植物脱毒技术PPT课件

（4）化学疗法脱毒
许多化学药品 (包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基 酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体具有脱毒效 果。常用的药品有：8—氮鸟嘌呤、2—硫脲嘧啶、 杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。例如， 将100μg 2—硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤 组织中的PVY(马铃薯病毒)。
3）其它脱毒方法
（1）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组
织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病 毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 原理：
A、愈伤组织分化植株，40%单细胞含有 病毒，病毒的复制赶不上细胞的增殖速度。
B、有些细胞经过突变获得了抗病毒性。 缺陷：
后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分 化成苗。
斑驳病，马铃薯卷叶病，枣疯病 etc.
防治策略：
①使用无毒种苗 ②严格检疫 ③清除传毒源 ④防治传播虫媒 无毒种苗培育途径： ①群体中未受病毒侵染的植株无性繁殖获得。 ②种子繁殖获得。但后代往往会发生变异。 ③组培脱毒培育无病毒苗。能相对保持物种遗
传稳定性。
二、无病毒苗培育的意义
1.无病毒苗的定义 指不含该种植物的主要危害病毒，即经
检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反 应的苗木。
2.无病毒苗培育的意义 用组织培养方法生产无毒苗，是一个积
极有效的途径，由于排除了使用药剂，所以 对减少污染，防止公害，保护环境都有积极 的意义。
三、脱毒的概念及方法
1.脱毒的概念 就是指用人为的方法将植物体内的病毒去
掉的一种方法。
2.脱毒方法：1）热处理法（温热疗法）； 2）茎尖培养法； 3）其它脱毒法。
C.严格控制糖浓度，一般2-4%，蔗糖、葡萄糖较 好。
D.适当提高生长素（0.1～0.5mg/L）与细胞分裂 素浓度。有时可加活性炭。用NAA或IBA，Kt或 BA，不用2,4－D。 GA适当。 7）培养方式
一般用琼脂培养基。对于在固体培养基上易形
成愈伤ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ织的须用滤纸桥。
琼脂培养基培养
滤纸桥培养
缺陷：方法简便易行，但易使材料受伤，不能脱除所 有病毒。例如在马铃薯中只能消除卷叶病毒。 注：热处理需与其它方法配合应用。
热处理时间因植物而异
2）茎尖培养脱毒
（1）茎尖培养脱毒原理 染病植株体内病毒的分布不均匀，越靠近茎
顶的感染程度越低，生长点（约0.1－1.0）几乎 不含或含病毒很少。原因是无维管束，病毒只能 通过胞间连丝传递，不及细胞不断分裂和生长的 速度。因此可利用微茎尖培养脱毒。
（2）茎尖微体嫁接
木本植物茎尖培养难以生根成植株， 将实生苗砧木在人工培养基上种植培养， 再从成年无病树枝上切取0.4-1.0mm茎尖， 在砧木上进行微体嫁接，以获得无病毒植 株。果树上应用多。
主要脱毒程序是：无菌砧木培养——茎尖 准备嫁接——嫁接苗培养——移植。
（3）珠心胚培养脱毒
柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚 外还有珠心胚，因为珠心细胞与维管束无联 系，由其产生的植株不易带病毒。
（3）影响微茎尖培养的因素
1）外植体大小 通常以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.3-
0.5mm)作外植体为宜。不同植物脱毒适宜的 茎尖大小不同。 2）培养条件
增加光照 3）外植体的生理状态
茎尖最好在活跃生长的芽上切取，取芽的 时间最好是在萌动期较好。
复习思考题
1.热处理为什么可以脱毒? 2.为什么用微茎尖组织培养形成的试管苗 一般是无毒的？
全 世 界 已 发 现 植 物 病 毒 有 近 700 种 。 病 毒 对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减 产，甚至全株死亡。
植物病毒的危害特点
①一旦染毒，终生带毒； ②难用药剂控制； ③通过嫁接或虫媒传播，随着无性繁殖系 数增大而传播加快； ④严重影响作物产量与产品质量；
（尤其是一些潜隐性病毒危害更大） 如：苹果锈果病、花叶病，香蕉束顶病，草莓
1）热处理脱毒（温热疗法）
（1）原理：
当植物组织处于高于正常温度的 环境（35-40℃）时，组织内部的病毒 部分或全部钝化，不能生成或生成病 毒很少，而破坏却日趋严重，以致病 毒含量不断降低，这样持续一段时间， 病毒自行消灭，但寄主植物的组织很 少或不会受到伤害，从而达到脱毒的 目的。
（2）热处理方法
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活， 过大又不能保证完全除去病毒。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳 定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的 一个途径。
（2）茎尖培养脱毒方法
1）材料选择、消毒 在植株上直接取或在室内培养一段时间的 植株上取顶芽或侧芽（3-5mm），然后消 毒。消毒方法是：剪取顶芽梢段3~5厘米， 剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75% 酒精中浸泡30秒左右，用1%~3％次氯酸钠 或5%~7%的漂白粉溶液消毒10~20分，最 后用无菌水冲洗材料4~5次。 2）微茎尖的剥取 解剖镜下剥取。注意勿损伤生长点。
3）接种：随剥随接，尽快接种。
4）培养：22℃左右，每天以10～16h、 1500～5000lx光照下培养。保证较高 温度和充足光照时间。其间应更换新 鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可 形成大量从生芽。
5）生根培养：诱导生根的方法是将23cm高的无根苗转入生根培养基继续 培养1-2个月可生根。
6）培养基 A.常用培养基： MS White、Morel B.提高钾盐的含量会有利于茎尖生长。在用MS 培养基时，其中有些离子的浓度过高应适当稀释。
A.温汤（浸渍）处理：
适用于离体材料（如接穗）和休眠 器官的处理。在50℃左右的温水中浸渍 10min至数小时，或在35℃热水中处理 30～40小时，使病毒失活。
B.热风（热空气）处理
(1)恒温处理：将生长的盆栽植物移入温热疗室内， 一般在35～40℃。对活跃生长的茎尖效果较好，处理 时间因植物而异，短则几分钟，长至几处月。处理时， 空气相对湿度保持85～95％。 (2)变温处理：如马铃薯每天40℃处理4h与16～20℃ 处理20h 交替处理块茎，可清除芽眼中马铃薯的叶片 病毒，而且保持芽眼的活力。
第五章 植物脱毒技术
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一、植物病毒的危害
病毒的危害给植物生产带来的损失是很大 的，如草莓病毒的危害，使草莓产量严重降低， 品质大大退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产l0%18%，为害马铃薯的病虫害则更多，大约有几 十种，给马铃薯生产带来严重障碍。花卉病毒 的危害一般会影响花卉的观赏价值，其表现是 花少而小，产生畸形、变色等。