管中。
6. 按 STANDBY 五分钟,使风扇冷却雷射后,关闭细胞仪(必要动作,以保护雷射光源。
)7. 倒掉废液,并回填 200 ml漂白水。
8. 将减压阀放在「VENT 漏气」位置。
将鞘流液筒充填至八分满。
9. 退出软件“File”→“Quit”(如有对话选项,选择“Don‘t save”)。
确认退出计算机中所有BD应用软件,所有数据数据已储存备份。
10. 关闭计算机。
“Special”→“Shutdown”。
三、上机分析流程建议首次试机避免进行大量试验,仅需准备下列样品。
(1)Negative Control(不加任何抗体)。
(2)CD3-FITC(FL1 单染)。
(3)CD19-PE(FL2 单染)。
(4)CD3-FITC /CD19-PE(FL1/FL2 双染)。
3、1 Calibur 开机1、先开启细胞仪本体再打开计算机。
*秘技1:如顺序相反,仪器与计算机之间无法建立正常通讯,无法执行“connect to cytometer”。
解决之道,两者都关机、然后以正确方式重开。
2、向前拉开储液箱抽屉,检查鞘液筒、废液筒水量,如需充填鞘液,将减压阀方向调在VENT位置(箭头方向)。
3、仪器会对鞘流液筒打气加压,请确认筒盖确实旋紧。
*秘技2:将减压阀方向调在加压(向前)位置。
减压阀如在VENT(箭头方向)位置,按RUN功能键时将显示橙黄色(表示仪器不正常,请检查就是否失压),正常为绿色显示。
3、2开启CellQuest 软件、编辑实验文件4、在苹果菜单下点击CELLQuest 启动软件。
桌面会出现一’Untitled’ 实验文件,可点击实验文件的右上角的放大钮,将实验文件窗口放大。
5、从工具板中点击散点图图示。
在实验文件的空白区点击,拖曳对角线至适当大小,然后放开鼠标。
出现散点图对话方框。
6、在出现的散点图对话方框中点击Plot Source,选择Acquisition (收取) ,确认X与Y轴参数预设为FSC-H 1024、SSC-H 1024。
在颜色方框中点击Multicolor Gating(收取样品时,门内细胞将出现颜色)。
点击OK。
此时实验文件会出现FSC/SSC散点图。
7、说明:散点图(Dotplot),又称二维散点图就是流式分析最常用图谱,它可以显示两个独立参数的相互关系。
在图中,横坐标X轴为为荧光1强度的相对值,单位就是道数,纵坐标Y轴则通常表示荧光2或光散射强度的相对值。
仪器使用者可因应实验需求来修改所有图谱中显示之参数。
第一图X与Y轴参数分别设为FSC-H 1024、SSC-H 1024;第二图X与Y轴参数分别设为FL1-H 1024、FL2-H1024。
修改动作为轻击图谱上X与Y轴参数,并依需要选择之(FSC:细胞大小,SSC:细胞折射率,FL1:FITC绿色荧光,FL2:PE橙色荧光,FL3:PerCP红色荧光)。
8、从屏幕上方Plots菜单中选择Dot Plot功能,可复制一个同样大小的散点图,在出现的对话方框内选择X轴:FL1-H 1024,Y轴:FL2-H 1024。
点击OK,FL1/FL2的散点图出现。
完成后可将重制图移至原图右方。
9、 在工具板中选择四象限工具,在FL1/FL2散点图上拖动Quadrant 的中心将它设定在(x,y)＝(101,101)处,这些象限将指定阴性/阳性区域。
建立仪器与计算机之间通讯10、 从Acquire 菜单中选择Connect to Cytometer,此时会出现Acquisition Control对话方框。
如果无法选择Connect to Cytometer,参考秘技 #1。
如果没见到Acquisition Control 对话,可到屏幕上方Windows 菜单中选择Show Acquisition Control 。
仪器设置文件注意:实验数据质量,取决于最适化仪器设定文件。
仪器设定文件不能在数据收取后再更改,研究人员必须在第一次就使用正确的仪器设定文件。
仪器设定文件(Instrument settings),含信号器高压(Detector/ Amps),阈值(Threshold),荧光补偿(Compensation)等仪器条件的组合。
一般而言,仪器设定的顺序为Detector/Amps -- Threshold -- Compensation 。
11、检查现有仪器条件,从Cytometer菜单中选择Detectors/Amps。
出现 Detectors/Amps窗口。