假单胞菌和大肠杆菌比较

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大肠杆菌的劣势:

大肠杆菌包涵体技术生产rhuIFNα-2b有如下劣势:1)肽链N端比人体内IFNα-2b成熟蛋白多一个Met,抗体产生的几率增加;2)目标蛋白需要经过变性和复性过程,二硫键错配率高,影响蛋白质活性;3)下游纯化过程复杂,生产成本高[1]。

假单胞菌的优势:

1)荧光假单胞菌(属于腐生假单胞菌的一种)对于高GC含量的基因表达效率更高,人干扰素基因序列GC含量在50%-60%以上[2],遗传物质结构稳定性高,利于使用基因工程技术进行表达;2)蛋白残留量低,根据2010版《药典》标准,原液中假单胞菌蛋白质残留量应不高于蛋白质总量的0.02%,而大肠杆菌的蛋白质残留量要求为0.10%[3];3)采用假单胞菌作为基因表达宿主菌,构建的菌种稳定性更好,连续传代50代以上,表达水平仍非常稳定,而且表达出的干扰素生物学比活性高,疗效好;4)纯化工艺先进,产品的纯度高(纯度在99%以上),不良反应小。

[1] 卢晨等,重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达[J]. 生物学杂志,2011,28(3):58-62.

[2] 陈国安等,人α2b-干扰素的基因克隆及序列分析[J]. 江西医学院学报,1998,4.

[3] 《2010版中国药典》

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