关于PCR总结
PCR学习心得（优秀范文六篇）
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第一篇：实习学习心得作为一名即将奔赴教师岗位的大学生，学习科学发展观，更要结合自身实际情况，要认真贯彻执行胡同志提出的：发展要有新思路，改革要有新突破，开放要有新局面，各项工作要有新举措，顶岗实习教师科学发展观学习心得。
我们要把学习践行科学发展观与执教工作结合起来；与谋划好今后与学生交往结合起来；着力提升我们的教师职业道德水平和专业素质。
实践已经充分证明，当代教育需要新的理念新的方式，教学改革的口号也越喊越响亮，这就更需要我们这些即将从事教师职业的顶岗实习生充分利用好实习这个锻炼的机会，以新的理念新的方式来组织教学，提高自己的教学能力，同时锻炼自己管理学生的实践能力，心得体会《顶岗实习教师科学发展观学习心得》。
通过近期的学习，我对科学发展观理论有了进一步的理解，我明白了科学发展观无处不在，无处不可以应用。
从人类个人、国家，乃至整个世界；从经济、政治到环境保护等等。
我们应该从现在起就将科学发展观应用于我们实习教师的学习、生活、思想、工作上，在实习工作中以科学的理念来完善自己的各项能力。
我更加深刻感受到这次学习实践活动的意义，明白更多认识问题、解决事情的方法，凡事要全面地协调地去看待问题。
第二篇：实习学习心得第一天，进入焊接实验室之前，老师简要地给我们讲解了一下实训的要求，让我们对收音机有一个大概的了解，在进行实训的时候心中更加有数。
在实训前，老师给我们发下了中夏S66E六管超外差式收音机实验套件。
接下来几天我们的工作就是将这套套件安装成一个合格的收音机了。
我们每个人拆开套件之后对照元件清单仔细检查了各个元件有无缺失，损坏。
在进行焊接元件之前，我们用废弃的电路摸板练习，掌握烙笔的用法。
刚刚开始自己练习的时候，我们的焊点可谓“抽不忍赌”，有的同学甚至在焊接的时候会出现手颤抖的现象。
高三生物一轮复习PCR知识总结
高考生物PCR的过程及应用考点归纳总结一、基础考点1.名称：多聚酶链式反应2.原理：DNA双链复制（DNA的半保留复制）、DNA的热变性原理3.前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列4.过程：PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：会解释三个步骤①变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链②复性：当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链结合；③延伸：当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸再耐高温的DNA 聚合酶的作用下，根据碱基互补配原则合成新的DNA链④重复：第一轮循环的产物作为第二轮的模板：重复循环变性—复性--延伸三过程。
5.PCR反应体系的成分及作用DNA模板：从样本或细胞中提取的微量总DNA原料∶dNTP（dATP、dGTP、dCTP、TTP），提供原料和能量酶∶Taq聚合酶（热稳定DNA聚合酶，从嗜热菌中分离得到）引物∶一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸（注意：引物与目的DNA片段两条母链各自的3’端序列互补）Mg2+：维持酶活性所必需PCR缓冲液∶维持pH，保护Taq酶6.DNA在体内复制的条件模板∶DNA分子的每条链酶∶解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶原料、能量∶dATP、dGTP、dCTP、dTTP引物∶RNA引物，温和的反应条件7.总结：PCR与体内DNA分子复制的不同点：PCR DNA复制复制起点无有复制叉无有场所及条件体外；控制3个不同温度体内细胞核、线粒体、叶绿体；温和条件步骤变性、退火、延伸起始、延伸、终止酶Taq酶解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶引物2种，一小段与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链DNA；人工合成多种RNA做引物；自行合成引物是否去除否是变性的条件90℃以上的高温解旋酶结果短时间内快速扩增目的基因片段复制完整的DNA分子特点半保留复制两条链连续合成半保留复制半不连续复制8.PCR技术在基因工程中的应用：（1）特异性、快速扩增目的基因获取目的基因（2）目的基因的检测与鉴定9.用PCR技术可以扩增mRNA吗？不可以；在逆转录酶的作用下，需以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则合成cDNA再进行扩增10.提取mRNA扩增目的基因的过程：第一步：逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子第二步：核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA；第三步：以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子第四步：以双链DNA分子为模板，经过③变性、④复性、⑤延伸，循环扩增形成目的基因产物11.cDNA中缺少真核生物基因的哪些结构：启动子、内含子、终止子12.目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是：Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活13.PCR产物的影响因素：模板DNA的量、脱氧核苷酸的量、引物的量、酶的数量和活性、循环次数、Mg2+的浓度14.PCR后期，反应速率下降的原因：酶的活性降低、引物和dNTP浓度降低、反应产物增多15.变性温度过低会导致双链不能充分解开；16：PCR扩增中预变性的目的：预变性破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构。
pcr知识点总结归纳
pcr知识点总结归纳PCR（Polymerase Chain Reaction），即聚合酶链反应，是一种用于抑制、合成、扩增DNA的技术。
PCR技术广泛应用于科学研究、临床诊断、法医鉴定和生物工程等领域。
PCR技术的出现不仅提高了DNA的扩增速度，而且在很大程度上解决了DNA分析的难题和可行性问题。
PCR技术的关键在于DNA的扩增，通过特定的引物（primer）和热稳定的DNA聚合酶在不同温度下进行多次循环反应，使目标DNA片段扩增成百上千倍。
PCR技术的应用可以在较短时间内获得充足的DNA，为后续的实验提供了可行性基础。
PCR技术是分子生物学研究的重要工具，掌握PCR技术的原理和操作方法对于分子生物学研究者来说至关重要。
下面将对PCR技术的知识点进行总结和归纳，包括PCR的基本原理、PCR反应体系、PCR引物设计、PCR技术的优缺点以及PCR技术在生物学研究中的应用等方面。
一、PCR的基本原理PCR技术是通过DNA的酶解、DNA的引物延伸、DNA的片段合成来实现DNA扩增。
PCR主要由以下三个步骤组成：变性、退火和延伸。
1. 变性步骤：将DNA的双链解链成两条单链，即使DNA解链。
2. 退火步骤：将引物与DNA模板结合成双链，即使DNA复性。
3. 延伸步骤：在退火变性条件下将引物作为起始核酸，然后DNA聚合酶将其扩增成DNA。
通过以上三个步骤的循环反应即可实现DNA的多次扩增。
二、PCR反应体系PCR反应体系主要包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、四种dNTPs、缓冲液和辅助剂等。
1. DNA模板：PCR反应的起始材料，可以是基因组DNA、cDNA或其他DNA模板。
2. 引物：在退火步骤中将与DNA模板特异性结合，为DNA的扩增提供起始核酸。
3. DNA聚合酶：用于合成DNA，PCR反应中通常采用热稳定的DNA聚合酶如Taq DNA聚合酶。
4. dNTPs：即脱氧核苷酸三磷酸盐，即dATP、dCTP、dGTP和dTTP，是DNA聚合的四种脱氧核苷酸单体。
pcr工作总结个人
pcr工作总结个人
PCR工作总结
在过去的一段时间里，我参与了PCR实验的进行并进行了相
关数据分析。
以下是我的个人总结：
1. 设计合适的引物和探针: 在PCR实验中，选择合适的引物和
探针非常重要，因为它们直接影响到反应的特异性和效率。
我在设计引物和探针时充分考虑了目标序列的特性，并通过生物信息学工具进行了引物的有效性和特异性检验。
2. 优化PCR反应条件: 我进行了一系列的试验，优化PCR反
应条件以提高扩增效率和特异性。
我尝试了不同的温度梯度、不同反应体系的比例和浓度，并通过监测反应产物的大小和纯度评估了优化效果。
3. 建立PCR实验流程: 我详细记录了PCR实验的步骤和条件，并建立了实验流程，以确保实验的重复性和可靠性。
我还优化了DNA提取和PCR反应的操作步骤，减少了潜在的污染和误差。
4. 数据分析和解释: 在PCR反应完成后，我对产生的数据进行
了分析和解释。
我使用统计学方法评估了扩增效率，并将结果与已知的参考数据进行了比较。
通过对扩增曲线和产物的大小进行分析，我能够确定目标序列的特异性和数量。
5. 结果和结论: 基于实验结果和数据分析，我得出了一些结论，
并提出了相应的建议。
我希望进一步优化PCR反应条件，尽量提高扩增效率和特异性。
另外，我还发现一些PCR反应中的问题，并提出了改进的措施。
总的来说，我的PCR工作经验使我对PCR技术有了更深入的理解，并提高了实验设计、操作和数据分析的能力。
在未来的工作中，我将继续应用这些技能，进一步拓展和应用PCR技术。
pcr检测工作总结
pcr检测工作总结
PCR检测工作总结。
PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，用于检测和分析DNA。
在疾病诊断、基因编辑、犯罪调查等领域都有广泛的应用。
在实验室中，PCR检测工作是非常重要的，它可以帮助科研人员快速准确地获取所需的DNA信息。
以下是对PCR检测工作的一些总结。
首先，PCR检测工作需要严格的操作规范。
在进行PCR反应时，实验室工作
人员必须严格遵守无菌操作规程，以避免外源DNA的污染。
此外，实验室工作人
员还需要准确地计量反应液中的各种试剂，以确保PCR反应的准确性和可重复性。
其次，PCR检测工作需要精准的实验仪器。
PCR反应需要在特定的温度下进行，因此实验室必须配备高质量的PCR仪器，以确保反应温度的准确控制。
此外，实
验室还需要配备准确的离心机、电泳仪等设备，以进行PCR产物的分离和分析。
另外，PCR检测工作需要严密的数据分析。
在PCR反应结束后，实验室工作
人员需要对PCR产物进行准确的分析和鉴定。
他们需要使用准确的电泳技术，对PCR产物进行分离和检测。
此外，实验室工作人员还需要使用专业的软件对PCR
数据进行处理和分析，以获取准确的实验结果。
总的来说，PCR检测工作是一项需要高度专业技能和严格操作规范的工作。
只
有通过严格的操作规范、精准的实验仪器和严密的数据分析，才能保证PCR检测
工作的准确性和可靠性。
PCR技术的不断发展和完善，将为人类健康和科学研究
带来更多的福祉。
pcr检验工作个人年终总结范文
pcr检验工作个人年终总结范文PCR检验工作个人年终总结一、总述回顾过去一年的PCR检验工作，我深感学到了很多知识和技能，也取得了不少成绩。
在这篇年终总结中，我将结合具体工作内容，分享我的收获和经验。
二、工作内容及成绩1. 实验技术能力提升通过不断学习和实践，我掌握了PCR检验的基本理论和实验步骤，熟悉了常见的实验室仪器设备操作，如PCR仪、离心机等。
我还研究了新的PCR技术和方法，如实时荧光定量PCR和多重PCR，提高了实验的准确性和效率。
2. 样本处理和质量控制在样本处理和质量控制方面，我积累了丰富的经验。
我严格按照实验室标准操作，保证了样本的准确性和可靠性。
我学会了正确制备PCR反应液，优化了反应条件，提高了PCR检验的灵敏度和特异性。
3. 数据分析和结果解读PCR检验不仅仅是实验操作，更重要的是数据的分析和结果的解读。
我学会了使用相关软件进行数据处理和分析，如SPSS和GraphPadPrism等。
我能够准确地解读PCR结果，并撰写科学报告，将实验结果与研究目的紧密结合，为研究提供有力的依据。
4. 与团队合作作为PCR检验工作的一员，与团队合作是非常重要的。
我与同事建立了良好的沟通和协作关系，相互之间互相配合，共同完成了多个项目。
团队合作使我们的工作更加高效和有成效，也提升了团队的凝聚力和专业水平。
三、经验与收获1. 学习的重要性PCR检验是一个不断发展的领域，我意识到学习是持续提升的关键。
我会继续学习新的实验技术和方法，积极参加相关培训和学术交流，不断提升自己的专业水平。
2. 规范操作的重要性PCR检验是一项精密的实验技术，任何一环的失误都可能导致结果错误或不准确。
因此，我更加注重规范操作，严格遵循实验室操作规程，确保实验过程的可重复性和结果的可靠性。
3. 团队合作的重要性PCR检验工作需要团队合作，每个人都发挥着重要的作用。
通过与团队的合作，我学会了倾听和尊重他人的意见，学会了协调和合作，也提高了自己的沟通能力和团队意识。
目的片段扩增总结
目的片段扩增总结引言目的片段扩增（PCR）是一种常用的分子生物学技术方法，它可以通过扩增DNA片段来获得特定的目的序列。
这项技术的发展使得科学家能够在研究基因组、DNA测序、基因工程等领域中进行更加精细和准确的实验操作。
本文将介绍PCR技术的基本原理、实验步骤以及注意事项，并总结该技术的优点和应用。
PCR技术的基本原理PCR技术通过在体外进行一系列高温循环反应，以获得大量特定DNA片段的方法。
其基本原理可以归结为以下三个步骤：变性、退火和扩增。
1.变性：将PCR反应混合液中的DNA样本加热至94-98摄氏度，使其两条链解旋（变性）。
这样，DNA就会变成两个单链的模板。
2.退火：降低反应温度到50-65摄氏度，将引物（primer）与目的DNA序列的单链模板互相结合。
这两个引物是根据目的DNA序列的反向互补序列设计的，它们的结合定位PCR扩增的起始位点。
3.扩增：将反应温度升至72摄氏度，加入DNA聚合酶（常用的是Taq聚合酶）。
DNA聚合酶在DNA单链模板上逐个加入碱基，从而在每一个引物的配对位点上合成新的DNA链。
这样，每个引物会扩增出与目的序列相对应的DNA片段。
通过不断的循环这三个步骤，PCR反应可以在非常短的时间内扩增出大量的目的DNA片段。
PCR实验步骤PCR实验通常包含以下几个步骤：1.DNA样本提取：从待测样本（例如细菌、动物组织、血液等）中提取DNA。
常用的提取方法包括酚/氯仿法、盐析法等。
2.引物设计：根据目的序列的反向互补序列设计引物。
引物通常是由15-30个碱基组成的短DNA片段。
3.PCR反应条件设定：根据目的序列的长度和GC含量，优化PCR反应的退火温度、扩增时间和循环次数等参数。
4.PCR反应体系制备：根据PCR反应条件设定添加反应体系所需的试剂，包括DNA模板、引物、反应缓冲液、Mg2+、dNTPs和DNA聚合酶等。
5.PCR反应程序设定：将PCR反应体系置入热循环仪，设定变性、退火和扩增的时间和温度。
pcr实验知识点总结
pcr实验知识点总结PCR实验（聚合酶链反应）是一种在生物化学中广泛使用的分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。
该技术由Kary Mullis于1983年发明，并于1993年获得了诺贝尔化学奖。
以下是关于PCR实验的知识点总结。
一、PCR原理PCR的基本原理是利用DNA聚合酶对单链DNA进行复制的能力。
这个过程分为三个步骤：变性、退火和延伸。
1. 变性：在高温（通常为95℃）下，双链DNA被解旋成两条单链模板。
2. 退火：温度降低（一般为50-65℃），引物与模板DNA的互补序列结合。
3. 延伸：在适宜的温度（72℃左右）和DNA聚合酶的作用下，引物沿着模板DNA向两侧延伸，形成新的双链DNA。
这三个步骤循环进行，每次循环都会使目标DNA的数量翻倍，经过几十到几百次循环后，就能得到大量的目标DNA。
二、PCR所需材料1. DNA模板：待扩增的目标DNA。
2. 引物：两段短的寡核苷酸，与目标DNA的两端互补。
3. dNTPs：脱氧核苷三磷酸，作为合成新链的原料。
4. Taq DNA聚合酶：能在高温下保持活性的酶，用于催化DNA的合成。
5. 缓冲液：提供合适的pH和离子环境。
三、PCR操作步骤1. 设计引物：根据目标DNA的序列设计出两条引物，分别与DNA的正反两条链互补。
2. 配制反应体系：将模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶和缓冲液按照一定比例混合。
3. PCR循环：将反应体系放入PCR仪中，设定好变性、退火和延伸的温度和时间，开始循环反应。
4. 产物检测：可以通过凝胶电泳等方法检测PCR产物的大小和数量。
四、PCR的应用1. 分子诊断：如病原体检测、基因突变检测等。
2. 基因克隆：将目的基因扩增后，可以方便地进行后续的克隆和表达。
3. 序列分析：通过扩增特定的基因区域，可以进行基因测序和SNP分析等。
4. 生物考古学：可以从古代样本中提取DNA并进行扩增，研究古生物的遗传信息。
五、PCR实验注意事项1. 引物设计：引物应具有良好的特异性和稳定性，避免产生非特异性扩增和二级结构。
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PCR总结若模板为环状质粒，最好先用酶将其切开成线性分子。
酵母、细菌及质粒基因组，每次反应的模板最大加入量分别为10ng，1ng和1pg。
引物的设计原则1．引物的长度应适宜，一般要求18~25bp，一对引物中两个引物之间的长度差异应小于3bp。
2．基本成分：G+C的含量一般为40%~60%。
四种碱基应随机的分布，避免碱基堆积的现象。
尤其引物的3’端，不应有连续的3个G或C，否则会使引物与核酸的G或C富集区互补从而影响PCR的特异性。
3．引物自身：引物自身不应有反向重复序列或者大于3bp 的自身互补序列，否则引物自身会折叠形成发夹结构，将影响引物与待增DNA中的靶序列的杂交结合。
4．引物之间：引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠以免形成引物二聚体。
由于PCR反应体系中含有高浓度的引物，即使引物之间存在极为微弱的互补作用也会使引物相互杂交，最终得到引物二聚体的扩增产物。
若引物二聚体在PCR反应的早期形成，它们将通过竞争DNA聚合酶、引物及四种单核苷酸从而抑制待增DNA的扩增。
通过精心设计引物、应用热启动PCR(hot start PCR)或者降落PCR(touch down PCR)及特制的DNA聚合酶，可以减少引物二聚体的生成。
5．3’末端：引物的3’端（羟基端）是引发延伸的起点，因此一定要与模板准确配对，应尽量避免在引物3’端的第一位碱基是A。
引物3’端最佳碱基的选择是G和C，因为他们形成的碱基配对比较稳定。
6．溶解温度：3’端引物和5’端引物应有相似的T m值（不同序列的DNA，Tm值不同。
DNA中G-C含量越高，Tm值越高，成正比关系。
），其差别不应大于5℃。
扩增产物与引物的T m值的差别应小于10℃，以确保PCR循环中的扩增产物有效的变性。
8. 引物的特异性：引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个碱基同源。
9．引物的简并性：引物的3’端应为保守的氨基酸序列，即采用简并密码较少的氨基酸如Met、Trp，且要避免三联体密码第三个碱基的摆动位置位于引物的3’端。
设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T。
引物的用量在PCR反应体系中，引物的浓度一般要求在0.1~0.5µM之间，这一引物浓度足以使1kb的DNA片段在PCR反应体系中循环扩增30次。
引物浓度过低，则产物量低；引物浓度过高则会促进引物二聚体的形成以及非特异性产物的形成。
反应缓冲系统反应缓冲系统提供PCR反应所必需的合适的酸碱度和某些离子。
目前最常用的缓冲液是10~50mmol/L的Tris-HCl(pH8.3~8.8，20℃)，在72℃时，其pH值为7.2左右。
反应缓冲系统中还含有KCl，50mM以内的KCl有利于引物的退火，而50mM以上的KCl则抑制Taq DNA聚合酶的活性。
然而，也有人认为含有50mM KCl的缓冲系统有利于大于500bp的DNA片段的扩增，然而将缓冲系统中的KCl浓度提高到70~100mM则有利于提高较小的DNA片段的扩增产量。
Mg2+反应体系中Mg2+浓度低时，酶的活力显著降低；过高时，酶则催化非特异性扩增。
此外，Mg2+浓度还影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度、产物的特异性、引物二聚体的生成等。
值得注意的是，由于PCR反应体系中的DNA模板、引物和dNTP磷酸基团均可与Mg2+结合从而降低Mg2+的实际浓度，因此一般Mg2+的加入量应比dNTP的总浓度高0.2~2.5mmol/L。
dNTPs许多厂商出售专门用于PCR的d NTP ( deoxy-具有较强的酸性而不含焦磷酸盐，其目的是保护dNTP在储存液的冷冻和加热期间受到破坏。
因此在使用前应用NaOH将pH值调至7.0~7.5。
无论是自配的还是购买的dNTPs溶液在储存前都应分成较小的几份，然后在-20℃下储存，经过两次冷冻-加热循环后储存液就必须丢弃。
若长期在-20℃下冻存，储存液中的少量的水分会蒸发而后凝结在储存容器上，因此储存dNTP液的容器在加热后应在微型离心机中离心数十秒以减少dNTP浓度的变化。
PCR的反应条件的选择退火温度确定后，退火的时间并不是关键性的因素，但也应加以控制。
退火时间过短，会导致延伸失败；而退火时间太长会增加引物与模板间的非特异性结合。
目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5'端而不影响特异性。
当计算引物Tm值时并不包括这些序列，但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。
引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）。
这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。
Tm对于设定PCR 退火温度是必需的。
在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。
合理的退火温度从55℃到70℃。
退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。
设定Tm有几种公式。
表5列出确定引物Tm最常用的两种方法。
第一个公式来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。
第二个公式根据GC含量估算Tm。
确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。
这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。
大部分计算机程序使用近邻分析法。
表5. 估算Tm的公式如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃。
或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后再根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。
这使得在较为严谨的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。
递减PCR通过在PCR的前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性。
循环在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃，直到退火温度低于Tm 5℃。
只有同同源性最高的目的模板会被扩增。
这些产物在随后的循环中继续扩增，并会将扩增的非特异性产物排挤出去。
递减PCR对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法较为有用，如AFLP DNA指纹分析通常的PCR反应体系中，dNTP的浓度应在20~200µmol/L之间，在此范围内，PCR的产量、特异性和忠实性之间的平衡最佳。
由于Taq pol没有校正阅读功能，在扩增过程中可引起碱基错配，通常可应用低浓度的dNTP(各20µmol/L)、1.5mmol/L的Mg2+浓度、高于55℃的复性温度，可提高Taq pol的忠实性。
此时的平均错配率仅为5×10-6次/核苷酸循环(通常30次循环的Taq pol的错配率约为0.25%)。
在其它参数最佳的时候，每100µl反应液中加入1~2.5U的Taq pol为最佳。
通常在100µl的反应体积中加入0.5~5U酶的范围内试验酶的最佳浓度。
循环参数1. 变性：变性的温度取决于模板DNA分子的G+C 含量和DNA聚合酶的热稳定性，而变性的时间与模板DNA链的长度及DNA聚合酶的热稳定性有关。
在90℃~97℃的温度范围内，即使再复杂的DNA分子也可以变性成为单链。
通常的变性温度和时间分别为95℃、30秒，有时用97℃、15秒。
尽管DNA在其链分解温度(strandseparation temperature，Tss)时的变性只需几秒钟，然而要使反应管内部达到Tss 还需要一定的时间，因此需要延长变性时间。
通常在加入耐热DNA聚合酶之前先使模板在97℃下变性7~10min，再按94℃或95℃的温度进入循环。
通常G+C含量约为55%的线性模板DNA分子的变性温度和时间为94~95℃45秒。
扩增100~300bp的短片段时，可用简便、快速的两步PCR法，同时在5~10个循环后，可将变性温度降至87℃~90℃以改善PCR 的产量。
此外，由于环状DNA复性太快，通常待扩增的环状质粒DNA模板在扩增前最好先酶切线性化。
2. 退火：合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。
通常引物与模板的退火温度在45~55℃之间，一般情况下在Tm值允许的范围内选择偏高的退火温度以提高PCR反应的特异性。
优化退火温度的最理想的方法是设置一系列的对照反应。
即通过在低于计算出的引物Tm值2℃到10℃的温度范围内进行退火的一系列平行反应来确定最佳退火温度。
此外我们还可以通过在低于计算出的引物Tm值2℃到10℃的范围内由高到低的设定同一反应体系中连续的不同循环的退火温度从而确定最佳退火温度，即降落PCR。
3. 延伸：延伸温度取决于所使用的耐热DNA聚合酶的最适作用温度，一般为70~75℃。
通常扩增1kb以内的DNA片段延伸1min即可，而当待增序列长达3~4kb时，则需延长3~4min；然而当扩增小于150bp的片段时则可以省略延伸步骤，因为在退火温度下Taq DNA聚合酶的活性已足以完成靶序列的合成。
应注意在前几轮循环中的延伸时间要足够，以使靶序列延伸完全从而提高PCR反应的特异性。
此外当待扩增DNA的浓度较低时，由于碱基掺入率较低，可适当的延长反应延伸时间。
4. 循环次数：当待增靶序列数分别为3×105、1.5×104、1×103和50拷贝分子时，最适循环数分别为25~30、30~35、35~40和40~45次。
降低错配几率通常在反应体系中加入的模板数应为102~105拷贝，以降低错配几率。
当反应体系中的dNTP浓度明显低于K m值(dNTP<1µmol/L)或者某一dNTP的浓度低于其它三种的浓度时会增加错配碱基的掺入。
当dNTP浓度过高(>1mmol/L)时则会促进错配碱基的延伸。
因此，在PCR反应体系中应采用较高浓度的dNTP，且四种dNTP的浓度应相同。
通常，当每种dNTP浓度为10~50µmol/L时，能够最大程度的保持PCR反应的忠实性。
标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。
dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris－HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。
多次冻融会使dNTP 降解。
在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP 的浓度要相等( 等摩尔配制)。