保护珍稀鸟类的无损伤采样和性别分子鉴定_刘清神

克氏病、新城疫、传染性法氏囊病、 ４．３ 观 察 应 根 据 鸡 群 动 态 和 静
传染性支气管炎、禽流感等疫病的 态情况仔细观察， 发现异常情况，
免疫接种。免疫后应进行定期免疫 及时分析、查找原因， 采取措施。一
抗 体 监 测 ， 以 便 调 整 免 疫 抗 体 水 旦发病应及时隔离、治疗。对病死
定。Ｎｏｔａ 和 Ｔａｋｅｎａｋａ 首次（１９９９）利用鸟类的排泄物白 黑天鹅都 是 雌 性 ， 找 出 了 人 工 繁 育 失 败 的 真 正 原 因 。
色部分的尿成功地对白色来航鸡的性别进行了鉴 第四， 大量的样品可以同时检测， 且整个过程时间较
定。Ｔｒｅｆｉｌ 等（ １９９９） 和 Ｂｅｌｌｏ 等（ ２００１） 分别利用鸟类羽 短， 可 以 做 到 高 通 量 地 鉴 定 鸟 类 性 别 ， 便 于 推 广 普
刘清神 １ 董泽敏 １ 刘子呢 ２ 李宝娟 １ 匡晨娅 １ 聂庆华 １＊ 陈仕焯 ３ （ 华南农业大学动物科学学院 广州 ５１０６４２； ２ 华南农业大学人文学院 广州 ５１０６４２；
３ 广州番禺欢乐鸟场 广州番禺 ５１０２８０）
中图分类号： Ｓ８３ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００８－ ３８４７（ ２００８） ０８－ ００３２－ ０２
近 年 来 ， 由 于 环 境 污 染 、植 被 破 坏 、生 境 破 碎 化 及非法捕猎等原因， 许多鸟类尤其是珍稀野生鸟类 正逐步濒临灭绝。因此在鸟类保护方面， 笼养繁殖进 行迁地保护及再引入的保护措施已经具有举足轻重 的作用。 雌 雄 个 体 的 鸟 类 往 往 在 生 理 、行 为 、生 态 等 领域具有差别， 性别鉴定特别是性别的早期鉴定对 鸟类的人 工 饲 养 管 理 、有 效 的 繁 殖 、疾 病 防 治 和 遗 传 研究等方面有重要的意义， 尤其是对濒危珍稀鸟类 的保护和管理具有重要意义（ Ｅｌｌｅｇｒｅｎ， １９９６） 。但全世 界 的 鸟 类 中 有 ５０％ 是 单 态 性 鸟 （ｍｏｎｏｍｏｒｐｈｉｃ ｂｉｒｄｓ）， 即雌雄同型， 他们的性别不论是在幼鸟还是在成鸟 时期， 都很难 从 外 观（ 躯 体 大 小 、羽 毛） 及 其 他 行 为 上 加以判断区别， 给配对造成了相当大的难度。即使对 于一些雌雄异型鸟类来说， 只有在性成熟后， 雌雄在
便易行且对研究对象无伤害， 使其在对鸟类性别的 不依赖于较难区别的外部形态， 结果更可靠。第三，
分子生物学鉴定和保护遗传学研究领域中得到广泛 鉴定不受年龄的限制， 可以实现对性别的早期鉴定。
的 应 用（ Ｂｅｌｌｏ， ２００１； Ｓｅｇｅｌｂａｃｈｅｒ， ２００２）。 如 Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ 可根 据 结 果 及 时 指 导 交 配 和 繁 殖 工 作， 避 免 配 种 周
（ １９９９）利用鸟粪作为 ＤＮＡ 取样来源成功地对一种 食 期的延长。如 Ｈｅ 等（ ２００５）设计引物对黑天鹅 ＣＨＤ 基
草鸟类号鸟 鹦鹉 （Ｓｔｒｉｇｏｐｓｈａｂｒｏｐｔｉｌｕｓ） 的 性 别 进 行 了 鉴 因进 行 扩 增 ， 检 测 发 现 成 都 大 熊 猫 繁 育 基 地 的 ７ 只
而 言 则 既 不 科 学 也 不 现 实 。２０ 世 纪 ８０ 年 代 中 期 以 同 一 引 物 对 成 功 对 东 方 白 鹳（ Ｃｉｃｏｎｉａ ｂｏｙｃｉａｎａ） 进 行
来， 由于 ＰＣＲ 技术的广泛应用， 已经能对极少量遗传 了分子性别鉴定。Ｉｎｏｕｅ－ Ｍｕｒａｙａｍａ 等（２００２） 对鸬鹚，
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＊ 为通讯作者
形态上才有区别， 所以在对单态性鸟类或部分双态 性鸟的幼鸟进行科学研究和人工饲养繁殖中， 尤其 对珍稀 濒 危 鸟 类 来 说 ， 要 安 全 、准 确 地 进 行 性 别 鉴 定 非 常 困 难 （ Ｇｒｉｆｉｔｈｓ， １９９６； Ｌｅｓｓｅｌｌｓ ，１９９６；Ｂｅｒｍｕｄｅｚ－ Ｈｕｍａｒａｎ， ２００２） 。
鸡及其污染物应采取无害化处理。 ４．４ 存 档 应 将 鸡 群 的 采 食 、饮 水 、精 神 、粪 便 、呼 吸 、睡 态 等 状 况 ， 以 及 消 毒 、免 疫 、发 病 、治 疗 、用 药 、 死亡等情况， 详细记录， 并存档备 查。
责任编辑： 董泽敏
养禽与禽病防治 ２００８ 年第 ８ 期
周添喂一次， 每次每羽鸡 ７ 克左 平。
右。
４．２ 卫 生 应 建 立 日 常 清 扫 、清
４ 防疫管理技术
洗 、消 毒 等 卫 生 管 理 程 序 ， 并 持 之
４．１ 免 疫 根 据 各 场 情 况 应 制 订 以 恒 ， 尽 量 采 取 封 闭 式 的 防 疫 管
科学的免疫程序。重点应做好马立 理。
样 是 通 过 捕 获 动 物 来 抽 取 血 液 、 采 集 毛 发 或 羽 毛 、 用 （Ｆｒｉｄｏｌｆｓｓｏｎ，１９９９）。 田 秀 华 （２００６） 运 用 引 物 对
耳、尾或趾等分析样品。这两种取样方法对于非珍稀 ２５５０Ｆ／ ２７１８Ｒ 对哈尔滨北方森林动物园 ７ 种鹤形目
的 鸟 类 来 说 也 许 是 可 行 的 ， 但 是 对 于 珍 稀 濒 危 鸟 类 鸟 类 的 性 别 成 功 地 进 行 了 鉴 定 ， 刘 铸 等（ ２００６） 运 用
对 鸟 类 性 别 在 ＤＮＡ 水 平 上 进 行 鉴 定 ， 首 要 工 作 是采集样品并提取 ＤＮＡ。通常畜禽分子生物学研 究 中取样方法有两种， 即伤害性取样 （ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｓａｍ－ ｐｌｉｎｇ） 和 非 伤 害 性 取 样 （ｎｏｎ－ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｉｎｇ）
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毛提取 ＤＮＡ 进行鸟类的性别鉴定。Ｊｅｎｓｅｎ 等（ ２００３） 及。
利用卵壳膜进行了鸟类的性别鉴定。这些研究以保
为了满足对珍稀濒危鸟类的科学研究和人工繁
护为宗 旨 ， 拓 宽 了 研 究 的 取 样 范 围 ， 便 于 通 过 对 鸟 类 殖 要 求 ， 笔 者 利 用 ２５５０Ｆ／ ２７１８Ｒ 作 为 引 物 ， 对 位 于
保护珍稀鸟类的无损伤采样
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和性别分子鉴定
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过收集脱落 的 毛 发 或 羽 毛 、粪 便 、尿 液 、食 物 残 渣 、鹿 容 易 ， 非 常 安 全 ， 可 以 采 用 非 损 伤 性 取 样 法 ， 采 样 材
角、鱼鳞和卵壳等不同形式的分析样品而进行遗传 料为再生能力很强的羽毛， 对鸟造成的应激反应较
分析的一种取样方法（Ｔａｂｅｒｌｅｔ， １９９９）。 因 为 该 方 法 简 小。其次， 利用稳定遗传的基因组 ＤＮＡ 来鉴定性别，
物质进行检测，由此产生了一类新的取样方法— ——非 Ｓａｃｃｈｉ 等（ ２００４） 对短趾鹰（ Ｓｈｏｒｔ－ ｔｏｅｄ Ｅａｇｌｅ） 分别成功
损伤性取样（ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｓａｍｐｌｉｎｇ）。非损伤性取样法就 地进行了性别鉴定。与鸟类传统鉴定方法相比， 性别
是在不触及或伤害， 甚至不必见到动物的情况下，通 分子鉴定方法具有许多优点： 首先， 采样量小， 取材
野外的活动领域或巢穴收集排泄物（粪便和尿） 、羽毛 广州 欢 乐 鸟 场 的 部 分 鹦 鹉 成 体 的 性 别 进 行 了 无 损 伤
和卵壳膜，利用 ＣＨＤ 基因进行性别鉴定。在国内， 胡 快速分子鉴定。ＰＣＲ 扩增产物电泳结果显示， 雌性为
锐 颖 等（ ２００３） 率 先 建 立 了 微 量 采 样 （一 根 羽 毛）检 测 ２ 条 带 （ＣＨＤ－ Ｗ 和 ＣＨＤ－ Ｚ 两 者 的 扩 增 产 物 ， 其 中
目前， 可用于鉴定单态性鸟或双态性幼鸟性别 的传统方法有： 目测性器官； 通过组织培养进行染色 体分析； 测定粪便中雌激素与睾酮比例； 对性腺进行 直接造影的内窥镜及超声波检查； 体尺测量法； 用录 音机录下鸣叫声比较声波频率等（Ｑｕｉｎｎ， １９９０）。这些 方法在适用性、可靠性和应用性上都有很大的局限 性， 不适用于珍稀濒危鸟类的保护和性别鉴定（李刚， ２００３）。因而， 为了更好地开展濒危珍稀鸟类的人工繁 育 和 保 护 等 工 作 ， 迫 切 需 要 建 立 一 种 安 全 、可 靠 、快 速的鉴定鸟类性别鉴定技术。本研究的无损伤采样 方 法 和 基 于 ＣＨＤ 基 因 的 鸟 类 性 别 分 子 鉴 定 技 术 可 为解决这一问题提供技术支持。 １ 珍稀鸟类的无损伤性取样
鹤、白鹤、黑颈 鹤 、白 头 鹤 、灰 鹤 、白 枕 鹤 、东 方 白 鹳 等 雄 性 为 ｌ 条 带（ＣＨＤ－ Ｚ 的 扩 增 产 物（） 图 １） ， 使 得 结 果
鸟类（ 或 禽 类） 是 指 体 表 被 覆 羽 毛 、有 翼 、恒 温 和 卵 生 的 高 等 脊 椎 动 物 。 全 世 界 的 现 代 鸟 类 约 ９ ７００ 种， 分为 ３ 个 总 目 ： 平 胸 总 目（ 如 鸵 鸟） 、企 鹅 总 目（ 如 企鹅） 和 突 胸 总 目 。 除 平 胸 总 目 、企 鹅 总 目 占 少 数 种 类之外， 绝大部分的现生鸟类属于突胸总目， 善于飞 翔， 具胸骨龙骨突。