浙大医学分子生物学真题2005-2011
2005-2012年中科院612生物化学与分子生物学真题

2012年中科院612生物化学与分子生物学真题一、名词解释(5个,每个4分)1.氧化磷酸化2.操纵子3.…4.…5.代谢组二、选择题(20个,每个1分)三、判断题(30个,每个1分)基本都是基础的,好好看书就行四、简答题(5个,每个4分)1.主要的顺式调控元件。
2.转录因子的结构域。
3.RNA的功能。
4...5.柠檬酸循环的概况及作用。
五、问答题(4个,每个15分)1. …2. 真核基因表达调控。
3. 原癌基因的定义、特点、活化机制及性质。
4. 嘧啶、嘌呤的从头合成的区别及参与的氨基酸。
2011年中科院612生物化学与分子生物学真题一、名词解释(每题4分,共20分)(1)抗体酶(2)Sanger双脱氧终止法(3)DNA切除修复(4)光合作用(5)酵母人工染色体二、单选(每题1分,共20分)这里面的题全是基础,比如产生ATP的是什么细胞器?(线粒体),合成DNA用什么底物?(dNTP)之类的,送分的,并无参考价值。
三、判断(每题1分,共30分)这一部分值得说一说,知识点有点偏,但很多人包括以前我的师兄都没有提出重视,可能失分就在这里。
做题技巧还是有的:首先,对错各一半,这是出题原则。
第二,出题点很多是小标题内容。
第三,陷阱比较多,要细心,这个不解释你懂的。
四、简答题(每题5分,共30分)1.DNA分子克隆的概念?简述其流程。
2.表观遗传学的概念,包括哪些方面。
浅议表观遗传在肿瘤发生发展过程中的作用。
3.真核生物中RNA聚合酶的种类以及主要功能。
4. 糖蛋白中N-型糖肽键和O-型糖肽键的结构特征及二者生物合成的特点是什么?5. 某研究生做关于植物方面的实验,遇到以下三种情况,请你给出实验方法从而达到实验目的:(1)检测某一目的基因是否整合到植物的基因组上(2)检测某一目的基因是否转录为mRNA(3)检测某一目的基因是否表达为蛋白质6.以乳酸脱氢酶为例说明同工酶的概念,并解释其生理意义?五、问答题(每题10分,共50分)1.研究蛋白质和蛋白质相互作用的分子生物学技术有哪些?并简述其原理。
浙江大学医学分子生物学2011年考博真题试卷

4、结合自身,分子生物学在医学中的应用。
浙江大学
医学考博真题试卷
攻读博士学位研究生入学考试试卷
浙江大学
2011年攻读博士学位研究生入学考试试题
考试科目:医学分子生物学
注意:所有答案一律写在答题纸上,写在试题纸上或其他地方一律不给分。
一、英文名解
1、冈崎片段:
2、反式作用因子:
3、多克隆位点:
4、micro RNA:
5、分子伴侣:
二、简答题
1、蛋白质四级结构。
2、真核转录调控点。
3、表观遗传学调控染色质。
4、真核RNA聚合酶类型及作用。
5、基因突变。
6、组学概念及举例。
7、简述兔源多克隆抗体的制备。
8蛋白与蛋白相互作用的研究方法
三、问答题
1、蛋白质的修饰定义,类型及功能。
2、非受体酪氨酸磷酸酶在乳腺恶性肿瘤中升高,请设计实验探讨此酶在恶变、转移中的作用。
分子生物学 考博真题

中国疾控中心2005年分子生物学(博士)一、名词解释1.EST2.YAC3.Sense DNA4.RNAi5.Race二、问答题1、乳糖操纵子的结构。
IPTG如何诱导结构基因表达?2、正向突变、抑制突变及回复突变的定义及与突变的关系。
3、PUC18克隆载体的结构特征。
4、在做PCR过程中,常遇到的问题及解决方法。
5、已知蛋白A、B之间相互作用,C、D分别与A、B 相似,如何签定C、D之间的相互作用,两种方法说明之。
6、试用分子生物学相关知识建立动物模型的方法,如何建立病原生物学的动物模型。
军事医学科学院1995年分子生物学试题(博士)1. Apoptosis的生物学意义及其调控基因。
2.基因转移的概念及基因转移载体应具备的条件。
3.原癌基因的功能及其转化为癌基因的机理。
4.人主要组织相容性抗原在细胞识别中的作用及原理。
5.染色体重排对生物体的影响及其主要类型。
6.噬菌体显示技术原理及其在生物学研究中的意义。
军事医学科学院1996年分子生物学试题(博士)1.什么是原癌基因?它们怎样被反转录病毒激活?2.什么是tumor supperssor gene?举例说明它的调控功能。
3.细胞染色体的异常如何导致癌基因的激活?4 解释以下名词:(1) gene knock-out (2) molecular hybridization (3) restriction fragment length polymorphism (4) human genome project5.G蛋白的结构特点信其功能.6 .apoptosis的特征与其生理及病理意义,已知它的调控基因有哪些?2006 协和生物化学与分子生物学专业博士试题一、填空(24空24分)1.---------年,由-------和-------(英文姓)首次提出了DNA的双螺旋模型,其结果发表在----杂志,他们提出的实验依据是-------和--------。
浙江大学2005–2006学年生物化学期末试卷

浙江大学2005–2006学年生物化学期末试卷浙江大学2005–2006学年《生物化学》(乙)课程期末考试试卷开课学院:生命科学院考试形式:闭卷,允许带计算器入场考试时间: 2006年7月4日, 所需时间: 120 分钟考生姓名: ____ _学号:专业: ___一、是非题(对者记“√”,错者记“×”,共20分):1、血红蛋白和肌红蛋白的功能都是运输氧。
2、蛋白质变性作用的机理就是蛋白质分子中的共价键和次级键被破坏,从而引起天然构象的解体。
3、在原核生物中,DNA聚合酶III是催化DNA合成的最主要的酶。
4、SDS-PAGE测得蛋白质的迁移率与蛋白质的等电点有关。
5、如果加入足够量的底物,即使有竞争性抑制剂存在,酶催化的最大反应速度V max也是可以达到的。
6、所有的酶在生理pH时活性最高。
7、双链DNA变性后, 粘度变小。
8、遗传密码的简并性是指一些密码适用于一种以上的氨基酸。
9、鸟氨酸是组成人体蛋白质的非必需氨基酸。
10、假尿苷分子中的碱基不是真正的尿嘧啶,而是尿嘧啶的衍生物。
11、基因表达的最终产物都是蛋白质。
12、糖酵解途径只有在无氧条件下才能发生。
13、在动物体内蛋白质可以转变成脂肪,也可以转变为糖。
14、tRNA反密码子的摆动性出现在反密码子的第三位碱基上。
15、切开蛋白质分子的二硫键, 该蛋白质的分量就一定变小.。
16、逆转酶的作用是以多肽链为模板, 转录生成RNA。
17、天冬氨酸是尿素N的直接供体。
18、酮体是在肝脏中合成的, 但却不能被肝脏却所利用。
19、酶的Km只与酶的性质有关, 与酶的浓度无关。
20、疏水环境比亲水环境有利于α-螺旋的形成。
二、选择题(20分):1、应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定具有四级结构蛋白质时,所测得的分子量应为:A.蛋白质分子量 B.亚基分子量 C.结构域分子量2、当含有Ala、Asp、Leu、Arg的混合物在pH3.9条件下进行电泳时,哪一种氨基酸移向正极(+)?A.Ala B. Asp C. Leu D. Arg3、有关蛋白质分子中肽键说明, 其中错误的是:A. 具有部分双键的性质B. 比一般C-N单链短C. 肽键可以自由旋转D. 与肽键相连的氢原子和氧原子呈反式结构.4、确定某一物质为蛋白质性质的反应是:A.茚三酮反应B.费林试剂反应C.双缩脲反应D.碘-碘化钾反应5、八肽Gly-Tyr-Pro-Lys-Arg-Met-Ala-Phe用下述哪种方式处理不产生任何更小的肽?A. 溴化氰;B. 胰蛋白酶;C. 胰凝乳蛋白酶;D. 盐酸6、酶促反应的初速度A.与[S]无关B.与K m成正比C.与[E]成正比D.与温度成正比7、测定酶活性时,通常以底物浓度的变化在底物起始浓度多大范围以内的速度为初速度A.0.5% B.1.0% C.5.0% D.10%8、转氨酶的辅酶是下列化合物中的哪一个?A.硫胺素 B.核黄素 C.磷酸砒哆醛 D.尼克酸9、维生素K是A.固醇类化合物 B.氨基酸衍生物 C.苯酚类化合物 D.萘醌衍生物10、核糖核酸(RNA)碱水解的产物是:A.5’-核苷酸 B.2’和3’核苷酸 C.核苷 D.寡聚核苷酸11、米氏常数Km是一个用来度量A.酶被底物饱和程度的常数 B.酶促反应速度大小的常数C.酶与底物亲和力大小的常数 D.酶稳定性的常数12、蛋白质典型的α-螺旋是什么?A.2.610B.310 C.3.613 D.4.416 13、蛋白质生物合成中的rRNA的作用是A.提供遗传密码 B.决定氨基酸排列顺序C.提供蛋白质合成场所 D.运输氨基酸14、DNA中含有18.4%的A时,其碱基C+G%总含量为多少?A.36.8 B. 37.2 C.63.2 D.55.215、热变性的DNA具有下列哪种特征?A.核苷酸间磷酸二酯键断裂 B.形成三股螺旋C.260nm处的光吸收下降 D.由螺旋向线团转化16、下列关于蛋白质分子中肽键的叙述哪个是不正确的?A.能自由旋转 B.比通常的C-N单键短C.通常有一个反式结构 D.具有部分双键性质17、蛋白质变性时不应出现的变化是:A.蛋白质的溶解度降低 B.失去原有的生理功能C.蛋白的天然构象破坏 D.蛋白质分子个别肽键被破坏18、反密码子是位于:A.DNA B.mRNA C.rRNA D.tRNA19、断裂基因指的是:A.基因之间是断开的B.基因由外显子与内含子交替组C.外界因素使基因发生断裂D.人体本身不含有癌症基因20、下述氨基酸除何者外都可以为嘌呤核苷酸的嘌呤环合成提供N原子?A. 甘氨酸;B. 谷氨酰胺;C. 谷氨酸;D. 天冬氨酸三、计算题(共20分):1、对于一个遵循米氏动力学的酶而言:(8分)(1)当[S]=K m时,若v=35μmol/min,V max是多少μmol/m in?(2)当[S]=2×10 -5mo/L,v=40μmol/min,这个酶的K m是多少?(3)若I表示竞争性抑制剂,K I=4×10-5mol/L,当[S]=3×10-2mol/L和[I]=3×10-5mol/L时,v是多少?(4)若I是非竞争性抑制剂,在K I、[S]和[I]条件与(3)中相同时,V是多少?2、设1mol葡萄糖酵解产生2mol乳酸,ΔG°’=-196.6KJ/mol;1mol葡萄糖完全氧化成CO2和H2O时,ΔG°’=-2870KJ/mol。
大学分子生物试题及答案

大学分子生物试题及答案大学分子生物学试题及答案一、选择题(每题2分,共30分)1. DNA双螺旋结构是由以下哪位科学家提出的?A. 沃森和克里克B. 达尔文C. 孟德尔D. 摩尔根答案:A2. 以下哪种碱基配对方式在DNA双螺旋结构中是正确的?A. A-TB. G-CC. A-GD. C-T答案:B3. RNA聚合酶的主要功能是什么?A. 催化DNA复制B. 催化RNA转录C. 催化蛋白质合成D. 催化DNA修复答案:B4. 以下哪种RNA是转运RNA?A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. snRNA答案:B5. 真核生物中,mRNA的5'端通常具有哪种结构?A. 帽子结构B. 尾部结构C. 茎环结构D. 多聚A尾答案:A6. 以下哪种蛋白质在DNA复制中起解旋酶的作用?A. 拓扑异构酶B. 螺旋酶C. 核糖核酸酶D. 限制性内切酶答案:B7. 以下哪种酶在DNA修复中起作用?A. 限制性内切酶B. 核酸酶C. DNA聚合酶D. 核糖核酸酶答案:C8. 以下哪种物质是DNA复制的引物?A. 核糖核苷酸B. 脱氧核糖核苷酸C. 氨基酸D. 蛋白质答案:B9. 以下哪种蛋白质在翻译过程中起作用?A. 限制性内切酶B. 核糖核酸酶C. 核糖体蛋白D. 拓扑异构酶答案:C10. 以下哪种RNA在mRNA剪接中起作用?A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. snRNA答案:D11. 以下哪种物质是DNA聚合酶的底物?A. 核糖核苷酸B. 脱氧核糖核苷酸C. 氨基酸D. 蛋白质答案:B12. 以下哪种碱基配对方式在RNA双螺旋结构中是正确的?A. A-UB. G-CC. A-GD. C-T答案:A13. 以下哪种RNA是信使RNA?A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. snRNA答案:A14. 以下哪种蛋白质在DNA复制中起连接酶的作用?A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 核糖核酸酶D. 拓扑异构酶答案:B15. 以下哪种物质是mRNA翻译的起始信号?A. 帽子结构B. 多聚A尾C. 起始密码子D. 终止密码子答案:C二、填空题(每空1分,共20分)1. DNA的双螺旋结构由两条_________链组成,它们通过_________配对相互连接。
(完整word版)浙大医学分子生物学真题2005-2011

2011 年一、名词解释(每题 3 分):1、Okazaki fragments2、Trans-acting factor3、Multiple -cloning site4、Micro RNA5、Chaperone二、简答题(每题 5 分)1、简述蛋白质的四级结构;2、真核细胞基因转录的主要调控点有哪些?3、表观遗传学机制如何调控染色体4、简述真核细胞中RNA 聚合酶的类型及功能;5、真核生物RNA 的类型;6、什么是基因突变?真核细胞基因突变的主要类型?7、什么是"组学"?常有的组学技术有哪些?8、简述兔源多克隆抗体的制备过程;9、研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法有哪些?三、问答题(每题10 分):1、什么是蛋白质修饰?细胞内蛋白质修饰主要类型有哪些?其主要功能是什么?2、大规模临床证据显示非受体酪氨酸磷酸酶在乳腺肿瘤转移灶组织中高表达。
请设计一个实验研究方案在细胞水平探讨该蛋白在肿瘤发生、转移过程中的可能作用。
3、什么是模式生物?为什么医学研究中需要模式生物?4、结合你的实际经历和知识背景,谈谈分子生物学在医学中的作用。
2010 年一、名词解释(每题 3 分):1、基因与基因组:2、基因诊断:3、半保留复制:4、疾病模型与模式:5、ncRNA:二、简答题:1、为什么个体基因型可以用于健康风险预测?2、蛋白质哪些理化性质可以用于检测和鉴定?3、蛋白质非共价键作用包括?蛋白质相互作用机制?4、细胞死亡的方式?5、肝细胞对医学的作用?6、基因转录、翻译和基因表达的区别?7、DNA 损伤类型、检测方式?8、蛋白质为什么能够细胞定位?怎样检测蛋白质定位?9、为什么同一个体的细胞基因组相同,蛋白质组不同?怎样检测蛋白质组差异?三、问答题:1、谈谈转化医学的定义? 你对转化医学研究有何建议?2、表观遗传机制?如何研究?有何意义?3、设计一个实验说明信号传导的过程?(研究信号通路,信号从细胞外传至细胞内,往往是形成一个复合物,从而引起效应,请你设计一个方法,了解整个信号通路的传递过程)4、端粒和端粒酶为何能获诺贝尔医学奖?2009 年一、名词解释1、种系分析法(系谱分析):2、癌基因和抑癌基因:3、顺式作用元件和反式作用因子:4、表观遗传学(遗传表观学性状):5、基因表达:二、简答试述基因、基因组,蛋白质和蛋白质组。
浙江大学医学分子生物学(乙)2005--2017年考博真题

2、SSR:简章序列重复多态性,引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计,用来扩增重复序列本身。由于重复的长度变化极大,所以是检测多态性的一种有效方法。其特点包括:一般检测到的是一个单一的多等位基因位点,共显性遗传,故可鉴别杂合子与纯合子;得到的结果重复性很高。
3、EST:表达序所产生的cDNA序列。随着高通量测序技术的进步,使人们越来越相信,大规模地产生EST,结合生物信息学的手段,将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。
7、SNP:单核苷酸多态性,是一种较为新型的分子标记,其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异,因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。
8、FISH:荧光原位杂交技术,是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性,荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来,通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交,在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数,从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断,为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。
考试科目:医学分子生物学
注意:所有答案一律写在答题纸上,写在试题纸上或其他地方一律不给分。
一、名词解释:(25%)
2011年浙江大学(生物化学)考研真题

2011年浙江大学(生物化学)考研真题(总分:82.00,做题时间:90分钟)一、名词解释题(总题数:10,分数:20.00)1.维生素(分数:2.00)__________________________________________________________________________________________ 正确答案:(正确答案:维生素(vitamin)是机体维持正常功能所必需,但在体内不能合成或合成量很少,必须由食物供给的一组低分子量有机物质。
维生素种类多,化学结构差异很大,主要按其溶解性分为:①脂溶性维生素,包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素K等;②水溶性维生素,包括B族(含维生素B 1、B 2、B 4、B 6、B 12、维生素pp、泛酸、叶酸、生物素)和维生素C。
)解析:2.G蛋白(分数:2.00)__________________________________________________________________________________________ 正确答案:(正确答案:受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合,使其释放活性因子,再与效应器发生反应。
L}j于这些偶联蛋白的结构和功能极为类似,且都能结合并水解GTP,所以通常称G蛋白(G-protein),即鸟苷酸调节蛋白。
G蛋白的种类已多达40余种,大多数存在于细胞膜上,由α、β、γ三个不同亚单位构成,总分子量为100kDa左右。
)解析:3.卡尔文循环(分数:2.00)__________________________________________________________________________________________ 正确答案:(正确答案:卡尔文循环又称光合碳循环,是一种类似于Kerbs cycle的新陈代谢过程,其可使起动物质以分子的形态进入和离开这循环后发生再生。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
2011年一、名词解释(每题3分):1、Okazaki fragments2、Trans-acting factor3、Multiple-cloning site4、Micro RNA5、Chaperone二、简答题(每题5分)1、简述蛋白质的四级结构;2、真核细胞基因转录的主要调控点有哪些?3、表观遗传学机制如何调控染色体4、简述真核细胞中RNA聚合酶的类型及功能;5、真核生物RNA的类型;6、什么是基因突变?真核细胞基因突变的主要类型?7、什么是"组学"?常有的组学技术有哪些?8、简述兔源多克隆抗体的制备过程;9、研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法有哪些?三、问答题(每题10分):1、什么是蛋白质修饰?细胞内蛋白质修饰主要类型有哪些?其主要功能是什么?2、大规模临床证据显示非受体酪氨酸磷酸酶在乳腺肿瘤转移灶组织中高表达。
请设计一个实验研究方案在细胞水平探讨该蛋白在肿瘤发生、转移过程中的可能作用。
3、什么是模式生物?为什么医学研究中需要模式生物?4、结合你的实际经历和知识背景,谈谈分子生物学在医学中的作用。
2010年一、名词解释(每题3分):1、基因与基因组:2、基因诊断:3、半保留复制:4、疾病模型与模式:5、ncRNA:二、简答题:1、为什么个体基因型可以用于健康风险预测?2、蛋白质哪些理化性质可以用于检测和鉴定?3、蛋白质非共价键作用包括?蛋白质相互作用机制?4、细胞死亡的方式?5、肝细胞对医学的作用?6、基因转录、翻译和基因表达的区别?7、DNA损伤类型、检测方式?8、蛋白质为什么能够细胞定位?怎样检测蛋白质定位?9、为什么同一个体的细胞基因组相同,蛋白质组不同?怎样检测蛋白质组差异?三、问答题:1、谈谈转化医学的定义? 你对转化医学研究有何建议?2、表观遗传机制?如何研究?有何意义?3、设计一个实验说明信号传导的过程?(研究信号通路,信号从细胞外传至细胞内,往往是形成一个复合物,从而引起效应,请你设计一个方法,了解整个信号通路的传递过程)4、端粒和端粒酶为何能获诺贝尔医学奖?2009年一、名词解释1、种系分析法(系谱分析):2、癌基因和抑癌基因:3、顺式作用元件和反式作用因子:4、表观遗传学(遗传表观学性状):5、基因表达:二、简答试述基因、基因组,蛋白质和蛋白质组。
举例说明蛋白质之间相互作用的研究方法有哪些?什么是基因表达及其调控机制?(基因表达的主要过程及调控的主要位点?)设计一个实验以证明DNA是遗传物质。
基因操作中的常用工具有哪些?举例说明蛋白质结构与功能的关系。
蛋白质翻译后加工的内容?单核苷酸多态性?基因突变及生物学意义?10、蛋白质结构与疾病的关系?三、问答题:有一个蛋白X,发现其在血管内皮细胞中与信号转导通路A有密切联系,如何证明在此细胞中与蛋白X相互作用的蛋白。
HGP已完成,谈谈你对其后续计划的认识。
根据国内外进展,说明分子生物学与医学的关系.结合环境污染,举例说明环境污染与基因的关系说明疾病的发生机制?5、某信号A与血管内皮细胞经蛋白B可发生信号转导,设计一个实验说明细胞内蛋白B发生相互作用的蛋白?2008年(1)一、名词解释1、核糖开关:2、反式作用因子:3、质粒:4、锌指结构:5、分子杂交基因组:6、hnRNA :7、cDNA :8、密码的简并性:9、信号肽:二、简答题(30分):1、什么是乳糖操纵子,简述乳糖操纵子的正负调节机制?2、简述原核和真核细胞在核酸翻译成蛋白质的过程中的异同点?3、质粒的不相容性和相容性指的是什么?其分子基础机制是什么?4、核酸凝胶电泳的基本原理和方法是什么?5谈谈你的硕士论文的基本内容,研究方法和结果,有什么收获,打算你的博士生涯如何度过?三、问答题(40分):1、简述3种由PCR技术衍生出来的技术及其应用?2、试述一条反向遗传克隆功能基因的途径。
(同下)3、近年来有些什么分子生物学研究的成果应用到实际应用当中?4、阐述一种细胞信号转导的途径(从接受信号到调控基因表达)。
5、给你一个cDNA序列,你如何表达,纯化得到所需要的目的蛋白质?2008年(2)一、名词解释1、蛋白质的超二级结构:2、核酸分子杂交:3、基因组:4、操纵子:5、反式作用元件:6、小卫星DNA:7、基因表达:8、逆转录:9、管家基因:10、信号肽:11、基因打靶:12、基因治疗:二、论述题1、DNA的复制过程的基本特点和要点。
2、G-蛋白信号介导的信号转导途径。
3、DNA损伤可以分为哪几类?相应的修复机制是什么?4、蛋白质组的概念及其研究意义。
2007年一、名词解释1、质粒:2、密码的简并性:3、信号肽:4、反式作用子:5、基因组:6、hnRNA:7、cDNA:8、结构域:9、EMSA:10、转座子:二、简答题:1、何谓乳糖操纵子,以乳酸操纵子为例说明基因表达与阻遏?2、核酸凝胶电泳的基本原理和方法是什么?(同前)3、简述原核和真核细胞在核酸翻译成蛋白质的过程中的异同点?(同前)4、DNA克隆的筛选方法及原理。
5、何谓质粒的不相容性和相容性?其分子基础机制是什么?(同前)三、问答题:1、试述一条反向遗传克隆功能基因的途径。
(同前)2、假定事先给你一个cDNA序列,你如何表达、纯化得到目的蛋白质?3、阐述一种细胞信号转导的途径(从接受信号到调控基因表达)(同前)4、ELISA方法的基本原理,方法,及其种类?5、原核生物和真核生物基因结构的差别有哪些?怎样去用实验证明呢?2006年一、名词解释:(25%)1、RFLP:限制性片段长度多态性,是由DNA变异(产生新的酶切位点或消除原有的酶切位点)导致在限制性核酸内切酶酶切时产生不同的长度片段。
可借助Southern Blotting或PCR 的方法进行检测。
2、SSR:简章序列重复多态性,引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计,用来扩增重复序列本身。
由于重复的长度变化极大,所以是检测多态性的一种有效方法。
其特点包括:一般检测到的是一个单一的多等位基因位点,共显性遗传,故可鉴别杂合子与纯合子;得到的结果重复性很高。
3、EST:表达序列标签,是指从不同的组织构建的cDNA文库中,随机挑选不同的克隆,进行克隆的部分测序所产生的cDNA序列。
随着高通量测序技术的进步,使人们越来越相信,大规模地产生EST,结合生物信息学的手段,将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。
4、STS:序列标签位点,是由特定引物序列所界定的一类标记的统称,短的在基因组上是可以被唯一操作的序列,因而可以确定在物理图谱上的特定位置。
5、CAP:CAP即分解代谢物基因活化蛋白,是一种激活蛋白,因为细菌的许多启动子为弱启动子,本身与RNA聚合酶的作用较弱,在有CAP蛋白这类激活蛋白存在下,可使RNA聚合酶与启动子的亲和力增强,CAP蛋白的活性强烈依赖cAMP。
6、AFLP:扩增片段长度多态性,其特点是把RFLP和PCR结合了起来。
其基本步骤是:把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的3’—端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3’—端严格配对的片段才能得到扩增),再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
7、SNP:单核苷酸多态性,是一种较为新型的分子标记,其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异,因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。
8、FISH:荧光原位杂交技术,是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。
它将荧光信号的高灵敏度、安全性,荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来,通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交,在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数,从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断,为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。
9、Genome:基因组,有机体或细胞中的所有DNA,包括核中的染色体和线粒体中的DNA。
10、RNA in situ hybridization:RNA原位杂交,是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA 链在细菌或其他真核细胞中的位置,是检测基因组织特性表达的常用方法。
11、单克隆抗体:每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。
当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。
被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙,即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆,并合成多种抗体。
如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。
单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
12、基因芯片:所谓基因芯片,是指将大量探针分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。
由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交,技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低等不足,而且,通过设计不同的探针阵列,用一定的分析方法,还可以用于序列分析,称作杂交测序。
二、描述cDNA文库构建原理与方法(25%):(1)cDNA获得方法,(2)克隆方法,(3)文库质量定义。
答:cDNA:以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary DNA,cDNA),再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后转入受菌体,扩增为cDNA文库(cDNA library),然后再采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA。
与基因组DNA文库类似,由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息,自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。
当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。
(1)cDNA获得方法:①Total RNA的提取;②mRNA的分离;③cDNA双链合成:Superscript II—RT合成第一链,cDNA第二链的合成,双链cDNA末端补平,EcoR I adaptor 加接,双链cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切,胶回收cDNA。
(2)克隆方法:①载体制备:p Blue Script II的提取,p Blue Script II的双酶切消化,载体去磷酸化,载体效率检测;②cDNA双链和载体的连接:连接,检测(PCR方法);③电转化:电转化感受态细胞的制备,连接产物纯化,电转化;④快速鉴定、菌落PCR ⑤p Blue Script cDNA文库扩增。