兽用生物制品无菌检验操作规程
GMP-无菌检查操作规程
1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
无菌检验标准操作规程(SOP)
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
无菌检验标准操作规程SOP
(SOP)无菌检验标准操作规程劲芳生物医药孵化器有限公司目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
QC检验员责任者：质管部、化验室主任、内容： XI H。
《中国药典》2015年版二部附录、标准依据：1、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、2厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
级）的单向级）背景下的局部百级（A3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
5 、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
4 、检验数量及检验量：6，供试品无菌检查若个（取较少者）或10、接种每种培养基所需的最少检验数量6.1:2%的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供1/2采用薄膜过滤法，应增加试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
，采用薄膜过滤法200ml）≤半量（100mlV≤6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
℃。
～℃，真菌培养温度为23287、细菌培养温度为30～35、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、8％酒精棉75双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、、真空泵、一次性使用集菌培养器。
球、紫外光灯365nm 、消毒剂配制：9 ％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.1、75 。
、9.20.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）2。
中国药典2020无菌检查法
中国药典2020无菌检查法无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法，其目的是检验药品是否符合无菌要求，以确保药品的安全性和有效性。
中国药典2020中规定了无菌检查的方法，本文将对无菌检查法进行详细介绍。
无菌检查法是指对药品样品进行无菌试验，以确定是否存在细菌、真菌或其它微生物。
无菌试验包括原料药、制剂和生物制品的无菌试验。
在中国药典2020中，无菌检查法主要分为两种：直接接种法和膜过滤法。
直接接种法是指将待检样品直接接种在培养基上，观察一定时间后是否有微生物生长。
直接接种法适用于液体制剂和原料药的无菌试验。
在进行直接接种无菌试验时，应先将试样用无菌方法处理，使细菌、真菌等微生物减少或清除。
然后将处理后的试样分别接种在含有适当培养基的培养皿上，然后密封培养皿，适当灭菌。
在培养箱中适当温度下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。
若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。
膜过滤法是指将待检样品通过0.45μm孔径的膜过滤器，将微生物截留在膜上，然后将膜放置在含有适当培养基的培养皿上，观察一定时间后是否有细菌或真菌生长。
膜过滤法适用于不易接种的样品，如含固体颗粒的液体制剂和大体积原料药等。
在进行膜过滤无菌试验时，应先将膜过滤器用无菌方法处理，使膜过滤器无菌。
然后将待检样品通过膜过滤器，过滤到含有适当培养基的培养皿中，然后在适当条件下培养一定时间，观察培养皿是否有微生物生长。
若有微生物生长，则说明样品不符合无菌要求。
对于无菌试验中的阴性对照，应分别对无菌生理盐水和培养基分别进行直接接种法或膜过滤法试验，确保试验条件和操作技术正确，并且无菌生理盐水和培养基无污染。
在进行无菌检查法试验时，应严格操作，避免试验污染。
应在无菌操作台上操作，使用无菌培养皿、无菌吸头、无菌吸滤器等。
同时，应严格遵守无菌技术操作规程，确保操作正确、无菌。
总之，无菌检查法是药品生产中非常重要的一项质量控制方法。
中国药典2020中规定了无菌检查法的方法，包括直接接种法和膜过滤法。
生物制品无菌试验规程
1.5混浊和接种后不能判定结果的制品，可取规定量的样品接种于不含琼脂 的硫乙醇酸盐培养基（200ml）内进行增菌培养，3～4天后移种。培养基种类 和支数、培育温度同
3.3.
1.2项，共培育8天后判定结果。
3.3.2血液制品
3.3.
2.1取规定抽样数，按下列规定，从每瓶抽取样品，并全部接种完。
1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。6～20ml抽检量加倍。5ml和5ml以下者按
1.2.1项抽检。
1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品 可不再做。
2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）
2.1检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品 时检查，有专门规定者除外）。
4结果判定
以接种培养基管数的以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次
试验中以2次达到的最高灵敏度为判定标准。
0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释。
3.3将10-6～10-8（短芽胞杆菌、生子孢梭状芽胞杆菌为10-6～10-8，乙型溶血性-7-9
链球菌为10～10）菌液各1ml分别接种到9ml（用于厌氧菌的培养基在试管中装置高度不得低于7cm）试验用培养基中，每个稀释度至少接种3管，并 用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生子孢梭状芽胞杆菌的 培养基，置30～35℃培育3天，接种短芽胞杆菌的培养基培育5天，记录结 果。
样品每瓶装量不足
1.0ml者，抽取全量，1～20ml以下者（不含20ml），抽取
1.0ml以上，每支装量为15ml的培养基，接种
1.0ml。
样品每瓶装量以下者（不含）抽取
兽用疫苗的无菌检验
无菌检验或纯粹检验法药典1.适用范围：适用于菌毒种、兽用生物制品的无菌检验和纯粹检验。
2.样品数量A.成品的无菌检验或纯粹检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。
B.制造疫苗用的各种原菌液、毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌或纯粹检验，应每瓶（罐）分别抽样进行，抽样量为2～10ml。
3.检验用培养基A.硫乙醇酸盐流体培养基（TG）Fluid Thioglycollate Medium检验厌氧菌和需氧菌B.胰酪大豆胨液体培养基（TSB）（大豆酪蛋白消化物培养基）Trypticase Soy Broth 检验真菌和需氧菌C.适宜本菌生长的培养基半成品的检验1、细菌原液（种子液）、细菌活疫苗半成品的纯粹检验：2管TG+2管本菌取供试品接种TG小管及适宜于本菌生长的其他培养基斜面各2管，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，观察3～5日，应纯粹。
2、病毒原液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验：2管TG+1管TSB取供试品接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3、灭活抗原的无菌检验A、灭活细菌菌液的无菌检验 2管本菌细菌灭活后，用适于本菌生长的培养基2支，各接种0.2ml，置35～37℃培养7日，应无菌生长。
B、灭活病毒液的无菌检验 2管TG+1管本菌病毒液灭活后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
C、类毒素的无菌检验 2管TG+1管TSB毒素脱毒过滤后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35～37℃培养，1支置23～25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23～25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
无菌检查法标准操作规程
将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至 传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品 等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套 的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行 清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处 理。 4.1.4阳性对照
关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化 更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。
4.操作
4.1薄膜过滤法 4.1.1操作前准备
检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前 次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作 室，开启超净工作台并擦拭工作台面。 4.1.2操作 4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号
菌检查法的要求。 （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。 （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所
使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依
法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符 合规定。
否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接 接种法。 1.2 检验数量
指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表 1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试 品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用； 采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。
无菌检验操作规程
无菌检验操作规程无菌检验操作规程一、目的和适用范围为了保证实验室无菌检验的准确性和可靠性，规范无菌检验操作，并确保实验室工作人员的安全和健康，特制定本操作规程。
本操作规程适用于实验室进行无菌检验的所有工作，包括培养基制备、无菌器具处理、样品采集和处理、培养方法等方面。
二、基本要求1. 实验室应具备无菌检验所必需的设施和设备，并保持良好的清洁卫生环境。
2. 实验室工作人员应严格按照操作规程进行操作，并保持良好的个人卫生习惯。
3. 实验室应保证培养基的质量，确保无菌性和适用性。
4. 实验室应建立必要的记录和档案，对无菌检验的结果进行及时记录和分析。
三、无菌器具处理1. 确保无菌器具的质量，每批次器具在使用前应进行质量检验。
2. 器具的清洗和消毒应在专门的消毒台上进行，使用无菌的工具和材料。
3. 清洗器具时应使用无菌特效洗涤剂，并充分冲洗干净。
消毒时应使用适当浓度的消毒剂，消毒时间应符合标准要求。
4. 清洗后的器具应存放在无菌柜或密封的袋子中，以防再次污染。
四、样品采集和处理1. 采集样品前，要对采样器具进行清洁和消毒处理，并使用无菌容器保存样品。
2. 采样时要保持无菌采样器具的封闭性，避免外界环境的污染。
3. 对于液体样品，应在无菌操作台上进行，严禁倒杯操作。
对于固体样品，应在无菌条件下处理。
4. 样品采集完成后，应及时将采样器具和容器送到实验室，并妥善保存，以防止再次污染。
五、培养基制备1. 制备培养基的操作应在无菌操作台上进行，工作台面应经过清洁和消毒处理。
2. 使用的培养基应经过质量检验，确保无菌性和适用性。
3. 制备培养基时，要注意保持操作的无菌性，避免污染。
4. 制备完成的培养基应标明名称、批号和有效期，并妥善保存，避免污染和变质。
六、培养方法1. 培养前要将培养基及所需器具放置在无菌操作台上，以使其达到与环境相同的温度。
2. 培养时要保持培养器具的密封性，避免外界空气和微生物的污染。
3. 培养容器的开启和关闭要快速，并尽量避免与空气接触时间过长。
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一、目的：规范无菌检验操作。
二、适用范围：适用于无菌检验操作。
三、职责：进行该项检验的检验员应严格按规程进行操作。
四、内容：
1 抽样应随机取样并注意代表性。
1.1 制造疫苗用的各种原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验，应每瓶（罐）分别进行，抽样量为2~10ml。
1.2 成品的无菌检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。
2 检验用培养基
2.1 无菌检验
2.1.1 硫乙醇酸盐流体培养基（TG）用于厌氧性及需氧性细菌的检验。
2.1.2 胰酪大豆胨液体培养基（TSB）用于真菌及需氧菌检验。
3 检验方法及结果判定
3.1 病毒原毒液和其他配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌检验取样品接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种1支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.2 灭活病毒液的无菌检验病毒液灭活后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.3 类毒素的无菌检验毒素脱毒过滤后，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
3.6 成品的无菌检验
样品（原）装量大于1.0ml的，取处理好的样品1.0ml，样品（原）装量小于1.0ml 的，取其处理好的样品的全部内容物，接种50ml TG培养基，置35~37℃培养，3日后
吸取培养物，接种TG小管2支，每支0.2ml，1支置35~37℃培养，1支置23~25℃培养，另取0.2ml，接种一支TSB小管，置23~25℃培养，均培养7日，应无菌生长。
如果允许制品中含有一定数量的非病原菌，应进一步做杂菌计数和病原性鉴定。
4 结果和判定每批抽检的样品必须全部无菌生长。
如果无菌检验发现个别瓶有菌生长或结果可疑，应抽取加倍数量的样品重检，如果仍有杂菌生长或有菌生长，则作为污染杂菌处理。
如果允许制品中含有一定数量非病原菌，应进一步作杂菌计数和病原性鉴定。
附注：TG培养基1/3变红时，需煮沸后再用，但不宜反复驱氧。