旋光度(比旋度)的测定方法
旋光度测定的步骤
旋光度测定的步骤
旋光度测定是化学分析中一种有用的物质性质检测方法，可以有效地测定极性有机分子（如碳氢化合物、蛋白质、多糖等）的旋光物质。
通过测量物质的旋光度，即可获得物质的结构和性质的定量评价信息。
旋光度测定的步骤一般如下：
1、处理样品：将需要对比的物质和测定物质分别放入旋光仪-测定机，并以特定容量进行称量，并增加一定量的稀释试剂，待样品溶液完全混和后，方可进行旋光度测定。
2、参比测量：准备两个样品容器，一个放入对比物质，一个放入测定物质，用控制仪控制旋转方向与角速度，并在两个样品容器中分别测定旋光度。
3、旋光度测定：将测定物质的旋光度和对比物质的旋光度进行比较，根据旋光度差异计算出总体旋光度值。
4、旋光参数测定：将测定物质和参比物质分别施加不同旋转方向与角速度的梯度，以获得参数变化趋势，根据计算出的旋光参数值来判断物质的旋光性质。
5、数据分析：将所获得的数据与参考数据进行比较，计算旋光率、旋光度等参数，了解试样的旋光性质。
以上就是旋光度测定的基本步骤，能够测出物质的旋光特性以及结构，用以进行优化及定量评价等，是一种重要的傅立叶变换、光谱分析以及芳香族有机分子认证和鉴别等研究中不可缺少的检测方法。
旋光度的测定
旋光度的测定方法和注意事项中国卖仪器网整理：平面偏振光通过含有某些光学活性化合物的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。
旋转的度数，称为旋光度。
偏振光透过长1dm并1mL中含有旋光性物质1g的溶液，在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度。
测定比旋度（或旋光度）可以区别或检查某些药品的纯杂程度，亦可用以测定含量。
除另有规定外，本药典系用钠光谱的D线（589.3nm）测定旋光度，测定管长度为1dm（如使用其他管长，应进行换算），测定温度为20℃。
测定旋光度时，用读数至0.01°并经过检定的旋光度测定计。
将测定管用供试液体或溶液（取固体供试品，按各药品项下的方法制成）冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量（注意勿使产生气泡），置于旋光计（旋光测定仪）内检测读数，即得供试液的旋光度。
使偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以“＋”符号表示；使偏振光向左旋转者（反时针方向）为左旋，以“－”符号表示。
用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，照下列公式计算，即得供试品的比旋度。
a对液体供试品[a](t,D)= ---ld100a对固体供试品[a](t,D)= -----Lc式中［α］为比旋度；D 为钠光谱的D线；t 为测定时的温度；l 为测定管长度，dm；α 为测得的旋光度；d 为液体的相对密度；c 为每100ml溶液中含有被测物质的重量，g（按干燥品或无水物计算）。
旋光计的检定，可用标准石英旋光管进行，读数误差应符合规定。
【注意事项】（1）每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正1次，以确定在测定时零点有无变动；如第2次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。
（2）配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃（或各品种项下规定的温度）。
（3）供试的液体或固体物质的溶液应不显浑浊或含有混悬的小粒。
超净工作台如有上述情形时，应预先滤过，并弃去初滤液。
（4）物质的比旋度与测定光源、测定波长、溶剂、浓度和温度等因素有关。
011-旋光度测定法
1 目的测定药品的比旋度，以测定药品含量。
2 范围本品适用于用来测定药物定性，定量和杂质检查的一种方法。
3 职责质控部、化验室相关操作人员。
4 内容4.1、原理：旋光度测定法是利用直线偏振光，通过含有某些光学活性化合物的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转，此种旋转在一定条件下有一定度数，称为旋光度。
使偏振光向右旋转者（顺时针方向）称为右旋物质，常“＋”号表示。
使偏振光向左旋转者（反时针方向），称为左旋物质，常以“－”号表示。
影响物质旋光度的因素很多，除化合物特性外，还有偏振光通过供试品液层的浓度和厚度，通过光线的波长和测定时的温度。
当偏振光通过长1dm、每１ml中含有旋光性物质1g的溶液，使用光线波长为钠光Ｄ线（589.3nm）、测定温度为20℃时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，以［α］表示。
比旋度是物质的物理常数。
因此可用以区别或检查某些药品的光学活性和药品的纯杂程度。
由于旋光度在一定条件下与浓度呈线性关系，故而还可以用来测定含量。
4.2、样品测定操作法旋光度测定法主要用于药典某些品种性状项下比旋度的测定，或一些制剂的含量测定。
4.2.1、比旋度测定按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的温度和放置时间内测定，测定前首先应将室温调至规定温度，然后用配制供试品的空白溶液校正零点或测定停点，以便扣除零点。
常用测定比旋度的溶液多为水溶液，有时也用稀释的盐酸溶液或氢氧化钠试液，或有机溶剂如乙醇、氯仿、二氧六环等溶液，主要是按照供试品在各种溶剂中的溶解情况决定。
配制溶液的浓度大都根据药品的比旋度大小，使配成的测定液旋光度一般应在左旋或右旋2～8℃范围，测定值太小，在读取旋光度时容易造成误差，且在称量上也易产生误差，一些溶解度小的可以例外。
用旋光法作含量测定时应当称取2份做平行试验。
（装入测定溶液时避免产生气泡，旋紧测试管两端螺帽时，不应用力过大以免产生应力，造成误差，测定旋光度应重复读取3次，取平均值，按规定公式计算结果。
旋光度的测定
旋光度的测定旋光度的测定是一种常用的化学分析方法，它可以用来检测化合物中手性分子的存在以及其对光线偏振方向的旋转程度。
在药物、食品、化妆品等领域中，旋光度的测定被广泛应用。
本文将介绍旋光度的定义、测量原理、仪器设备和实验步骤。
一、旋光度的定义旋光度是指物质对平面偏振光旋转角度的大小，通常用α表示。
当入射线与观察线夹角为90°时，称为正旋性；当入射线与观察线夹角为270°时，称为负旋性。
其单位为度（°）或毫度（mdeg）。
二、测量原理当平面偏振光通过具有手性分子的溶液或晶体时，由于手性分子对左右两个方向的圆偏振光吸收不同，导致传播速度不同，从而使得出射光线发生相位差，进而改变了偏振方向和波长。
这种现象被称为“旋光现象”。
根据洛仑茨公式可得：α = α0 × l × c其中，α0为比旋光度，l为样品长度，c为样品浓度。
因此，旋光度的测定需要测量样品的长度和浓度，并根据上述公式计算出比旋光度。
三、仪器设备旋光度测定常用的仪器设备有旋光仪和偏振光谱仪。
1. 旋光仪：是一种专门用于测量物质对平面偏振光的旋转程度的仪器。
它由源、偏振器、样品室、检测器和读数装置等组成。
常见的有手摇式旋光仪和自动旋光仪两种。
2. 偏振光谱仪：是一种可以同时测量吸收谱和旋转角度的分析仪器。
它由源、偏振器、样品室、检测器和读数装置等组成。
与传统的分析仪不同之处在于，它使用圆偏振光而非平面偏振光。
四、实验步骤1. 准备样品：将待测物质溶解于适当溶剂中或制备成晶体，并按照要求调整其浓度。
2. 校准：打开旋光仪或偏振光谱仪，进行校准。
校准时应使用已知旋光度的样品进行校准。
3. 实验操作：将样品放入旋光仪或偏振光谱仪中，按照要求调整样品室的长度和浓度，记录下旋转角度。
4. 计算结果：根据洛仑茨公式计算出比旋光度，并将其转换为旋光度。
5. 数据处理：根据实验结果进行数据处理和分析，得出结论。
旋光度测定法
旋光度测定法平面偏振光通过含有某些光学活性化合物的液体或溶液，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。
旋转的度数，称为旋光度。
在一定波长与温度下，偏振光透过每lml含有lg旋光性物质的溶液且光路为长ldm时，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度（或旋光度）可以用于鉴别或检查光学活性药品的纯杂程度，亦可用于测定光学活性药品的含量。
在间上不能重叠，互为镜像关系的立体异构体称为对映体。
手性物质的对映异构体之间，除了使平面偏振光发生偏转的程度相同而方向相反之外，在非手性环境中的理化性质相同。
生物大分子如酶、生物受体等通常为手性物质，总是表现出对一种对映体的立体选择性，因此，对映体可在药理学与毒理学方面有差异来源于自然界的物质，例如氨基酸、蛋白质、生物碱、抗体、糖苷、糖等，大多以对映体的形式存在。
外消旋体一般由等量的对映异构体构成，旋光度净值为零，其物理性质也可能与其对映体不同。
最常用的光源是采用钠灯在可见光区的D线（589.3nm），但也使用较短的波长，如光电偏振计使用滤光片得到汞灯波长约为578nm、546nm、436nm、405nm和365nm处的最大透射率的单色光，其具有更髙的灵敏度，可降低被测化合物的浓度。
还有一些其他光源，如带有适当滤光器的氙灯或卤钨灯。
除另有规定外，本法系采用钠光谱的D线（589.3mn）测定旋光度，测定管长度为ldm（如使用其他管长，应进行换算），测定温度为20℃。
用读数至0.01°并经过检定的旋光计。
旋光度测定一般应在溶液配制后30分钟内进行测定。
测定旋光度时，将测定管用供试液体或溶液（取固体供试品，按各品种项下的方法制成）冲洗数次，缓缓注人供试液体或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。
使偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋，以“+”符号表示；使偏振光向左旋转者（反时针方向）为左旋，以“一”符号表示。
用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，照下列公式计算，即得供试品的比旋度对液体供试品 []ld t D αα=对固体供试品 []lc100t D αα= 式中[α]为比旋度；D 为钠光谱的D 线；f 为测定时的温度，℃；l 为测定管长度，dm ；α为测得的旋光度；d 为液体的相对密度；c 为每100ml 溶液中含有被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g 。
3 比旋光度的测定
2．5．2 旋光度的测定 旋光度利用旋光仪进行测定。 为提高测量的准确度，实际应用的旋光仪都采用
所谓“半荫”原理。 图2-22为国产WXG－4型旋光仪。
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图2-22 WXG－4型旋光仪
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比旋光度的测定
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一.偏振光与旋光性 光是一种电磁波, 光的振动方向与其前进的方向垂直.
普通光的光波是在与前进方向垂直的平面内, 以任何方向 振动. 使普通光通过一个尼科尔棱镜, 只有振动方向和棱 镜的晶轴平行的光才能通过. 这种只在一个方向上振动的 光称为平面偏振光, 简称偏振光.
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二.旋光仪和比旋光度 (一)旋光仪
式中α是旋光仪测得的旋光度, C是旋光性物质溶液的 浓度,即1毫升溶液里所含物பைடு நூலகம்的克数, l 为盛液管的长度, 单 位是分米. 在一定的条件下, 旋光性物质的比旋光度是一个 物理常数.
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测定旋光度, 可计算出比旋光度, 从而可鉴定末知的旋 光性物质. 例如, 某物质的水溶液浓度为5g/100ml, 在1分米 长的盛液管内, 温度为20℃, 光源为钠光, 用旋光仪测出旋光 度为-4.64º. 此物质的比旋光度可按下式计算.
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(二)比旋光度 旋光度的大小和方向, 不仅取决于旋光性物质的结构和性
质, 而且与测定时溶液的浓度(或纯液体的密度)、旋光管的长度、 溶剂的性质、温度和光波的波长等有关. 一定温度、一定波长的
入管射时光所测, 通得过的一旋个光1度分，米称长比, 盛旋满光浓度度，为用1g•mtl表-1旋c示光l. 性物质的旋光
胆甾醇的氯仿溶液，其浓度为100ml溶剂中含溶质6.15 克. 将该溶液盛于5cm长的旋光管中，于20C时用钠光测得 其旋光度为1.2，则它的比旋光度可按下式计算.
如何测定手性化合物的光学纯度-比旋光度
如何测定手性化合物的光学纯度——比旋光度(o.p.)的测定手性分子能够把平面偏振光旋转到一定的角度，各对映体使其数值相同但方向相反，这种性质即光学活性。
若是消旋体，两个异构体的量刚好相等，表现出来的却是无光学活性。
同样，如果一个对映体的量超过了另一个，该手性化合物就有可能显示出光学活性。
测定手性分子各对映异构体的组成（相对含量），对于开展不对称催化、手性药物合成等方面的研究具有十分重要的意义。
对映体的纯度是手性质控的重要指标，可以通过测定旋光度/比旋度来反映对映体的光学纯度。
什么是光学纯度？光学纯度（optical purity）是衡量旋光性样品中一个对映体超过另一个对映体的量的量度。
若一个纯的光学活性物质是100％的一种对映异构体，那么一个外消旋体的光学纯度则为0。
如某旋光性样品是由一个对映体R-和S-异构体组成，R-异构体含量为30％，S-异构体的含量为70％，其光学纯度则为40％。
样品中有多余40％的S-异构体，而样品中有60％是外消旋体。
如何测量旋光度？可以用旋光仪来测定旋光性物质的旋光度和旋光方向。
旋光仪主要由一个钠光源、两个尼科尔棱镜和一个盛有测试样品的盛液管组成(见图 2.28)。
普通光先经过一个固定不动的棱镜(起偏镜)变成偏振光，然后通过盛液管、再由一个可转动的棱镜(检偏镜)来检验偏振光的振动方向和旋转角度。
若使偏振光振动平面向右旋转，则称右旋；若使偏振光振动平面向左旋转，则称左旋。
1.JPG光活性物质的旋光度与其浓度、测试温度、光波波长等因素密切相关。
但是，在一定条件下，每一种光活性物质的旋光度为一常数，用比旋光度[α]表示：2.jpg其中，α为旋光仪测试值；c为样品溶液浓度，以lmL溶液所含样品克数表示；l为盛液管长度，单位为dm；λ为光源波长，通常采用钠光源，以D表示；t为测试温度。
如果被测样品为液体，可直接测定而不需配成溶液。
求算比旋光度时，只要将其相对密度值(d)代替上式中的浓度值(c)即可：3.jpg除了比旋光度外，还可用光学纯度、左旋和右旋对映体的百分含量以及对映体过量值(Enantiomer Excess，缩写为e．e．)等来反映光活性物质的纯度。
比旋光度检验步骤
比旋光度检验步骤
比旋光度是一种用来检测液体溶质的光学方法，在化学实验、环境检测、生物分析中有广泛的应用。
1、准备样品：将需要检测的样品通过抽滤（或离心）处理并均匀悬浮，以确保测量结果的准确性。
2、设置仪器：将被测样品倒入仪器所需的容器中，并校准仪器参数，比如波长、通道、偏振设置等，设置完成后，可以开启测量程序。
3、数据采集：根据仪器的指示开始采集数据，同时获取参数的测量值，采集数据时需要反复采集，以确保测量值的准确性。
4、计算比旋光度：根据采集到的数据，计算出比旋光度，这是检测
溶质的有效参数。
5、汇总结果：将步骤4计算的结果汇总，整理整个实验的测试结果，获得多组不同波长的比旋光度数据。
6、实验报告：根据步骤5的结果，综合整理实验报告，分析不同波
长的比旋光度数据，从而确定溶质的种类及含量。
7、安全处理：实验完成后，对样品和仪器做出安全处理，将样品送
入排放系统，将仪器清洗干净，及时采取维护措施，以确保下次使用时仪
器能正常工作。
以上为比旋光度检验步骤，通过以上步骤可以分析溶质的种类及含量。
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旋光度（比旋度）的测定方法
平面偏振光通过某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，偏振光的振动平面向左或向右旋转的现象称为旋光现象。
偏振光旋转的角度称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用“—”表示。
偏振光透过长1dm 且每1mL 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度，以t
λα][表示。
t 为测定时的温度，λ为测定
波长。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物纯杂的程度。
旋光度在一定条件下与浓度呈线性关系，故还可以用来测定含量。
1．测定仪器
测定旋光度的的专用仪器为旋光计。
除另有规定外，测定时采用钠光谱的D 线（589.3nm ）测定旋光度，测定管长度为1dm （如使用其它管长，需进行换算），测定温度为20℃。
使用读数至0.01°并经过检定的旋光计。
2．测定方法
测定旋光度时，将测定管用供试液体或溶液（取固体供试品，按各药品项下规定的方法制成）冲洗数次，缓缓注入供试液体或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。
用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，照下列公式计算，即得供试品的比旋度。
对液体供试品 ld t
D αα=][
对固体供试品 lc t
D α
α100][=
式中，[α]——为比旋度，通常测定温度为20℃，使用钠光谱的D 线
（589.3nm ）表示时，可表示为20][D α；
D ——钠光谱的D 线； t ——测定时的温度； l ——测定管长度，dm ；
α——测得的旋光度； d ——液体的相对密度；
c ——每100mL 溶液中含有被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g 。
3．注意事项
（1）每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正1次，以确定在测定时零点有无变动；如第2次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。
（2）配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃（或各药品项下规定的温度）。
（3）供试的液体或固体物质的溶液应充分溶解，供试液应澄清。
（4）物质的比旋度与测定波长、溶剂、浓度和温度等因素有关。
因此，表示物质的比旋度时应注明测定条件。
（5）旋光计的检定，可用标准石英旋光管进行，读数误差应符合规定。
4. 在含量测定中的应用 具有旋光性的药物,特别是在无其他更好的方法测定含量时，可采用旋光度法测定。
《中国药典》采用旋光度法测定含量的药物有葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液、谷氨酸钾注射液、右旋糖酐氯化钠注射液、右旋糖酐葡萄糖注射液等。
如右旋糖酐20氯化钠注射液中右旋糖酐20的含量测定方法为:精密量取本品10ml ，置25ml 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,照旋光度测定法测定,按下式计算右旋糖酐20的含量。
α5128.0=C
式中，C ——每100ml 注射液中右旋糖酐20的重量，g ；
α——测得的旋光度⨯稀释倍数2.5.
已知右旋糖酐20的比旋度为+195°，代入浓度的计算公式：
[]ααααα⨯=⨯⨯=⨯⨯⨯=⨯⨯=5128.05.25128.05.211951005.2100''20'l C D
式中，'
α——测得的旋光度。