最新5实验五经典免疫学检测技术：抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉淀实验课件PPT
注意2：看并列词组同它相关的句子成分搭 配是否完全恰当。
一.“和”字（3）
1、通过检查，大家讨论、发现、解决了课外活动 中的一些问题。
2、产品要赢得消费者的喜爱，厂家必须在售后、 生产、销售等各个环节下足功夫，真正为消费者 着想。
3、人生价值和意义，其实并不在于别人对自己 如何膜拜、崇敬、羡慕，而在于自己对社会，对 历史的进步和发展作出何种贡献。
高考真题
（13江西）B.教育主管部门要求，各级各类学校学生的生 活用品以及床上用品都应由学生自主选购，不得统一配备。
（13四川）D.2013年财富全球论坛是成都自改革开放以 来举办的具有里程碑意义的国际盛会，是成都推进和发展 国际化建设进程面临的重大历史性机遇。
（13辽宁）A. 第二十五届阿姆斯特丹国际记录片电影节 12天里吸引了20多万名观众，来自40多个国家的近2500 名电影人、300多部电影前来参与。
注意3：看并列词组内部的逻辑顺序是否恰 当。
一.“和”字（4）
1.他背着总经理和副总经理偷偷地把这笔钱分别 存入了两家银行。 2.这次外出比赛，我一定说服老师和你一起去， 这样你就不会太紧张了，可以发挥得更好。 3.因患病住院，83岁高龄的黄昆和正在美国的姚 明没能到场领奖。
注意4：出现并列的多个人或物时，看是否 有歧义
A
+抗A血清
+抗B血清
B
3.实验方法
（3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促 其充分混匀。
A
B
不凝集（-） 凝集（+）
•如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不 等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀 混浊状，则为不凝集。
4.实验结果
记录受检者红细胞凝集情况，根据 ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。
抗体（免疫球蛋白）：机体在抗原物质刺激下所形 成的一类能与抗原特异结合的血清活性成分。
3.实验方法
（1）取载玻片1张，用记号笔划分为两格，分别注明 A和B，各加1滴标准抗A和抗B的血清（抗体）。 （每
人一张玻片）
A 抗A 血清
抗B 血清 B
3.实验方法
（2）采血：酒精棉球消毒耳垂或手指末端后，用采 血针刺破皮肤，取1滴血（可用牙签）直接放入抗A、 抗B血清。
孔，中央孔为7孔。7孔加入1:10人血清10 l(已稀释好) ，
1-5孔加入对倍稀释的兔抗人血清（原液，1:2，1:4，1:8，
1:16）
1
10 l ；6孔加入
生理盐水10 l ， 作为阴性对照孔。
每孔加样10 l
6 盐水
Ab
7
人Ag
Ab(1:16)
2 Ab(1:2) Ab(1:4) 3
注意移液枪的使用！
5.结果观察与判断
实验内容
现象 结论
待检菌 +
生理盐水
待检菌 +
志贺诊断血清
二、沉淀反应
1.目的：了解双向琼脂扩散试验的原理和用途 2.基本原理
可溶性抗原（如血清、毒素、细菌浸出液等） 与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电 解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线， 称为沉淀反应。常用于定性检测，也可用于半定 量检测。
实验结果
结论
抗A血清 抗B血清
+
+
+
-
-
+
-
-
玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内！
(二)志贺杆菌玻片凝集实验
1. 材料 志贺杆菌诊断血清(已知抗体)； 待鉴定细菌
2 .原理(玻片凝集) 将已知抗体直接与未知抗原物质（如细菌）
混合，在电解质存在条件下，如两者对应便发生 特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性， 可判断细菌种类。
5实验五经典免疫学检测技术： 抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉
淀实验
一、凝集反应
(一) ABO血型鉴定实验
凝集反应：在一定浓度的电解质溶液中，颗 粒性抗原(如红细胞)与相应抗体结合后，出现 肉眼可见的凝集块。由于凝集反应方法简便， 目前在临床检验中仍被广泛应用。
抗原：能诱导机体产生体液抗体和细胞免疫应答， 并能与抗体和致敏淋巴细胞在体外发生特异结合反 应的物质。
注意1：看并列词组内部是否有包含关系、 交叉关系。
一.“和”字（2）
1、今年春节期间，这个市的210辆消防车， 3000多名消防官兵，放弃休假，始终坚守 在各自执勤的岗位上。
2、这个文化站已成为教育和帮助后进青 年，挽救和培养失足青年的场所，多次受 到上级领导的表彰。
3、要掌握走私犯活动的规律，以便稳、 准、狠地识别和打击他们。
——如何快速辨析病句
辨析病句 应注意的两个字
一.“和”字（1）
1、我们的报刊、杂志、电视和一切出版物，更有 责任作出表率，杜绝用字不规范的现象，增强使 用语言文字的规范意识。
2、最近一段时间，各种传媒、报纸、电视、广播、 互联网大量报道了美国在阿富汗进行的反对恐怖 主义的战争。
3、来自各个学校的学生和共青团员出席了这次表 彰大会。
5
Ab(1:8) 4
4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。
4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。 5. 结果观察
以出现明显沉淀线的最高稀释度为该兔抗人 血清的效价。
记录琼脂玻片双向扩散是否有沉淀线,分布在 哪几档稀释度之间? 并画图。
上交实验报告！ 用过的枪头放入 消毒缸！
Байду номын сангаас
抓标志 辨语病
4. 方法
二、沉淀反应
1)．制备琼脂玻片：将已知加热溶化的1.5%琼脂
3.5ml(已制备好,在水浴锅中)，迅速倾入载玻片
上。（每2人倒一个玻片）
2)．打孔：待凝固后用打孔器(玻璃管)按下图样打
孔。（孔径3mm，孔距4mm）（每1人打一个梅花）
3)．加样
以上方孔为第1孔，按顺时针方向分别称为2、3、4、5和6
3.实验方法
生理盐水
+
待检菌
志贺诊断血清
混
+
匀
待检菌
2人一个玻片
3.实验方法
4.注意事项： （1）生理盐水、诊断血清要适量； （2）待检菌为肠道致病菌，注意无菌操作，
玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂；
待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽，否则影响结果观察。
二、沉淀反应
2.基本原理
将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶板上相邻近的小 孔内，让它们相互向对方扩散。当两者在最适当比 例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。根据有否 出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原，或 用已知的抗原鉴定未知的抗体。
二、沉淀反应
3.材料 （1）人血清、兔抗人血清。 （2）1.5%琼脂（用生理盐水或巴比妥 缓冲液配成）。 （3）载玻片、移液枪、水浴锅、玻璃 管等。
一.“和”字（3）
1、通过检查，大家讨论、发现、解决了课外活动 中的一些问题。
2、产品要赢得消费者的喜爱，厂家必须在售后、 生产、销售等各个环节下足功夫，真正为消费者 着想。
3、人生价值和意义，其实并不在于别人对自己 如何膜拜、崇敬、羡慕，而在于自己对社会，对 历史的进步和发展作出何种贡献。
高考真题
（13江西）B.教育主管部门要求，各级各类学校学生的生 活用品以及床上用品都应由学生自主选购，不得统一配备。
（13四川）D.2013年财富全球论坛是成都自改革开放以 来举办的具有里程碑意义的国际盛会，是成都推进和发展 国际化建设进程面临的重大历史性机遇。
（13辽宁）A. 第二十五届阿姆斯特丹国际记录片电影节 12天里吸引了20多万名观众，来自40多个国家的近2500 名电影人、300多部电影前来参与。
注意3：看并列词组内部的逻辑顺序是否恰 当。
一.“和”字（4）
1.他背着总经理和副总经理偷偷地把这笔钱分别 存入了两家银行。 2.这次外出比赛，我一定说服老师和你一起去， 这样你就不会太紧张了，可以发挥得更好。 3.因患病住院，83岁高龄的黄昆和正在美国的姚 明没能到场领奖。
注意4：出现并列的多个人或物时，看是否 有歧义
A
+抗A血清
+抗B血清
B
3.实验方法
（3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促 其充分混匀。
A
B
不凝集（-） 凝集（+）
•如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不 等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀 混浊状，则为不凝集。
4.实验结果
记录受检者红细胞凝集情况，根据 ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。
抗体（免疫球蛋白）：机体在抗原物质刺激下所形 成的一类能与抗原特异结合的血清活性成分。
3.实验方法
（1）取载玻片1张，用记号笔划分为两格，分别注明 A和B，各加1滴标准抗A和抗B的血清（抗体）。 （每
人一张玻片）
A 抗A 血清
抗B 血清 B
3.实验方法
（2）采血：酒精棉球消毒耳垂或手指末端后，用采 血针刺破皮肤，取1滴血（可用牙签）直接放入抗A、 抗B血清。
孔，中央孔为7孔。7孔加入1:10人血清10 l(已稀释好) ，
1-5孔加入对倍稀释的兔抗人血清（原液，1:2，1:4，1:8，
1:16）
1
10 l ；6孔加入
生理盐水10 l ， 作为阴性对照孔。
每孔加样10 l
6 盐水
Ab
7
人Ag
Ab(1:16)
2 Ab(1:2) Ab(1:4) 3
注意移液枪的使用！
5.结果观察与判断
实验内容
现象 结论
待检菌 +
生理盐水
待检菌 +
志贺诊断血清
二、沉淀反应
1.目的：了解双向琼脂扩散试验的原理和用途 2.基本原理
可溶性抗原（如血清、毒素、细菌浸出液等） 与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电 解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线， 称为沉淀反应。常用于定性检测，也可用于半定 量检测。
实验结果
结论
抗A血清 抗B血清
+
+
+
-
-
+
-
-
玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内！
(二)志贺杆菌玻片凝集实验
1. 材料 志贺杆菌诊断血清(已知抗体)； 待鉴定细菌
2 .原理(玻片凝集) 将已知抗体直接与未知抗原物质（如细菌）
混合，在电解质存在条件下，如两者对应便发生 特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性， 可判断细菌种类。
5实验五经典免疫学检测技术： 抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉
淀实验
一、凝集反应
(一) ABO血型鉴定实验
凝集反应：在一定浓度的电解质溶液中，颗 粒性抗原(如红细胞)与相应抗体结合后，出现 肉眼可见的凝集块。由于凝集反应方法简便， 目前在临床检验中仍被广泛应用。
抗原：能诱导机体产生体液抗体和细胞免疫应答， 并能与抗体和致敏淋巴细胞在体外发生特异结合反 应的物质。
注意1：看并列词组内部是否有包含关系、 交叉关系。
一.“和”字（2）
1、今年春节期间，这个市的210辆消防车， 3000多名消防官兵，放弃休假，始终坚守 在各自执勤的岗位上。
2、这个文化站已成为教育和帮助后进青 年，挽救和培养失足青年的场所，多次受 到上级领导的表彰。
3、要掌握走私犯活动的规律，以便稳、 准、狠地识别和打击他们。
——如何快速辨析病句
辨析病句 应注意的两个字
一.“和”字（1）
1、我们的报刊、杂志、电视和一切出版物，更有 责任作出表率，杜绝用字不规范的现象，增强使 用语言文字的规范意识。
2、最近一段时间，各种传媒、报纸、电视、广播、 互联网大量报道了美国在阿富汗进行的反对恐怖 主义的战争。
3、来自各个学校的学生和共青团员出席了这次表 彰大会。
5
Ab(1:8) 4
4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。
4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。 5. 结果观察
以出现明显沉淀线的最高稀释度为该兔抗人 血清的效价。
记录琼脂玻片双向扩散是否有沉淀线,分布在 哪几档稀释度之间? 并画图。
上交实验报告！ 用过的枪头放入 消毒缸！
Байду номын сангаас
抓标志 辨语病
4. 方法
二、沉淀反应
1)．制备琼脂玻片：将已知加热溶化的1.5%琼脂
3.5ml(已制备好,在水浴锅中)，迅速倾入载玻片
上。（每2人倒一个玻片）
2)．打孔：待凝固后用打孔器(玻璃管)按下图样打
孔。（孔径3mm，孔距4mm）（每1人打一个梅花）
3)．加样
以上方孔为第1孔，按顺时针方向分别称为2、3、4、5和6
3.实验方法
生理盐水
+
待检菌
志贺诊断血清
混
+
匀
待检菌
2人一个玻片
3.实验方法
4.注意事项： （1）生理盐水、诊断血清要适量； （2）待检菌为肠道致病菌，注意无菌操作，
玻片用后，酒精擦过后，放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂；
待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽，否则影响结果观察。
二、沉淀反应
2.基本原理
将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶板上相邻近的小 孔内，让它们相互向对方扩散。当两者在最适当比 例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。根据有否 出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原，或 用已知的抗原鉴定未知的抗体。
二、沉淀反应
3.材料 （1）人血清、兔抗人血清。 （2）1.5%琼脂（用生理盐水或巴比妥 缓冲液配成）。 （3）载玻片、移液枪、水浴锅、玻璃 管等。
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抗原抗体反应ppt课件
• 抗生素等药物因其分子量较小，不具有抗 原性。与牛血清白蛋白等大分子偶联后才 具有完全抗原的特性。
48
• 来源于自然感染或人工感染以及人工培养 病原生物体的生物大分子物质，如蛋白质 、多肽、酶类等，必须进行分离纯化，才 能作为特异性较好的检测抗原。
• 分离纯化方法有选择性沉淀法、有机溶剂 沉淀法、等电点沉淀法、电泳法、超速离 心法、层析法等。
抗原抗体结合力示意图
5
l. 静电引力
抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧 基基团之间相互的引力，称为静电引力， 又称库伦引力。
例如，抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的 游离氨基(-NH3+)和酸性氨基酸的游离羧基 (-COO-)可与抗原分子上带相反电荷的对应 基团相互吸引。这种引力的大小与两个相 互作用基团间的距离平方成反比。
30
（3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合 适的浓度才出现明显的反应现象。因此 许多试验应进行抗体预滴定，找出最适 反应浓度。
31
二、环境因素
l.电解质
抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时 易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在， 就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或 沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不 出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5% NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其 中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使 胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝 集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特 异性蛋白质沉淀，即盐析。
13
三、亲水胶体转化为疏水胶体
抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的 血清学反应条件下均带有负电荷，使极化 的水分子在其周围形成水化层，成为亲水 胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。 当Ag与Ab结合后，表面电荷减少，水化层 变薄；而且由于Ag-Ab复合物形成后，与水 接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏 水胶体。此时在电解质(如NaCl)的作用下， 使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形 成可见的Ag-Ab复合物。
48
• 来源于自然感染或人工感染以及人工培养 病原生物体的生物大分子物质，如蛋白质 、多肽、酶类等，必须进行分离纯化，才 能作为特异性较好的检测抗原。
• 分离纯化方法有选择性沉淀法、有机溶剂 沉淀法、等电点沉淀法、电泳法、超速离 心法、层析法等。
抗原抗体结合力示意图
5
l. 静电引力
抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧 基基团之间相互的引力，称为静电引力， 又称库伦引力。
例如，抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的 游离氨基(-NH3+)和酸性氨基酸的游离羧基 (-COO-)可与抗原分子上带相反电荷的对应 基团相互吸引。这种引力的大小与两个相 互作用基团间的距离平方成反比。
30
（3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合 适的浓度才出现明显的反应现象。因此 许多试验应进行抗体预滴定，找出最适 反应浓度。
31
二、环境因素
l.电解质
抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时 易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在， 就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或 沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不 出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5% NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其 中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使 胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝 集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特 异性蛋白质沉淀，即盐析。
13
三、亲水胶体转化为疏水胶体
抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的 血清学反应条件下均带有负电荷，使极化 的水分子在其周围形成水化层，成为亲水 胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。 当Ag与Ab结合后，表面电荷减少，水化层 变薄；而且由于Ag-Ab复合物形成后，与水 接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏 水胶体。此时在电解质(如NaCl)的作用下， 使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形 成可见的Ag-Ab复合物。
抗原抗体反应的应用免疫学导论PPT课件
抗体上被标记的酶仍保持活性，催化底物形成有色产物，即酶联免疫吸附试验(ELISA).
第39页/共59页
ELISA有直接发、间接法及夹心法等不同反应方式 直接法
第40页/共59页
间接法
第41页/共59页
夹心法
第42页/共59页
特点：
❖ 非竞争结合反应 ❖ 常用于抗原的检测 ❖ 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价
第30页/共59页
免疫标记
一、放射免疫分析（ RIA ）
•
女科学家 R.Yalow（美,1921~）1950’
末
• 发明（胰岛素），1977年获诺贝尔医学奖
• 1. 基本原理
• （1）竞争结合分析：Ag + Ab AgAb
• *A g A b
*Ag + Ab
• （2）IRMA（免疫放射分析）：
第34页/共59页
b. 标记方法：
氯胺-T 法：最常用的 125I 标记法，I 与酪氨酸共价结 合，方法简便，但易造成蛋白质的损伤
• 乳过氧化酶法：
• Iodogen（氯甘脲）法：固相法，标记率较高，损伤小， 反应时间长
•
置换法： 3H 最常用
c. 标记产物的纯化：常用 Sephadex 层析，也可用硅胶 G 薄
•1.检测未知抗原或抗体 •2.抗原性质分析 •3.抗体效价滴定 •4.抗原或抗体纯度鉴定
第15页/共59页
电泳条件下的沉淀反应
•
免疫电泳是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离的特性与免疫扩
散结合进行分析的方法。
• 原理：混合的蛋白质抗原在ＰＨ８．６时带负电荷，在电场的作用下，由负极 向正极迁移，使混合的抗原组分得以分离。抗体可以通过自由扩散，也可以通 过电泳与分离的抗原形成相应的特异性沉淀线，从而提高免疫沉淀的灵敏度。
第39页/共59页
ELISA有直接发、间接法及夹心法等不同反应方式 直接法
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间接法
第41页/共59页
夹心法
第42页/共59页
特点：
❖ 非竞争结合反应 ❖ 常用于抗原的检测 ❖ 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价
第30页/共59页
免疫标记
一、放射免疫分析（ RIA ）
•
女科学家 R.Yalow（美,1921~）1950’
末
• 发明（胰岛素），1977年获诺贝尔医学奖
• 1. 基本原理
• （1）竞争结合分析：Ag + Ab AgAb
• *A g A b
*Ag + Ab
• （2）IRMA（免疫放射分析）：
第34页/共59页
b. 标记方法：
氯胺-T 法：最常用的 125I 标记法，I 与酪氨酸共价结 合，方法简便，但易造成蛋白质的损伤
• 乳过氧化酶法：
• Iodogen（氯甘脲）法：固相法，标记率较高，损伤小， 反应时间长
•
置换法： 3H 最常用
c. 标记产物的纯化：常用 Sephadex 层析，也可用硅胶 G 薄
•1.检测未知抗原或抗体 •2.抗原性质分析 •3.抗体效价滴定 •4.抗原或抗体纯度鉴定
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电泳条件下的沉淀反应
•
免疫电泳是利用蛋白质在凝胶中电泳迁移率不同能被分离的特性与免疫扩
散结合进行分析的方法。
• 原理：混合的蛋白质抗原在ＰＨ８．６时带负电荷，在电场的作用下，由负极 向正极迁移，使混合的抗原组分得以分离。抗体可以通过自由扩散，也可以通 过电泳与分离的抗原形成相应的特异性沉淀线，从而提高免疫沉淀的灵敏度。
医学免疫学实验课件
02
实验二：免疫细胞的分离与培 养
Chapter
免疫细胞的分离方法
将细胞悬液种植在特定培养皿上 ，只有贴壁生长的细胞能够继续 繁殖，常用的有T细胞分离培养法 和B细胞分离培养法。
利用荧光标记抗体和细胞表面抗 原的特异性结合，通过荧光检测 系统对细胞进行快速分选和计数 。
密度梯度离心法 贴壁筛选法 磁珠分离法 流式细胞术
培养条件
适宜的温度、湿度、气体环境等 ，以保证细胞的正常生长和代谢 。
01 02 03 04
生长因子
刺激细胞生长和分裂的蛋白质， 如白细胞介素、集落刺激因子等 。
传代培养
当细胞密度达到一定水平时，需 要进行传代培养，即将细胞分散 并重新种植在新的培养器皿中。
免疫细胞的功能检测
增殖能力检测
通过检测细胞分裂的速率来评估细胞的增殖能力，常用方 法有MTT法和BrdU法。
抗原提呈细胞（APC）表面的共刺激 分子与T细胞表面的受体结合，提供 必要的共刺激信号，促使T细胞活化 。
细胞因子作用
如白介素（IL）、干扰素（IFN）、肿 瘤坏死因子（TNF）等细胞因子，可 与免疫细胞表面的受体结合，促进细 胞活化。
免疫细胞的分化过程
初始T细胞分化
在抗原刺激和细胞因子的作用下，初始T细胞分化为不同 亚型的效应T细胞，如Th1、Th2、Th17等。
04
血清的收集和分离是在免疫反应达到高峰后进行的，通常采用离心、 沉淀等方法将免疫血清与其它成分分离，得到纯净的免疫血清。
免疫血清的效价测定
01 02 03 04
效价测定是评估免疫血清免疫效果的重要手段，通常采用抗原-抗体 反应的方法进行测定。
效价测定的方法包括间接凝集试验、间接酶联免疫吸附试验、中和试 验等多种，根据抗原和抗体特性选择合适的方法。
抗原抗体反应知识讲义PPT(63张)
•
5、世上最美好的事是：我已经长大，父母还未老;我有能力报答，父母仍然健康。
•
6、没什么可怕的，大家都一样，在试探中不断前行。
•
7、时间就像一张网，你撒在哪里，你的收获就在哪里。纽扣第一颗就扣错了，可你扣到最后一颗才发现。有些事一开始就是错的，可只有到最后才不得不承认。
•
8、世上的事，只要肯用心去学，没有一件是太晚的。要始终保持敬畏之心，对阳光，对美，对痛楚。
范德华引力
概念：抗原和抗体相互接近时，由于分子的 极化作用而出现的引力。
• 结合力的大小与两个相互作用基团的极化程 度的乘积成正比、与它们之间距离的7次方 成反比，键能约为4.2～12.5kJ／mol。
• 这种引力的能量小于静电引力。 • 具有特异性。
氢键结合力
• 概念：供氢体上的氢原子与受氢体原子 间的引力。
二、环境条件： *电解质：0.85%NaCl *酸碱度：pH6～9 *温度：15～40℃
*酸凝集：当pH为3左右时，接 近细菌Ag的等电点，可出现非 特异性凝集。
• 作用时间
• 抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不 同。
第四节 抗原抗体反应类型
1.沉淀反应 2.凝集反应 3.补体参与的反应 4.中和反应 5.免疫标记
1．抗原决定簇又称表位（epitope），是指抗原性物质 表面决定该抗原特异性的特殊化学基团，是免疫应答和免 疫反应具有特异性的物质基础。
2．抗原决定簇是很小的，其大小相当于相应抗体的 结合部位，它们可由5-7个氨基酸、单糖或核苷酸残基组成。
3．抗原结合价：是指能与抗体分子结合的抗原决定 簇的总数。每一种半抗原可理解为单一的抗原决定簇，而 天然抗原含有很多不同的抗原决定簇，它是带有大量多种 "天然"半抗原的大分子。
第十四章 免疫学实验技术抗原抗体反应精选精品PPT
第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现
沉淀反与应的抗抗原体为小血分子清的可反溶性应抗原时，通可常稀出释抗现原，交以避叉免抗反原过应剩而。出现如后带变现象形。 杆菌与立克次氏体之
间有共同抗原决定族。（其他例子）
抗原结合部位
可 变 区
铰
恒
链
定
区
区
VH
CH1
N端
VH VL
VL CL Fab段
本章思考题 简述抗原抗体反应的特点及影响因素
3、抗原-抗体反应可分为两个阶段（反应的阶段性） 因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象。
第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和细胞溶解等。 抗原-抗体反应适宜的pH为6-8 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象
l 沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免 抗原过剩而出现后带现象。
抗原抗体反应主要影响因素
1、电解质 u 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质
会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集 现象。 u 通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。
第1l、一抗节这原抗与种原抗体-抗特的体结反异合应是性特异结性结合合（是特异由性）抗原分子上的决定簇和抗体分子V区中的超 变区相互适应所决定的。但抗原成分复杂,常含有多种抗原决定 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象
。 如超过60℃或pH降到3以下时，则抗原抗体复合物又可重新离解。
。l 第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现
沉淀反与应的抗抗原体为小血分子清的可反溶性应抗原时，通可常稀出释抗现原，交以避叉免抗反原过应剩而。出现如后带变现象形。 杆菌与立克次氏体之
间有共同抗原决定族。（其他例子）
抗原结合部位
可 变 区
铰
恒
链
定
区
区
VH
CH1
N端
VH VL
VL CL Fab段
本章思考题 简述抗原抗体反应的特点及影响因素
3、抗原-抗体反应可分为两个阶段（反应的阶段性） 因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象。
第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和细胞溶解等。 抗原-抗体反应适宜的pH为6-8 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象
l 沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免 抗原过剩而出现后带现象。
抗原抗体反应主要影响因素
1、电解质 u 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质
会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集 现象。 u 通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。
第1l、一抗节这原抗与种原抗体-抗特的体结反异合应是性特异结性结合合（是特异由性）抗原分子上的决定簇和抗体分子V区中的超 变区相互适应所决定的。但抗原成分复杂,常含有多种抗原决定 在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象
。 如超过60℃或pH降到3以下时，则抗原抗体复合物又可重新离解。
。l 第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现
免疫学实验技术培训课件
质
免疫学实验技术
15
抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
网格学说（免l疫a学实t验t技ic术e theory） 16
三.血清学试验的优越性
• 1、特异性强，敏感性高 • 2、检样量少，预处理简单 • 3、试验方法多，功能各异，可择优选用 • 4、方法简易快速 • 5、可用于抗原或抗体的定位
免疫学实验技术
9
补体结合反应
检测病毒
免疫学实验技术
10
溶血
+
—
免疫学实验技术
11
4.沉淀反应 (precipitation)
• 沉淀反应是指可溶性抗原（细菌培养滤液 、细胞或组织的浸出液、血清蛋白等）与 相应抗体在液相中特异结合后，形成的免 疫复合物受电解质影响出现的沉淀现象。
• 反应中的抗原称为沉淀原，可以是类脂、 多糖或蛋白质等；抗体称为沉淀素。
免疫学实验技术
26
抗体的免疫原性
马血清制备的 破伤风毒素
免疫学实验技术
27
一抗和二抗
一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检 测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出 来的。
二抗：可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标 记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团）， 作用是检测一抗。
当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。
水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚
至纳克水平上对其进行定量。
免疫学实验技术
23
免疫酶技术分为两类： 免疫酶组织化学法或免疫酶染色法
免疫酶测定法： 固相免疫酶测定法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 应用最广泛
免疫学实验技术
24
1.酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫学实验技术
15
抗体过剩
抗体抗体比例合适
抗原过剩
网格学说（免l疫a学实t验t技ic术e theory） 16
三.血清学试验的优越性
• 1、特异性强，敏感性高 • 2、检样量少，预处理简单 • 3、试验方法多，功能各异，可择优选用 • 4、方法简易快速 • 5、可用于抗原或抗体的定位
免疫学实验技术
9
补体结合反应
检测病毒
免疫学实验技术
10
溶血
+
—
免疫学实验技术
11
4.沉淀反应 (precipitation)
• 沉淀反应是指可溶性抗原（细菌培养滤液 、细胞或组织的浸出液、血清蛋白等）与 相应抗体在液相中特异结合后，形成的免 疫复合物受电解质影响出现的沉淀现象。
• 反应中的抗原称为沉淀原，可以是类脂、 多糖或蛋白质等；抗体称为沉淀素。
免疫学实验技术
26
抗体的免疫原性
马血清制备的 破伤风毒素
免疫学实验技术
27
一抗和二抗
一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检 测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出 来的。
二抗：可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标 记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团）， 作用是检测一抗。
当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。
水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚
至纳克水平上对其进行定量。
免疫学实验技术
23
免疫酶技术分为两类： 免疫酶组织化学法或免疫酶染色法
免疫酶测定法： 固相免疫酶测定法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 应用最广泛
免疫学实验技术
24
1.酶联免疫吸附试验（ELISA）
凝集反应和沉淀反应 PPT
以பைடு நூலகம்盐缓冲液为反应介质的抗原抗体特异 性结合的沉淀试验。
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
precipitate forms in regions of Ab or Ag excess.
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
免疫学检验-抗原抗体反应ppt课件下载PPT课件
第一章 概述
第一课件网网站
2020年10月2日
1
第一节 免疫学简介
传统的概念认为，免疫（immunity）系指机体对感染有 抵抗能力，而不患疾病或传染疾病。现代免疫学的发展认 识到，宿主体内的免疫系统，能识别并清除从外环境中侵 入的病原微生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产 生的肿瘤细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原， 实现免疫防御（immunological defence）免疫自稳 （immunological homeostasis）和免疫监视 （immunological surveillance）的功能，保持机体内环 境稳定。所以，免疫是机体识别和排斥抗原性异物的一种 生理功能。
一、抗原抗体结合力 抗原和抗体的结合为分子间结构互补的特
异结合，它是一种非共价的结合，不形成牢 固的共价键。在抗原抗体特异结合后有四种 分子间引力参与并促进其结合。
2020年10月2日
9
• 静电引力（electrostatic forces）是抗原和抗体 带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的 力，又称库伦引力
2020年10月2日
4
第二章 抗原抗体反应
2020年10月2日
5
抗原抗体反应（antigen－antibody reaction）是抗原与相应抗体之间的特异性 结合反应。它既可发生在体内，也可发生在
体外。
2020年10月2日
6
第一节 抗原抗体反应的原理
抗原与抗体的特异性结合是基于抗原决定 簇（表位）与抗体超变区分子间的结构互补性 与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间 构型所决定的。
12
三、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，
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2020年10月2日
1
第一节 免疫学简介
传统的概念认为，免疫（immunity）系指机体对感染有 抵抗能力，而不患疾病或传染疾病。现代免疫学的发展认 识到，宿主体内的免疫系统，能识别并清除从外环境中侵 入的病原微生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产 生的肿瘤细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原， 实现免疫防御（immunological defence）免疫自稳 （immunological homeostasis）和免疫监视 （immunological surveillance）的功能，保持机体内环 境稳定。所以，免疫是机体识别和排斥抗原性异物的一种 生理功能。
一、抗原抗体结合力 抗原和抗体的结合为分子间结构互补的特
异结合，它是一种非共价的结合，不形成牢 固的共价键。在抗原抗体特异结合后有四种 分子间引力参与并促进其结合。
2020年10月2日
9
• 静电引力（electrostatic forces）是抗原和抗体 带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的 力，又称库伦引力
2020年10月2日
4
第二章 抗原抗体反应
2020年10月2日
5
抗原抗体反应（antigen－antibody reaction）是抗原与相应抗体之间的特异性 结合反应。它既可发生在体内，也可发生在
体外。
2020年10月2日
6
第一节 抗原抗体反应的原理
抗原与抗体的特异性结合是基于抗原决定 簇（表位）与抗体超变区分子间的结构互补性 与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间 构型所决定的。
12
三、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，
抗原抗体检测技术ppt课件
目前应用最广的是人O型红细胞和绵羊红细胞。后 者应用更广，因为其来源方便，另外，绵羊红细胞 的表面有大量糖蛋白受体，极易吸附某种抗原物质， 吸附性能好，且大小均匀一致 。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集实验是一个定性检测方法，即根据凝 集现象的出现与否判定结果阳性与阴性。
也可以进行半定量检测，即将标本作一系 列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应 的最高稀释度作为滴度。
间接凝集反应中所用与免疫无关的颗粒称为载 体（carrier）。
将抗原（或抗体）吸附或偶联于颗粒表面的过 程称为致敏（sensitization）。
吸附有已知抗原（或抗体）的颗粒称为致敏颗 粒（sensitized particle）。
敏感度比直接凝集反应高2~8倍，适用于各种可 溶性抗原（或抗体）的检测，敏感度也高于沉 淀反应。
环境条件
电解质
抗原抗体结合后由亲水胶体变为疏水胶体，易受电 解质影响。
若无电解质存在，则不出现可见反应。 但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质
沉淀，即盐析。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集反应的类型
直接凝集反应
颗粒性抗原在适当电解质参与下，直接与相应 抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，成为直接 凝集实验（direct agglutination test）。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集实验是一个定性检测方法，即根据凝 集现象的出现与否判定结果阳性与阴性。
也可以进行半定量检测，即将标本作一系 列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应 的最高稀释度作为滴度。
间接凝集反应中所用与免疫无关的颗粒称为载 体（carrier）。
将抗原（或抗体）吸附或偶联于颗粒表面的过 程称为致敏（sensitization）。
吸附有已知抗原（或抗体）的颗粒称为致敏颗 粒（sensitized particle）。
敏感度比直接凝集反应高2~8倍，适用于各种可 溶性抗原（或抗体）的检测，敏感度也高于沉 淀反应。
环境条件
电解质
抗原抗体结合后由亲水胶体变为疏水胶体，易受电 解质影响。
若无电解质存在，则不出现可见反应。 但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质
沉淀，即盐析。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集反应的类型
直接凝集反应
颗粒性抗原在适当电解质参与下，直接与相应 抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，成为直接 凝集实验（direct agglutination test）。