正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤嘿，朋友们！今天咱来唠唠小鼠骨髓细胞原代培养这档子事儿。
你可别小瞧这小小的骨髓细胞，这里头的门道可不少哩！首先呢，你得准备好一只健康的小鼠。
就像厨师要准备新鲜的食材一样，这小鼠可得精挑细选。
把小鼠麻醉了，然后小心翼翼地把它固定好，可别让它乱动。
接下来，就是关键的一步啦！找到小鼠的骨头，用手术器械精准地把骨头取出来。
这就好比是在挖掘宝藏，得小心谨慎，不能有一点儿马虎。
把骨头弄干净后，用合适的工具把骨头敲碎，就像敲碎一块硬糖一样。
然后呢，把敲碎的骨头放到培养液里。
这培养液就像是细胞的小窝，得让它们舒舒服服地待在里面。
这时候，就需要你耐心地等待啦，就像等待花儿开放一样。
在等待的过程中，你可得时刻关注着，看看细胞们是不是在乖乖地生长。
这可不像种花儿，能直接看到它们长大，得用一些特别的方法去观察。
等细胞们长到一定程度，就得给它们换个更宽敞的地方啦，也就是传代培养。
这就好比是给孩子们换个更大的房间，让他们能更好地成长。
你想想看，这小小的骨髓细胞，从一只小鼠的身体里出来，经过我们的精心培养，就能变成好多好多的细胞。
这多神奇呀！就像魔术师一样，能把一样东西变成好多好多。
培养骨髓细胞可不是一件容易的事儿，需要我们细心、耐心，还得有技巧。
就像骑自行车一样，一开始可能会摔倒，但只要坚持，就能骑得稳稳当当。
在这个过程中，要是有一个步骤没做好，那可能就前功尽弃啦。
所以呀，每一步都得认真对待，不能有丝毫的马虎。
总之呢，小鼠骨髓细胞原代培养可真是个有趣又有挑战性的事儿。
要是你也感兴趣，那就赶紧试试吧，说不定你也能成为这方面的专家呢！。
骨骼肌细胞原代培养
骨骼肌细胞原代培养骨骼肌细胞是我们身体中最重要的肌肉组织之一，通过细胞的原代培养可以帮助我们更好地研究肌肉的生理和病理过程。
本文将介绍骨骼肌细胞原代培养的方法和意义。
一、骨骼肌细胞原代培养的方法1. 细胞来源骨骼肌细胞可以从人体或动物体内获得。
人体来源的骨骼肌细胞可以通过手术获取，动物来源的骨骼肌细胞可以通过解剖或抽取组织获得。
2. 细胞分离将获得的骨骼肌组织进行消化，分离出单个的骨骼肌细胞。
常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶，通过适当的温度和时间来进行消化。
3. 细胞培养将分离出的骨骼肌细胞放入培养皿中，加入适当的培养基，提供细胞所需的营养物质和生长因子。
培养基的配方和组成会因实验目的的不同而有所差异。
4. 细胞传代原代培养的骨骼肌细胞会在培养过程中逐渐增殖，达到一定的细胞数量后，可以进行细胞传代。
传代可以保持细胞的稳定性和生物学特性。
二、骨骼肌细胞原代培养的意义1. 生理研究通过骨骼肌细胞原代培养，可以研究肌肉的生理功能和调控机制。
例如，可以研究肌肉收缩机制、肌肉代谢和能量平衡等方面的问题。
2. 病理研究骨骼肌细胞原代培养还可以用于研究肌肉疾病的发生机制和治疗方法。
例如，可以利用培养的肌肉细胞模拟某些疾病的发生过程，寻找治疗的靶点和药物。
3. 药物筛选骨骼肌细胞原代培养可以用于药物的筛选和评价。
通过在培养的肌肉细胞中加入不同的药物，观察细胞的反应和变化，可以评估药物的疗效和毒副作用。
三、骨骼肌细胞原代培养的注意事项1. 细胞来源的选择在进行骨骼肌细胞原代培养前，需要选择合适的细胞来源。
不同的细胞来源可能会影响培养结果和实验的可行性。
2. 培养条件的优化骨骼肌细胞原代培养需要适宜的培养条件，包括培养基的配方、温度、湿度和CO2浓度等。
这些条件需要根据实验的要求进行优化。
3. 细胞的纯度和活性在骨骼肌细胞原代培养过程中，需要保证细胞的纯度和活性。
细胞的纯度可以通过筛选和分离的方法进行提高，细胞的活性可以通过细胞活力试剂盒进行检测。
小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定的开题报告
小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定的开题报告一、研究背景与意义骨骼肌是人体最大的组织之一，具有收缩和运动的功能。
但是由于各种原因，骨骼肌组织受到损伤或者疾病的影响，会导致肌肉萎缩或者无法正常运动。
肌肉干细胞是骨骼肌组织修复和再生的重要来源，因此研究肌肉干细胞的生物学特性以及培养技术具有重要的理论和实践意义。
小鼠肌肉干细胞是目前应用最广泛的肌肉干细胞模型，具有大量的来源、较短的代谢时间和易于操作等特点。
因此，对小鼠肌肉干细胞的原代培养和鉴定研究，对于深入了解肌肉干细胞的生物学特性和开展相应的研究具有重要的意义。
二、研究内容1.小鼠肌肉干细胞的原代培养技术研究小鼠肌肉干细胞的原代培养是研究肌肉干细胞生物学特性和应用的前提，原代培养的关键是细胞来源、细胞分离和培养条件的优化等。
因此，本研究将通过细胞来源的筛选、细胞分离的优化和培养介质的改良，建立快速、高效、稳定的小鼠肌肉干细胞的原代培养技术，并评价培养细胞的生长状态和细胞增殖能力。
2.小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析是研究肌肉干细胞应用的基础，包括干细胞的标记、差异表达基因的分析和功能实验等。
本研究将通过进行免疫细胞化学染色、流式细胞术和实时荧光定量PCR等技术，对小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性进行深入的分析。
三、研究方法（1）小鼠肌肉干细胞的来源筛选：采用小鼠胸肌组织、腿肌组织和膜肌组织等来源，筛选合适的肌肉干细胞来源。
（2）小鼠肌肉干细胞的分离和培养：采用胶原酶和胰酶等酶切法，分离小鼠肌肉干细胞，建立原代培养系统，包括细胞培养基的优化和培养条件的调节等。
（3）小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析：采用免疫细胞化学染色、流式细胞术和实时荧光定量PCR等技术，对小鼠肌肉干细胞进行鉴定和生物学特性分析。
四、研究预期结果该研究预期能够建立快速、高效、稳定的小鼠肌肉干细胞的原代培养技术，同时探究小鼠肌肉干细胞的特殊基因标记和功能特性，为深入开展肌肉干细胞研究提供新的理论和实践基础。
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)解读
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。
方法取成年Wistar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。
并对培养细胞进行形态学研究和细胞鉴定。
结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/ml, 成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。
结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深入研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基础。
【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年【Abstract】 Objective： To explorean experimental method for primary culture of adult rat skeletalmuscle sarcoblast Methods: Muscle of posterior limb from wistar rat were cultured by tissue culture method. The cells were counted and observed by light microscopy combined with identification. Results:The number of skeletalmuscle sarcoblast118per millilitre. skeletalmuscle sarcoblast cell differentiation accredit showed that over 94% cells were stained positive for myogenin.Conclusions: Tissue culture method conveniently permits the purification and Proliferation of myoblast. These esults provide the basis for future studies to assess the ability of the cells to repair heart failure.【Key words】skeletalmuscle sarcoblast primaryculture rat adult心肌细胞是终末化组织，不能再生。
小鼠细胞原代培养取材方法
小鼠细胞原代培养取材方法原代培养是指直接从体内取下的细胞、组织和器官，经过清洗、剪切、分散等步骤后，立即进行培养的过程。
小鼠细胞原代培养取材方法主要包括以下步骤：1. 实验前准备：在超净工作台或生物安全柜中进行，确保无菌环境。
2. 取材：选择健康的成年小鼠，使用颈椎脱臼法处死小鼠。
用70-75%酒精对烧杯进行消毒，将整个小鼠浸入盛有纯酒精的烧杯中浸泡1分钟进行消毒。
3. 打开腹腔：取出小鼠，将其放在不锈钢手术盘中，用无菌手术剪打开腹腔。
4. 取出组织：小心将所需组织从体内取出，放入无菌培养皿中。
5. 清洗组织：用70-75%酒精擦拭培养皿外周后，将培养皿移至超净工作台或生物安全柜中，用含双抗的Hanks液洗涤组织数遍以去除血污。
6. 剪切组织：在体视显微镜下操作，用无菌手术器械去除多余组织，用解剖镊子或眼科剪将组织剪碎至1立方毫米的肉糜状。
7. 消化组织：将剪碎的组织放入含解离液或培养基的50ml离心管中，用10ml弯头滴管对组织进行吹打5-10次，然后用1ml枪头的吹打组织，最后用200μl的尖端进行吹打。
8. 过滤分散：将上述组织悬液通过70μm过滤器过滤，切碎和分散的组织悬浮液。
9. 离心收集细胞：在1200rpm、4℃下离心10分钟，弃掉上清液，加入配置好的细胞培养基重悬细胞。
10. 接种细胞：将细胞接种于经多聚赖氨酸预处理的培养瓶或培养板中，置于37℃、5%CO2的培养箱中进行培养。
注意事项：取材过程应在无菌环境中进行，确保整个过程不受到污染。
操作时要小心，避免损伤组织。
使用的仪器和器皿均应进行消毒处理。
培养基和试剂应选择适宜的种类和浓度。
培养条件要保持恒定，包括温度、湿度、CO2浓度等。
在实验过程中要密切观察细胞生长情况，及时发现和处理异常情况。
以上是小鼠细胞原代培养取材方法的简要步骤，具体操作可能因实验需求和条件而有所不同。
建议在进行实验前仔细阅读相关文献和资料，并咨询专业人士的建议和指导。
细胞工程实验三：乳鼠心肌细胞的原代培养-治
将细胞混悬液1 000 r/min离心10 min
去上层，收获细胞
实战程序 第四大步骤：清洗细胞，培养细胞
细胞沉淀用PBS溶液和DMEM清洗3次 弃上清液 加4ml含20%小牛血清的DMEM培养液制 成细胞悬液，置于培养瓶中 培养24 h后即可见细胞贴壁和细胞收缩
【注意事项】
组织块必须漂洗 2~3 次以除去组织的钙离 子、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA的抑 制作用。 胰蛋白酶浓度不宜过高，作用时间不能太长， 以避免毒性作用。 消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免 毒性产生，而且动作要轻，以避免蓬松的细 胞随漂洗而失去。
【实验结果与分析】
记录心肌细胞的培养及动态观察。
实验三 动物细胞的原代培养
【实验目的】
掌握实体组织材料的原代细胞培养的 基本思路。 掌握动物组织中细胞的分离和原代培 养的方法。
【实验原理】（参考教材P128）
原代细胞培养是从供体取得组织细胞在体外
进行的首次培养
是一项基本技术
是建立细胞系的第一步
【实验原理】
原代细胞的分离和制作常采用的方法
用镊子小心剥离心包膜
剪去心房（心脏上半部分）及主动脉
PBS溶液清洗心室组织3次（至没有血时）
将心室组织剪成1~3 mm3碎块后，转移至
离心管
用PBS清洗3遍
实战程序 第三大步骤：消化组织，获得细胞
加0.125%胰蛋白酶（2ml）
37℃水浴中旋摇消化10 min 吸上层（细胞在悬液中，未消化好的组织块在底层） 细胞悬液转至小烧杯 加等体积无血清培养基终止反应，反复3-5次
【实验材料与器材】
本实验用品
每组1个：乳鼠、解剖器械、小烧杯、细胞 培养瓶、移液枪（1ml）及枪头 每组2个：离心管、培养皿
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
动物细胞原代培养过程
动物细胞原代培养一、剪取组织颈椎脱臼法处死小鼠，放在100ml的烧杯中用70％乙醇消毒3min。
用剪刀剪开腹部，取出肾、肝、脾（任意一种脏器）。
1、将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。
2、将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔二、清洗在盛有PBS 液平皿中洗涤数次，剔除包膜、结缔组织，将剔除后脏器放入另一盛有PBS 平皿中。
三、剪切将肾、肝、脾剪成1mm3 （剪成肉末状）大小的组织块，再次清洗，洗去残留的血细胞，以备消化。
四、消化1、在50ml离心筒中加入0. 25％胰蛋白酶溶液25ml，在温暖的环境中或置于37 °水浴摇床中轻轻摇动15min，转速约为180r/min。
2、让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活胰蛋白酶。
（小牛血清在共用无菌操作台上取用）3、在离心管中残留未消化组织块中再次加入胰蛋白酶进行消化，重复步骤1和2。
五、制备单细胞悬液1、将混合的细胞悬液离心，1200rpm，5min，弃上清。
2、将沉淀用新鲜的无菌PBS重悬，再1000-1200rpm，5min离心。
3、用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止,然后再按照（1）进行离心，离心后弃去上清液，将沉淀用少量细胞培养液反复吹打。
制的细胞悬液。
六、接种1、将细胞悬液接种到细胞培养瓶中。
2、用滤器过滤RPMI1640再悬沉淀，并使终体积为20ml。
（RPMI-1640RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维.帕克纪念研究所。
RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。
其中含有10%胎牛血清。
）七、培养1、在培养瓶外做好标记（标明所培养细胞的名称和时间），2、置于CO2的孵箱中培养，3、72h后即可观察。
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PriCells –正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
一、实验试剂
1、培养基：PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
2、冻存液：PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
3、洗涤液：1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S
4、染色液：0.4% Trypan Blue
5、消化液：PriCells Isolation of Primary Cell Kit
6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体
二、实验器械
1、培养皿
2、培养瓶
3、直剪和眼科剪
4、眼科镊和止血钳
5、烧杯
6、15ml离心管
三、实验流程
取肌肉于平皿，Hank’s洗3次
↓
剔除脂肪、结缔组织
↓
肌肉标本剪约0.1cm3小块
↓
移至离心管，Hank’s洗3次
↓
静置1min，弃去上层液及漂浮组织
↓
0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次
↓
生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛
↓
离心，1000rmp,10min，弃去上清
↓
重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml
↓
悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h
↓
转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2
↓
4d换液，以后每天换
四、实验操作
1、新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；
2、将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织
3、向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；
4、反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；
5、弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。
五、细胞鉴定
1、显微鉴定：刚分离出的原代细胞比较小，呈球形，折光性强。
12h后，细胞开始贴壁，72h后贴壁完全，细胞逐渐延展成梭形，随着培养时间的延长，细胞增殖、迁移并逐渐规律性地沿一个方向排列。
当细胞融合80%以上后，开始形成肌管。
2、免疫细胞化学染色1：肌卫星细胞胞浆中含有结蛋白（desmin），可采用鼠抗人及小鼠desmin 一抗对卫星细胞进行免疫染色鉴定。
3、免疫细胞化学染色2：采用骨骼肌特异性的肌球蛋白（myosin）单克隆抗体检测。
取含骨骼肌细胞盖玻片常规处理后进行myosin的细胞免疫化学染色，PBS代替一抗做阴性对照。
结果判定：以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色。
六、注意事项
1、胰酶消化过程中，也可采用15min两步消化的方法进行。
根据所取组织个体年龄决定，一般成年大小鼠采用两步消化效果好，幼鼠一步消化和两步消化差别不大。
2、传代培养代数不要太多，骨骼肌细胞传代能力有限，容易死亡。
3、骨骼肌细胞培养过程中，形态会发生较大变化。
4、肌肉组织要尽可能剔除表面的膜和脂肪组织。