血球计数板细胞计数法

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1、细胞计数方法

1、细胞计数方法

细胞如何计数?(整理自网络)
方法一:血球计数盘
此物一般有二个chambers,分别刻有9 个1 mm²大正方形,4 个角落之正方形再细刻为16 个小格,深度均为0.1 mm。

当chamber 上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1 mm²×0.1 mm=0.1 mL。

计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以10000,即为每mL 中之细胞数目。

操作步骤
1、取少许细胞悬液(约15 μL)自血球计数盘chamber 上方凹槽加入,盖上盖玻片,于100
倍倒立显微镜下观察;
2、计数四个大方格之细胞总数,再除4,乘以稀释倍数,最后乘以10000,即为每mL 中
细胞悬浮液之细胞数。

若细胞位于刻线上,只计上线与右线之细胞(下线与左线之细胞)。

计算公式为:4个大格细胞总数×稀释倍数×10000/4=细胞数/mL。

注:(1)计数板计数时,最适浓度为5~100000 细胞/mL,此范围外计数误差偏大。

高浓度细胞悬液,可取出部分作稀释或连续稀释后计数。

(2)吸管吸取细胞,让吸管在计数板一侧的凹槽处流出液体,至盖玻片被液体充满为止,不要溢出盖玻片,也不要过少或带气泡;(有人认为,10 uL 就可以被虹吸作用吸入且铺满计数板)。

(3)移液器(20 μL 的微量加样器)吸取20 μL 细胞悬液至计数板边缘,液体经虹吸作用进入凹槽。

(4)静置半分钟再于显微镜下观察。

方法二:粒子计数器自动计数。

血球计数板计数法

血球计数板计数法

精度高
血球计数板由精密的网格构成,能够精确地 计算细胞数量,误差较小。
样本用量少
血球计数板计数法需要的样本量较少,适用 于珍贵样本的计数。
缺点
主观性强
血球计数板计数法需要人工识别和计数细胞,因此容易受到主观因素 的影响,不同操作者之间可能存在差异。
无法计数非网格区域细胞
血球计数板上的网格区域有限,对于非网格区域的细胞无法计数,可 能会造成计数误差。
改进样本处理方法,提高细胞分散效果,降低细胞聚集现象, 提高计数的准确性。
增加血球计数板的网格密度,以减少计数误差,提高计数的准 确性。
将血球计数板计数法与其他检测方法相结合,如染色法、流式 细胞术等,以提高计数的准确性和可靠性。
06 血球计数板计数法:血常规检测中的血细胞计数
红细胞计数降低
常见于缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、溶血性贫血等,也 可见于慢性病、肿瘤、月经期、孕妇等生理性贫血。
白细胞计数结果解读
白细胞计数正常值
成人(4.0~10.0) × 10^9/L,新生儿 (15.0~20.0) × 10^9/L。
白细胞计数升高
常见于感染、炎症、组织损伤、恶性肿瘤等,也可 见于生理性升高,如剧烈运动、体力劳动、月经期 和排卵期等。
常见于免疫性血小板减少症、再 生障碍性贫血、骨髓增生异常综 合征等,也可见于某些药物影响 或放化疗后骨髓抑制。
05 血球计数板计数法的优缺点
CHAPTER
优点
操作简便
血球计数板计数法是一种直接、快速的细胞 计数方法,操作简便,易于掌握。
适用范围广
该方法适用于各种类型的细胞计数,包括细 菌、红细胞、白细胞等。
总结词
血球计数板计数法在血常规检测中广 泛应用,用于准确计数红细胞、白细 胞和血小板等血细胞数量,为临床诊 断提供重要依据。

血球计数板计算方法

血球计数板计算方法

血球计数板计算方法
血球计数板是一种用于血液分析的仪器,可以用来测定红细胞数量、白细胞数量和血小板数量等。

其计算方法如下:
1.计算红细胞计数:在血球计数板的左侧,依次数两个大格子,每个大格子有25个小格子,每个小格子的面积是1/16个平方毫米。

将视野放大到40倍,使用显微镜对红细胞进行计数,记录在四个角落中的红细胞数量,并求平均值。

然后将平均值乘以20,即可得到每升血液中的红细胞数量。

2.计算白细胞计数:与计算红细胞计数类似,但是在视野中选择较深的区域,数出100个白细胞,并求平均值。

然后将平均值乘以200,即可得到每升血液中的白细胞数量。

3.计算血小板计数:在血球计数板的中央,有一列小的正方形格子,每个格子的边长为1/25毫米。

数出10个小正方形中的血小板数量,并求平均值。

然后将平均值乘以4000,即可得到每升血液中的血小板数量。

需要注意的是,使用血球计数板进行血液分析时,需要经过专业的培训和实践经验,才能得到准确的结果。

细胞计数方法细胞计数板法

细胞计数方法细胞计数板法

细胞计数方法——---—细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3。

计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×16即每个格得平均值。

所以,细胞密度=m×16×10个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为:1。

0mm(长)×1.0mm(宽)×0。

1mm(高)=0.1mm 而1ml=1000ul=1000mm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板得使用一、血球计数板-基本构造血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。

计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、计数区边长为1mm,则计数区得面积为1mm2,每个小方格得面积为1/400mm2。

细胞计数方法--细胞计数板法

细胞计数方法--细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数方法------细胞计数板法汇总

细胞计数方法------细胞计数板法汇总

细胞计数方法------细胞计数板法汇总细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:4细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m 4×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×10个/ml) 说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

4公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为:331.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 而 1ml=1000ul=1000mm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m ×16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16×104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)================================================细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。

细胞计数方法------细胞计数板法

细胞计数方法------细胞计数板法

实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作:1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算:细胞数∕mL=四大格细胞总数∕4× 104个/ml(注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均的小格,由于每大格中有 16个小格,然后计左侧和上方的细胞数,求出每小格的细胞数,取平均值m,m× 16即每个格的平均值。

所以,细胞密度=m×16× 104个/ml)说明:公式中除以4,因为计数了 4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm (长)× 1.0mm (宽)× 0.1mm (高)=0.1mm 而 1ml=1OOOul=1OOOmm(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团1O%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

)细胞计数板的使用一、血球计数板-基本构造血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成 25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由 4OO个小方格组成。

(d)tt X ⅛i*⅛lf fe ∙.■邛1 Ct*3⅞Hi⅞ft计数区边长为Imm ,则计数区的面积为Imm2,每个小方格的面积为1∕400mm 2。

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血球计数板细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。

一般利用计数板(血球计数板)进行。

即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。

不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。

一、步骤
1、制备细胞悬液:对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程)。

如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。

1)、终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。

2)、给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。

期间不断在镜下观察。

当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液。

3)、加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。

2、计数与计算过程
1)、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。

3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。

对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。

4)、按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 。

二、注意事项:
1)、务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。

2)、显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。

如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分。

三、显微镜下血球计数板如下图:。

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