培养基的制备与灭菌
18
a
二）、配置培养基的方法
1、生态模拟 2、查阅文献 3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方 4、实验比较 实验的规模一般由定性到定量，由小到大。 发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾
原料来源、成本及工艺管理；
19
a
培养基配方举例
牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)
例如：微生物发酵生产甘油中，例如亚硫酸氢钠， 它与代谢过程中的乙醛生成加成物。
11
a
7.水分 功能：生化反应均在水溶液中进行
12
a
二、培养基的类型
1.依营养物质的来源分类 天然培养基； 合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）； 半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、
氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；
1）、孢子培养基
2）、种子培养基
3) 、 发酵培养基
4）、补料培养基
5）、加富培养基
6）、选择培养基
7）、鉴别培养基
8）、增殖和保存培养基
9）、富集培养基
17 10）、测定培养基
a
三、发酵培养基的选择
一）、配置培养基的原则 1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基 2、注意各营养物质的浓度和配比 3、调节适宜的物理化学条件 4、根据培养微生物的目的配置 5、尽量使用廉价易得的原料
缺点：高温高压下进行，设备要求耐腐蚀、耐高温、
耐高压，副反应多，对原料要求严格，淀粉颗粒不宜
23 过大，淀粉乳浓度不能过高。
a
2、酶解法：（双酶水解法） 定义：用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。一般
伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)
蛋白胨 10克 K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.6 2％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别
灭菌后，加入灭菌的培养基中摇匀，倒平板。
21
a
四、原料转换及意义 1、节约原料，减低单耗，提高发酵单位和总
到100u/mL，研究发现玉米浆中的苯乙胺被有限结合到青霉素分 子中，从而提高了青霉素G的产量。
9
a
2）、促进剂：指那些既不是营养物又不是前 体，但却能提高产量的添加剂。
比如在酶制剂发酵过程中，加入诱导物、表明活性剂及其它一些 产酶促进剂（比如吐温80、植酸、洗衣粉等）
10
a
3）、抑制剂：在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代 谢途径的进行，同时会使另外一些代谢途径活跃，从 而获得人们所需要的某种产物或使正常代谢的某一代 谢中间物积累起来。
第二章 培养基的制备与灭菌
1
a
1、培养基的组成？如何选择培养基？ 2、如何对制备培养基？ 3、如何对培养基进行灭菌？
2
a
第一节 培养基的原材料
一、培养基的营养成分及用途
光
光能自养 自养菌
氢、硫、氨
化能自养
1.能源 亚硝酸盐、亚铁盐
碳水化合物等有机物
石油天然气和石油化工产品（如醋酸） 异养菌
a
察氏培养基(培养霉菌用)
蔗糖 20克 NaNO33克 K2HPO41克 KCl1克 MgSO40.5克 FeSO40.01
克 琼脂20克 水1000毫升自然pH
无氮培养基(培养自生固氮菌用)
葡萄糖 10克 NaCl0.2克 KH2PO40.2克 CaSO4·2H2O0.1克 MgSO40.2 克 CaCO35克 琼脂 20克水1000毫升自然pH
14 纤维衬垫上，就形成了具有固体培养基性质的a 培养条
2）半固体培养基
再配置号的液体培养基中加入0.5%左右的琼 脂作为凝固剂，形成的培养基称之微半固体培 养基。
主要用于菌种鉴定，观察细菌运动特征及噬菌 体的效价测定等
15
a
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
3）液体培养基； 培养基中80～90%是水。
16
a
3.依培养基的用途来分
功能：生长、繁殖需要；
3
a
2.碳源
碳酸气 淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等 石油、正构石蜡、天然气 醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品
功能：提供能量、构成菌体、代谢产物的物 质基础；
4
a
有机氮：黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆、蛋白胨、
3.氮源
酵母粉、鱼粉、发酵菌丝体、酒糟水等
无机氮： 尿素、硫酸铵、氨水、硝酸盐
收率；
2、开拓新的原料资源和微生物资源：野生植 物淀粉、植物纤维、木屑水解物、石蜡、醋酸、 乙醇
22
a
第二节 淀粉水解糖的制备
一、淀粉水解糖的制备方法
1、酸解法：
定义：以酸（无机酸或有机酸）为催化剂，在高温高 压下将淀粉水解为葡萄糖的方法.
优点：设备要求简单，水解时间短（20min），设备 生产能力大
的形成，而并不促进微生物的生长，这些物质 包括前体、促进剂和抑制剂
8
a
1）、前体：指某些化合物加入到发酵培养基中， 能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物 分子中去，而其自身的结构没有多大的变化， 但产物的产量却因加入前体而有较大的提高。
如：在青霉素生产中加入玉米浆，青霉素产量可从20u/mL增加
功能：构成菌体、含氮代谢物；
5
a
磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐
4.无机盐
铁、锰、钴等微量元素
功能：构成菌体，参与酶的组成，维持酶活
性，调节渗透压，调节pH值，维持氧化还原 电位；
6
a
5.特殊生长因子：硫胺素、生物素、对氨基苯 甲酸、肌醇等
功能：酶的辅助部分，维持生命活动；
7
a
6．发酵的促进剂与抑制剂 发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物
13
a
2.依培养基的物理状态来分： 1）固体培养基 A、凝固培养基 ：即遇热可融化，冷却后则凝固的固
体培养基 B、非可逆性凝固培养基：指有血清凝固成的固体培
养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的固体 培养基 C、天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成的 培养基，如麸皮，米糠，木屑等 D、滤膜：是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄 膜，把它制成圆片状覆盖再营养琼脂或浸有培养液的
牛肉膏5克 蛋白胨10克 NaCl5克 水1000毫升 pH7.2～7.4 (琼脂15～20克)
高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)
可溶性淀粉20克 KNO31克 K2HPO40.5克 M脂g1S5O～4200.5克克pHN7a.C4l～07.5.6克 FeSO40.01克水1000毫升琼
20
实验三：培养基的制备与灭菌
实验三：培养基的制备与灭菌一、实验目的与要求：（1）熟悉玻璃器皿的洗涤包装和灭菌前的准备工作。
（2）学习微生物培养基和无菌水的制备，了解培养基配方中各成分的作用、制备流程及各环节的操作技术与应用。
（3）学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。
二、实验原理培养基的制备原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。
人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。
把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。
自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。
但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。
根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。
根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。
培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的进行选择配制，本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。
琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。
因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。
高压蒸气灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌培养基的制备与灭菌实验⼋培养基的制备与灭菌⼀、⽬的要求1.掌握微⽣物实验室常⽤玻璃器⽫的清洗及包扎⽅法。
2.掌握培养基的配置⽅法。
3.掌握⼲热灭菌和⾼压蒸汽灭菌的操作⽅法。
⼆、基本原理正确掌握培养基的配制⽅法是从事微⽣物学实验⼯作的重要基础。
由于微⽣物种类及代谢类型的多样性．因⽽⽤于培养微⽣物的培养基的种类也很多，它们的配⽅及配制⽅法虽各有差异。
但⼀般培养基的配制程序却⼤致相同．例如器⽫的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜⾯与平板的制作以及培养基的⽆菌检查等基本环节⼤致相同。
三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L 的NaOH 和HCl 溶液。
2.仪器及玻璃器⽫：天平、⾼压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三⾓瓶、培养⽫、玻璃漏⽃等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤(⼀)玻璃器⽫的洗涤和包装1.玻璃器⽫的洗涤玻璃器⽫在使⽤前必须洗刷⼲净。
将三⾓瓶、试管、培养⽫、量筒等浸⼊含有洗涤剂的⽔中.⽤⽑刷刷洗，然后⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲净。
移液管先⽤含有洗涤剂的⽔浸泡，再⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲洗。
洗刷⼲净的玻璃器⽫置于烘箱中烘⼲后备⽤。
2 ?灭菌前玻璃器⽫的包装(1)培养⽫的包扎：培养⽫由⼀盖⼀底组成⼀套，可⽤报纸将⼏套培养⽫包成⼀包，或者将⼏套培养⽫直接置于特制的铁⽪圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养⽫须经灭菌之后才能使⽤(2)移液管的包扎：在移液管的上端塞⼊⼀⼩段棉花(勿图8-1移液管的包扎⽤脱脂棉），它的作⽤是避免外界及⼝中杂菌进⼊管内，并防⽌菌液等吸⼊⼝中。
塞⼊此⼩段棉花应距管⼝约0.5cm 左右，棉花⾃⾝长度纟勺1~1.5cm。
塞棉花时.可⽤⼀外围拉直的曲别针、将少许棉花塞⼊管⼝内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通⽓⽽⼜不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽勺5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的⼀端，约成45C⾓，折叠纸条包住尖端，⽤左⼿握住移液管⾝，有⼿将移液管压紧.在桌⾯上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
实验一 培养基的制备与灭菌
实验一培养基的制备与灭菌一、实验目的1. 了解配制培养基的一般方法和步骤;掌握牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基的制备方法。
2. 了解灭菌的原理，掌握高压蒸气灭菌的操作方法。
二、实验器材1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;葡萄糖(蔗糖);琼脂;1N NaOH;1N HCl等。
2. 仪器及其他:试管;锥形瓶;量杯;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或台秤;马铃薯;电炉;铝锅;灭菌锅等。
三、实验方法(一)配制培养基的基本过程:(1)称量:按照培养基配方，称取各种原料放于锅中;(2)溶解:锅中加入所需水量(自来水)，加热溶解。
要不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分;(3)调pH值:按配方要求调节;(4)过滤:用过滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求，此步可以省去。
(5)分装:按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:斜面培养基装入的培养基约为试管高度的l/5,1/4，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
(6)加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。
制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可以用折叠卷塞法制作棉塞(见图)。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，以瓶、管不下落为准。
棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。
如制作时不慎沾上培养基则不可再用。
(7)包扎:加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中，则应以7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。
然后用笔注明培养基名称、组别、日期。
实验七 培养基的配制和灭菌
（二）培养基灭菌
培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便 可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证 灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后， 可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌 和干热灭菌。一般培养基和水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟， 干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿 热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热 穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又 可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌步骤如下： 高压蒸汽灭菌步骤如下：
灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 接通电源， 2. 接通电源，进行加热 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开， 3. 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开，待排出大气后 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 0.5kg/cm2时再 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 当压力达1.05kg/cm2 1.05kg/cm2时 此时灭菌器内的温度为121℃ 121℃， 4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃， 维持20min 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 20min。 维持20min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等 物时，应适当降低压力，延长时间。 物时，应适当降低压力，延长时间。 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时， 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖， 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。
此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。
灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。
物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。
消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。
配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。
(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌1. 前言在微生物学和生物实验中，培养基作为微生物生长的基础和载体起到了至关重要的作用，因而它的质量和制备过程显得尤为重要。
本文将介绍培养基的制备与灭菌，旨在为读者提供一些帮助和参考。
2. 培养基的制备培养基的制备需要注意的是材料和配方的准确性和环境卫生的保证。
2.1 材料与仪器•试剂、培养基成分•纯净水•称量器具（称量皿、电子天平）•烧杯、棒子等常规实验仪器•玻璃仪器（试管、培养皿等）•分液漏斗、滤纸、滤膜•火源（酒精灯、燃气炬等）2.2 制备流程1.准备培养基的配方首先，需根据培养菌的要求和实验目的精准配制培养基。
要使用高纯度的试剂，避免杂质的干扰。
2.称量、倒量利用称量皿和电子天平精准的称量各种试剂，比如：氨基酸、盐酸、氢氧化钠等。
按照一定的顺序，向烧杯中慢慢地加入每一种试剂，倒入固定量的纯净水，搅拌，使溶液均匀。
3.混合、调PH值得到每种成分的溶液后，冷却并混合每种成分的溶液，盂内笛声触目激动 (pH Meter Calibration by Fattyd58, 免费使用).调整pH 值，使其达到正确的值。
4.灭菌将混合好的培养基倒入试管、培养皿中，使用微量注射器，将培养基填充至需要的培养皿内。
然后使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌。
灭菌时间和温度以及一些细节部分操作灵活处理即可。
5.保存灭菌后离火并放置冰箱内，保持冷藏状态。
开封后，最好在 1-2周内使用完成。
3. 培养基的灭菌在实验中，灭菌至关重要，可以有效去除细菌、霉菌等污染物，保证培养基的纯度和实验的成功。
3.1 灭菌方法常见的灭菌方法有：高温高压法、滤过法和辐射法。
其中高温高压法是最普遍也是最常用的灭菌方式。
3.2 操作步骤1.洗涤器皿将试管、培养皿等器皿用清洁刷和流动水清洗干净，在滤器芯中装入过滤棉花。
2.分配培养基用微量注射器等方法将分配好的培养基填充到需要的器皿中。
3.高温高压灭菌将器皿密闭，放入高压锅或者高压蒸汽灭菌器内，进行高温高压灭菌。
5.培养基的制备和消毒灭菌
6.灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。培养基做完后，要求 在2-4小时内灭菌，否则会被污染。 7.摆斜面 灭菌完毕，冷却到60℃左右再摆斜面，以免 产生过多冷凝水。
棉塞制作
牛肉膏蛋白胨培养基（ g/L,培养细菌用）
牛肉膏
3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g（取18g） 水 1000ml pH 7.0-7.2 121℃灭菌20min
3.调节pH值 培养基溶解用pH试纸测pH，然后根据要求 加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓 慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时， 不用调节。 4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要 求可省去。
5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内， 管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污 染。分装量可分为下面几方面： （1）斜面：装量为管长的1/5。 （2）液体培养基：装量为管长的1/4。 （3）半固体培养基：装载量为管长的1/3。
高氏1号（ g/L,培养放线菌用）
可溶性淀粉 KNO3 NaCl
K2HPO4
MgSO4 FeSO4
琼脂
水 pH
20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 15-20g（取18g） 1000ml 7.2-7.4
121℃灭菌20min
马丁氏培养基（g/L,分离真菌用）
NaCl、K2HPO4、 KH2PO4、 KNO3、MgSO4、 FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH、
2.器材：
试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏
斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、 pH试纸 （5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。
实验-培养基的制备和灭菌
原料称量 溶解 定容 调节pH （加琼脂熔化） （过滤澄清）
分装 塞棉塞、包装 灭菌
培养基的制备和灭菌
注意事项
1. 配制培养基前先算好需要量，杜绝浪费； 2. 原料称量中，快接近终点时，用左手轻轻拍打右手手
腕，将少量药品振落，以免过量； 3. 牛肉膏用玻璃棒称取； 4. 成分中如含有磷酸盐和钙盐应分开溶解，否则会产生
生胨培养基：（%）
➢ 牛肉膏 0.5
➢ 蛋白胨 1.0
➢ NaCl
0.5
➢ pH 7.2-7.4
每组：
肉汤蛋白胨培养基：100mL
肉汤固体斜面（琼脂 1.3%）—— 3支 1-4号
肉汤固体三角瓶（琼脂1.0%）——1瓶 80mL/250ml瓶
沙保固体三角瓶（琼脂1.8%）——1瓶
在同样的条件下，为什么湿热灭菌的效果 好于干热灭菌？
高压蒸汽灭菌后，为什么排气不能过猛？ 为什么须待降到零磅才能打开锅盖取出物 件？
为什么配制好的培养基须立即灭菌？
培养基的制备和灭菌
培养基配方与实验安排
沙保培养基：（%） ➢ 葡萄糖 4.0 ➢ 蛋白胨 1.0 ➢ pH 5.4-5.8（自然）
干热灭菌 火焰灼烧：适用于接种环等金属用具 热空气灭菌 ：160℃～170℃灭菌2h 射线灭菌：一般用于无菌室灭菌 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌
培养基的制备和灭菌
实验步骤之灭菌
高压蒸汽灭菌 灭菌条件：一般温度为121℃（压力1kg/cm2 ）
下,维持15～30 min。 高压蒸汽灭菌原理是水的沸点随着压力的增加
培养基的制备和灭菌
高压蒸汽灭菌注意事项
1. 灭菌完毕后，用排气阀排气不能太猛， 否则，压力骤降，导致锅内液体剧烈沸 腾，打湿棉塞，容易造成染菌；